專利名稱：一種山藥離體繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種繁殖的方法，特別是一種山藥離體繁殖方法。
技術(shù)背景-
山藥既有食用價值，還有藥用價值。懷山藥因其獨特的產(chǎn)地和品種所 具有的獨特口感和營養(yǎng)價值及藥效而著稱于世。然而傳統(tǒng)的塊莖繁殖方法 不能適應(yīng)生產(chǎn)需要。對其離體繁殖進(jìn)行了廣泛的研究，目前，在懷山藥的 研究中認(rèn)為懷山藥可以通過腋生枝途徑、多芽體誘導(dǎo)途徑和微型塊莖誘導(dǎo) 途徑等方式進(jìn)行離體繁殖。其中腋生枝是將帶腋芽的莖段捍插在培養(yǎng)基中， 其腋芽分化成苗，基部分化出根而成一完整植株；多芽體誘導(dǎo)型是通過調(diào) 整培養(yǎng)基中的激素濃度，去除頂端優(yōu)勢的抑制使腋芽發(fā)育出多個小芽；微 型塊莖既是山藥的一種變態(tài)器官，同時也是山藥的儲藏器官和繁殖器官， 而微型塊莖誘導(dǎo)途徑則是誘導(dǎo)試管苗腋芽形成地上變態(tài)塊莖，形成的塊莖 可萌發(fā)成苗亦可進(jìn)行保存。前兩種繁殖方式遺傳穩(wěn)定性較高，但占用空間 大，第三種目前僅有微型塊莖的初步誘導(dǎo)，在塊莖萌發(fā)成苗及應(yīng)用方面未 見更深入的研究。本實驗室以帶腋芽的莖段為外植體，首次離體誘導(dǎo)出了 懷山藥的類原球莖，這些類原球莖占用空間小，且在適宜條件下能夠大量 分化為新的植株，可作為懷山藥離體繁殖的新途徑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種遺傳穩(wěn)定性好、繁殖占用空間小、保存和運 輸方便的懷山藥離體繁殖方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是，其特征在于有 以下步驟(1)懷山藥類原球莖的誘導(dǎo)形成，將懷山藥試管苗切成帶腋芽 莖段接種于MS + TDZ 0.1~6 mg/L + KT 1 4mg/L的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進(jìn) 行培養(yǎng)30 40 d，誘導(dǎo)形成類原球莖；(2)懷山藥類原球莖的增殖，將上 述類原球莖的小塊在無菌條件下接種于MS + TDZ 1~4 mg/L + KT 1~4 mg/L的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)，得到大量增殖的類原球莖；(3)懷 山藥類原球莖的分化，將誘導(dǎo)形成或增殖的類原球莖轉(zhuǎn)接于MS + 2，4-D0.05~0.1 mg/L + 6-BA 1~2 mg/L + KT 2 4 mg/L + TDZ 0~2 mg/L +活性炭 0.1 0.2g/L的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)，類原球莖分化出大量的芽；
(4)懷山藥類原球莖再生植株的生根，挑選頂芽長度為2~3 cm的類原球 莖再生植株，從其基部分開，轉(zhuǎn)入液體的MS+ PP333 0.5-1.0 mg/L + NAA 0.05 1.0 mg/L培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)7d開始有根的形成，15-20d 即可形成大量的根。以上各步驟中的工作臺為超凈工作臺，各步驟培養(yǎng)室 的培養(yǎng)條件為溫度20 25'C，光照每天12 16h，光強為2000 lx; (5) 懷山藥類原球莖再生植株的煉苗移栽，將上述生根的懷山藥類原球莖的培 養(yǎng)瓶蓋打開，將培養(yǎng)瓶移自然光下煉苗3~5 d，使其逐漸適應(yīng)外界自然環(huán) 境，移栽時將根部的培養(yǎng)基洗凈，去除褐化的老根，移栽入裝有蛭石的營 養(yǎng)缽中，15d后即成活。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較具有遺傳穩(wěn)定性好、繁殖 占用空間小且保存及運輸方便的顯著優(yōu)點。
具體實施例方式
本發(fā)明有以下實施例
1、 懷山藥類原球莖的誘導(dǎo)形成
在超凈工作臺上將懷山藥試管苗切成長度為1 cm左右的帶腋芽莖段 接種于MS + TDZ 0.1 6 mg/L + KT 1 4 mg/L的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室條件下 進(jìn)行培養(yǎng)，30 40 d即可誘導(dǎo)形成類原球莖。
2、 懷山藥類原球莖的增殖
在超凈工作臺上，將誘導(dǎo)出的懷山藥類原球莖切成直徑0.5 cm左右的 小塊在無菌條件下接種于MS + TDZ 1 4 mg/L+ KT 1~4 mg/L培養(yǎng)基上， 在培養(yǎng)室條件下進(jìn)行培養(yǎng)，類原球莖可以大量增殖。
3、 懷山藥類原球莖的分化
在超凈工作臺上，將誘導(dǎo)形成或繼代增殖的類原球莖轉(zhuǎn)接于MS + 2，4-D 0.05~0.1 mg/L+ 6-BA 1~2 mg/L + KT 2~4 mg/L+ TDZ 0~2 mg/L + 活性炭0.1 0.2g/L的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室條件下進(jìn)行培養(yǎng)，類原球莖可以 分化出大量的芽。
4、 懷山藥類原球莖再生植株的生根
挑選頂芽長度為2~3 cm的類原球莖再生植株，從基部分開，轉(zhuǎn)入液體
4的MS + PP333 0.5 1.0 mg/L + NAA 0.05~1.0 mg/L培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室條件 下進(jìn)行培養(yǎng)，7d開始有根的形成，15 20d即可形成大量的根。
以上各步培養(yǎng)條件均為溫度20~25 'C，每天光照12 16h,光強為2000lx。
5、懷山藥類原球莖再生植株的煉苗移栽
當(dāng)類原球莖生根后，打開培養(yǎng)瓶蓋，將培養(yǎng)瓶移至自然光下煉苗3 5 d。 讓類原球莖植株逐漸適應(yīng)外界自然條件，移栽時將根部的培養(yǎng)基洗凈，去 除褐化的老根，移栽入裝有蛭石的營養(yǎng)缽中，15d后即可成活。
權(quán)利要求
1、一種山藥離體繁殖方法，其特征在于有以下步驟(1)懷山藥類原球莖的誘導(dǎo)形成，將懷山藥試管苗切成帶腋芽莖段接種于MS+TDZ0.1～6mg/L+KT 1～4mg/L的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)30～40d，誘導(dǎo)形成類原球莖；(2)懷山藥類原球莖的增殖，將上述類原球莖的小塊在無菌條件下接種于MS+TDZ 1～4mg/L+KT 1～4mg/L的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)，得到大量增殖的類原球莖；(3)懷山藥類原球莖的分化，將誘導(dǎo)形成或增殖的類原球莖轉(zhuǎn)接于MS+2，4-D 0.05～0.1mg/L+6-BA 1～2mg/L+KT 2～4mg/L+TDZ 0～2mg/L+活性炭0.1～0.2g/L的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)，類原球莖可分化出大量的芽；(4)懷山藥類原球莖再生植株的生根，挑選頂芽長度為2～3cm的類原球莖再生植株，從其基部分開，轉(zhuǎn)入液體的MS+PP333 0.5～1.0mg/L+NAA 0.05～1.0mg/L培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)，7d開始有根的形成，15～20d即可形成大量的根；以上各步驟中的工作臺為超凈工作臺，各步驟培養(yǎng)室的培養(yǎng)條件為溫度20～25℃，光照每天12～16h，光強為2000 lx；(5)懷山藥類原球莖再生植株的煉苗移栽，將上述生根的懷山藥類原球莖的培養(yǎng)瓶蓋打開，將培養(yǎng)瓶移自然光下煉苗3～5d，使其逐漸適應(yīng)外界自然環(huán)境，移栽時將根部的培養(yǎng)基洗凈，去除褐化的老根，移栽入裝有蛭石的營養(yǎng)缽中，15d后即成活。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種山藥離體繁殖方法，本發(fā)明的目的是提供一種遺傳穩(wěn)定性好、繁殖占用空間小、保存和運輸方便的懷山藥離體繁殖方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案要點有以下步驟(1)懷山藥類原球莖的誘導(dǎo)形成；(2)懷山藥類原球莖的增殖；(3)懷山藥類原球莖的分化；(4)懷山藥類原球莖再生植株的生根；(5)懷山藥類原球莖再生植株的煉苗移栽。本發(fā)明用于山藥繁殖。
文檔編號A01H4/00GK101637125SQ20091006605
公開日2010年2月3日 申請日期2009年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月3日
發(fā)明者張曉麗, 李明軍, 李海兵, 嬌 趙, 趙喜亭, 麗 鄧, 陳明霞 申請人:河南師范大學(xué)