專利名稱：暴馬丁香樹皮揮發(fā)油的制備新工藝和新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及以暴馬丁香a/^i-e/7S^Rupr. 樹皮揮發(fā)油的制備新工藝和新用途。
背景技術(shù)：
暴馬丁香5>ri/^a ay77"re/7w's R叩r.為長白山常見藥用植物之一，在我國主要分布在吉 林、遼寧、華北、西北和華中地區(qū)，資源豐富。樹皮、樹干及枝條均可藥用，味苦，性微寒， 經(jīng)現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明具有清肺祛痰、止咳、平喘、消炎、利尿的功能。
目前，關(guān)于暴馬丁香樹皮揮發(fā)油和化學(xué)成分及藥理作用研究鮮見報(bào)道，僅有幾篇報(bào)道從 樹皮、樹枝中分離得到數(shù)個(gè)化合物，未對暴馬丁香樹皮揮發(fā)油做過抑菌研究。因此，本發(fā)明 采用暴馬丁香樹皮，干燥后剪碎，用蒸餾水浸泡12 h后超聲30 min，溫度為3(TC，功率為 80W。將藥材與浸泡液一同倒入揮發(fā)油提取器中，采用水蒸氣蒸餾法提取3 h。放出水層，用 乙醚反復(fù)洗揮發(fā)油提取器，使暴馬丁香揮發(fā)油充分溶解到乙醚中。將溶有揮發(fā)油的乙醚溶液 倒入燒杯中，再向燒杯中加無水硫酸鈉吸干水分，回收乙醚后即得到純凈的揮發(fā)油，放入冰 箱4 'C保存?zhèn)溆谩?br> 本發(fā)明的暴馬丁香樹皮揮發(fā)油對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌具有抑制作用，這種抑菌 作用具有積極的實(shí)踐應(yīng)用價(jià)值。比如對鏈球菌有良好的抑制作用，對治療化膿性炎癥、猩紅 熱、風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎等疾病有積極的實(shí)踐意義；對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙 門氏菌有良好的抑制作用，對預(yù)防與治療細(xì)菌性食物中毒有積極作用。這對于擴(kuò)大暴馬丁香 藥源，并對其進(jìn)行合理開發(fā)利用具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有抑菌活性的暴馬丁香樹皮揮發(fā)油的制備新工藝并將暴馬丁 香樹皮揮發(fā)油在具有抑菌作用的產(chǎn)品中進(jìn)行丌發(fā)應(yīng)用。
1. 以暴馬丁香樹皮為原料制備揮發(fā)油的新工藝和新用途，并將暴馬丁香樹皮揮發(fā)油在具 有抑菌作用的產(chǎn)品中進(jìn)行開發(fā)應(yīng)用。
本發(fā)明的暴馬丁香樹皮揮發(fā)油對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、巴氏菌、鏈球菌、沙門氏 菌均有不同程度的抑制作用，可開發(fā)為天然抗菌劑應(yīng)用于食品、藥品等行業(yè)，制備出具有抑 菌作用的各種形式的產(chǎn)品。
2. —種制備暴馬丁香樹皮揮發(fā)油的新工藝，其特征在于該工藝包括以下過程
(1)取暴馬丁香樹皮，挑去雜物，水洗，烘干或晾干，粉碎，用蒸餾水浸泡12h后超聲
330 min，溫度為30。C功率為80W;
(2) 將(1)中藥材與浸泡液一同倒入揮發(fā)油提取器中，采用水蒸氣蒸餾法提取3 h，獲 得上面浮有揮發(fā)油的水溶液；
(3) 將(2)中上面浮有揮發(fā)油的水溶液放出水層，用乙醚反復(fù)洗揮發(fā)油提取器，使暴馬 丁香揮發(fā)油充分溶解到乙醚中，將溶有揮發(fā)油的乙醚溶液倒入燒杯中，再向燒杯中加無水硫 酸鈉吸干水分，回收乙醚后即得到純凈的揮發(fā)油，放入冰箱4 'C保存?zhèn)溆谩?br> 3. 根據(jù)本發(fā)明1至2所述的制備暴馬丁香樹皮揮發(fā)油的原料為暴馬丁香5>nV^s ayz7ore/751/5 Rupr. 的樹皮。
4. 根據(jù)本發(fā)明1至2所述的暴馬丁香樹皮揮發(fā)油對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、巴氏菌、 鏈球菌、沙門氏菌均有不同程度的抑制作用。
5. 根據(jù)本發(fā)明l至2所述的暴馬丁香樹皮揮發(fā)油，其特征在于該樹皮揮發(fā)油可作為天然 抗菌劑用于食品、藥品等行業(yè)，代替有毒副作用的合成抗菌劑。
6. 根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中的"％"是重量百分比。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所述的暴馬丁香樹皮揮發(fā)油制備新工藝包括以下實(shí)施例，下面的實(shí)施例可進(jìn)一歩 說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1:
(1) 取暴馬丁香樹皮100g，挑去雜物，水洗，烘干或晾干，粉碎，用400mL蒸餾水浸泡 12 h后超聲30 min，溫度為3(TC功率為80W;
(2) 將(1)中藥材與浸泡液一同倒入揮發(fā)油提取器中，采用水蒸氣蒸餾法提取3 h，獲 得上面浮有揮發(fā)油的水溶液；
(3) 將(2)中上面浮有揮發(fā)油的水溶液放出水層，用乙醚反復(fù)洗揮發(fā)油提取器，使暴馬 丁香揮發(fā)油充分溶解到乙醚中，將溶有揮發(fā)油的乙醚溶液倒入燒杯中，再向燒杯中加無水硫 酸鈉吸干水分，回收乙醚后即得到純凈的揮發(fā)油，放入冰箱4 。C保存?zhèn)溆谩?br> 實(shí)施例2:
(1) 取暴馬丁香樹皮200g，挑去雜物，水洗，烘干或晾干，粉碎，用600mL蒸餾水浸泡 12 h后超聲30 min，溫度為30。C功率為80W;
(2) 將(1)中藥材與浸泡液一同倒入揮發(fā)油提取器中，采用水蒸氣蒸餾法提取3 h，獲 得上面浮有揮發(fā)油的水溶液；(3)將(2)中上面浮有揮發(fā)油的水溶液放出水層，用乙醚反復(fù)洗揮發(fā)油提取器，使暴馬 丁香揮發(fā)油充分溶解到乙醚中，將溶有揮發(fā)油的乙醚溶液倒入燒杯中，再向燒杯中加無水硫
酸鈉吸干水分，回收乙醚后即得到純凈的揮發(fā)油，放入冰箱4 t:保存?zhèn)溆谩?br> 藥理試驗(yàn)例暴馬丁香樹皮揮發(fā)油的抑菌作用 1實(shí)驗(yàn)材料
大腸桿菌、鏈球菌、沙門氏菌、巴氏菌和金黃色葡萄球菌均來自于吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)預(yù)防獸 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，37'C在蛋白胨牛肉湯中培養(yǎng)12h。
培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。菌的活化與培養(yǎng)時(shí)用液體培養(yǎng)基，組成為牛肉膏蛋
白胨氯化鈉蒸餾水(3 : 10 : 5 : 1000)。菌的保存及抑菌實(shí)驗(yàn)時(shí)用固體培養(yǎng)基，組成為 牛肉膏蛋白胨氯化鈉瓊脂蒸餾水(3 : 10 : 5 : 22 : 1000)。
2實(shí)驗(yàn)方法
2. 1培養(yǎng)基的配制
取牛肉膏0.6g、蛋白胨2 g、氯化鈉1 g、蒸餾水200 ml，混合并攪拌使其完全溶解， 配成液體培養(yǎng)基。用量筒量取液體培養(yǎng)基，將其平均分裝在10個(gè)50 ml的三角瓶內(nèi)，每瓶 20 ml。取牛肉膏3 g、蛋白胨IO g、氯化鈉5 g、瓊脂22 g、蒸餾水1000 ml，混合后將其 置于電爐子上加熱，使瓊脂完全溶解，配成固體培養(yǎng)基。用量筒量取固體培養(yǎng)基，將其平均 分裝在5個(gè)150 ml的三角瓶內(nèi)，每瓶IOO ml。三角瓶瓶口均用棉塞塞緊并用牛皮紙包扎。 2. 2滅菌
將配好的固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基均放入高壓滅菌鍋中滅菌，溫度上升到121 t:時(shí)，開 始計(jì)時(shí)20 min。培養(yǎng)皿、量筒、鑷子、剪刀、6 mm濾紙片(放在小燒杯中)、滴管、安瓿瓶 等實(shí)驗(yàn)器材均放入烘箱中170 。C滅菌2 h。實(shí)驗(yàn)前用75%乙醇擦拭超凈工作臺(tái)并紫外滅菌20 min。 37 'C恒溫培養(yǎng)箱在使用前需用75%乙醇擦拭滅菌。 2.3菌的培養(yǎng)與查菌
將5個(gè)菌種在超凈工作臺(tái)上、酒精燈環(huán)境下倒入裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中，每種菌培 養(yǎng)兩份。將這10個(gè)三角瓶放入搖床37 。C搖菌6 h。顯微鏡做鏡檢后開始查菌，記錄數(shù)據(jù)并 計(jì)算菌濃度，若5個(gè)中方格總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B ，則lml菌液中總菌數(shù)=八/5 X 25 X 10000 X 13 =50000AB 2.4樣品液及濾紙片的制備
將暴馬丁香樹皮揮發(fā)油配制成5 mg/ml的溶液(可加0 4u L 二甲基亞砜助溶)，按1 : 2。稀釋成2.5 mg/ml、 1.25 mg/ml、 0.625 mg/ml、 0.3125 mg/ml的溶液。將濾紙片用打孔器 打成直徑為6 mm的圓片，在超凈工作臺(tái)將濾紙片放進(jìn)各梯度樣品中浸泡2 h。 2. 5有菌瓊脂平板的制備
將稀釋好的菌液與固體培養(yǎng)基混合并搖晃均勻，此時(shí)菌的濃度應(yīng)達(dá)到3.6Xl(f CFU/ml。 將有菌培養(yǎng)基依次倒入各培養(yǎng)皿中，晃動(dòng)培養(yǎng)皿使培養(yǎng)基均勻地鋪在培養(yǎng)皿底部，冷卻至凝 固。
2. 6抑菌實(shí)驗(yàn)方法
用記號(hào)筆在有菌瓊脂平板上標(biāo)號(hào)，將浸泡好的濾紙片用鑷子夾出，放入寫相應(yīng)對照編號(hào) 的培養(yǎng)皿中，每個(gè)樣品做三個(gè)平行，放入37 。C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3. 1抑菌效果用抑菌圈直徑DD表示(單位mm)
在抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的第12h、 24h、 36h、 48h觀察菌的生長情況，測量抑菌圈直徑并記錄。表1暴馬丁香樹皮揮發(fā)油的抑菌活性
菌種揮發(fā)油鏈霉素
大腸桿菌832
鏈球菌1430
沙門氏菌935
巴氏菌1031
金黃色葡萄球菌1230
3. 2最小抑菌濃度MIC的測定(單位mg/ml)
用水做陰性對照，鏈霉素做陽性對照，揮發(fā)油的抑菌效果與二者對比得出最小抑菌濃度。
表2暴馬丁香樹皮揮發(fā)油的最小抑菌濃度MIC (單位mg/ml)
菌種揮發(fā)油鏈霉素
大腸桿菌1.250. 1
鏈球菌0. 630. 1
沙門氏菌1. 250. 1
巴氏菌1.250. 1
金黃色葡萄球菌5. 000, 1
結(jié)果表明暴馬丁香樹皮揮發(fā)油對大腸桿菌、鏈球菌、沙門氏菌、巴氏菌、金黃色葡萄
球菌均有不同程度的抑制作用。揮發(fā)油對五種菌的最小抑菌濃度在0. 63 mg/ml 5. 00 mg/ml 之間。
通過具體實(shí)施實(shí)例說明暴馬丁香樹皮揮發(fā)油抑菌效果很好，可作為天然抗菌劑用于食品、 藥品等行業(yè)，代替有毒副作用的合成抗菌劑。暴馬丁香揮發(fā)油對鏈球菌有良好的抑制作用， 可以制備各種劑型的藥品，用于治療化膿性炎癥、猩紅熱、風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎等疾病。 對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌有良好的抑制作用；可以制備食品添加劑以及各種 劑型的藥品，用于預(yù)防與治療因食物被細(xì)菌污染而導(dǎo)致的食物中毒。
暴馬丁香在中國已有1000年的耕種歷史，資源豐富，取材方便，適合大規(guī)模投入生產(chǎn)， 增加了開發(fā)的可行性，具有重要的實(shí)踐意義及開發(fā)前景。
權(quán)利要求
1.以暴馬丁香樹皮為原料制備揮發(fā)油的新工藝和新用途，并將暴馬丁香樹皮揮發(fā)油在具有抑菌作用的產(chǎn)品中進(jìn)行開發(fā)應(yīng)用。
2. —種制備暴馬丁香樹皮揮發(fā)油的新工藝，其特征在于該工藝包括以下過程(1) 取暴馬丁香樹皮，挑去雜物，水洗，烘干或晾干，粉碎，用蒸餾水浸泡12h后超聲 30 min，溫度為30'C，功率為80W;(2) 將(1)中藥材與浸泡液一同倒入揮發(fā)油提取器中，采用水蒸氣蒸餾法提取3 h，獲 得上面浮有揮發(fā)油的水溶液；(3) 將(2)中上面浮有揮發(fā)油的水溶液放出水層，用乙醚反復(fù)洗揮發(fā)油提取器，使暴馬 丁香揮發(fā)油充分溶解到乙醚中，將溶有揮發(fā)油的乙醚溶液倒入燒杯中，再向燒杯中加無水硫 酸鈉吸干水分，回收乙醚后即得到純凈的揮發(fā)油，放入冰箱4 。C保存?zhèn)溆谩?br> 3. 根據(jù)本發(fā)明1至2所述的制備暴馬丁香樹皮揮發(fā)油的原料為暴馬丁香5>ri/^3 柳"re"s/s Rupr. 的樹皮。
4. 根據(jù)本發(fā)明1至2所述的暴馬丁香樹皮揮發(fā)油對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、巴氏菌、 鏈球菌、沙門氏菌均有不同程度的抑制作用。
5. 根據(jù)本發(fā)明1至2所述的暴馬丁香樹皮揮發(fā)油，其特征在于該樹皮揮發(fā)油可作為天然 抗菌劑用于食品、藥品等行業(yè)，代替有毒副作用的合成抗菌劑。
全文摘要
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及以暴馬丁香(Syringa amurensis Rupr)樹皮揮發(fā)油的制備新工藝和新用途。取暴馬丁香樹皮，干燥后剪碎，用蒸餾水浸泡12h后超聲30min，溫度為30℃，功率為80W。將藥材與浸泡液一同倒入揮發(fā)油提取器中，采用水蒸汽蒸餾法提取3h。放出水層，用乙醚反復(fù)洗揮發(fā)油提取器，使暴馬丁香揮發(fā)油充分溶解到乙醚中。將溶有揮發(fā)油的乙醚溶液倒入燒杯中，再向燒杯中加無水硫酸鈉吸干水分，回收乙醚后即得到純凈的揮發(fā)油，放入冰箱4℃保存?zhèn)溆?。本發(fā)明暴馬丁香樹皮揮發(fā)油對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、巴氏菌、鏈球菌、沙門氏菌均有不同程度的抑制作用，可開發(fā)為天然抗菌劑應(yīng)用于食品、藥品等行業(yè)，制備出具有抑菌作用的各種形式的產(chǎn)品。
文檔編號(hào)A01N65/08GK101574093SQ20091006714
公開日2009年11月11日 申請日期2009年6月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月22日
發(fā)明者張連學(xué), 蔡恩博, 鄭友蘭 申請人:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)