專利名稱：一種禽用地衣芽孢桿菌制劑的制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于獸用生物制品領(lǐng)域，具體的說(shuō)是提供一種作為飼料添加劑的地衣芽孢桿菌制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
微生態(tài)飼料添加劑是根據(jù)微生態(tài)學(xué)理論研制的含有對(duì)動(dòng)物有益微生物的活菌制 劑，它們通過(guò)維持動(dòng)物腸道內(nèi)微生態(tài)平衡而發(fā)揮作用，具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育，提高動(dòng)物機(jī) 體免疫力等多種功能，且無(wú)污染、無(wú)殘留、無(wú)耐藥性和對(duì)環(huán)境無(wú)害等，是一類新型綠色環(huán)保 飼料添加劑。這些禽畜用的益生菌制劑含有芽孢桿菌，乳酸桿菌，糞鏈球菌，雙歧桿菌，酵母 等，光合細(xì)菌和梭狀芽胞桿菌屬的部分菌株及噬菌蛭弧菌等也偶然被用做益生菌添加到仔 豬和仔雞飼料中?；罹苿┦加谏鲜兰o(jì)初，有人用酸牛奶來(lái)調(diào)整幼畜腹瀉出現(xiàn)的腸道微生物菌群失 調(diào)。后來(lái)，在研究中人們發(fā)現(xiàn)用活菌制劑可防止畜禽的腹瀉和腸炎，繼之又發(fā)現(xiàn)活菌制劑還 可改善動(dòng)物對(duì)飼料的利用，并有利于促進(jìn)畜禽的生長(zhǎng)發(fā)育和腸道健康，從而擴(kuò)大了活菌制 劑在畜牧生產(chǎn)中的作用和應(yīng)用前景，概括起來(lái)，主要有以下幾個(gè)方面的作用改善動(dòng)物胃腸道微生態(tài)環(huán)境研究表明，動(dòng)物自身及許多致病菌不會(huì)產(chǎn)生各種有 毒物質(zhì)，如胺、氨、細(xì)菌毒素、氧自由基等代謝產(chǎn)物。有些有益菌可以阻止毒性胺和氨的合成 或把它們分解中和細(xì)菌毒素，從而避免這些有害物質(zhì)對(duì)動(dòng)物機(jī)體組織細(xì)胞的損害作用。一 些好氧菌則通過(guò)產(chǎn)生超氧化物歧化酶來(lái)消除氧自由基，減少或消除氧自由基對(duì)細(xì)胞及細(xì)胞 器膜質(zhì)結(jié)構(gòu)的損害。乳酸菌能夠產(chǎn)生有機(jī)酸和抗菌物質(zhì)，降低腸道內(nèi)PH值值和氧化還原電 位，有利于宿主生長(zhǎng)發(fā)育和維持腸道健康。產(chǎn)生有益物質(zhì)動(dòng)物微生態(tài)活菌制劑能夠在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生各種消化酶，合成B族 維生素、維生素K等動(dòng)物所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；同時(shí)能促使動(dòng)物體增加對(duì)腸道內(nèi)容物中鈣、鎂 等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。建立和維持腸道微生態(tài)平衡研究表明，動(dòng)物腸道內(nèi)寄居的微生物，主要為厭氧 菌。通常情況下，腸道內(nèi)有益菌和致病菌會(huì)保持一定比例，當(dāng)條件發(fā)生改變時(shí)，致病菌大量 繁殖引起平衡失調(diào)，從而導(dǎo)致動(dòng)物體患病。當(dāng)需氧型益生菌進(jìn)入消化道后，生長(zhǎng)繁殖消耗腸 道內(nèi)大量氧氣，通過(guò)“生物奪氧”使需氧型致病菌大幅度下降，因而起到防止動(dòng)物患病的作 用。研究還發(fā)現(xiàn)，益生菌能夠有秩序地定植于粘膜、皮膚等表面或細(xì)胞之間形成生物屏障， 這些屏障可以阻止病原微生物的定植，起著占位、爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)?；ダ采蜣卓棺饔?，形成保 護(hù)屏障，阻止病原菌的侵入，從而對(duì)致病菌的定植產(chǎn)生抑制作用。增強(qiáng)動(dòng)物免疫能力和促進(jìn) 動(dòng)物生長(zhǎng)微生態(tài)制劑可作為非特異性免疫調(diào)節(jié)因子，增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬能力和細(xì)胞產(chǎn) 生抗體的能力，刺激動(dòng)物產(chǎn)生干擾素，從而增強(qiáng)抗病能力。據(jù)報(bào)道，用活菌微生態(tài)制劑—— 益生素飼喂哺乳仔豬，添加組腹瀉率明顯比對(duì)照組減少(3.91%，P<0.01)，成活率提高 79%。在10 28日齡的仔豬飼料中添加益生素，試驗(yàn)組采食量平均比對(duì)照組增加70g/d，增 重提高4. 2%。又有研究報(bào)道，在雛雞中分別飼喂和不飼喂乳酸桿菌制劑兩個(gè)組的基礎(chǔ)上，進(jìn)行雞的白痢沙門氏菌攻毒試驗(yàn)。結(jié)果表明，飼喂乳酸桿菌雛雞組與對(duì)照組相比，死亡率明顯 降低了 20%。還有報(bào)道稱在魚(yú)蝦飼料中添加微生態(tài)制劑，可使魚(yú)蝦增重提高10% 20%。在畜牧生產(chǎn)中常用的微生態(tài)添加劑，乳酸菌和芽胞桿菌類益生菌為主要的微生態(tài) 添加劑。與乳酸菌、雙歧桿菌等相比，芽孢桿菌的優(yōu)點(diǎn)在于它對(duì)外界不良環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗 力，能耐60°C以上高溫，保存時(shí)間長(zhǎng)(常溫下1年以上)，培養(yǎng)容易，便于加工制成各種制 劑，效果穩(wěn)定。本試驗(yàn)采用牛肉湯蛋白胨培養(yǎng)基為培養(yǎng)一級(jí)種子，用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)二 級(jí)種子，用牛肉湯蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行連續(xù)補(bǔ)料分批發(fā)酵方式擴(kuò)增培養(yǎng)，發(fā)酵液經(jīng)過(guò)離心，菌 體用輕質(zhì)碳酸鈣吸附在干燥箱中40°C烘干成干粉，再與藥用葡萄糖和白色淀維粉稀釋制備 成微生態(tài)制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種能促進(jìn)畜禽類生長(zhǎng)，防治細(xì)菌性腹瀉及菌群失調(diào)的地衣 芽孢桿菌制劑的制備方法。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下(1)用牛肉湯蛋白胨培養(yǎng)基為種子培養(yǎng)基，pH值6. 0 8. 0，30 37°C有氧條件 下培養(yǎng)地衣芽孢桿菌18 24h，成為一級(jí)種子；(2)將一級(jí)種子液接種在營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)，PH值6.0 8.0，30 37°C有 氧條件下培養(yǎng)18 24h，成為二級(jí)種子；(3)將二級(jí)種子液接種在牛肉湯蛋白胨培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，pH值6. 0 8. 0，30 37°C有氧條件下，采用連續(xù)補(bǔ)料分批發(fā)酵方式培養(yǎng)48 72h，培養(yǎng)結(jié)束后靜置24 48h使 芽孢出芽率達(dá)到90%以上；(4)發(fā)酵液經(jīng)常溫SOOOrpm 20min離心，菌體沉淀用輕質(zhì)碳酸鈣吸附，在干燥箱中 40°C烘干成干粉；(5)將上述干粉加入藥用葡萄糖和白色淀維粉稀釋，研磨混勻制成微生態(tài)制劑。上述步驟(1)所述種子培養(yǎng)時(shí)間為優(yōu)選20h。上述步驟(3)所述的發(fā)酵培養(yǎng)為補(bǔ)料分批式，每隔20h流出60% 80%發(fā)酵菌
液，并補(bǔ)加等量發(fā)酵培養(yǎng)基。上述步驟(4)所述的離心后的菌體沉淀與輕質(zhì)碳酸鈣以1 3比例混合，干燥。上述步驟(5)所述干粉與藥用葡萄糖和白色淀維粉的稀釋比例為1 3 6。根據(jù)本技術(shù)方案制備的微生態(tài)制劑以1 5比例拌飼料使用。本發(fā)明的有益效果是1、本發(fā)明提供的地衣芽孢桿菌微生態(tài)制劑對(duì)某些致病菌有明顯的抑制作用，能調(diào) 整腸道內(nèi)的菌群，無(wú)毒、無(wú)不良反應(yīng)，使用安全。2、采用補(bǔ)料式發(fā)酵方式使產(chǎn)菌量大大提高，利于工業(yè)化大量產(chǎn)生。3、用本發(fā)明的方法制備地衣芽孢桿菌微生態(tài)制劑作為飼料添加劑應(yīng)用于禽類時(shí)， 可不使用抗生素和激素，并能促進(jìn)禽類的生長(zhǎng)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。
實(shí)施例1 地衣芽孢桿菌制劑的制備方法，包括下述步驟(1)用牛肉湯蛋白胨培養(yǎng)基為種子培養(yǎng)基，pH值7. 0，37°C有氧條件下培養(yǎng)地衣芽 孢桿菌20h，成為一級(jí)種子；(2)將一級(jí)種子液接種在營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)，pH值7. 0，37°C有氧條件下培養(yǎng) 地衣芽孢桿菌20h，成為二級(jí)種子；(3)將二級(jí)種子液接種在牛肉湯蛋白胨培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，pH值7. 0，37°C有氧條 件下，采用連續(xù)補(bǔ)料分批發(fā)酵方式培養(yǎng)24h，培養(yǎng)結(jié)束后靜置24h使芽孢出芽率達(dá)到90 %以 上；(4)發(fā)酵液經(jīng)常溫SOOOrpm 20min離心，菌體沉淀與輕質(zhì)碳酸鈣1 3比例混合， 吸附，在干燥箱中40°C烘干成干粉，制得800g干粉；(5)將上述800g干粉加入藥用葡萄糖2400g和白色淀維粉4800g稀釋，研磨混勻 制成微生態(tài)制劑8kg。實(shí)施例2 本發(fā)明的方法制備的干粉對(duì)單純性雞大腸桿菌病的治療某雞場(chǎng)飼養(yǎng)蛋雞5000只，曾于23日齡有50%左右的雞發(fā)生雞大腸桿菌病，并造成 平均約每天1 %的死亡率，表現(xiàn)癥狀為嚴(yán)重腹瀉，直到35日齡就診，其間曾用敵菌凈、土霉 素等治療，連用一周病程好轉(zhuǎn)，但停藥后又復(fù)發(fā)，經(jīng)糞涂片30份，無(wú)固定致病原，視野中大 多數(shù)是革蘭氏陰性桿菌。通過(guò)地衣芽孢桿菌微生態(tài)制劑1 5拌料飼喂，以每雞每天0. 3億活菌劑量投服， 7天內(nèi)全群恢復(fù)，采食量由每天每只87g增加至98g。糞涂片20份，視野中95%為革蘭氏陽(yáng) 性桿菌，90%桿菌為芽孢桿菌的狀態(tài)。臨床結(jié)果表明，本發(fā)明制劑能夠降低畜禽由于大腸桿菌等有害微生物造成腹瀉的 發(fā)生率，提高成活率；提高機(jī)體免疫功能，提高飼料轉(zhuǎn)化利用率，并具有治療腸道菌群失調(diào) 的作用，無(wú)毒、無(wú)不良反應(yīng)。
權(quán)利要求
一種禽類地衣芽孢桿菌制劑的制備方法，其特征在于包括下述步驟(1)用牛肉湯蛋白胨培養(yǎng)基為種子培養(yǎng)基，pH值6.0～8.0，30～37℃有氧條件下培養(yǎng)地衣芽孢桿菌18～24h，成為一級(jí)種子；(2)將一級(jí)種子液接種在營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)，pH值6.0～8.0，30～37℃有氧條件下培養(yǎng)18～24h，成為二級(jí)種子；(3)將二級(jí)種子液接種在牛肉湯蛋白胨培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，pH值6.0～8.0，30～37℃有氧條件下，采用連續(xù)補(bǔ)料分批發(fā)酵方式培養(yǎng)48～72h，培養(yǎng)結(jié)束后靜置24～48h使芽孢出芽率達(dá)到90％以上；(4)發(fā)酵液經(jīng)常溫8000rpm 20min離心，菌體沉淀用輕質(zhì)碳酸鈣吸附，在干燥箱中40℃烘干成干粉；(5)將上述干粉加入藥用葡萄糖和白色淀維粉稀釋，研磨混勻制成微生態(tài)制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種禽類地衣芽孢桿菌制劑的制備方法步驟(1)中種子培養(yǎng) 時(shí)間優(yōu)選為20h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種禽類地衣芽孢桿菌制劑的制備方法步驟(3)中所述的培 養(yǎng)方式為連續(xù)補(bǔ)料分批培養(yǎng)方式，每隔20h流出60% 80%發(fā)酵菌液，并補(bǔ)加等量發(fā)酵培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種禽類地衣芽孢桿菌制劑的制備方法步驟(4)中所述的發(fā) 酵液離心后的菌體沉淀與輕質(zhì)碳酸鈣以1 3比例混合，進(jìn)行干燥。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種禽類地衣芽孢桿菌制劑的制備方法步驟(5)中所述干粉 與藥用葡萄糖和白色淀維粉的稀釋比例為1 3 6。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種禽類地衣芽孢桿菌制劑，以1 5比例拌飼料使用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種禽類地衣芽孢桿菌制劑的制備方法，把地衣芽孢桿菌培育后加輕質(zhì)碳酸鈣脫水干燥，并用葡萄糖和白色淀維粉稀釋成每克含100億活菌的制劑，在臨床上可用于治療由大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等引起的腹瀉和菌群失調(diào)。該制劑的穩(wěn)定性高，貯藏簡(jiǎn)單，有利于長(zhǎng)期使用。
文檔編號(hào)A23K1/18GK101986865SQ20091006993
公開(kāi)日2011年3月23日 申請(qǐng)日期2009年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月30日
發(fā)明者王小娥 申請(qǐng)人:天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司