專利名稱：一種蛋白飼料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛋白飼料及其制備方法。
背景技術(shù)：
亞麻籽，又稱胡麻籽，是亞麻科植物亞麻的種子。近十年世界亞麻籽產(chǎn)量迅速 增加，而中國已成為僅次于加拿大的世界第二大亞麻籽產(chǎn)國，亞麻籽產(chǎn)量占世界總
量的20%。亞麻籽油富含約73%的多不飽和脂肪酸，18%的單不飽和脂肪酸而成為優(yōu) 質(zhì)的食用油脂來源。亞麻籽油的制備過趕中會(huì)產(chǎn)生大量脫脂粕，亞麻粕中富含蛋白 質(zhì)、木脂素、可溶性纖維、礦物質(zhì)及維生素等營養(yǎng)成分，可以很好地補(bǔ)充市場上蛋 白飼料的缺口，是可利用的重要資源。目前亞麻粕尚不能被有效利用，只能將少量 亞麻粕加入飼料中，直接飼喂牛羊，利用率很低。如不將亞麻粕加以回收利用，不 僅造成資源浪費(fèi)，還會(huì)堆積腐敗，造成嚴(yán)重的環(huán)境污染。
關(guān)于亞麻粕的研究，目前主要以亞麻粕中有效成分的提取為主，包括蛋白質(zhì)、 木脂素等。在國內(nèi)，主要是通過物理方法(擠壓膨化)處理亞麻粕而改善其營養(yǎng)利 用率。
利用微生物生產(chǎn)和調(diào)劑飼料具有物理和化學(xué)方法不可替代的優(yōu)越性，是開發(fā)利 用新飼料資源的有效途徑。微生物酶的生產(chǎn)，目前主要采用液體深層發(fā)酵和固體發(fā) 酵兩種形式。液體深層發(fā)酵具有益于微生物生長、易于控制、易于擴(kuò)散熱量等優(yōu)點(diǎn)。
固體發(fā)酵的優(yōu)點(diǎn)主要表現(xiàn)為1)培養(yǎng)基簡單，多為廉價(jià)的天然基質(zhì)；2)基質(zhì)的低 含水率可大大減少升華反應(yīng)器的體積，不需要廢水處理，減少環(huán)境污染；3)不一 定連續(xù)通風(fēng)， 一般可間歇通風(fēng)或氣體擴(kuò)散完成；4)產(chǎn)物的產(chǎn)率較高；5)設(shè)備簡單，
投資小，能耗低。由于飼料工業(yè)附加值低，飼料用酶無需精制，因此，采用固態(tài)發(fā) 酵更為合適。
微生物發(fā)酵技術(shù)已成為現(xiàn)今比較成熟的技術(shù)之一，其中一些也已實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生 產(chǎn)，但至今尚未發(fā)現(xiàn)有人利用微生物發(fā)酵亞麻粕制備蛋白飼料。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種蛋白飼料及其制備方法。 本發(fā)明提供的生產(chǎn)蛋白飼料的方法，是將亞麻粕進(jìn)行發(fā)酵，得到蛋白飼料。所述方法中，可在亞麻粕中接種米曲霉(Asperillus oryzae)進(jìn)行發(fā)酵。 本發(fā)明提供的生產(chǎn)蛋白飼料的方法可包括如下步驟
1) 將粉碎后的亞麻粕與緩沖液混合，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；所述緩沖液為 pH2. 0-10. 0的緩沖液；所述亞麻粕與所述緩沖液的質(zhì)量比為l: (2-7);
2) 在發(fā)酵培養(yǎng)基中接種米曲霉進(jìn)行發(fā)酵，得到蛋白飼料。
所述步驟l)中，優(yōu)選pH5. 0-7. 0的緩沖液；所述亞麻粕與所述緩沖液的質(zhì)量比 優(yōu)選為l: (2-3)。
所述亞麻粕通常是指亞麻油脂加工廠生產(chǎn)亞麻油時(shí)所產(chǎn)生的廢渣，根據(jù)油脂加 工的不同工藝，亞麻粕包括高溫亞麻粕和低溫亞麻粕兩種。所述緩沖液可以同時(shí)實(shí) 現(xiàn)對(duì)亞麻粕含水率和pH值的調(diào)節(jié)，達(dá)到抑制雜菌生長的目的。所述粉碎后的亞麻粕 可將片狀結(jié)構(gòu)的亞麻粕通過油脂粉碎機(jī)或其它飼料用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎處理得到。
所述米曲霉的接種量具體可為(0.125-6) Xl(f個(gè)/mL。
所述步驟1)中，所述粉碎后的亞麻粕的粒度可為20-120目，優(yōu)選為40-80目。 所述步驟2)中，發(fā)酵條件可為溫度為26-4CTC、相對(duì)濕度為80-95%、時(shí)間
為24-96小時(shí)。發(fā)酵條件優(yōu)選為溫度為28-30°C、相對(duì)濕度為80-85%、時(shí)間為72小時(shí)。
所述發(fā)酵培養(yǎng)基可以只含有所述亞麻粕和所述緩沖液。所述發(fā)酵培養(yǎng)基還可含 有輔料。所述輔料可為氮源、無機(jī)鹽、微量元素和義體中的至少一種。
所述氮源可為無機(jī)氮源和/或有機(jī)氮源。所述無機(jī)氮源具體可為銨鹽和/或硝酸 鹽，如氯化銨、硫酸銨、硝酸鉀等。所述有機(jī)氮源具體可為豆餅粉、花生餅粕、魚 粉、酵母粉、玉米漿中的至少一種。所述無機(jī)鹽具體可為鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鉀鹽 中的至少一種，如磷酸二氫鉀。所述載體為利于通風(fēng)的載體，具體可為稻殼、麩皮、 玉米皮中的至少一種。
各種無機(jī)鹽和微量元素是微生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)的重要成分或酶的組成成分，維持酶 的活性，能促進(jìn)微生物生長、發(fā)育、刺激酶的生成。在具體實(shí)踐中，應(yīng)根據(jù)不同菌 種的需要量，通過試驗(yàn)來研究確定無機(jī)鹽類等的加入量。
所述發(fā)酵培養(yǎng)基中具體可含有如下輔料麩皮、硫酸銨和磷酸二氫鉀；所述發(fā) 酵培養(yǎng)基中麩皮的質(zhì)量可為亞麻粕質(zhì)量的10%-15%，優(yōu)選為15%;硫酸銨的質(zhì)量可 為亞麻粕質(zhì)量的1%-1.5%，優(yōu)選為1.5%;磷酸二氫鉀的質(zhì)量可為亞麻粕質(zhì)量的O. 5%。
所述輔料可由同類輔料進(jìn)行替換，或調(diào)整相互間的比例，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以
4理解，所作的替換或調(diào)整均不會(huì)超出本發(fā)明的范圍。
發(fā)酵完成后，可將發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行干燥，得到蛋白飼料，為了干燥更迅速，可采 用60-7(TC進(jìn)行干燥。
生產(chǎn)中所用菌種可通過菌種擴(kuò)培流程制備得到。菌種擴(kuò)培流程為試管斜面菌種 培養(yǎng)一一級(jí)菌種擴(kuò)培一生產(chǎn)用菌種擴(kuò)培，具體方法如下
(1) 斜面菌種培養(yǎng)馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基為斜面培養(yǎng)基。
(2) —級(jí)菌種擴(kuò)培采用液體擴(kuò)培的方法，培養(yǎng)基可采用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng) 基或麥芽汁培養(yǎng)基。
(3) 生產(chǎn)用菌種擴(kuò)培采用固體擴(kuò)培的方法，培養(yǎng)基采用麩皮，并添加一些 微量元素。采用固體方法擴(kuò)培菌種，實(shí)際生產(chǎn)過程中菌種的添加將不會(huì)對(duì)發(fā)酵原料 的水分造成很大的影響。用于實(shí)驗(yàn)室實(shí)施方式中所用到的菌種無需進(jìn)行生產(chǎn)性擴(kuò) 培，利用血球計(jì)數(shù)板和顯微鏡統(tǒng)計(jì)液體培養(yǎng)基中的孢子數(shù)，按照要求比例接種即可。
本發(fā)明的方法具體來說是一種固態(tài)發(fā)酵的方法。 所述方法制備得到的蛋白飼料也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
本發(fā)明的蛋白飼料，以質(zhì)量百分含量計(jì)，粗蛋白含量為28-41%，中性洗滌纖維 含量為11-27%。所述粗蛋白是蛋白飼料中含氮物質(zhì)的總稱，包括真蛋白質(zhì)和非蛋白 含氮物質(zhì)兩部分，后者主要包括游離氨基酸、硝酸鹽、氨等。蛋白飼料中蛋白酶活 力為133-2241U/g，纖維素酶活力為3.2-65.9U/g。本發(fā)明的飼料中，粗蛋白含量 相對(duì)于原料有明顯的增長，中性洗滌纖維顯著減少，產(chǎn)生大量蛋白酶，營養(yǎng)價(jià)值大 大提高。產(chǎn)品顏色相對(duì)于原料有了明顯的改善，氣味芳香，且物料疏松，提高了家 畜的采食速度和采食量，適口性得到明顯改善，提高了亞麻粕飼料的生物效價(jià)。
本發(fā)明提供的蛋白飼料不僅可以單獨(dú)用于家畜的喂飼，還可作為添加劑，用 于制備動(dòng)物飼料。除了所述蛋白飼料，動(dòng)物詞料中還可進(jìn)一步選擇性的添加家畜 生長所需的其它營養(yǎng)成分，例如脂肪、碳水化合物、各種微量礦物元素、維生素、 藥物添加劑等。本領(lǐng)域技術(shù)人員可按照常規(guī)技術(shù)來選擇本發(fā)明提供的蛋白飼料及其 它營養(yǎng)成分在所述飼料中的加入量及加入方式。
本發(fā)明提供的制備蛋白詞料的方法具有禽產(chǎn)、簡易、低投資、低能耗、占地少 等優(yōu)點(diǎn)。發(fā)酵工藝操作簡單方便，易于控制管理，投資靈活性強(qiáng)。通過一次發(fā)酵生 產(chǎn)的飼料，粗蛋白質(zhì)含量和蛋白酶活力明顯增加，緩解我國飼料蛋白的不足，給亞 麻油加工廠帶來一定的經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)解決了企業(yè)的環(huán)境污染問題。本發(fā)明所得的蛋白飼料易干燥，低能耗、高回收，可把發(fā)酵物包括菌體及其代謝產(chǎn)物和底物全部 利用，既保留了活性成分又沒有廢液污染之憂。
利用本發(fā)明的方法制備蛋白飼料可以實(shí)現(xiàn)以下目標(biāo)1)經(jīng)濟(jì)，成本低，可以 大幅度提高亞麻粕的附加值。對(duì)于我國亞麻籽的主產(chǎn)區(qū)西北地區(qū)具有重要的經(jīng)濟(jì)社 會(huì)價(jià)值；2)對(duì)亞麻粕的營養(yǎng)成分影響破壞較?。?)可以同時(shí)作用去除多種抗?fàn)I養(yǎng) 因子；4)發(fā)酵使得亞麻粕細(xì)胞壁破壞更加徹底，內(nèi)容物更加容易釋放，有利于動(dòng) 物更快的吸收營養(yǎng)物質(zhì)；5)增加了微生物活菌體，有利于動(dòng)物腸道菌群的平衡。
具體實(shí)施例方式
以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí) 驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊 說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。
實(shí)施例1、蛋白飼料的制備和性能測定 一、蛋白飼料的制備
1、 發(fā)酵培養(yǎng)基的制備
取10g用油脂粉碎機(jī)粉碎的粒度為20-40目的亞麻粕，加入到250mL三角瓶中。 加入pH2.0的緩沖液，亞麻粕與緩沖液的質(zhì)量比為1:7。得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
2、 菌種的培養(yǎng)
(1) 斜面菌種制備
利用馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基或5Be。麥芽汁斜面培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無菌操作 接種米曲霉(Asperillus oryzae 3.951，中科院微生物所菌種保藏中心)，28°C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，制成斜面菌種，置于冰箱中貯藏備用。
(2) 菌種培養(yǎng)
利用馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，接入斜面菌種兩環(huán)，于振蕩培養(yǎng)箱中28。C、 200r/min培養(yǎng)48小時(shí)。
3、 發(fā)酵
將發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌處理，按照0. 125Xl()6個(gè)/mL的濃度接種米曲霉。 放入恒溫恒濕箱里靜止培養(yǎng)，控制環(huán)境溫度26t:、濕度95%，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)。 得到蛋白飼料。發(fā)酵完成后，取部分發(fā)酵產(chǎn)物冷凍干燥(用于酶活力測定)，其它 發(fā)酵產(chǎn)物7(TC干燥4小時(shí)。二、蛋白飼料的性能測定
1、 蛋白酶和纖維素酶活力測定
取冷凍干燥的樣品lg，檢測樣品中蛋白酶和纖維素酶活力。蛋白酶活力測定的
方法參照中華人民共和國食品行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10317-1999，纖維素酶活力測定的方 法參照中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 912-2004。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，蛋白酶活力為132.8士 18. 6U/g (平均值士標(biāo)準(zhǔn)差)，纖維素酶活力為3. 19±0. 63U/g (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)。
2、 成分測定
取加熱干燥的樣品1-2g，用于檢測飼料中粗蛋白含量和中性洗滌纖維含量。粗 蛋白含量的測定方法參照GB/T 6432-1994，中性洗滌纖維含量的測定方法參照GB/T 20806-2006。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，粗蛋白含量為28.0%±1.2% (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)，中性洗漆纖維含量為26.7%±1.7% (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)。
實(shí)施例2、蛋白詞料的制備和性能測定 一、蛋白飼料的制備
1、 發(fā)酵培養(yǎng)基的制備
取10g用油脂粉碎機(jī)粉碎的粒度為100-120目的亞麻粕，加入到250mL三角瓶 中。加入pH10.0的緩沖液，亞麻粕與緩沖液的質(zhì)量比為1:7。得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
2、 菌種的培養(yǎng)
(1) 斜面菌種制備
利用馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基或5Be。麥芽汁斜面培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無菌操作 接種米曲霉(Asperillus oryzae 3.951，中科院微生物所菌種保藏中心)，28°C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，制成斜面菌種，置于冰箱中貯藏備用。
(2) 菌種培養(yǎng)
利用馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，接入斜面菌種兩環(huán)，于振蕩培養(yǎng)箱中28'C、 200r/min培養(yǎng)48小時(shí)。
3、 發(fā)酵
將發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌處理，按照6.0X106個(gè)/mL的濃度接種米曲霉。放 入恒溫恒濕箱里靜止培養(yǎng)，控制環(huán)境溫度4(TC、濕度95%，發(fā)酵時(shí)間為96小時(shí)。得到蛋白飼料。發(fā)酵完成后，取部分發(fā)酵產(chǎn)物冷凍干燥(用于酶活力測定)，其它 發(fā)酵產(chǎn)物7(TC干燥4小時(shí)。
二、蛋白飼料的性能測定
1、 蛋白酶和纖維素酶活力測定
取冷凍干燥的樣品lg，檢測樣品中蛋白酶和纖維素酶活力。蛋白酶活力測定的
方法參照中華人民共和國食品行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10317-1999，纖維素酶活力測定的方 法參照中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 912-2004。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，蛋白酶活力為235.0士 21.9U/g (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)，纖維素酶活力為5.94土1.34U/g(平均值士標(biāo)準(zhǔn)差)。
2、 成分測定
取加熱干燥的樣品1-2g，用于檢測飼料中粗蛋白含量和中性洗滌纖維含量。粗 蛋白含量的測定方法參照GB/T 6432-1994，中性洗滌纖維含量的測定方法參照GB/T 20806-2006。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，粗蛋白含量為28.9%±0.9°/0 (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)，中性洗滌纖維含量為25.9%±1.9% (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)。
實(shí)施例3、蛋白飼料的制備和性能測定 一、蛋白飼料的制備
1、 發(fā)酵培養(yǎng)基的制備
取10g用油脂粉碎機(jī)粉碎的粒度為20-40目的亞麻粕，加入到250mL三角瓶中。 按照亞麻粕的質(zhì)量計(jì)，添加10%麩皮、1.0%硫酸銨和0.5%磷酸氫二鉀，混合均勻。 加入pH6.0的緩沖液，亞麻粕與緩沖液的質(zhì)量比為1:6。得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
2、 菌種的培養(yǎng)
(1) 斜面菌種制備
利用馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基或5Be。麥芽汁斜面培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無菌操作 接種米曲霉(Asperillus oryzae 3.951，中科院微生物所菌種保藏中心)，28°C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，制成斜面菌種，置于冰箱中貯藏備用。
(2) 菌種培養(yǎng)
利用馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，接入斜面菌種兩環(huán)，于振蕩培養(yǎng)箱中28'C、 200r/rain培養(yǎng)48小時(shí)。3、發(fā)酵
將發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌處理，按照1.0X106個(gè)/mL的濃度接種米曲霉。放 入恒溫恒濕箱里靜止培養(yǎng)，控制環(huán)境溫度36i:、濕度95%，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)。 得到蛋白飼料。發(fā)酵完成后，取部分發(fā)酵產(chǎn)物冷凍干燥(用于酶活力測定)，其它 發(fā)酵產(chǎn)物7(TC干燥4小時(shí)。
二、蛋白飼料的性能測定
1、 蛋白酶和纖維素酶活力測定
取冷凍干燥的樣品lg，檢測樣品中蛋白酶和纖維素酶活力。蛋白酶活力測定的 方法參照中華人民共和國食品行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10317-1999，纖維素酶活力測定的方 法參照中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 912-2004。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，蛋白酶活力為314.0土 12. 1U/g (平均值士標(biāo)準(zhǔn)差)，纖維素酶活力為8. 42±0. 26U/g (平均值士標(biāo)準(zhǔn)差)。
2、 成分測定
取加熱干燥的樣品卜2g，用于檢測飼料中粗蛋白含量和中性洗滌纖維含量。粗 蛋白含量的測定方法參照GB/T 6432-1994，中性洗滌纖維含量的測定方法參照GB/T 20806-2006。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，粗蛋白含量為30. 4%±0. 4% (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)，中性洗滌纖維含量為22.2%±3.5% (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)。
實(shí)施例4、蛋白飼料的制備和性能測定 一、蛋白飼料的制備
1、 發(fā)酵培養(yǎng)基的制備
取10g用油脂粉碎機(jī)粉碎的粒度為40-60目的亞麻粕，加入到250mL三角瓶中。 按照亞麻粕的質(zhì)量計(jì)，添加10%麩皮、1.0%硫酸銨和0.5%磷酸氫二鉀，混合均勻。 加入pH6.0的緩沖液，亞麻粕與緩沖液的質(zhì)量比為1:4。得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
2、 菌種的培養(yǎng) (1)斜面菌種制備
利用馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基或5Be。麥芽汁斜面培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無菌操作 接種米曲霉(Asperillus oryzae 3.951，中科院微生物所菌種保藏中心)，28°C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，制成斜面菌種，置于冰箱中貯藏備用。(2)菌種培養(yǎng)
利用馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，接入斜面菌種兩環(huán)，于振蕩培養(yǎng)箱中28'C、
200r/min培養(yǎng)48小時(shí)。 3、發(fā)酵
將發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌處理，按照1.0X106個(gè)/mL的濃度接種米曲霉。放 入恒溫恒濕箱里靜止培養(yǎng)，控制環(huán)境溫度32i:、濕度90%，發(fā)酵時(shí)間為48小時(shí)。 得到蛋白飼料。發(fā)酵完成后，取部分發(fā)酵產(chǎn)物冷凍干燥(用于酶活力測定)，其它 發(fā)酵產(chǎn)物7(TC干燥4小時(shí)。
二、蛋白飼料的性能測定
1、 蛋白酶和纖維素酶活力測定
取冷凍干燥的樣品lg，檢測樣品中蛋白酶和纖維素酶活力。蛋白酶活力測定的 方法參照中華人民共和國食品行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10317-1999，纖維素酶活力測定的方 法參照中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 912-2004。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，蛋白酶活力為681.6士 22.6U/g(平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)；纖維素酶活力為14.41±0. 57U/g(平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)。
2、 成分測定
取加熱干燥的樣品1-2g，用于檢測飼料中粗蛋白含量和中性洗滌纖維含量。粗 蛋白含量的測定方法參照GB/T 6432-1994，中性洗滌纖維含量的測定方法參照GB/T 20806-2006。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，粗蛋白含量為33.9%±0. 8% (平均值士標(biāo)準(zhǔn)差)；中性洗滌纖維含量為18.2%±2.4% (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)。
實(shí)施例5、蛋白飼料的制備和性能測定 一、蛋白飼料的制備
1、 發(fā)酵培養(yǎng)基的制備
取10g用油脂粉碎機(jī)粉碎的粒度為40-60目的亞麻粕，加入到250mL三角瓶中。 按照亞麻粕的質(zhì)量計(jì)，添加15%麩皮、1.5%硫酸銨和0.5%磷酸氫二鉀，混合均勻。 加入pH5.0的緩沖液，亞麻粕與緩沖液的質(zhì)量比為1:4。得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
2、 菌種的培養(yǎng) (1)斜面菌種制備利用馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基或5Be。麥芽汁斜面培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無菌操作 接種米曲霉(Asperillus oryzae 3.951，中科院微生物所菌種保藏中心)，28°C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，制成斜面菌種，置于冰箱中貯藏備用。 (2)菌種培養(yǎng)
利用馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，接入斜面菌種兩環(huán)，于振蕩培養(yǎng)箱中28"C、 200r/min培養(yǎng)48小時(shí)。 3、發(fā)酵
將發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌處理，按照0. 5X 106個(gè)/mL的濃度接種米曲霉。放 入恒溫恒濕箱里靜止培養(yǎng)，控制環(huán)境溫度3(TC、濕度85%，發(fā)酵時(shí)間為72小時(shí)。 得到蛋白飼料。發(fā)酵完成后，取部分發(fā)酵產(chǎn)物冷凍干燥(用于酶活力測定)，其它 發(fā)酵產(chǎn)物7(TC干燥4小時(shí)。
二、蛋白飼料的性能測定
1、 蛋白酶和纖維素酶活力測定
取冷凍干燥的樣品lg，檢測樣品中蛋白酶和纖維素酶活力。蛋白酶活力測定的 方法參照中華人民共和國食品行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10317-1999，纖維素酶活力測定的方 法參照中華人民共和'國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 912-2004。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，蛋白酶活力為1560.5± 64. 2U/g (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)，纖維素酶活力為35. 79 ±0. 67U/g (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)。
2、 成分測定
取加熱干燥的樣品l-2g，用于檢測飼料中粗蛋白含量和中性洗滌纖維含量。粗 蛋白含量的測定方法參照GB/T 6432-1994，中性洗漆纖維含量的測定方法參照GB/T 20806-2006。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，粗蛋白含量為38. 4%±1. 0% (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)，中性洗滌纖維含量為12.6%±5.4% (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)。
實(shí)施例6、蛋白飼料的制備和性能測定 一、蛋白飼料的制備 1、發(fā)酵培養(yǎng)基的制備
取10g用油脂粉碎機(jī)粉碎的粒度為60-80目的亞麻粕，加入到250mL三角瓶中。 加入pH7.0的緩沖液，亞麻粕與緩沖液的質(zhì)量比為1:3。得到發(fā)酵培養(yǎng)基。2、 菌種的培養(yǎng)
(1) 斜面菌種制備
利用馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基或5Be。麥芽汁斜面培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無菌操作 接種米曲霉(Asperillus oryzae 3.951，中科院微生物所菌種保藏中心)，28°C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，制成斜面菌種，置于冰箱中貯藏備用。
(2) 菌種培養(yǎng)
利用馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，接入斜面菌種兩環(huán)，于振蕩培養(yǎng)箱中28X:、 200r/min培養(yǎng)48小時(shí)。
3、 發(fā)酵
將發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌處理，按照0.5X106個(gè)/mL的濃度接種米曲霉。放 入恒溫恒濕箱里靜止培養(yǎng)，控制環(huán)境溫度28t:、濕度85%，發(fā)酵時(shí)間為72小時(shí)。 得到蛋白詞料。發(fā)酵完成后，取部分發(fā)酵產(chǎn)物冷凍干燥(用于酶活力測定)，其它 發(fā)酵產(chǎn)物7(TC干燥4小時(shí)。
二、蛋白飼料的性能測定
1、 蛋白酶和纖維素酶活力測定
取冷凍干燥的樣品lg，檢測樣品中蛋白酶和纖維素酶活力。蛋白酶活力測定的 方法參照中華人民共和國食品行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10317-1999，纖維素酶活力測定的方 法參照中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 912-2004。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，蛋白酶活力為1863.0± 62. 9U/g (平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)，纖維素酶活力為50. 95 ± 1. 34U/g (平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)。
2、 成分測定
取加熱干燥的樣品l-2g，用于檢測飼料中粗蛋白含量和中性洗滌纖維含量。粗 蛋白含量的測定方法參照GB/T 6432-1994，中性洗漆纖維含量的測定方法參照GB/T 20806-2006。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，粗蛋白含量為38. 9%±0. 9% (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)，中性洗滌纖維含量為11.5%±1.9% (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)。
實(shí)施例7、蛋白飼料的制備和性能測定 一、蛋白飼料的制備 1、發(fā)酵培養(yǎng)基的制備取10g用油脂粉碎機(jī)粉碎的粒度為40-60目的亞麻粕，加入到250mL三角瓶中。 按照亞麻粕的質(zhì)量計(jì)，添加15%麩皮、1.5%硫酸銨和0.5%磷酸氫二鉀，混合均勻。 加入pH5.0的緩沖液，亞麻粕與緩沖液的質(zhì)量比為1:2。得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
2、 菌種的培養(yǎng)
(1) 斜面菌種制備
利用馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基或5Be。麥芽汁斜面培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無菌操作 接種米曲霉(Asperillus oryzae 3.951，中科院微生物所菌種保藏中心)，28°C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，制成斜面菌種，置于冰箱中貯藏備用。
(2) 菌種培養(yǎng)
利用馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，接入斜面菌種兩環(huán)，于振蕩培養(yǎng)箱中28"C、 200r/min培養(yǎng)48小時(shí)。
3、 發(fā)酵
將發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌處理，按照0.5Xl()6個(gè)/mL的濃度接種米曲霉。放 入恒溫恒濕箱里靜止培養(yǎng)，控制環(huán)境溫度3(TC、濕度80%，發(fā)酵時(shí)間為72小時(shí)。 得到蛋白飼料。發(fā)酵完成后，取部分發(fā)酵產(chǎn)物冷凍干燥(用于酶活力測定)，其它 發(fā)酵產(chǎn)物70'C干燥4小時(shí)。
二、蛋白飼料的性能測定
1、 蛋白酶和纖維素酶活力測定
取冷凍干燥的樣品lg，檢測樣品中蛋白酶和纖維素酶活力。蛋白酶活力測定的 方法參照中華人民共和國食品行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10317-1999，纖維素酶活力測定的方 法參照中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 912-2004。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，蛋白酶活力為2240.5土 71. 4U/g (平均值士標(biāo)準(zhǔn)差)，纖維素酶活力為65. 90±1. 85U/g (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差)。
2、 成分測定
取加熱干燥的樣品1-2g，用于檢測飼料中粗蛋白含量和中性洗滌纖維含量。粗 蛋白含量的測定方法參照GB/T 6432-1994，中性洗滌纖維含量的測定方法參照GB/T 20806-2006。
試驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。蛋白飼料中，粗蛋白含量為40. 6%±1. 4% (平均值士標(biāo)準(zhǔn)差)，中性洗滌纖維含量為10.7%±2.6% (平均值士標(biāo)準(zhǔn)差)。以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本 發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn) 行修改或者等同替換，而未脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā) 明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
權(quán)利要求
1、一種生產(chǎn)蛋白飼料的方法，是將亞麻粕進(jìn)行發(fā)酵，得到蛋白飼料。
2、 如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于所述方法包括如下步驟1) 將粉碎后的亞麻粕與緩沖液混合，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；所述緩沖液為PH2. 0-10. 0 的緩沖液，優(yōu)選pH5.0-7.0的緩沖液；所述亞麻粕與所述緩沖液的質(zhì)量比為l: (2-7)， 優(yōu)選為l: (2-3);2) 在發(fā)酵培養(yǎng)基中接種米曲霉(Asperillusoryzae)進(jìn)行發(fā)酵，得到蛋白飼料。
3、 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述米曲霉的接種量為(0.125-6) Xl()6個(gè)/mL。
4、 如權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于所述步驟l)中，所述粉碎后的 亞麻粕的粒度為20-120目，優(yōu)選為40-80目。
5、 如權(quán)利要求2至4中任一所述的方法，其特征在于所述步驟2)中，發(fā)酵條 件為溫度為26-40°C、相對(duì)濕度為80-95%、時(shí)間為24-96小時(shí)；發(fā)酵條件優(yōu)選為 溫度為28-3(TC、相對(duì)濕度為80-85%、時(shí)間為72小時(shí)。
6、 如權(quán)利要求2至5中任一所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基還含有輔 料；所述輔料為氮源、無機(jī)鹽、微量元素和載體中的至少一種。
7、 如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述氮源為無機(jī)氮源和/或有機(jī)氮源； 所述無機(jī)氮源為銨鹽和/或硝酸鹽；所述有機(jī)氮源為豆餅粉、花生餅粕、魚粉、酵母 粉、玉米漿中的至少一種；所述無機(jī)鹽為鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鉀鹽中的至少一種；所 述載體為稻殼、麩皮、玉米皮中的至少一種。
8、 如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基中含有如下輔料以 亞麻粕的質(zhì)量計(jì)，10%-15%麩皮、1%-1.5%硫酸銨和0.5%磷酸二氫鉀；所述發(fā)酵培養(yǎng)基 優(yōu)選含有如下輔料以亞麻粕的質(zhì)量計(jì)，15%麩皮、1.5%硫酸銨和0.5%磷酸二氫鉀。
9、 權(quán)利要求1至8中任一所述方法制備得到的蛋白飼料。
10、 含有權(quán)利要求9所述蛋白飼料的動(dòng)物飼料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蛋白飼料及其制備方法。本發(fā)明提供的生產(chǎn)蛋白飼料的方法，是將亞麻粕進(jìn)行發(fā)酵，得到蛋白飼料。本發(fā)明的蛋白飼料中，粗蛋白含量相對(duì)于原料有明顯的增長，中性洗滌纖維顯著減少，產(chǎn)生大量蛋白酶，營養(yǎng)價(jià)值提高。產(chǎn)品顏色相對(duì)于原料有明顯的改善，氣味芳香，且物料疏松，提高了家畜的采食速度和采食量，適口性得到明顯改善，提高了亞麻粕飼料的生物效價(jià)。本發(fā)明的方法既節(jié)約能源又簡化生產(chǎn)工藝，有高產(chǎn)、簡易、低投資、低能耗、占地少等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明具有巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)意義。
文檔編號(hào)A23K1/14GK101455271SQ20091007624
公開日2009年6月17日 申請(qǐng)日期2009年1月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月8日
發(fā)明者敏 吳, 棟 李, 毛志懷, 汪立君 申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)