專利名稱：一種越橘組織培養(yǎng)中的增殖培養(yǎng)基配方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及越橘工廠化育苗過程中一種組織培養(yǎng)的 增殖培養(yǎng)基配方。 '
背景技術(shù)：
越橘是近幾年世界上發(fā)展最為迅速的新一代水果，具有獨特的營養(yǎng)保健功能，可鮮食、 加工成果醬果酒等、提取天然花青素以及作為藥物的原料。目前已經(jīng)證明越橘果實內(nèi)的生 物活性物質(zhì)具有明目、消除眼睛疲勞、增強視力的功能；對多種惡性腫瘤如直腸癌有明顯 的治療作用；具有促進神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的功能，有兒童增智，預(yù)防老年癡呆癥的作用；可降 低體內(nèi)膽固醇水平，調(diào)節(jié)血糖濃度，防治心血管病和II型糖尿??；可以增強人體的免疫功 能，延緩衰老。越橘適應(yīng)溫帶及亞熱帶地區(qū)氣候，在我國南方具有廣泛的發(fā)展前景，需苗 量巨大。但越橘的扦插繁殖所需生根時間長，約60天，管理成本高，而且繁殖系數(shù)低，因 此組織培養(yǎng)工廠化繁殖是一條保證種苗供應(yīng)的有效途徑。目前關(guān)于越橘的組織培養(yǎng)研究資 料偶見國外文獻，但不系統(tǒng)，高效繁育體系較為缺乏，未見有效的適用于工廠化生產(chǎn)的增 殖培養(yǎng)基配方。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種越橘組織培養(yǎng)過程中的增殖培養(yǎng)基配方，以提高越橘的繁殖 效率，將其命名為Kl培養(yǎng)基。每L該培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下
*大量元素KNO:, 1400mg. L-'; (NH4) 2S04 800 mg. L-1; MgS04370mg. L—'; Ca(N03) 2'4H20 600 mg. L—'; KH2P04 170 mg. L/1
*微量元素Mn S04'4H20 22. 3 mg. I/1; Zn S04'7H20 8. 6 mg. I/1; H3B03 6. 2 mg.
I/1; KI 0. 83 mg. L/'; Na2Mo04'2H20 0. 25 mg. L—'; Cu S04*5H20 0. 025 mg. L—、 CoCl2
6H20 0 . 02 5 mg. L—1
*鐵鹽Na2-EDTA 37.3 mg. L—1; FeS04 27.8 mg. L—'
*有機成分甘氨酸2.0 rag. L—1 ; VB6 0.5nig. L—1; VB1 0. 1 mg. L—'; 煙酸0.5 mg. L-';肌醇100 mg. L—1
*庶糖30 g. L—'，卡拉膠6. 25 g.L—1，玉米素ZT 1.5 mg. L-1 其余為水，pH 5. 5。本發(fā)明越橘工廠化生產(chǎn)過程中增殖培養(yǎng)基的配制方法為
1、 20倍大量元素母液的配制:分別稱取KNO:i 28 g、 (NH4) 2S0416 g 、 K跳3. 4 g用 純水溶解后定容至1000 ml，配成母液I ;稱取Ca(N0:i) 2 *4H20 12 g，用純水溶解后定容 至lOOOml成為母液II;稱取MgS(U.4g，用純水溶解后定容至1000 ml為母液m;使用 時配制每升培養(yǎng)基取母液I 、母液II、母液III各50ml;
2、 1000倍的微量元素母液的配制:稱取Mn S04*4H20 2 2 3 00 mg、 Zn S(V7H20 8600 mg、 H.,BO.i 6200mg、 KI 830 mg、 Na2Mo04*2H20 250 mg、 Cu S(V5H20 25 mg、 CoCl2*6H20 25 mg，
用純水溶解后定容至1000 ml保存，使用時配制每升培養(yǎng)基取lml;
3、 EDTA-鐵鹽母液的配制:稱取5. 57g FeS04 7H20和7. 5 g Na-EDTA試劑分別溶解，
混合定容至1L，使用時配制每升培養(yǎng)基取5ml;
4、 有機成分母液的配置稱取IOO mg甘氨酸、5 mg Vbl、 25 mg Vb6、'25 mg煙酸、 5000 mg肌醇溶解后混合定容至500 ml，使用時配制每升培養(yǎng)基取10 ml;
5、 激素母液的配置稱取25mg玉米素ZT，先用少量乙醇溶解，然后加水定容至50 ml，使用時配制每升培養(yǎng)基取3 ml;
6、 按上述l-4項所述各成分用量加入后，再加入卡拉膠6.5g、蔗糖30g，定容至l L，在微波爐內(nèi)加熱3-5分鐘使卡拉膠充分熔化，最后加入玉米素母液，用lmol.l/1 HC1 調(diào)pH至5.5，分裝后滅菌。
本發(fā)明的Kl培養(yǎng)基越橘增殖方法為
將經(jīng)過初代培養(yǎng)的無菌苗在超凈臺上接種至配制好的滅菌的Kl培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng) 25-30天即可進行生根培養(yǎng)，增殖倍數(shù)可達15倍以上，苗高3-4厘米。培養(yǎng)條件為光照 強度1500-2500 Lex，溫度25-30°C，光暗周期各為12小時。
初代培養(yǎng)方法為現(xiàn)有技術(shù)，在下面的實施例中將詳細描述。
本發(fā)明的優(yōu)點是
1、 組成培養(yǎng)基的成分來源普通，無特殊形態(tài)化合物。
2、 培養(yǎng)基配制容易。
3、 增殖效率高，可以達到15倍以上；所需增殖培養(yǎng)的時間短，僅25-30天增殖苗可 以達到3-4cm高，完全可滿足生根培養(yǎng)的需要。
具體實施例方式下列實施例中所涉及百分比濃度均為質(zhì)量百分比濃度 實施例l:3月取越橘sharpblue (目前生產(chǎn)用品種)當年生枝條中上部15cm左右作為外植體， 用自來水沖洗15min，用紗布輕輕擦洗去除污漬，再用自來水沖洗15 min，將沖洗后的枝 條剪成4-5cm的小段，每段留芽2-4個，置超凈工作臺內(nèi)消毒。消毒程序75%乙醇30 秒，0. 1%升汞15 min (加吐溫80 2-3滴)并不時搖動，然后無菌水沖洗4次，每次3 min。 將消毒后的枝段兩端切去0.5cm，然后將枝條切成l-2cm的小段，每段保留1-2個芽，最 后將切好的帶芽莖段接種到預(yù)先配制好的添加了O. 5mg.L—'ZT的普通MS培養(yǎng)基上，置25'C， 1500-2500 Lex光照下培養(yǎng)2周，光照時間為12小時/天。2周后將萌發(fā)的幼芽切下，置于 Kl增殖培養(yǎng)基中繼代增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)的環(huán)境條件同初代。IO天左右大量萌發(fā)側(cè)芽，25-30 天苗高達3-4cm，葉色濃綠，每芽增殖出15個以上個側(cè)芽。
實施例2:
3月取南高叢越橘3號品種(目前生產(chǎn)用品種)當年生枝條中上部15cm左右作為外植 體，用自來水沖洗15min，用紗布輕輕擦洗去除污漬，再用自來水沖洗15 min，將沖洗后 的枝條剪成4-5cm的小段，每段留芽2-4個，置超凈工作臺內(nèi)消毒。消毒程序75%乙醇 30秒，0. 1%升汞15 min (加吐溫80 2-3滴)并不時搖動，然后無菌水沖洗4次，每次3 min。 將消毒后的枝段兩端切去0.5cm，然后將枝條切成l-2cm的小段，每段保留1-2個芽，最 后將切好的帶芽莖段接種到預(yù)先配制好的添加了 0. 5mg. L，T的普通MS培養(yǎng)基上，置25°C， 1500-2500 Lex光照下培養(yǎng)2周，光照時間為12小時/天。2周后將萌發(fā)的幼芽切下，置于 Kl增殖培養(yǎng)基中繼代增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)的環(huán)境條件同初代。IO天左右大量萌發(fā)側(cè)芽，25-30 天苗高達3-4cm，葉色濃綠，每芽增殖出15-20個側(cè)芽。
權(quán)利要求
1、一種越橘組織培養(yǎng)中的增殖培養(yǎng)基配方，其特征在于，每L該培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下*大量元素KNO3 1400mg.L-1；(NH4)2SO4 800mg.L-1；MgSO4 370mg.L-1；Ca(NO3)2·4H2O 600mg.L-1；KH2PO4 170mg.L-1*微量元素MnSO4·4H2O 22.3mg.L-1；ZnSO4·7H2O 8.6mg.L-1；H3BO3 6.2mg.L-1；KI 0.83mg.L-1；Na2MoO4·2H2O 0.25mg.L-1；CuSO4·5H2O 0.025mg.L-1；CoCl2·6H2O 0.025mg.L-1*鐵鹽Na2-EDTA 37.3mg.L-1；FeSO4 27.8mg.L-1*有機成分甘氨酸2.0mg.L-1；VB6 0.5mg.L-1；VB1 0.1mg.L-1；煙酸0.5mg.L-1；肌醇100mg.L-1*蔗糖30g.L-1，卡拉膠6.25g.L-1，玉米素ZT 1.5mg.L-1其余為水，pH 5.5。
全文摘要
一種越橘組織培養(yǎng)中的增殖培養(yǎng)基配方，由不同組分及濃度的大量元素、微量元素、鐵鹽、有機成分等組成，使用該培養(yǎng)基增殖效率高，可以達到15倍以上；所需增殖培養(yǎng)的時間短，僅25-30天增殖苗可以達到3-4cm高，完全可滿足生根培養(yǎng)的需要。同時，組成培養(yǎng)基的成分來源普通，無特殊形態(tài)化合物，培養(yǎng)基配制容易。
文檔編號A01H4/00GK101536675SQ20091010367
公開日2009年9月23日 申請日期2009年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月24日
發(fā)明者凌 李, 政 李 申請人:西南大學