專利名稱：一種珊瑚草種苗組織培養(yǎng)的繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種珊瑚草種苗組織培養(yǎng)的繁殖方法。
背景技術(shù)：
珊瑚草(Heuchera)又名纏百合，為鴨跖草科植物竹葉吉祥草的花，竹葉吉祥草 (《植物名實(shí)圖考》)攀援狀草本，長0.5 l米，單葉互生，狹披針形，長5 IO厘米，寬 1. 2 1. 5厘米，先端長漸尖，基部闊楔形，全緣；葉柄長3 6毫米，葉鞘抱莖?；ㄗ仙?，雜 性，為頂生的圓錐花序，雄花多數(shù)，生于花序的上部；萼片3，披針狀卵形；花瓣線形，與萼等 長；雄蕊6，基部有須毛；雌花少數(shù)，生于花序的基部，大于雄花，包藏于佛焰苞狀的葉腋內(nèi)， 有不發(fā)育雄蕊3 ;子房圓柱狀，花柱圓柱狀，柱頭3裂。蒴果紙質(zhì)，橢圓球形3瓣裂。種子5 7粒，近多角形，淡棕色，排成2裂。生長于山坡陰濕處。分布云南、廣西和湖南。珊瑚草具 有調(diào)和氣血，止痛，治療月經(jīng)不調(diào)，神經(jīng)性頭痛以及便秘，有排毒等功效。以前采用分株進(jìn)行 繁殖的方法， 一棵珊瑚草一年只能繁殖出6 8棵，因其繁殖系數(shù)低，遠(yuǎn)不能滿足市場的需 要。因此，目前珊瑚草的繁殖方法大多采用組織培養(yǎng)法，它是一種利用植物細(xì)胞的全能性，
離體培養(yǎng)植物組織小塊，進(jìn)行植物無性快繁的工廠化育苗技術(shù)，具體工藝是切下珊瑚草的
幼嫩葉片，先誘導(dǎo)出愈傷組織，再分化出不定芽，再培育成可以移栽馴化的壯苗。 一般情況 下此過程需要四個(gè)月以上，而且需要較高的生產(chǎn)成本(包括培養(yǎng)基成本和培養(yǎng)條件耗費(fèi))
等，所以現(xiàn)有的珊瑚草種苗繁殖技術(shù)仍存在以下缺陷繁殖速度較慢，成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種繁殖速度快、成本 低的珊瑚草種苗組織培養(yǎng)的繁殖方法。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是本發(fā)明包括以下步驟 (a)芽的誘導(dǎo)和分化步驟取珊瑚草的嫩葉作為外植體，將所述外植體加入培養(yǎng) 基進(jìn)行芽分化培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基為加有0. 5 1. 5mg/L的6-芐氨基嘌呤(6BA)和0. 05 0. 15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為24 26度，光照強(qiáng)度為 1800 20001ux，光照時(shí)間為每天10 14小時(shí); (b)無菌苗的增殖培養(yǎng)步驟取所述分化芽置于0. 3 lmg/L的6_芐氨基嘌呤 (6BA)，糖為3%的MS培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)，分化出增殖苗，培養(yǎng)溫度為24 26度，光照強(qiáng)度 為2000 30001ux，光照時(shí)間為每天10 14小時(shí)； (c)無菌苗的馴化移栽步驟將所述增殖苗置于培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，形成小 植株，可進(jìn)行移栽馴化，培養(yǎng)基為0. 8 1. 5mg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖3%的MS培養(yǎng)基， 培養(yǎng)溫度為18 28度，弱光條件。 所述外植體來源于開放帶菌環(huán)境的活體植物，需經(jīng)消毒處理在作為外植體，消毒 處理是指所述活體植物先用75%的酒精處理，再在0. 1%的升汞溶液中浸泡后取出，然后 用無菌水沖洗。
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所述酒精處理時(shí)間為8 12秒，所述升汞溶液浸泡時(shí)間為8 12分鐘，所述無菌 水沖洗4 5次。 本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明采用加有0. 5 1. 5mg/L的6-芐氨基嘌呤(6BA)和 0.05 0. 15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培養(yǎng)基，所以可以有效促進(jìn)珊瑚草 葉片快速分化出不定芽；又由于本發(fā)明采用0. 3 lmg/L的6-芐氨基嘌呤(6BA)，糖為3% 的MS培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)，所以不定芽能旺盛增殖；最后增殖苗置于0. 8 1. 5mg/L的3吲 哚丁酸(3IBA)，糖3X的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所以增殖苗四周即可快速生根。本發(fā)明通過直 接誘導(dǎo)出分化芽，分化芽又直接快速增殖減少了愈傷組織的誘導(dǎo)這一步驟，簡化培養(yǎng)條件 或培養(yǎng)方式等工藝，可以降低生產(chǎn)成本，提高商品化生產(chǎn)的效率和利潤，因此本發(fā)明珊瑚草 種苗組織培養(yǎng)的繁殖方法繁殖速度快，成本低。
具體實(shí)施方式

實(shí)施例一( — )芽的誘導(dǎo)和分化步驟取珊瑚草剛展開一天的嫩葉作為外植體；將所述葉片 先用75 %的酒精處理8秒，再在0. 1 %的升汞溶液中浸泡8分鐘取出，然后用無菌水沖洗 4 5次；取經(jīng)升汞消毒后的所述葉片切成lcm的小塊，放入加有0. 5mg/L的6芐氨基嘌呤 (6BA)和0. 05mg/L的2， 4- 二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培養(yǎng)基中，所述葉片放入培養(yǎng)基中 時(shí)保持葉片切塊的葉面向上；培養(yǎng)溫度為24 26度，光照18001ux，光照時(shí)間每天10小時(shí)， 培養(yǎng)6周后，可見葉片切口處分化出不定芽。 (二)無菌苗的增殖培養(yǎng)取分化芽置于0.3mg/L的6芐氨基嘌呤(6BA)，糖為 3X的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)四周后，每個(gè)分化芽可多分化出3 4個(gè)新的植株；培養(yǎng)溫度要求 24 26度，光照20001ux，每天光照10小時(shí)。(三)無菌苗的馴化移栽所述增殖苗置于0.8mg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖 3X的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)四周后，無菌苗長出1.5cm的根后，可進(jìn)行移栽馴化；栽前4天打 開瓶蓋使無菌苗逐步適應(yīng)外界條件；洗凈所述無菌苗根部培養(yǎng)基并移栽入泥炭土和珍珠 巖比例為4 : 1的基質(zhì)內(nèi)；保持溫度為18 28度，弱光條件，移栽后的第一周用無紡布 覆蓋，控制濕度85 95%，保持葉表面水霧不干。MS培養(yǎng)基組成元素包括大量元素、微 量元素、有機(jī)成分，大量元素NH4N03 1650mg/L、 KN03 1900mg/L、 CaC12 2H20 440mg/L、 MgS04 7H20370mg/L、KH2P04 1700mg/L。 微量元素KI 0. 83mg/L、 H3B03 6. 2mg/L、 MnS04 4H20 22. 3mg/L、 ZnS04 7H20 8. 6mg/L、Na2Mn04 2H20 0. 25mg/L、CuS04 5H20 0. 025mg/L、CoC12 6H20 0. 025mg/L、Fe S04 7H20(27. 8)+Na2-EDTA 2H20 (37. 3)mg/L。有機(jī)成分肌醇100mg/L、煙酸0. 5mg/L、鹽酸吡哆醇(維生素B6) 0. 5mg/L、鹽酸硫 胺素(維生素Bl)O. 5mg/L、甘氨酸2mg/L。
實(shí)施例二( — )芽的誘導(dǎo)和分化步驟取珊瑚草剛展開兩天的嫩葉作為外植體；將所述葉片 先用75%的酒精處理IO秒，再在O. 1%的升汞溶液中浸泡IO分鐘取出，然后用無菌水沖 洗4 5次；取經(jīng)升汞消毒后的所述葉片切成lcm的小塊，放入加有l(wèi)mg/L的6芐氨基嘌呤 (6BA)和O. lmg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培養(yǎng)基中，所述葉片放入培養(yǎng)基中時(shí)保持葉片切塊的葉面向上；培養(yǎng)溫度為24 26度，光照20001ux，光照時(shí)間每天12小時(shí)， 培養(yǎng)4周后，可見葉片切口處分化出不定芽。 ( 二 )無菌苗的增殖培養(yǎng)取分化芽置于lmg/L的6芐氨基嘌呤(6BA)，糖為3%的 MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)四周后，每個(gè)分化芽可多分化出3 4個(gè)新的植株；培養(yǎng)溫度要求24 26度，光照30001ux，每天光照10小時(shí)。(三)無菌苗的馴化移栽所述增殖苗置于lmg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖3X的 MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)四周后，無菌苗長出1. 5cm的根后，可進(jìn)行移栽馴化；栽前4天打開瓶蓋 使無菌苗逐步適應(yīng)外界條件；洗凈所述無菌苗根部培養(yǎng)基并移栽入泥炭土和珍珠巖比例為 4 : 1的基質(zhì)內(nèi)；保持溫度為18 28度，弱光條件，移栽后的第一周用無紡布覆蓋，控制濕 度85 95%，保持葉表面水霧不干。MS培養(yǎng)基組成元素與實(shí)施例一相同。
實(shí)施例三( — )芽的誘導(dǎo)和分化步驟取珊瑚草剛展開兩天的嫩葉作為外植體；將所述葉片 先用75%的酒精處理12秒，再在0. 1%的升汞溶液中浸泡12分鐘取出，然后用無菌水沖洗 5次；取經(jīng)升汞消毒后的所述葉片切成lcm的小塊，放入加有l(wèi). 5mg/L的6芐氨基嘌呤(6BA) 和O. 15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培養(yǎng)基中，所述葉片放入培養(yǎng)基中時(shí)保持 葉片切塊的葉面向上；培養(yǎng)溫度為24 26度，光照20001ux，光照時(shí)間每天14小時(shí)，培養(yǎng)4 周后，可見葉片切口處分化出不定芽。 ( 二 )無菌苗的增殖培養(yǎng)取分化芽置于lmg/L的6芐氨基嘌呤(6BA)，糖為3%的 MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)四周后，每個(gè)分化芽可多分化出3 4個(gè)新的植株；培養(yǎng)溫度要求24 26度，光照30001ux，每天光照14小時(shí)。(三)無菌苗的別l化移栽所述增殖苗置于1. 5mg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖3X 的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)四周后，無菌苗長出1. 5cm的根后，可進(jìn)行移栽馴化；栽前4天打開瓶蓋 使無菌苗逐步適應(yīng)外界條件；洗凈所述無菌苗根部培養(yǎng)基并移栽入泥炭土和珍珠巖比例為 4 : l的基質(zhì)內(nèi)；保持溫度為18 28度，弱光條件，移栽后的第一周用無紡布覆蓋，控制濕 度85 95% 保持葉表面水霧不干。MS培養(yǎng)基組成元素與實(shí)施例一相同。
權(quán)利要求
一種珊瑚草種苗組織培養(yǎng)的繁殖方法，其特征在于該繁殖方法包括以下步驟(a)芽的誘導(dǎo)和分化步驟取珊瑚草的嫩葉作為外植體，將所述外植體加入培養(yǎng)基進(jìn)行芽分化培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基為加有0.5～1.5mg/L的6-芐氨基嘌呤(6BA)和0.05～0.15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)的MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為24～26度，光照強(qiáng)度為1800～2000lux，光照時(shí)間為每天10～14小時(shí)，培養(yǎng)4～6周后，可見葉片切口處分化出不定芽；(b)無菌苗的增殖培養(yǎng)步驟取所述分化芽置于0.3～1mg/L的6-芐氨基嘌呤(6BA)，糖為3％的MS培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)，分化出增殖苗，培養(yǎng)溫度為24～26度，光照強(qiáng)度為2000～3000lux，光照時(shí)間為每天10～14小時(shí)；(c)無菌苗的馴化移栽步驟將所述增殖苗置于培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，形成小植株，可進(jìn)行移栽馴化，培養(yǎng)基為0.8～1.5mg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖3％的MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為18～28度，弱光條件。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種珊瑚草種苗組織培養(yǎng)的繁殖方法，其特征在于所述外 植體來源于開放帶菌環(huán)境的活體植物，需經(jīng)消毒處理在作為外植體，消毒處理是指所述活 體植物先用75%的酒精處理，再在0. 1%的升汞溶液中浸泡后取出，然后用無菌水沖洗。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種珊瑚草種苗組織培養(yǎng)的繁殖方法，其特征在于所述酒 精處理時(shí)間為8 12秒，所述升汞溶液浸泡時(shí)間為8 12分鐘，所述無菌水沖洗4 5次。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種珊瑚草種苗組織培養(yǎng)的繁殖方法，旨在提供一種繁殖速度快、成本低的珊瑚草種苗組織培養(yǎng)的繁殖方法。該繁殖方法包括以下步驟(a)芽的誘導(dǎo)和分化步驟；(b)無菌苗的增殖培養(yǎng)步驟；(c)無菌苗的馴化移栽步驟，本發(fā)明采用加有0.5～1.5mg/L的6-芐氨基嘌呤(6BA)和0.05～0.15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)的MS培養(yǎng)基，可以有效促進(jìn)珊瑚草葉片快速分化出不定芽；采用0.3～1mg/L的6-芐氨基嘌呤(6BA)，糖為3％的MS培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)，不定芽能旺盛增殖；最后增殖苗置于0.8～1.5mg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖3％的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，增殖苗四周即可快速生根。本發(fā)明可廣泛應(yīng)用于珊瑚草種苗組織培養(yǎng)領(lǐng)域。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101702998SQ200910192719
公開日2010年5月12日 申請(qǐng)日期2009年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月25日
發(fā)明者姚慧芬, 巫仕榮, 徐紅, 文方德, 金劍平, 黃皚冰 申請(qǐng)人:珠海市園藝研究所;珠海諾德生物科技有限公司