專利名稱：生長快成活率高牙鲆優(yōu)良品系的選育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本技術(shù)屬于海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，是一種選擇培育生長速度快、成活率高牙鲆新品系的育種方法。

背景技術(shù)：
牙鲆(Paralichthys olivaceus)是分布在我國沿海的主要經(jīng)濟魚類，是天然捕撈、工廠化、池塘和網(wǎng)箱養(yǎng)殖的主要對象，在漁業(yè)產(chǎn)量中占有較大的比重。但是隨著對天然魚類資源捕撈強度的加大，牙鲆種質(zhì)資源的衰退已經(jīng)顯現(xiàn)。另外在人工養(yǎng)殖環(huán)境下，長期以來我國對牙鲆優(yōu)良品種選育未得到足夠的重視，近親交配繁殖、集約化養(yǎng)殖等導致牙鲆養(yǎng)殖品種種質(zhì)退化、生長速度降低、養(yǎng)殖周期長、養(yǎng)殖效率低，嚴重影響了牙鲆苗種大面積養(yǎng)殖推廣和產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展。因此利用牙鲆不同地理群體及人工篩選的抗病群體進行牙鲆品種培育，培育生長速度快、抗逆力強的牙鲆養(yǎng)殖新品種，對于牙鲆種質(zhì)恢復、提高養(yǎng)殖產(chǎn)品質(zhì)量和經(jīng)濟效益具有重要意義。在牙鲆養(yǎng)殖新品種的研究方面，Kanako Fuji等篩選培育出一個能夠抗病淋巴囊腫病的養(yǎng)殖群體(Faculty of Marine Science，Tokyo University ofMarine Science and Technology，Kanako Fuji et al，Aquaculture，2006)。近年來本課題組利用微衛(wèi)星標記和AFLP技術(shù)對牙鲆養(yǎng)殖群體和野生群體的遺傳結(jié)構(gòu)進行評價(中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所，Liu et al，Aquaculture，2005)，發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性明顯降低。分析了牙鲆抗病魚和不抗病魚的MHC II B基因多態(tài)性與抗鰻弧菌病的相關(guān)性，初步篩選到抗病相關(guān)的MHC II B基因型(中國水產(chǎn)科學研究院黃海產(chǎn)研究所，Zhang etal，Marine Biotechnology，2006)，同時利用3個育種群體建立了牙鲆家系(中國水產(chǎn)科學研究院黃海產(chǎn)研究所，陳松林，田永勝等，水產(chǎn)學報，2008)，從此展開了國內(nèi)牙鲆育種工作，但是在生長快、成活率高牙鲆新品系的選擇培育方面在國內(nèi)外還屬首次。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對人工養(yǎng)殖環(huán)境下牙鲆苗種生長速度慢和成活率低的問題，培育出生長速度快、成活率高的牙鲆新品系，從而提高牙鲆養(yǎng)殖經(jīng)濟效益。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方法實現(xiàn)的 本發(fā)明內(nèi)容主要包括1、牙鲆育種群體培育和生殖調(diào)控，2、精子冷凍技術(shù)輔助家系建立，3、家系培育和標準化，4、數(shù)量性狀的測量和分析，5、遺傳參數(shù)估計，6、優(yōu)良家系篩選，7、利用異源冷凍精子誘導牙鲆雌核發(fā)育構(gòu)建優(yōu)良品系。
1、牙鲆育種群體培育和生殖調(diào)控 將如下3個牙鲆育種群體分別利用電子標識標記，建立育種檔案，在人工養(yǎng)殖條件下集中飼養(yǎng)培育，達到2-3齡。育種群體的年培育溫度控制在13-25℃，采用正常日照，每年2-5月的繁殖季節(jié)水溫控制在14-17℃，光照時間15h，光照強度1500-2000lux，連續(xù)照射1-2月，水流交換量為6-7m3/h，親魚在非繁殖季節(jié)利用市售人工配合鉺料飼喂，繁殖季節(jié)利用添加維生素E的野雜魚飼喂。經(jīng)過以上培育達到性成熟，可產(chǎn)出成熟卵子。4個育種群體包括①抗病育種群體(RS)利用人工感染鰻弧菌的方式從養(yǎng)殖群體中篩選感染病菌后長期不發(fā)病的個體100尾組成。②日本育種群體(JS)從日本引進牙鲆魚苗經(jīng)人工培育、篩選30尾組成。③黃海育種群體(YS)從山東省煙臺地區(qū)沿海收集天然捕撈的野生牙鲆個體50尾組成。
2、精子冷凍技術(shù)輔助家系建立 利用人工擠壓腹部法，采集成熟牙鲆親魚精液，利用MPRS+20％DMOS溶液以體積比1∶1的比例稀釋，注入2.0ml冷凍管中，放入液氮中冷凍保存，MPRS溶液的各成分濃度為NaCl 60.35mM，NaH2PO41.8mM；NaHCO33mM，KCl 5.23mM，CaCl2.2H2O 1.13mM，MgCl2.6H2O 1.13mM，D-Glucose 55.55mM。DMSO為市售二甲基亞砜。
利用以上方法冷凍保存以上3個育種群體及篩選優(yōu)良家系成熟雄魚的精子，并且從其它養(yǎng)殖公司收集和冷凍保存了牙鲆雄魚精子，預先建立牙鲆育種群體精子冷凍庫，利用冷凍精子輔助人工受精。在3個育種群體之間或群體內(nèi)親本之間，采用1雄多雌或1雌多雄的交配方式建立牙鲆家系。
3、家系培育和標準化 利用水質(zhì)、水流量、溫度和光照可控制的循環(huán)水車間進行家系孵化、苗種培育，每個家系的培育水體為3m3水缸，水流量可在1-5m3/h之間調(diào)控，水溫可在14-25℃調(diào)控，光照可保持10-15h。利用小球藻、輪蟲和鹵蟲進行早期魚苗的培育，利用人工配合餌料進行后期魚苗的培育。分別在魚苗生長至15、50、90、150、210d左右對每個家系的養(yǎng)殖數(shù)量進行標準化，標準化魚苗數(shù)量分別為10000、1000、500和200尾，210d將標準化魚苗集中飼養(yǎng)在1-2個30m3水池中，同時利用紅、橙、黃3種熒光顏料，在魚苗腹部選擇背前、背中、背后、腹后和腹中5個位置，利用注射方式對選擇家系個體進行標記。
4、數(shù)量性狀測量和分析 家系生長性狀測量家系數(shù)量性狀的測量時間為生長至90、210、510、720(2齡)幾個時間段，90-210天是牙鲆家系建立后第一個高溫季節(jié)，也是牙鲆魚苗的第一個快速生長期；210-510天為魚苗第一個越冬期和第二個快速生長期，720天魚苗已經(jīng)度過了第二個冬季，大部分個體已經(jīng)達到了商品魚規(guī)格，而且部分生長快的個體達到了性成熟。在各時期相繼測量魚苗的體長(從吻端至尾鰭末端)、體重和養(yǎng)殖存活數(shù)量。
性狀分析利用牙鲆家系不同生長時期測量的體長、體重數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析及Student-Newman-Keuls(SNK)法對不同家系生長性狀進行多重比較分析，同時計算生長平均值和標準差。利用絕對增重公式AGRW(g.d-1)＝(W2-W1)/(t2-t1)計算每個家系生長一定時期的絕對增重率。利用(魚苗成活數(shù)量/標準化后總數(shù))*100％計算家系成活率。分析家系間的生長差異，選擇出生長最快和成活率高的家系。
5、遺傳參數(shù)的估計 利用不同生長時期測定的牙鲆家系體長、體重數(shù)據(jù)，采用線形混合模型(Linear mixed model)、“加性-顯性”遺傳分析模型及約束極大似然法(REML)估計體長和體重性狀的加性和顯性方差組分、協(xié)方差組分、遺傳相關(guān)和遺傳力。加性和顯性方差達到極顯著水平(P＜0.01)，遺傳相關(guān)達到極顯著正相關(guān)水平(P＜0.01)，遺傳力達到極顯著(P＜0.01)且大于0.2，說明對體長和體重的選擇效果明顯，以此來檢測選擇育種過程中遺傳因素和環(huán)境因素發(fā)生的作用，為牙鲆選擇育種提供相關(guān)參數(shù)。
6、優(yōu)良家系篩選 通過對標準化后家系生長性狀的測定和對比分析，從建立的家系中篩選出體長和體重具有顯著性差異(P＜0.05)，90-524d的絕對增重率在0.25以上，成活率在80％以上的家系，做為生長快、成活率高家系繼續(xù)培育。將篩選出的家系利用標記從集中養(yǎng)殖池中與其它家系分離，專池培育至2-3齡達性成熟，培育方法如內(nèi)容1所述，并在每個個體上注射永久性電子標記，記錄電子標識，建立育種檔案。
7、利用異源冷凍精子誘導牙鲆雌核發(fā)育構(gòu)建優(yōu)良品系 預先采集成熟的鱸魚精子，利用MPRS+20％DMOS溶液以體積比1∶1的比例稀釋鱸魚精子，采用2.0ml冷凍管在液氮中冷凍保存，建立鱸魚精子冷凍庫，MPRS溶液的各成分濃度為NaCl 60.35mM，NaH2PO41.8mM；NaHCO33mM，KCl 5.23mM，CaCl2.2H2O 1.13mM，MgCl2.6H2O 1.13mM，D-Glucose55.55mM。DMSO為市售二甲基亞砜。
將篩選的優(yōu)良家系培育至性成熟，通過人工生殖調(diào)控達到產(chǎn)卵要求，利用人工擠壓腹部法采集未受精卵。隨之利用37℃水浴解凍鱸魚精子，利用MPRS稀釋液將精子以1∶10的比例稀釋，在直徑為10cm的培養(yǎng)皿中加入1ml稀釋精液鋪平，在40000μJ/cm2強度紫外線下照射，使其遺傳物質(zhì)失活，加入牙鲆卵中進行干法授精，受精卵與精液比為100∶0.4，授精3min后浸入2～4℃海水中冷休克處理45min，使其染色體加倍，然后將卵放入17℃海水孵化，至此完成了優(yōu)良牙鲆家系雌核發(fā)育，建立優(yōu)良品系。
本發(fā)明技術(shù)方案的技術(shù)特點1、利用了太平洋西岸牙鲆分布上具有典型地理特點的牙鲆育種群體日本牙鲆和黃海牙鲆，以及人工感染方法構(gòu)建了抗病牙鲆群體，豐富了牙鲆優(yōu)良品種選育的遺傳背景。2、將魚類精子冷凍保存技術(shù)溶合到牙鲆家系的建立中，為雜交組配提供了豐富的牙鲆精子來源和更多的組配方式，提高了家系建立效率。3、利用異源冷凍鱸魚精子誘導了牙鲆優(yōu)良家系個體雌核發(fā)育，提高了優(yōu)良家系基因的純合速度，1代雌核發(fā)育相當了4代全同胞兄妹自交，同時異源精子的誘導保證了雌核發(fā)育后代基因的純合性。4、通過大量家系的建立和篩選、數(shù)量性狀的測量和多重比較、遺傳參數(shù)的估計和雌核發(fā)育方法篩選并建立了生長速度快牙鲆新品系0719、0750和0751。5、將精子冷凍技術(shù)、雌核發(fā)育技術(shù)、數(shù)量性狀的遺傳參數(shù)估計等現(xiàn)代生物技術(shù)與傳統(tǒng)的選擇育種有機的結(jié)合在一起，提高了新品種選育的效率，建立了一條育種的新途徑。

具體實施例方式 本發(fā)明技術(shù)方案所依據(jù)的科學原理將現(xiàn)代生物技術(shù)與傳統(tǒng)的選擇育種技術(shù)相結(jié)合進行新品種培育。選擇育種(selective breding)是根據(jù)育種目標，在現(xiàn)有品種或育種材料內(nèi)出現(xiàn)的自然變異類型中，經(jīng)比較鑒定，通過多種選擇方法，選優(yōu)去劣，選出優(yōu)良的變異個體，培育新品種的方法。家系選育是選擇育種的方法之一，通過家系的建立、繁殖、比較，淘汰不良家系，選擇符合標準的家系，逐代提高品種的遺傳純合性，可選育出具有穩(wěn)定優(yōu)良性狀的新品種。本發(fā)明技術(shù)將精子冷凍保存技術(shù)、雌核發(fā)育技術(shù)、遺傳參數(shù)估計等現(xiàn)代生物技術(shù)與傳統(tǒng)的選擇育種技術(shù)有機的結(jié)合在一起，提高育種水平，顯著加快了魚類新品種培育進程。
下面通過實施例詳細敘述本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容 本發(fā)明內(nèi)容主要包括1、牙鲆育種群體培育和生殖調(diào)控，2、精子冷凍技術(shù)輔助家系建立，3、家系培育和標準化，4、數(shù)量性狀的測量和分析，5、遺傳參數(shù)估計，6、優(yōu)良家系篩選，7、利用異源冷凍精子誘導牙鲆雌核發(fā)育構(gòu)建優(yōu)良品系。
1、牙鲆育種群體培育和生殖調(diào)控 將3個牙鲆育種群體利用電子微粒注射法進行標記，并記錄其電子標識，同時對其體長、體重進行測量和記錄，建立育種群體檔案。3個育種群體包括①抗病育種群體(RS)利用人工感染鰻弧菌的方式從養(yǎng)殖群體中篩選感染病菌后長期不發(fā)病的個體100尾組成。②日本育種群體(JS)從日本引進牙鲆魚苗經(jīng)人工培育、篩選30尾組成。③黃海育種群體(YS)從山東省煙臺地區(qū)沿海收集天然捕撈的野生牙鲆個體50尾組成。
經(jīng)過人工培育達到2-3齡，育種群體的年培育溫度控制在13-25℃，采用正常日照，每年2-5月的繁殖季節(jié)水溫控制在14-17℃，光照時間15h，光照強度1500-2000lux，連續(xù)照射1-2月，水流交換量為6-7m3/h，親魚在生長季節(jié)以投喂人工混合飼料，繁殖期飼喂添加維生素E的野雜魚，經(jīng)過以上生長和生殖調(diào)控，達到性成熟和人工繁殖要求，人工擠壓魚體腹部可流出成熟的卵子和精子。
2、精子冷凍技術(shù)輔助家系建立 牙鲆精子冷凍保存方法利用人工擠壓腹部法采集成熟的牙鲆精子，顯微鏡檢測精子活力，活力在70％以上者，利用MPRS+20％DMOS溶液以體積比1∶1的比例稀釋，采用2.0ml冷凍管在液氮中冷凍保存。共冷凍保存各育種群體的牙鲆精子500余份(約900ml)，建立牙鲆精子冷凍庫。在人工繁殖時，將冷凍保存的牙鲆精子在37℃水浴中解凍，鏡檢凍后精子活力，如精子活力保持在70％以上，可與采集的牙鲆卵干法受精，受精時卵精比例為100ml∶1ml。
牙鲆家系建立方法利用以上3個育種群體，選擇群體中性成熟個體，人工采集卵子和精子(或冷凍庫中精子)，在3個育種群體內(nèi)或群體間采用如下交配方式建立半同胞或全同胞家系RS♂×JS♀、RS♂×RS♀、RS♂×YS♀、JS♂×RS♀、JS♂×JS♀、JS♂×YS♀、YS♂×RS♀、YS♂×JS♀。(表1)。
表1 2007牙鲆家系系譜

注RS抗病牙鲆，JS日本牙鲆，YS黃海牙鲆 3、家系的培育和標準化 家系培育牙鲆家系魚苗培養(yǎng)在3m3水缸中，早期采用微流水，每天交換量1-2m3，保持水質(zhì)清新，每天早晚各1次利用虹吸法清洗池底沉淀的藻類、過剩的飼料。3m3水缸中放養(yǎng)初孵仔魚數(shù)量在10000尾左右，伏底魚苗(體長1cm)2000尾，5-7cm魚苗1000尾，10-15cm魚苗500尾。水體中小球藻的濃度保持在8～10萬個/ml，輪蟲投喂量以水中5-10個/ml為宜，鹵蟲投喂量以1-2個/ml為宜。人工飼料的投喂應當以魚苗規(guī)格大小及時調(diào)節(jié)飼料顆粒大小，第12-15天開始投喂顆粒配合飼料，25天前苗種顆粒飼料粒徑250-400μm，0.1-0.15g體重的仔稚魚顆粒飼料粒徑400-600μm，0.5g體重顆粒飼料粒徑800μm左右。隨著魚體的生長，配合飼料粒徑逐漸增加。配合飼料日投飼量為魚體重的5-15％，投喂及時，宜少投勤投。防止飼料過剩、溫度變化、水質(zhì)污染、水流不穩(wěn)定等現(xiàn)象發(fā)生。
家系標準化家系標準化的主要目的將養(yǎng)殖環(huán)境造成的家系差異降低到最低。家系養(yǎng)殖至15天左右對魚苗密度進行初步調(diào)整，使每缸魚苗數(shù)量保持在10000尾左右，養(yǎng)殖到50天對所有家系進行第一次標準化，每個家系隨機選留2000尾魚。90天左右(5-7cm)選留1000尾，150天左右(10-15cm)選留500尾繼續(xù)養(yǎng)殖。養(yǎng)殖到210天左右從每個家系中隨機的選擇200尾個體，利用紅、黃、橙3個種熒光顏料，在魚苗腹部選擇背前、背中、背后、腹后和腹中5個位置進行標記，標記后集中飼養(yǎng)在1-2個30m3水池中，同時對選擇家系個體的體長、體重逐一測量，此時完成家系數(shù)量和養(yǎng)殖環(huán)境的標準化。
4、數(shù)量性狀的測量和分析 2007年建立牙鲆家系在生長到平均日齡至90、524d左右，對每個家系的體長、體重、成活率進行了測量，利用單因素方差分析及Student-Newman-Keuls(SNK)法對不同家系生長性狀進行多重比較，分析家系間的生長差異。利用絕對增重率(AGRW，g.d-1)＝(W2-W1)/(t2-t1)，對每個家系生長90d至524d絕對增重率進行了計算，平均日齡(t2-t1)按286d計算，成活率＝(524d家系存活數(shù)量/200尾)*100％，依據(jù)絕對增重率和養(yǎng)殖成活率篩選出生長快、成活率高的家系，0719、0750、0703、0751號家系生長最快成活率最高(表2)。
表2 2007年牙鲆家系90d和524d生長性狀比較


注*在生長方面具有顯著性差異(P＜0.05) 5、遺傳參數(shù)的估計 利用2007年建立了63個家系，收集了所有家系5328尾魚苗的體長和體重數(shù)據(jù).借助線形混合模型(Linear mixed model)、“加性-顯性”模型、約束極大似然法(REML)分別估計體長和體重的遺傳相關(guān)和遺傳力。結(jié)果顯示體長和體重兩性狀的加性、顯性、表型和基因型相關(guān)分量都達到極顯著水平(P＜0.01)，體長和體重的加性方差比率均大于顯性方差比率，可見兩性狀的遺傳效應主要取決于基因的加性效應。體長和體重達到極顯著正相關(guān)(P＜0.01)。體長的總遺傳效應率為31.20％，體重的總遺傳效應率為33.58％，體長和體重的隨機方差比率分別達到68.80％和66.41％，說明養(yǎng)殖環(huán)境等因素對牙鲆體長和體重的影響較大，同時說明在牙鲆選擇育種中消除環(huán)境影響極為重要。體長和體重的狹義遺傳率分別為0.20和0.26(P＜0.01)，廣義遺傳率分別為0.31和0.34(P＜0.01)，牙鲆在以上兩性狀上屬于中等遺傳力，通過選擇育種可取得較大的遺傳進展(表3)。
表3利用“加性-顯性”模型對牙鲆家系體長和體重方差分量、方差分量比率及遺傳力估計結(jié)果
注0**表示顯著性水平P＜0.01 6、優(yōu)良家系的篩選 經(jīng)過對2007年家系培育、生長、成活率性狀的測定、多重比較及遺傳參數(shù)估計，篩選出了2007年家系中具有生長快、成活率高性狀的牙鲆家系共4個分別為0719、0703、0750和0751(表2、表4)，絕對增重率為0.27-0.372，成活率為82.5-100％。經(jīng)過對篩選家系的人工培育、生殖調(diào)控，培育和調(diào)控方法如具體實施方法1所述，2009年春季部分家系個體已經(jīng)達到性成熟，通過異源冷凍精子誘導建立了雌核發(fā)育品系(表5)。
表4 2007年家系篩選結(jié)果

注1-背前，2-背后，3-腹后，Y-黃色，O-橙色，R-紅色 7、利用異源冷凍精子誘導牙鲆雌核發(fā)育構(gòu)建優(yōu)良品系 通過對2007年篩選出的生長快、成活率高家系0719、0750、0751的人工培育、生殖調(diào)控，于2009年4月達到性成熟，利用擠壓腹部法可采集到未受精卵。同時于2008年11月冷凍保存鱸魚精子200ml，建立了其精子庫，在受精時利用37℃水浴解凍精子，利用MPRS稀釋液將精子以1∶10的比例稀釋，在40000μJ/cm2強度紫外線下照射，使其遺傳物質(zhì)失活。采集以上成熟家系個體卵子，將失活的鱸魚精子加入卵中，進行干法授精，受精時卵精比例為100∶0.4，授精3min后放入2-4℃海水中冷休克處理45min，然后放入17℃海水孵化和魚苗培育。相繼建立以上家系雌核發(fā)育系7個分別為0921、0927、0920、0938、0939、0946和0947(表5)。對雌核發(fā)育系生長進行了測量，目前雌核發(fā)育系體長為10.54-12.28cm，體重為13.19-20.62g。
表5牙鲆雌核發(fā)育優(yōu)良品系系譜及生長情況
注RS-抗病牙鲆，JS-日本牙鲆，S.P-滅活的鱸魚冷凍精子
權(quán)利要求
1.一種生長快成活率高牙鲆優(yōu)良品系的選育方法，其特征在于它的方法，包括牙鲆育種群體的培育和生殖調(diào)控、精子冷凍技術(shù)輔助家系建立、家系的培育和標準化、數(shù)量性狀的測定和分析、遺傳參數(shù)估計、優(yōu)良家系篩選、利用異源冷凍精子誘導牙鲆雌核發(fā)育構(gòu)建優(yōu)良品系；將事先構(gòu)建的抗病牙鲆、日本牙鲆、黃海牙鲆利用電子微粒注射標記，集中培育達2-3齡，年培育溫度控制在13-25℃，投喂人工配合飼料；每年2-5月繁殖季節(jié)水溫控制在14-17℃，光照時間15h，光照強度1500-2000lux，連續(xù)照射1-2月，水流交換量為6-7m3/h，飼喂添加維生素E的野雜魚培育，達到性成熟時，人工采集成熟牙鲆卵子和精子，鏡檢活力在70％以上的精子冷凍保存在液氮中，建立牙鲆精子冷凍庫；人工繁殖時將冷凍精子在37℃水浴中解凍，鏡檢活力在70％以上者與卵子干法受精，其卵精比例為100ml∶1ml；在3個育種群體間或群體內(nèi)以1雄多雌或1雌多雄的交配方式，建立全同胞或半同胞家系；210d前的家系培育在3m3水缸中，水流量調(diào)控在1-5m3/h之間，水溫14-25℃；分別在魚苗生長至15、50、90、150、210d左右對每個家系的養(yǎng)殖數(shù)量進行標準化，標準化魚苗數(shù)量分別為10000、1000、500和200尾，210d分別利用紅、黃、橙3種熒光顏料，在魚苗腹部選擇背前、背中、背后、腹后和腹中5個位置對家系選擇個體進行標記，并集中養(yǎng)殖在1-2個30m3水池中；家系生長至90、210、510、720d幾個時間段對其體長、體重和成活率進行測定，利用方差分析、多重比較、絕對增重和成活率比較分析家系生長情況；采用線性混合模型對測量性狀遺傳參數(shù)進行估計，體長和體重的狹義遺傳率分別為0.20和0.26(P＜0.01)，廣義遺傳率分別為0.31和0.34(P＜0.01)；通過以上方法篩選出生長快、成活率高牙鲆家系4個分別為0703、0719、0750、0751號家系。將篩選家系培育成熟，可產(chǎn)出成熟卵子；將冷凍保存的鱸魚精子在37℃水浴中解凍，用MPRS以1∶10的比例稀釋鱸魚精液，后在40000μJ/cm2紫外線下照射，使其遺傳物質(zhì)失活，加入牙鲆卵中進行干法授精，受精卵與精液體積比為100ml∶0.4ml，授精3min后浸入2～4℃海水中冷休克處理45min，誘導牙鲆卵雌核發(fā)育，然后將卵放入17℃海水孵化，建立生長快、成活率高牙鲆品系，共建立7個優(yōu)良品系，分別為0920、0921、0927、0938、0939、0946、0947號品系。
全文摘要
一種生長快成活率高牙鲆優(yōu)良品系的選育方法，其技術(shù)方法包括牙鲆育種群體的培育和生殖調(diào)控，精子冷凍技術(shù)輔助家系建立，家系的培育和標準化，數(shù)量性狀的測定和分析，遺傳參數(shù)估計，優(yōu)良家系篩選和利用異源冷凍精子誘導牙鲆雌核發(fā)育構(gòu)建優(yōu)良品系。本發(fā)明可選擇培育出生長速度快、成活率高牙鲆養(yǎng)殖新品系，篩選出生長快、成活率高的優(yōu)良牙鲆家系共4個(0703、0719、0750和0751)，利用冷凍保存的鱸魚精子，誘導建立了雌核發(fā)育的牙鲆優(yōu)良品系7個(0920、0921、0927、0938、0939、0946和0947)。該技術(shù)方法可用于牙鲆養(yǎng)殖新品種培育，解決海水養(yǎng)殖魚類牙鲆生長慢、成活率低的問題，可提高牙鲆養(yǎng)殖經(jīng)濟效益。
文檔編號A01K61/00GK101699998SQ20091023001
公開日2010年5月5日 申請日期2009年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月3日
發(fā)明者田永勝, 陳松林, 鄧寒, 徐田軍, 王磊 申請人:中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所