專利名稱：一種福氏紫薇組織培養(yǎng)繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及福氏紫薇Lagerstroemia fauriei Koehne.組織培養(yǎng)繁殖方法，屬于 木本植物種苗繁殖的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
福氏紫薇Lagerstroemia fauriei Koehne.屬千屈菜禾斗、紫薇屬bagerstroemia， 落葉小喬木，高3 5米。樹干光滑，棕紅褐色(7 8月間樹干脫皮時)。奇數(shù)羽狀復葉， 小葉5 9枚，橢圓形，革質(zhì)。圓錐花序著生枝頂，花乳白色，花期6 7月。果近球形，果 期9 10月。陽性樹種，稍耐陰，喜溫暖濕潤的環(huán)境，耐干旱，喜肥沃、較濕潤、排水良好的 石灰性土壤，較耐水濕。是集觀樹形、樹姿、樹干、葉片、花及花序為一身的優(yōu)良園林觀賞樹 種，可用作行道樹、庭蔭樹、小區(qū)綠化的骨干樹種等。 本種樹冠圓傘形，樹干光潔，斑駁的樹皮色澤似血，花序大而美麗，為不可多得觀
花、觀莖干樹種，可孤植或叢植于草坪邊緣、湖畔、建筑物前，或列植于道路兩側(cè)，生長較快，
耐修剪，抗污染，適宜城市街道、廣場綠地、住宅區(qū)綠地、公路綠島等景觀綠化。 目前該品種種苗數(shù)量在國內(nèi)非常少，相關(guān)研究表明福氏紫薇的種子繁殖和扦插繁
殖也十分困難，因此福氏紫薇資源非常缺乏，且應用量很大。 木本植物組織培養(yǎng)研究起步于20世紀50年代初，直到70年代后期才得到較大的 發(fā)展。目前，不完全統(tǒng)計有90多屬300多種木本植物經(jīng)組織培養(yǎng)獲得再生植株。而關(guān)于 紫薇屬植物組織培養(yǎng)的研究，國內(nèi)外報道很少。僅見楊彥伶等報道以紫薇(Lagerstroemia indica)嫩莖為外植體進行快速繁殖(見林業(yè)科技開發(fā)，2005年2期，紫薇組織培養(yǎng)技術(shù))， 而關(guān)于福氏紫薇的組織培養(yǎng)研究尚未見有報道。 綜上所述，本發(fā)明一種福氏紫薇組織培養(yǎng)繁殖方法是解決福氏紫薇資源短缺的重 要途徑之一，對福氏紫薇的開發(fā)和推廣利用都具有著非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是公開福氏紫薇的組織培養(yǎng)繁殖方法。
本發(fā)明的目的是解決福氏紫薇資源短缺。 本發(fā)明一種福氏紫薇組織培養(yǎng)繁殖方法采用如下的技術(shù)方案 A)芽的分化誘導選取福氏紫薇的一年生扦插苗外植體消毒，用清水沖洗干凈， 然后用洗衣粉漂洗一次，用84消毒液搖床上振蕩消毒15-20min，流水沖洗20-30min后，于 無菌操作臺上用75%乙醇消毒50-608，立即倒入0. 1%的升汞消毒10min，最后用無菌水 洗滌4次，每次振蕩3-5min。取消毒后的外植體切割的莖段1. 0-2cm長，其中每個莖段帶 一個腋芽，將莖段接種于誘導培養(yǎng)基中進行芽的分化誘導。誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 5mg/ L+NAAO. 05mg/L+GA30. lmg/L+瓊脂6. 5g/l，蔗糖30g/l，培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0?？刂婆囵B(yǎng)溫 度在20-26t:，首先在黑暗中培養(yǎng)20-26h，然后進行光照時間10_16h/天培養(yǎng)25-35天，得 福氏紫薇嫩梢。
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B)繼代培養(yǎng)與增殖將A)中所得福氏紫薇嫩梢切割后接入繼代培養(yǎng)基； MS+6-BA0. 3mg/L+NAA0. 02mg/L+瓊月旨6. 5g/l，蔗糖30g/l，培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0，進行 繼代培養(yǎng)25-35天，培養(yǎng)溫度20-26 °C ，光照時間10_16h/天，光照強度為1600-2000Ix。 培養(yǎng)25-35天，所得福氏紫薇無菌苗株，再切割后接入繼代培養(yǎng)基MS+6-BA0. 3mg/ L+NAAO. 02mg/L+瓊脂6. 5g/l，蔗糖30g/l，培養(yǎng)基pH為5. 8-6. O，進行繼代培養(yǎng)25-35天， 培養(yǎng)溫度20-26°C ，光照時間10-16h/天，光照強度為1600-2000Ix，得到繼代無菌苗帶8_11 個腋芽的莖段。 C)根的誘導將繼代培養(yǎng)的無菌苗切成帶3個腋芽的小段，接入生根壯苗培養(yǎng)基 MS+6-BA0. 05mg/L+IBAl. Omg/L+瓊脂6. 5g/l，蔗糖30g/l，培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0，控制溫度 在20-26°C ，光照時間10h/天，光強20001x的條件下，進行培養(yǎng)10d_15d后生根率達80% ， 至此獲得帶根無菌苗株。 本發(fā)明相對現(xiàn)有技術(shù)的有益效果為采用組織培養(yǎng)的方法對福氏紫薇進行繁殖， 能夠有效的得到大量的福氏紫薇無菌苗，解決福氏紫薇資源短缺的問題；通過對外植體、 誘導培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基的選取，能夠使得萌發(fā)率達到60_80%，增殖率達到 10-15倍，生根率達到80%，能夠高效的得到福氏紫薇無菌苗。
具體實施方式

實施例一 1、選取50株茁壯的福氏紫薇一年生扦插苗。剪取地上嫩梢部分，去除葉片，以 莖段為外植體，每莖段帶一腋芽，長約2cm。將外植體用清水沖洗干凈，然后用洗衣粉漂洗 一次，用84消毒液搖床上振蕩消毒15-20min。流水沖洗20-30min后，于無菌操作臺上用 75 %乙醇消毒50-60s，立即倒入0. 1 %的升汞消毒10min，最后用無菌水洗滌4次，每次振 蕩3-5min。將消毒滅菌過的外植體兩端分別切除0. 5cm，以去除受傷部分。接入誘導培養(yǎng) 基MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 05mg/L+GA30. lmg/L+瓊脂6. 5g/l，蔗糖30g/l，同時控制培養(yǎng)基 pH為5. 8-6. 0，每瓶接3株，共接入70瓶，在溫度20_26°C ，光照時間10h/天，光強20001x 的條件下，進行培養(yǎng)。 2、外植體接入培養(yǎng)基5天后，腋芽開始萌動。至30天時，萌發(fā)率達60%，共獲得 126株不帶根的初代無菌苗。無菌苗株高約4cm，每株莖上帶有已萌動的腋芽3至6個。 將葉片去除，主干切為帶芽莖段，每段帶一個腋芽。接入繼代增殖培養(yǎng)基MS+6-BA0. 3mg/ L+NAAO. 02mg/L+瓊脂6. 5g/l，蔗糖30g/l，同時控制培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0，培養(yǎng)5天后，腋 芽開始陸續(xù)出梢，30天后，增殖率達到11倍，即每株繼代苗上平均含有11個已萌動的腋芽。
3、將第1次繼代增殖得到的繼代無菌苗切為帶2至3個腋芽的莖段，得到莖段600 段。進行第2次繼代，5天后腋芽開始出梢，30天后得到平均帶有8個腋芽的無菌苗580 株。重復進行第3次繼代，得到莖段2200段，30天后獲得平均帶有6個腋芽的繼代無菌苗 約2100株。 4、將經(jīng)過3次繼代的無菌苗切成帶3個腋芽的小段，接入生根壯苗培養(yǎng)基 MS+6-BA0. 05mg/L+IBAl. Omg/L，共接入4200株，培養(yǎng)條件同上。培養(yǎng)10天后，開始生根，15 天后生根率達80%，至此獲得帶根無菌苗3360株。
實施例二
1、選取30株茁壯的福氏紫薇一年生扦插苗。剪取地上部分，去除葉片，以莖段為外植體，每莖段帶一腋芽，長約2cm。將外植體用清水沖洗干凈，然后用洗衣粉漂洗一次，用84消毒液搖床上振蕩消毒15-20min。流水沖洗20_30min后，于無菌操作臺上用75%乙醇消毒50-60s，立即倒入0. 1%的升汞消毒10min，最后用無菌水洗滌4次，每次振蕩3-5min。將消毒滅菌過的外植體兩端分別切除0. 5cm，以去除受傷部分。接入誘導培養(yǎng)基MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 05mg/L+GA30. lmg/L+瓊脂6. 5g/l，蔗糖30g/l，同時控制培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0，每瓶接3株，共接入50瓶。在溫度20-26°C ，光照時間16h/天，光強16001x的條件下，進行培養(yǎng)。 2、外植體接入培養(yǎng)基5天后，腋芽開始萌動。至35天時，萌發(fā)率達70%，共獲得105株不帶根的初代無菌苗。無菌苗平均株高4. 5cm，每株莖上帶有已萌動的腋芽3至6個。將葉片去除，主干切為帶芽莖段，每段帶一個腋芽。接入繼代增殖培養(yǎng)基MS+6-BA0. 3mg/L+NAAO. 02mg/L加瓊脂6. 5g/l，蔗糖30g/l，同時控制培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0，培養(yǎng)5天后，腋芽開始陸續(xù)出梢，30天后，增殖率達到10倍，即每株繼代苗上平均含有10個已萌動的腋芽。
3、將第1次繼代增殖得到的繼代無菌苗切為帶2至3個腋芽的莖段，得到莖段510段。進行第2次繼代，5天后腋芽開始出梢，30d后得到平均帶有8個腋芽的無菌苗500株。重復進行第3次繼代，得到莖段1900段，30天后獲得平均帶有6個腋芽的繼代無菌苗約1800株。 4、將經(jīng)過3次繼代的無菌苗切成帶3個腋芽的小段，接入生根壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA0. 05mg/L+IBAl. Omg/L+瓊脂6. 5g/l，蔗糖30g/l，同時控制培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0，在溫度20-26°C ，光照時間10h/天，光強20001x的條件下，進行培養(yǎng)，培養(yǎng)10天后開始生根，15天后生根率達81%，至此獲得含根無菌苗4374株。
權(quán)利要求
一種福氏紫薇組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟A)芽的分化誘導選取福氏紫薇的一年生扦插苗外植體消毒，取消毒后的外植體切割為1.0-2cm長的莖段，其中每個莖段帶一個腋芽，將莖段接種于誘導培養(yǎng)基中進行芽的分化誘導，控制培養(yǎng)溫度在20-26℃，首先在黑暗中培養(yǎng)20-26h，然后進行光照時間10-16h/天，培養(yǎng)25-35天，得福氏紫薇嫩梢；B)繼代培養(yǎng)與增殖將步驟A)中所得福氏紫薇嫩梢切割后接入繼代培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)25-35天，培養(yǎng)溫度20-26℃，光照時間10-16h/天，光照強度為1600-2000Ix，得到帶8-11個腋芽的繼代無菌苗；C)根的誘導將步驟B)所得經(jīng)過繼代的無菌福氏紫薇試管苗切成帶3個腋芽的小段，接入生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)10-15天，培養(yǎng)溫度20-26℃，光照時間10-16h/天，光照強度為1600-2000Ix，至此獲得含根無菌苗。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種福氏紫薇組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于，步驟A)中的外植體消毒過程為用清水沖洗干凈，然后用洗衣粉漂洗一次，用84消毒液搖床上振蕩消毒15-20min，流水沖洗20-30min后，于無菌操作臺上用75%乙醇消毒50-60s，立即倒入0. 1%的升汞消毒10min，最后用無菌水洗滌4次，每次振蕩3-5min。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種福氏紫薇組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于，步驟A)中采用的誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 05mg/L+GA30. lmg/L+瓊脂6. 5g/l，蔗糖30g/l，培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種福氏紫薇組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于，步驟B)中采用的繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 3mg/L+NAA0. 02mg/L+瓊脂6. 5g/l ，蔗糖30g/l ，培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種福氏紫薇組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于，步驟C)中采用的生根培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 05mg/L+IBAl. 0mg/L+瓊脂6. 5g/l，蔗糖30g/l。培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0。
全文摘要
本發(fā)明提供了福氏紫薇Lagerstroemia fauriei Koehne組織培養(yǎng)繁殖方法，包括以下步驟首先進行福氏紫薇莖段外植體消毒，消毒后接種于誘導培養(yǎng)基中進行芽的分化誘導，控制培養(yǎng)溫度在黑暗中培養(yǎng)，然后在光照下進行正常培養(yǎng)，將所得福氏紫薇嫩梢切割后接入繼代培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)，最后將福氏紫薇無菌苗接入生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，得到福氏紫薇無菌苗。通過該方法能夠有效的解決福氏紫薇資源短缺的問題。
文檔編號A01H4/00GK101707982SQ20091023427
公開日2010年5月19日 申請日期2009年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月18日
發(fā)明者李乃偉, 李云龍, 湯詩杰, 郭忠仁, 陸小清 申請人:江蘇省中國科學院植物研究所