專利名稱：：皮特蘭豬的選育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于畜牧選育
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤指一種皮特蘭豬的選育方法。
背景技術(shù)：
：皮特蘭豬是目前瘦肉率最高的豬種，原產(chǎn)于比利時布拉邦特地區(qū)，是先由比利時的本地豬與法國的貝衣豬雜交，后又引入英國的泰姆沃斯豬的血統(tǒng)雜交而成，1955年被歐洲各國所公認，是近十幾年來歐洲較為流行的豬種。我國于1988年從法國引進皮特蘭豬，在我國主要是被用作二元或三元雜交生產(chǎn)的父本，以提高雜交商品豬的瘦肉率水平。盡管皮特蘭豬具有極高的瘦肉率，但它的應(yīng)激反應(yīng)嚴重，常常在運輸途中死亡或出現(xiàn)PSE肉(Pale，SoftandExudative,即灰白、松軟和滲出液汁)，給養(yǎng)豬企業(yè)帶來巨大損失?，F(xiàn)代分子生物學(xué)的研究認為，位于豬第6號染色體上pll-q21區(qū)域的氟烷基因(HalothaneGene)是決定PSE從而影響肉質(zhì)的主效基因。目前已知氟烷座位(Hal)有三種基因型HalNHalN、HalNHaln、HalnHaln(常用N表示顯性，用n表示隱性)，前兩種基因型對氟烷不敏感(為氟烷陰性)，后一種為敏感型個體(氟烷陽性)，氟烷基因呈隱性純合時，導(dǎo)致豬應(yīng)激綜合癥頻繁發(fā)生。如此一來就迫切需要選育出對氟烷不敏感的陰性皮特蘭豬。然而常規(guī)的育種技術(shù)是根據(jù)表現(xiàn)型來進行選育的，而表現(xiàn)型取決于基因型。對于氟烷基因來講，一般常規(guī)技育種術(shù)是利用氟烷氣體來進行測試，只有氟烷基因呈隱性純合即為HalnHaln時，豬才會陽性反應(yīng)，而對雜合子HalNHaln而言，此技術(shù)無能為力！若采用常規(guī)技術(shù)努力提高種豬和商品豬瘦肉率的同時，就會發(fā)現(xiàn)氟烷隱性基因的頻率在豬群中有升高的趨勢。也有許多研究表明，無氟烷隱性基因的純合體HalNHalN皮特蘭豬的肉質(zhì)性狀如肉色和嫩度等方面較優(yōu)越，但純合體HalNHalN皮特蘭豬的胴體性狀如瘦肉率等卻有所降低。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一是降低皮特蘭豬群的應(yīng)激反應(yīng)和PSE肉的出現(xiàn)機率，實現(xiàn)這一目的的有效方法之一是對皮特蘭豬群進行無氟烷隱性基因的選育，采用分子輔助標記選擇手段鑒別個體皮特蘭豬的氟烷基因及其基因型，將氟烷隱性基因的皮特蘭豬從豬群中剔除出去。本發(fā)明的皮特蘭豬的選育方法，包括如下步驟A)組建基礎(chǔ)選育群體，該群體中至少有一頭具有HalN基因的皮特蘭豬；B)培育皮特蘭公豬和母豬并進行選配產(chǎn)仔，選配措施是配種的每對皮特蘭公母豬中至少一頭具有HalN基因，提高下一代皮特蘭豬群體的HalN基因頻率；C)培育仔豬并進行選種，選種措施是檢測每一仔豬的Hal基因，選留具有HalN基因的皮特蘭豬以及綜合選擇指數(shù)高的具有Haln基因的皮特蘭豬作為種豬；D)重復(fù)步驟B)和步驟C)510次。3步驟A)中，組建的皮特蘭豬基礎(chǔ)選育群體共120頭以上，含有5個血統(tǒng)，公豬與母豬的比例為1:46。如果在選擇步驟A)的基礎(chǔ)選育群體時，試驗場所有皮特蘭豬經(jīng)檢測均沒有HalN基因，則可引進具有HalN基因的皮特蘭公豬精液，導(dǎo)入到皮特蘭母豬，然后培養(yǎng)仔豬并將具有HalN基因的仔豬納入選育群體。步驟A)中，組建基礎(chǔ)選育群體的首要原則是首先選擇HalNHalN基因型的皮特蘭豬，其次選擇HalNHaln基因型的皮特蘭豬，最后選擇HalnHaln基因型的皮特蘭豬。步驟B)中，選配措施是首先選擇HalNHalN基因型的皮特蘭豬，其次選擇HalNHaln基因型的皮特蘭豬進行配種，加快提高下一代皮特蘭豬群體的HalN基因頻率。例如可以選擇的交配模式包括HalNHalNXHalNHalN,HalNHalNXHalNHaln，HalNHalnXHalNHalN，HalNHalnXHalNHaln禾口HalNHalNXHalnHaln。優(yōu)選HalNHalNXHalNHalN,HalNHalNXHalNHaln,HalNHalnXHalNHalN的交配模式，更優(yōu)選HalNHalNXHalNHalN的交配模式。步驟C)中，選種措施是大力保留HalNHalN基因型的豬，擇優(yōu)選留HalNHaln基因型的豬，嚴格剔除HalnHaln基因型的豬。本發(fā)明的另一目的是為了在降低皮特蘭豬群的應(yīng)激反應(yīng)和PSE肉的出現(xiàn)機率的同時，提高皮特蘭豬群的胴體性狀、生長性能等指標。因此組建基礎(chǔ)選育群體的次要原則是取綜合選擇指數(shù)SI值高的皮特蘭豬納入基礎(chǔ)選育群體，其中^=。.06魯+0.06會+0'135魯+0.144魯。尸l尸2尸3尸4步驟B)中，選配的另一措施是取綜合選擇指數(shù)SI值高的皮特蘭豬進行配種。步驟C)中，取綜合選擇指數(shù)SI值高的皮特蘭豬作為種豬。步驟C)中，培育仔豬并進行選種時還進行淘汰制選擇，于仔豬28士4日齡時進行第一次選留，淘汰體質(zhì)虛弱、體型外貌差、發(fā)育不良者；于皮特蘭豬120±10日齡進行第二次選留，對少數(shù)發(fā)育不良，體重小于40kg以及體型外貌差者予以淘汰；于皮特蘭豬180±10日齡進行第三次選留，嚴格剔除外陰畸形或發(fā)育不良、臍疝者；選種時同時參考其父母產(chǎn)仔性能和同胞生長性能。在基礎(chǔ)選育群體及各世代的選育中，采用PCR-RFLPs方法檢測皮特蘭豬的Hal基因。在基礎(chǔ)選育群體及各世代的選育中，選留種豬數(shù)120頭以上，公母豬比例為i:46。在無氟烷隱性基因皮特蘭豬的選育過程中，選種選配的首要原則是優(yōu)選采用HalNHalN基因型皮特蘭豬，其次采用HalNHaln基因型皮特蘭豬，最后采用HalnHaln基因型皮特蘭豬，利用該方法可以快速提高皮特蘭豬群體的HalN基因頻率以及HalNHalN基因型頻率；選種選配的次要原則是選擇綜合選擇指數(shù)SI值高的皮特蘭豬，通過選擇綜合選擇指數(shù)SI值高的皮特蘭豬進行選配選種可以使得皮特蘭豬群體的生產(chǎn)性能下降得不至于過快，同時有機會將非HalNHalN基因型皮特蘭豬的其它優(yōu)秀性狀如胴體性能、生長性能等逐漸固定到具HalNHalN基因型皮特蘭豬上，提高整個皮特蘭豬群的各生產(chǎn)性能。本發(fā)明取得的積極進步效果在于在選育出的皮特蘭豬群體中，HalnHaln基因型皮特蘭豬完全剔除出去，Haln基因頻率也基本為O，無應(yīng)激和PSE肉；群體中皮特蘭豬平均日增重高達740g，瘦肉率也在72X以上。具體實施例方式實施例1組建基礎(chǔ)選育群體取上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所試驗豬場的皮特蘭豬、上海大江畜禽公司種豬場內(nèi)的皮特蘭豬、北京順鑫農(nóng)業(yè)茶棚原種豬場的皮特蘭豬耳組織樣，采用文獻[談永松，張似青，張忠明，何玉英，劉紅林，王林云.PCR-RFLPs檢測法在無氟烷隱性基因皮特蘭豬建群中的應(yīng)用.上海農(nóng)業(yè)學(xué)報，2001，17(3):34-37]報道的PCR-RFLPs方法檢測皮特蘭豬的氟烷基因。并記錄上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所試驗豬場的每頭皮特蘭豬的達100kg日齡、飼料轉(zhuǎn)化率、活體背膘厚、眼肌面積等指標，計算綜合選擇指數(shù)SI(SelectionIndex)。根據(jù)所有皮特蘭豬的SI值，從最高值往下選擇一直到組建基礎(chǔ)選育群所需要的頭數(shù)。其中，=『A2+『A2=+……『A2,1尸2尸"式中W代表性狀的經(jīng)濟重要性，權(quán)數(shù)W,W^…Wn=1.0h2=性狀的遺傳力，P=某一性狀的群體平均數(shù)，P=某一性狀的個體表型值。皮特蘭豬共選擇四個性狀加以考慮，分別為代表生長性狀的達100kg的日齡P工和飼料轉(zhuǎn)化率P2，代表胴體性狀的活體背膘厚P3和眼肌面積P4，則所對應(yīng)的性狀遺傳力分別為hi2=o.30、h22=o.30、h32=o.45、h42=o.48，根據(jù)育種目標，皮特蘭豬的上述四個性狀的經(jīng)濟重要性分別為^=20%、W2=20%、W3=30%、W4=30%，則皮特蘭豬的綜合選擇指數(shù)/>/>P57=20%x0.30x4+20%x0.30x4+30%x0.45x4+30%x0.48x4S尸2AA=0.06^+0.06^+0.135!+0.144&SA尸3A結(jié)果所有皮特蘭豬均未檢測到HalN基因，均為HalnHaln基因型，根據(jù)綜合選擇指數(shù)SI值共選得HalnHaln基因型皮特蘭豬120頭，15頭公豬，共有5個血統(tǒng)。實施例2導(dǎo)入具有HalN基因皮特蘭豬外血產(chǎn)生一世代豬從法國引進含N基因的法系皮特蘭豬精液，及時對實施例1的基礎(chǔ)選育群體中的10頭皮特蘭母豬按照常規(guī)方法進行人工授精，產(chǎn)生一世代，PCR-RFLPs方法檢測一世代豬的Hal基因。結(jié)果經(jīng)檢測，共產(chǎn)生127頭仔豬，具有HalN基因的皮特蘭雜合子仔豬19頭，納入選育群體中。實施例3選育擴大HalN基因皮特蘭豬個體數(shù)和出現(xiàn)HalNHalN基因型皮特蘭豬個5體采用HalNHalnXHalNHaln的交配模式，盡可能多地擴大含HalN基因的皮特蘭豬個體數(shù)，同時也期望能獲得HalNHalN基因型的皮特蘭豬。同時為了充分利用皮特蘭公豬的HalN基因，也采用HalNHalnXHalnHaln交配模式，以擴大含HalN基因的皮特蘭豬個體數(shù)。采用系祖建系法與群體繼代選育法相結(jié)合的方法，培養(yǎng)皮特蘭公豬和母豬，根據(jù)上述交配模式產(chǎn)仔豬并進行選種，給每頭皮特蘭豬建立詳細的檔案資料。于仔豬出生時采集耳組織樣，利用PCR-RFLPs方法檢測氟烷基因及其基因型；于仔豬28日齡時進行第一次選留，淘汰體質(zhì)虛弱、體型外貌差、發(fā)育不良者；于皮特蘭豬4月齡進行第二次選留，對少數(shù)發(fā)育不良，體重小于40kg以及體型外貌差者予以淘汰；于皮特蘭豬6月齡進行第三次選留，嚴格剔除外陰畸形或發(fā)育不良、臍疝者。根據(jù)氟烷基因及其基因型，最后保留HalNHalN基因型、HalNHaln基因型和優(yōu)秀HalnHaln基因型的皮特蘭豬作為種豬，同時根據(jù)每頭皮特蘭豬的胴體性能和生長性能指標計算出的SI值，從高到低進行選擇120頭種豬，公母比例為1:5，選種時同時參考其父母產(chǎn)仔性能和同胞生長性能。苴中57=0.065^+0.06^+0.1355^+0.144&'^尸2尸3尸4表1各世代皮特蘭豬的Hal基因情況<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>備注表格中的0世代即為基礎(chǔ)群皮特蘭豬，1世代即是實施例2的仔豬從表1可以看出，經(jīng)過有目的的選種配種，各世代的皮特蘭豬的HalN頻率呈現(xiàn)上升趨勢，至2世代出現(xiàn)了HalNHalN皮特蘭豬個體12頭。實施例4繼續(xù)逐代選育提高皮特蘭豬群體HalNHalN基因型頻率采用系祖建系法與群體繼代選育法相結(jié)合的方法，培養(yǎng)皮特蘭公豬和母豬，根據(jù)HalNHalNXHalNHaln、HalNHalnXHalNHalN、HalNHalnXHalNHaln、HalNHalNXHalnHaln交配模式選配產(chǎn)仔豬并進行選種，給每頭皮特蘭豬建立詳細的檔案資料，記錄達100kg日齡、飼料轉(zhuǎn)化率、活體背膘厚、眼肌面積等數(shù)據(jù)。仔豬出生后采集耳組織樣，利用PCR-RFLPs方法檢測氟烷基因及其基因型；于仔豬28日齡時進行第一次選留，淘汰體質(zhì)虛弱、體型外貌差、發(fā)育不良者；于皮特蘭豬4月齡進行第二次選留，對少數(shù)發(fā)育不良，體重小于40kg以及體型外貌差者予以淘汰；于皮特蘭豬6月齡進行第三次選留，嚴格剔除外陰畸形或發(fā)育不良、臍疝者。最后根據(jù)氟烷基因及其基因型，大力保留HalNHalN基因型的皮特蘭豬，擇優(yōu)選留HalNHaln基因型的皮特蘭豬，嚴格剔除HalnHaln基因型的皮特蘭豬，同時根據(jù)每頭皮特蘭豬的胴體性能和生長性能指標計算出的SI值，從高到低進行選擇120頭種豬，公母比例1:5，選種時同時參考其父母產(chǎn)仔性能和同胞生長性能。苴中，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>表2各世代皮特蘭豬的Hal基因情況世代總數(shù)HalNHalNHalNHalnHalnHalnHalN頻率012000120011270191087.5%210512355828.1%34613523918733.5%4249751037150.8%526323132093.9%備注表格中的1、2世代分別為實施例2、3的仔豬數(shù)量。從表2可以看出，經(jīng)過有目的的選種配種，各世代的皮特蘭豬的HalNHalN基因型頻率呈現(xiàn)上升趨勢，至5世代HalNHalN基因型皮特蘭豬頻率已達到87.83%，而HalN基因頻率上升到93.9%。實施例5氟烷基因的檢測采用PCR-RFLPs法檢測從2003年11月份至2007年8月份止的28批共994頭后備豬的氟烷基因及其基因型，結(jié)果如表3所示。表3各批次氟烷基因檢測結(jié)果批檢測送檢檢測HalNHalNHalNHalnHalnHaln次曰期總數(shù)總數(shù)總數(shù)其中總數(shù)其中總數(shù)其中SS￥$103.11.011631631789844242623626203.11.1424241011569880303.11.1970701082351421251697<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注送檢總數(shù)與檢測總數(shù)不太一致，因送檢樣本或DNA抽提等原因未能檢測，氟烷基因檢測結(jié)果以及選育依據(jù)均以檢測總數(shù)為準從表3中可以看出，盡管不同檢測批次間HalN基因以及HalNHalN基因型出現(xiàn)的頻率變化較大，各批次間也不是一世代接一世代的關(guān)系，但若以年為單位總體來看，整個群體有一個總體的趨勢，那就是隨著時間的推移，群體中HalN基因的頻率在增加，HalNHalN基因型的頻率在增加，而HalNHaln基因型頻率相對在下降，經(jīng)過不斷的有目的地選配，最終剔除了HalnHaln基因型。這說明隨著選育的深入進行，群體正逐步地淘汰Haln基因，向著HalNHalN基因型群體發(fā)展，具體的基因及基因型頻率發(fā)展趨勢可參見表4。表4各批次氟烷基因不同基因型及基因頻率<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>40.16670.40000.43330.36670.63330細00.57890.42110.28950.710560.07410.55560.37040.35190.648170細00.57890.42110.28950.710580細00.45830.54170.22920.770890.00000.52170.47830.26090.7391100.35420.41670.22920.56250.4375110.05260.21050.73680.15790.8421120.22390.44780.32840.44780.5522130.21210.60610.18180.51520.4848140.44440.44440.11110.66670.3333150.84210.15790細00.92110.0789160.38460.53850.07690.65380.346217l細00.00000細01.00000.000018l細00扁00.0000l細00細0191.00000.00000細0l細00扁0200.92000.08000.00000.96000.0400210.84210.15790細00.92110.078922l細00.00000細0l細00扁0230.95240扁00.04760.95240.0476240.90480.09520細00.95240.0476250.62500.37500細00.81250.187526l扁00.00000.0000l細00扁0270.66670.33330細00.83330.1667280.83330.16670細00.91670.0833實施例6肥育試驗及屠宰測定選取出生日期相同或相近、體重大約在2530kg左右的皮特蘭仔豬，按照HalNHalN、HalNHaln、HalnHaln基因型分為3組進行肥育試驗時，每組不少于6頭，逐個稱取試驗始重，然后每滿1個月稱一次個體重，至肥育試驗結(jié)束。屠宰測定時，選取9095kg左右的試驗豬，每組選擇3頭進行屠宰，左胴測量，右胴分割試驗。結(jié)果如表5所示。表5肥育屠宰試驗結(jié)果基因型HalNHalN組HalNHaln組HalnHaln組頭數(shù)(肥育/屠宰)7/37/37/3生長性狀平均日增重(g/d)739.50757.98760.201.871.861.85胴體性狀平均背膘厚(cm)1.861.701.44眼月幾面積(cm2)52.5056.3556.80胴體瘦肉率(％)72.8971.9576.74肉質(zhì)性狀肉色鮮紅淡紅蒼白肌內(nèi)脂含量(％)2.111.681.519<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>結(jié)論剔除Haln基因的皮特蘭豬肉肉質(zhì)得到明顯改善，特別是具HalNHalN基因型的皮特蘭豬肉，肉色鮮紅，大理石紋明顯，有光澤，有彈性，而具HalnHaln基因型的皮特蘭豬肉，肉色蒼白、松軟、滲水，出現(xiàn)典型的PSE肉。具HalNHalN基因型的豬肉的嫩度好于HalnHaln基因型，肌內(nèi)脂含量亦高于后者，這說明前者肉質(zhì)明顯優(yōu)于后者。HalNHaln基因型的其各項指標介于HalNHalN和HalNHaln基因型之間，更偏近于HalNHalN基因型。并且本發(fā)明的HalNHalN基因型的皮特蘭豬的胴體瘦肉率也高達72.89%。權(quán)利要求一種皮特蘭豬的選育方法，其包括如下步驟A)組建基礎(chǔ)選育群體，該群體中至少有一頭具有HalN基因的皮特蘭豬；B)培育皮特蘭公豬和母豬并進行選配產(chǎn)仔，選配措施是配種的每對皮特蘭公母豬中至少一頭具有HalN基因，提高下一代皮特蘭豬群體的HalN基因頻率；C)培育仔豬并進行選種，選種措施是檢測每一仔豬的Hal基因，選留具有HalN基因的皮特蘭豬以及綜合選擇指數(shù)高的具有Haln基因的皮特蘭豬作為種豬；D)重復(fù)步驟B)和步驟C)5～10次。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟A)的基礎(chǔ)選育群體中，具有HalN基因的皮特蘭豬，是將具有HalN基因的皮特蘭公豬精液導(dǎo)入到皮特蘭母豬，然后培養(yǎng)具有HalN基因的仔豬納入選育群體。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟A)中，組建基礎(chǔ)選育群體的首要原則是首先選擇HalNHalN基因型的皮特蘭豬，其次選擇HalNHaln基因型的皮特蘭豬，最后選擇HalnHaln基因型的皮特蘭豬，組建基礎(chǔ)選育群體的次要原則是取綜合選擇指數(shù)高的皮特蘭豬納入基礎(chǔ)選育群體。4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟B)中，選配措施是首先選擇HalNHalN基因型的皮特蘭豬，其次選擇HalNHaln基因型的皮特蘭豬進行配種，加快提高下一代皮特蘭豬群體的HalN基因頻率。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于步驟B)中，交配模式包括HalNHalNXHalNHalN，HalNHalNXHalNHaln，HalNHalnXHalNHalN，HalNHalnXHalNHaln和HalNHalNXHalnHaln。6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟C)中，所述選種措施是保留HalNHalN基因型的豬，擇優(yōu)選留HalNHaln基因型的豬，嚴格剔除HalnHaln基因型的豬。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于步驟C)中，所述選種的另一措施是取綜合選擇指數(shù)高的皮特蘭豬作為種豬。8.如權(quán)利要求1、6或7所述的方法，其特征在于步驟C)中，培育仔豬并進行選種時還進行淘汰制選擇，于仔豬28±4日齡時進行第一次選留，淘汰體質(zhì)虛弱、體型外貌差、發(fā)育不良者；于皮特蘭豬120±10日齡進行第二次選留，對少數(shù)發(fā)育不良，體重小于40kg以及體型外貌差者予以淘汰；于皮特蘭豬180±10日齡進行第三次選留，嚴格剔除外陰畸形或發(fā)育不良、臍疝者；選種時同時參考其父母產(chǎn)仔性能和同胞生長性能。9.如權(quán)利要求1、3或7所述的方法，其特征在于所述綜合選擇指數(shù)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中，P表示某一性狀的群體平均數(shù)，p表示某一性狀的個體表型值，1、2、3、4分別表示達100kg的日齡、飼料轉(zhuǎn)化率、活體背膘厚和眼肌面積四個性狀。10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于采用PCR-RFLPs方法檢測皮特蘭豬的Hal基因。全文摘要本發(fā)明公開了一種皮特蘭豬的選育方法，其包括如下步驟A)組建基礎(chǔ)選育群體，該群體中至少有一頭具有HalN基因的皮特蘭豬；B)培育皮特蘭公豬和母豬并進行選配產(chǎn)仔，選配措施是配種的每對皮特蘭公母豬中至少一頭具有HalN基因；C)培育仔豬并進行選種，選種措施是檢測每一仔豬的Hal基因，選留具有HalN基因的皮特蘭豬以及綜合選擇指數(shù)高的具有Haln基因的皮特蘭豬作為種豬；D)重復(fù)步驟B)和步驟C)5～10次。利用本發(fā)明的方法可以有效地提高皮特蘭豬群體的HalN基因頻率，降低皮特蘭豬群的應(yīng)激反應(yīng)和PSE肉的出現(xiàn)機率。文檔編號A01K67/02GK101743929SQ200910247308公開日2010年6月23日申請日期2009年12月28日優(yōu)先權(quán)日2009年12月28日發(fā)明者談永松申請人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院;上?？屏⑻剞r(nóng)科(集團)有限公司