專利名稱：：去飽和酶和在轉(zhuǎn)基因生物中產(chǎn)生多不飽和脂肪酸的方法去飽和酶和在轉(zhuǎn)基因生物中產(chǎn)生多不飽和脂肪酸的方法本發(fā)明涉及來自海洋球石藻(Emilianahuxleyi)的多核苷酸，其編碼去飽和酶，可用于重組生產(chǎn)多不飽和脂肪酸。本發(fā)明還涉及包含根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸的載體、宿主細胞和非人轉(zhuǎn)基因生物，以及由多核苷酸編碼的多肽。本發(fā)明還涉及抗根據(jù)本發(fā)明的多肽的抗體。最后，本發(fā)明還涉及用于生產(chǎn)多不飽和脂肪酸和油、脂類和脂肪酸組合物的方法，涉及它們作為藥物、化妝品、食品、飼料，優(yōu)選的作為魚類飼料或食品添加物的用途。脂肪酸和三酰甘油酯在食品工業(yè)、動物營養(yǎng)、化妝品和藥學(xué)領(lǐng)域內(nèi)具有多種應(yīng)用。根據(jù)它們是否為游離飽和或不飽和脂肪酸或為具有含量升高的飽和或不飽和脂肪酸的三酰甘油酯，它們適合迥然不同的應(yīng)用。多不飽和脂肪酸(例如亞油酸和亞麻酸)對哺乳動物是關(guān)鍵的，因為哺乳動物不能自身合成。因此，多不飽和ω3脂肪酸和ω6_脂肪酸是動物和人類營養(yǎng)的重要構(gòu)成要素。鑒于其在健康方面的多種作用，多不飽和長鏈ω3_脂肪酸，例如二十碳五烯酸(=ΕΡΑ,020:5Δ5'8'η'14'17)或二十二碳六烯酸(=0^^22:6"4'7'1°'13'16'19)，是人類營養(yǎng)的重要組分，包括兒童大腦發(fā)育、眼的功能、激素合成及其它信號物質(zhì)，以及預(yù)防心血管疾病、癌癥和糖尿病(Poulos，ALipids30:1-14,1995；Horrocks，LA和YeoYKPharmacolRes40211-225，1999)。這是需要生產(chǎn)多不飽和長鏈脂肪酸的原因。鑒于目前人類食物的組成，向食物中添加主要發(fā)現(xiàn)于魚油中的多不飽和ω3脂肪酸極為重要。因此，例如將多不飽和脂肪酸如二十二碳六烯酸(=DHA,C22:6"4'7·10·13·16·19)或二十碳五烯酸(=EPA,020:5Δ5·8·η·14·17)添加至嬰兒配制奶粉中以提高營養(yǎng)價值。據(jù)稱不飽和脂肪酸DHA對腦功能的發(fā)育和維持有積極影響。下文中，多不飽和脂肪酸稱作PUFA、PUFAs,LCPUFA或LCPUFAs(多不飽和脂肪酸、PUFA；長鏈多不飽和脂肪酸=LCPUFA)。多種脂肪酸和甘油三酯主要從微生物如被孢霉屬(Mortierella)和裂殖壺菌(Schizochytrium)中獲得或從產(chǎn)油植物如大豆、油菜籽、藻類如隱甲藻屬(Crypthecodinium)或褐指藻屬(Phaeodactylum)中獲得，其中所述多種脂肪酸和甘油三酯通常以其三酰甘油酯(=甘油三酯=三酰甘油)形式獲得。然而這些脂肪酸和甘油三酯也能從動物如魚中獲得。游離脂肪酸有利地通過水解制備。極長鏈多不飽和脂肪酸例如DHA、EPA、花生四烯酸(=六以丄20:4"5’8’11’14)、二高Y-亞麻酸(C203Δ8'η'14)或二十二碳五烯酸(DPA，C22:5A7a°’13’16’19)不能在油料作物例如油菜籽、大豆、向日葵或紅花中合成。這些脂肪酸的常規(guī)天然來源是魚如鯡魚、鮭魚、沙丁魚、雄鮭、鰻鱺、鯉魚、鱒魚、大比目魚、鯖魚、梭鱸或金槍魚或藻類。根據(jù)預(yù)期的用途，具有飽和或不飽和在脂肪酸的油是優(yōu)選的。在人類營養(yǎng)物中，例如具有不飽和脂肪酸，特別是多不飽和脂肪酸的脂類是優(yōu)選的。據(jù)稱多不飽和ω3脂肪酸對血液中膽固醇水平具有正面影響，并且因此正面地影響心臟病的預(yù)防可能性。通過向食物中添加這些ω3脂肪酸可顯著降低心臟病、中風(fēng)或高血壓的風(fēng)險。ω3脂肪酸也正面的影響與免疫性疾病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)有關(guān)的炎性過程，尤其是慢性炎性過程。因此將它們添加至食品，尤其食用性食品中或應(yīng)用于藥品。由于我們?nèi)粘５娘嬍硵z入，ω6脂肪酸如花生四烯酸往往不利的影響與這些風(fēng)濕性疾病相關(guān)的這類功能紊亂。ω3和ω6脂肪酸是稱作類二十烷酸的組織激素(如前列腺素)的前體，所述組織激素源自二高Y亞麻酸、花生四烯酸和二十碳五烯酸，ω3和ω6脂肪酸也是血栓烷和白三烯的前體，而血栓烷和白三烯衍生自花生四烯酸和二十碳五烯酸。形成自ω6脂肪酸的類二十烷酸(稱作系列)通常促進了炎性反應(yīng)，而ω3脂肪酸來源的類二十烷酸(稱作系列)具有很少或沒有促炎效應(yīng)。鑒于多不飽和脂肪酸的積極特征，過去從未停止嘗試獲得參與合成這些脂肪酸或甘油三酯的基因，以便在多種生物中產(chǎn)生不飽和脂肪酸的含量經(jīng)改變的油。因此，WO91/13972及其美國同族專利描述了Δ9去飽和酶。WO93/11245要求了Δ15去飽和酶的權(quán)利，WO94/11516要求了Δ12去飽和酶的權(quán)利。其它去飽和酶描述在例如ΕΡ-Α-0550162、WO94/18337,WO97/30582,WO97/21340,WO95/18222、EP-A_0794250、Stukey等，J.Biol.Chem.，265，1990:20144-20149,Wada等，Nature347，1990:200-203或Huang等，Lipids34，1999:649-659中。然而，多種去飽和酶的生物化學(xué)特征迄今尚未得到充分描述，因為這些酶是膜結(jié)合蛋白，其分離和表征存在極高難度(McKeon等，MethodsinEnzymo1.71,1981:12141-12147,Wang等，PlantPhysiol.Biochem.，26，1988:777-792)。通常，通過導(dǎo)入合適的生物，隨后分析起始材料和產(chǎn)物的酶活性，來表征膜結(jié)合的去飽和酶。在WO93/06712、US5614393、US5614393、WO96/21022、WO00/21557和WO99/27111中描述了Δ6去飽和酶。這種酶用于轉(zhuǎn)基因生物中產(chǎn)生脂肪酸的申請在例如WO98/46763、W098/46764和WO98/46765中描述。在本上下文中，還描述和要求保護了多種去飽和酶的表達和多不飽和脂肪酸的形成，參見例如WO99/64616或WO98/46776。就去飽和酶的表達效力和這種表達效力對多不飽和脂肪酸形成的影響而言，必須指出如迄今所述的單一去飽和酶的表達僅僅導(dǎo)致低含量的不飽和脂肪酸/脂類，例如Y-亞麻酸和十八碳四烯酸(stearidonicacid)。此外，通常獲得的是ω3和ω6脂肪酸的混合物。尤其適合用于產(chǎn)生PUFA的微生物是微藻、如三角褐指藻(Phaeodactylumtricornutum)、Porphiridium禾中、破囊壺菌(Thraustochytrium)禾中、裂殖壺菌禾中或隱甲藻(Crypthecodinium)種，纖毛蟲例如棘尾蟲屬(Mylonychia)或豆形蟲屬(Colpidium)、真菌如被孢霉、蟲霉菌屬(Entomophthora)或毛霉屬(Mucor)和/或苔蘚，如劍葉蘚(Physcomitrella)、角齒蘚屬(Ceratodon)和地錢屬(Marchantia)(R.Vazhappilly&F·Chen(1998)BotaniciiMarina41:553-558；K.Totani&K.Oba(1987)Lipids22:1060-1062；Μ.Akimoto^A,(1998)Appl.BiochemistryandBiotechnology73:269-278)。株系的選擇已經(jīng)導(dǎo)致了所討論的多種微生物突變株系的開發(fā)，這些突變株系產(chǎn)生了包括PUFA在內(nèi)的一系列目標(biāo)化合物。然而，對株系進行突變并選擇具有改善特定分子如多不飽和脂肪酸產(chǎn)生的株系是一個費時且困難的方法。這就是為什么只要可能就優(yōu)選如上所述的重組方法的原因。然而，借助上述微生物，僅可以產(chǎn)生有限量的所希望的多不飽和脂肪酸，如DPA、EPA或者ARA。而且，取決于所用的微生物，這些脂肪酸通常作為例如EPA、DPA和DHA的脂肪酸混合物而獲得。已討論了多種合成途徑，用于合成花生四烯酸、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。因此，通過聚酮化合物途徑，在海洋細菌(例如弧菌(Vibrio)屬或希瓦菌(Shewanella)屬)中生產(chǎn)EPA或DHA(Yu，R.等人，Lipids35:1061-1064,2000；Takeyama,5H.等人，Microbiologyl43:2725-2731,1997)。備選策略是改變?nèi)ワ柡兔负脱由烀傅幕钚?Zank，Τ.K.等人Plantjournal31255-268,2002；Sakuradani,E.等人Gene238:445-453,1999)Δ6去飽和酶、Δ6延伸酶、Δ5去飽和酶、Δ5延伸酶和Δ4去飽和酶對上述途徑的修飾是哺乳動物中的Sprecher途徑(Sprecher2000,Biochim.Biophys.Acta1486:219-231)。實施進一步的延伸步驟而非Δ4去飽和過程以產(chǎn)生C24，隨后通過進一步Δ6-去飽和作用和最終的β-氧化作用產(chǎn)生了C22的鏈長度。由于調(diào)節(jié)機制未知，故稱作Sprecher的途徑(見圖1)并不適于植物和微生物中的生產(chǎn)。取決于它們的去飽和模式，可以將多不飽和脂肪酸分成兩大類，S卩，ω6_或者ω3_脂肪酸，它們的代謝和功能活性不同。ω6_代謝途徑的起始物質(zhì)是脂肪酸亞油酸(18:2Δ9’12)，而ω3_途徑通過亞麻酸(18:3Δ9’12’15)進行。通過Δ15去飽和酶的活性形成亞麻酸(Tocher等人1998，Prog.LipidRes.37，73-117；Domergue等人2002，Eur.J.Biochem.269,4105-4113)。哺乳動物，以及人，沒有對應(yīng)的去飽和酶活性(Δ12-和Δ15-去飽和酶)，必須通過食物攝入這些脂肪酸(必需脂肪酸)。以這些前體開始，通過去飽和酶和延伸酶反應(yīng)順序合成生理上重要的多不飽和的脂肪酸花生四烯酸(=ΑΚΑ，20:4Δ5’8’"’14)、一種6-脂肪酸和兩種ω3-脂肪酸二十碳五烯酸(=EPA，20:5A5’8’lia4’17)和二十二碳六烯酸φΗΑ，22:6Δ4’7’1CI’13’17’19)。ω3-脂肪酸的應(yīng)用在心血管疾病(Shimikawa2001,WorldRev.Nutr.Diet.88，100-108)、炎癥(Calder2002，Proc.Nutr.Soc.61,345-358)和關(guān)節(jié)炎(Cleland和James2000，J.Rheumatol.27，2305-2307)的治療中顯示出上述治療活性。高等植物包含多不飽和脂肪酸，如亞油酸(C182)和亞麻酸(C18:3)。在高等植物的種子油中根本沒有發(fā)現(xiàn)ARA、EPA和DHA，或者僅存在極小的量(E.Ucciani=NouveauDictionnairedesHuilesVegetales[NewDictionaryoftheVegetableOils].Technique&Documentation-Lavoisier,1995.ISBN:2-7430-0009-0)然而，在高等植物中(優(yōu)選的在油料種子作物如油菜(oilseedrape)、亞麻籽、向日葵和大豆中)產(chǎn)生LCPUFA將是有利的，因為可以經(jīng)濟地得到食品工業(yè)、動物營養(yǎng)和制藥目的所需的大量高質(zhì)量的LCPUFA。有效的途徑是通過重組方法，為此導(dǎo)入并表達編碼LCPUFA生物合成的酶的基因。這些基因編碼例如，Δ6去飽和酶、Δ6延伸酶、Δ5去飽和酶或Δ4去飽和酶。這些基因可以有利地從產(chǎn)生LCPUFA并將它們摻入膜或者三酰甘油酯的微生物和低等植物中分離。因此，已有可能從苔蘚植物展葉劍葉蘚(Physcomitrellapatens)中分離Δ6去飽和酶基因，從展葉劍葉蘚和秀麗線蟲(C.elegans)中分離Δ6延伸酶基因(Zank，Τ.K.等人，PlantJournal31255-268，2002，Beaudoin等人，BiochemSocTrans28:661_663，2000)。例如在DE-A_10219203(用于在植物中產(chǎn)生多不飽和脂肪酸的方法“methodfortheproductionofpolyunsaturatedfattyacidsinplants")Φ71''^達編碼LCPUFA生物合成酶的基因，并由此產(chǎn)生LCPUFA的第一個轉(zhuǎn)基因植物。然而，這些植物生產(chǎn)的LCPUFA的量需要進一步優(yōu)化，用于加工植物中存在的油。為了能夠強化含有這類多不飽和脂肪酸的食品和飼料，因此非常需要生產(chǎn)這類多不飽和脂肪酸的簡單、廉價的方法，特別是在真核系統(tǒng)中的方法。本發(fā)明的目的是基于提供此類方法和測量。通過在專利的權(quán)利要求和下文中描述的實施方案來實現(xiàn)上述目的。因此，本發(fā)明涉及包含這樣的核酸序列的多核苷酸，所述核酸序列選自(a)SEQIDNO1顯示的核酸序列；(b)編碼這樣的多肽的核酸序列，所述多肽具有SEQIDNO2顯示的氨基酸序列；(c)與(a)或(b)的核酸序列之一具有至少70%同一性，且編碼具有去飽和酶活性的多肽的核酸序列；和(d)(a)、(b)或(C)的核酸的片段的核酸序列，其中片段編碼具有去飽和酶活性的多肽。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“多核苷酸”指包含這樣的核酸序列的多核苷酸，所述核酸編碼具有去飽和酶活性的多肽。去飽和酶活性優(yōu)選的是脂類或脂肪酸的生物合成所需要的。特別優(yōu)選的，它們具有下列去飽和酶活性的形式Δ5去飽和酶活性。去飽和酶優(yōu)選的涉及多不飽和脂肪酸(PUFA)的合成，特別優(yōu)選的涉及長鏈PUFA(LCPUFA)的合成。用于該去飽和酶活性的合適的檢測系統(tǒng)描述在例如WO2005/083053中。根據(jù)本發(fā)明的特定的多核苷酸，即，具有如SEQIDNO1所示核酸序列的多核苷酸，或者編碼具有如SEQIDNO2所示氨基酸序列的多肽的多核苷酸已經(jīng)從海洋球石藻中獲得。該術(shù)語還涵蓋了上述特定多核苷酸的變體。這些可以采用同源、直系同源或旁系同源序列。此類變體包括這樣的核酸序列，其特征是至少一個堿基取代、一個堿基添加或一個堿基缺失，意在變體仍然編碼具有上述各起始序列的生物學(xué)活性的多肽。變體包括能與上述多核苷酸雜交的多核苷酸，優(yōu)選的在嚴謹條件下。特別優(yōu)選的嚴謹條件是技術(shù)人員已知的，并可見于CurrentProtocolsinMolecularBiology,Johnffiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6。嚴謹雜交條件的優(yōu)選實例是在約45°C的6x氯化鈉/檸檬酸鈉(=SSC)中雜交，然后在50-65°C下在0.2xSSC,0.1%SDS中進行一次或多次洗滌步驟。技術(shù)人員知道根據(jù)核酸類型和例如當(dāng)存在有機溶劑時，在溫度和緩沖液濃度方面，雜交條件中是不同的。在“標(biāo)準(zhǔn)雜交條件”下，在濃度為0.1至5XSSC(pH7.2)的水性緩沖溶液中，根據(jù)核酸類型，雜交溫度在42°C和58°C之間。如果上述緩沖液中存在有機溶劑，例如50%甲酰胺，則標(biāo)準(zhǔn)條件下的雜交溫度是大約42°C。對于DNA=DNA雜交體，雜交條件優(yōu)選的是例如0.IXSSC和20°C至45°C，優(yōu)選的在30°C至45°C之間。對于DNA=RNA雜交體，雜交條件優(yōu)選的是0.1XSSC和30°C至55°C，優(yōu)選的在45°C至55°C之間。上述雜交溫度是針對例如長度約IOObp(=堿基對)，G+C含量為50%的核酸，在缺少甲酰胺的情況下確定的。技術(shù)人員在教科書幫助下知道如何確定需要的雜交條件，例如上述的，或者來自以下教科書Sambrook等人，MolecularCloning,ColdSpringHarborLaboratory,1989；Hames禾口Higgins(編著)1985,NucleicAcidsHybridizationAPracticalApproach,IRLPressatOxfordUniversityPress,Oxford；Brown(編著)1991,EssentialMolecularBiology:APracticalApproach,IRLPressatOxfordUniversityPress,Oxford0作為替代，還可以通過基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的方法提供根據(jù)本發(fā)明的特定多核苷酸的變體。為此，首先可以從保守序列得到引物(例如，編碼多肽的功能結(jié)構(gòu)域的序列)?？梢酝ㄟ^與編碼具有相似活性的多肽的多核苷酸進行序列比較來確定保守序列。使用的模板可以是來自細菌、真菌、植物或動物的DNA或cDNA?？梢允褂猛ㄟ^PCR獲得的DNA片段篩選合適的基因組文庫或cDNA文庫，從而如果需要的話，分離多核苷酸的完整可讀框，并通過測序確定它。優(yōu)選的變體包括這樣的多核苷酸，所述多核苷酸包含與上述特定核酸序列之一具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%(或者與本文所述不同的百分比)同一性的核酸序列，并且編碼具有各自生物學(xué)活性的多肽。同樣優(yōu)選的包括這樣的多核苷酸，所述多核苷酸包含的核酸序列編碼與上述特定氨基酸序列之一具有至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%(或者與本文所述不同的百分比)同一性的氨基酸序列的多肽，并且所述多肽具有起始序列各自的生物學(xué)活性。相同核苷酸或氨基酸的百分比優(yōu)選的涉及待比較序列至少50%的序列片段，特別優(yōu)選的在待比較序列的全長上。實現(xiàn)此類比較的算法的多種程序描述在現(xiàn)有技術(shù)中，并且是可商購的。特別的是，可以參照Needleman和^msch或Smith及Waterman的算法，其產(chǎn)生特別可靠的結(jié)果。這些算法優(yōu)選的通過下列程序?qū)崿F(xiàn)=PileUp程序(J.Mol.Evolution.，25,351-360,1987，Higgins等，CABI0S,51989:151-153)，Gap和BestFit程序(Needleman1970，J.Mol.Biol.48；443-453和Smith1981,Adv.App1.Math.2；482-489)，作為GCG軟件包(GeneticsComputerGroup,575ScienceDrive,Madison,Wisconsin,USA53711,1991)的一部分。出于本發(fā)明的目的，特別優(yōu)選的用GAP程序在整個序列上確定序列同一性的百分比(％)，使用下列設(shè)定參數(shù)缺口權(quán)重50；長度權(quán)重3；平均匹配10.000和平均錯配0.000。僅包含上述核酸序列的片段的多核苷酸也是根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸。在此，意在所述片段編碼的多肽的特征是起始序列的生物學(xué)活性，或者是后者編碼的多肽。由此類多核苷酸編碼的多肽因此包括賦予生物學(xué)活性的上述特定多肽(起始多肽)的結(jié)構(gòu)域，或由所述結(jié)構(gòu)域組成。出于本發(fā)明目的的片段優(yōu)選的包括上述特定序列的至少50、至少100、至少250或至少500個連續(xù)的核苷酸，或者編碼的氨基酸序列包括上述特定氨基酸序列之一的至少20、至少30、至少50、至少80、至少100或至少150個連續(xù)的氨基酸，并賦予如上述的生物學(xué)活性，優(yōu)選的去飽和酶活性。如本文上下文中使用的，術(shù)語“去飽和酶活性”指以脂肪酸或脂肪酸衍生物作為底物催化脫氫的酶活性。根據(jù)本發(fā)明的去飽和酶活性優(yōu)選的采取△5去飽和酶的形式(也稱為Δ5去飽和酶活性)。Δ5去飽和酶是具有脫氫C20脂肪酸的酶促功能的酶，其在8-9位C原子對C20脂肪酸脫氫。在此，C原子C5和C6每次脫去一個氫原子，在兩個C原子之間產(chǎn)生雙鍵。特別優(yōu)選的是，在本發(fā)明含義中具有去飽和酶活性——特別是Δ5去飽和酶活性的酶也轉(zhuǎn)化作為底物的乙酰輔酶Α。根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸變體優(yōu)選的特征是至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%的由起始序列編碼多肽的相應(yīng)生物學(xué)活性。這表示根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸編碼的多肽可以參與在生物體內(nèi)，優(yōu)選的在植物或植物細胞中的脂肪酸、脂肪酸酯(例如二?；视秃?或三?；视?合成所需的化合物的代謝，或者可以參與分子的跨膜轉(zhuǎn)運，所述分子意指在至少2個、優(yōu)選的3、4、5或6個位置具有雙鍵的脂肪酸分子中的C18-、C20-或C22-碳鏈。根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸包含上述特定的核酸序列，或由上述序列組成。這表示，根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸原則上還可以包含其他核苷酸。這些核苷酸可以優(yōu)選的是基因組核苷酸序列的3’-或5’-非翻譯區(qū)。它們優(yōu)選的由編碼區(qū)5’末端的至少100、200或500個核苷酸和3’末端的至少20、50或100個核苷酸組成。包含額外核酸序列的其它多核苷酸是編碼融合蛋白的那些。此類融合蛋白可以編碼除上述多肽以外的其它多肽或多肽部分。其它多肽或多肽部分可以采取脂類或脂肪酸生物合成的其它酶的形式。其它可行的是可作為表達標(biāo)志物(綠色、黃色、紅色、藍色熒光蛋白，堿性磷酸酶和其它)作用的多肽，或者所謂的“標(biāo)記”作為標(biāo)簽或作為純化的輔助(例如FLAG標(biāo)記、6-組氨酸標(biāo)記、MYC標(biāo)記和其它)?？梢詮牟煌奶烊换蛉斯碓捶蛛x多核苷酸變體。例如，它們可以通過體外或體內(nèi)誘變?nèi)斯ど??？梢詮膹V泛的動物、植物和微生物中獲得特定序列的同源物或直系同源物。它們優(yōu)選的獲得自藻類。優(yōu)選的是藻類例如等鞭金藻屬(Isochrysis)、裸藻屬(Euglena)或隱甲藻屬(Crypthecodinium)，藻類/硅藻類例如海鏈藻屬(Thalassiosira)、褐指藻屬(Phaeodactylum)或破囊壺菌屬(Thraustochytrium)，腐霉屬(Pythium)，苔蘚例如劍葉蘚(Physcomitrella)或角齒蘚屬(Ceratodon)；非常特別優(yōu)選的是裸藻屬或Oomycota綱硅藻類的藻類，例如腐霉屬或疫霉屬(Wiytophtora)，或來自接合菌門根霉屬的真菌。多核苷酸還可以優(yōu)選的獲得自高等植物，例如報春花科(Primulaceae)，如Aleuritia、Calendulastellata、刺狀骨軒菊(Osteospermumspinescens)或Osteospermumhyoseroides，微生物如真菌例如曲霉屬(Aspergillus)、破囊壺菌屬、疫霉屬、蟲霉屬(Entomophthora)、毛霉屬(Mucor)或被孢霉屬(Mortierella)，細菌如希瓦菌(SiewaneIla)，酵母或動物如線蟲(例如隱桿線蟲)、昆蟲或魚。多核苷酸變體還優(yōu)選的源自脊椎動物綱的動物。多核苷酸變體還特別優(yōu)選的源自脊椎動物綱、真核生物，輻鰭魚M(Actinopterygii)；IfftIfeM^(Neopterygii)；(Teleostei)；Euteleostei、原鰭魚總目(Protacanthopterygii)、鮭形目(Salmoniformes)；鮭禾斗(Salmonidae)或大馬哈魚屬(Oncorhynchus)；以及非常特別優(yōu)選的，來自鮭形目，例如鮭科(Salmonidae)，如斑魚尊屬(Salmo),例如來自虹魚尊(Oncorhynchusmykiss)、Truttatrutta或亞東娃(Salmotruttafario)屬和種。在此，可以通過分子生物學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)以及本文提供的序列信息，分離根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸。此外，在比較算法的幫助下，可以在DNA或氨基酸水平鑒別例如同源序列或同源保守序列區(qū)。這些可以作為雜交探針和標(biāo)準(zhǔn)雜交技術(shù)(參見例如在Sambrook等人，MolecularCloningALaboratoryManual，第2片反，ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY,1989中描述的)使用，用于分離其它可用于方法中的核酸序列。此外，可以通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的方法，分離多核苷酸或其片段，其中使用基于該序列或其部分的寡核苷酸引物(例如，可以使用基于該相同序列產(chǎn)生的寡核苷酸引物，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)分離包含完整序列或其部分的核酸分子)。例如，可以從細胞分離mRNA(例如通過Chirgwin等人，(1979)Biochemistry18=5294-5299的硫氰酸胍提取方法)，以及通過逆轉(zhuǎn)錄酶的方法產(chǎn)生cDNA(例如，獲得自Gibco/BRL,Bethesda,MD的MoloneyMLV逆轉(zhuǎn)錄酶，或者獲得自SeikagakuAmerica,Inc.，St.Petersburg,FL的AMV逆轉(zhuǎn)錄酶)。用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴增的合成寡核苷酸引物可基于在SEQID編號中所示的多核苷酸和氨基酸序列產(chǎn)生。根據(jù)本發(fā)明的核酸可使用cDNA或備選地使用基因組DNA作為模板和合適的寡核苷酸引物，通過標(biāo)準(zhǔn)PCR擴增技術(shù)擴增。所擴增的核酸因此可以克隆到合適的載體中，并DNA序列分析來表征?？梢酝ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)合成方法產(chǎn)生與去飽和酶核苷酸序列對應(yīng)的寡核苷酸，例如使用自動化DNA合成儀。根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸可以以分離的多核苷酸的形式(即，與其天然來源分離，例如基因組的基因座)，或者以遺傳修飾的形式(即，多核苷酸也可以位于其天然的遺傳座位，但是，在此情況下，必須是遺傳修飾的)提供。分離的多核苷酸優(yōu)選的包含少于51Λ、4kb,3kb,2kbUkb,0.51Λ或0.Ikb的在其環(huán)境中天然存在的核苷酸序列。根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸可以以單鏈或雙鏈的核酸分子形式存在，并可以采取基因組DNA、cDNA或RNA的形式。優(yōu)選的，根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸由RNA或DNA組成。根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸包括在SEQID編號中顯示的所有方向的序列，S卩，互補鏈和反向或反向互補的方向。該術(shù)語還包括化學(xué)修飾的核酸，例如天然存在的甲基化DNA分子，或人工核酸，例如生物素化的核酸。因為根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸，可以增加長鏈PUFA的重組生產(chǎn)中的底物20:4Δ5，8，11，14和20:5Δ5，8，11，14，17。由根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸編碼的Δ5去飽和酶優(yōu)選的催化20:3Δ8，11，14和20:4Δ8，11，14，17的最終合成步驟，產(chǎn)生有商業(yè)價值的長鏈多不飽和脂肪酸。過去，可以進行多種分離Δ5去飽和酶的方法(例如，Domergue等人，(2002)，EurJBiochem.269(16):4105-13;Kajikawa等人，(2004)PlantMol.Biol.54:335-52)還已經(jīng)可以證實，所有已知的Δ5去飽和酶利用相同的?；d體磷脂酰膽堿(Domergue等人，(2003)JBiolChem.278(37):35115-26)。對于Δ6去飽和酶，已可以證實?；o酶A(?；?載體輔酶Α)的轉(zhuǎn)化對長鏈多不飽和脂肪酸的合成是有利的(Domergue等人，(2005)BiochemJ.389(Pt2):483-90)。然而，目前尚未能鑒別任何Δ5去飽和酶類的酶能夠轉(zhuǎn)化作為底物的?；o酶Α。也沒有序列比較能夠預(yù)測對于?；d體的底物特異性。令人驚訝的是，在本發(fā)明的上下文中，能夠分離來自藻類海洋球石藻(真核生物；觸絲藻綱(Haptophyceae)；等鞭金藻目(Isochrysidales)；Noelaerhabdaceae)的序列，其編碼具有Δ5去飽和酶活性并轉(zhuǎn)化?；?輔酶A底物的酶。特別的是，它有利的表現(xiàn)出根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸可以特別有效的應(yīng)用于多不飽和脂肪酸在宿主細胞和轉(zhuǎn)基因生物中的重組生產(chǎn)。特別是，由根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸編碼的、具有△5去飽和酶活性的多肽，能用于產(chǎn)生具有2、3、4或5個雙鍵的C18-、C2(1-或C22-脂肪酸，以及優(yōu)選的具有3或4個雙鍵的多不飽和C22-脂肪酸，例如C20:3A8’"’14或C20:4A8’"’14’17。根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸和氨基酸序列特別優(yōu)選的導(dǎo)致脂肪酸20:4Δ5，8，11，14(花生四烯酸)和20:5Δ5，8，11，14，17(二十碳五烯酸)的增加。本發(fā)明還包括至少15bp，優(yōu)選的至少20bp、至少25bp、至少30bp、至少35bp或至少50bp的寡核苷酸，所述寡核苷酸能夠在嚴謹條件下與上述多核苷酸之一特異性的雜交。寡核苷酸可以由DNA或RNA或兩者組成。此類寡核苷酸可作為引物用于PCR，作為表達抑制性的反義寡核苷酸、用于RNA干擾(RNAi)方法或用于嵌合可塑性(chimeroplastic)或基因可塑性(genoplastic)方法。RNAi方法描述在例如Fire等人，Nature(1998)391806-811；Fire,TrendsGenet.15,358-363(1999)；Sharp,RNAinterference2001.GenesDev.15,485-490(2001)；Hammond等人，NatureRev.Genet.2,1110-1119(2001)；Tuschl，Chem.Biochem.2,239-245(2001)；HamiIton等人，Science286,950-952(1999)；Hammond等人，Nature404,293-296(2000)；Zamore^人，Cell101,25-33(2000)；Bernstein10等人，Nature409,363-366(2001)；Elbashir等人，GenesDev.15，188-200(2001)；WO01/29058；WO99/32619；或Elbashir等人，2001Nature411:494-498中，通過降解mRNA抑制基因表達來發(fā)揮作用。嵌合可塑性(chimeroplastic)或基因可塑性(genoplastic)方法在內(nèi)源性基因座將體內(nèi)修飾引入基因中(例如，引入點突變)。相應(yīng)的方法描述在US5,565，350、US5,756，325、US5,871，984、US5,731，181、US5,795，972、US6,573，046、US6,211，351、US6，586，184、US6,271，360和US6,479，292中。在本文中，特別優(yōu)選的使用由具有SEQIDNO5的多核苷酸序列編碼的Δ6-去飽和酶(d6Des(Pir))，由具有SEQIDNO:7的多核苷酸序列編碼的Δ6-延伸酶(d6Elo(Pp))，由具有SEQIDNO:1的多核苷酸序列編碼的Δ5-去飽和酶(d5Des(Eh))，由具有SEQIDN0:9的多核苷酸序列編碼的Δ12-去飽和酶(dl2Des(PS))，由具有SEQIDNO:13的多核苷酸序列編碼的Δ15-去飽和酶(dl5Des(Perf))，由具有SEQIDNO:11的多核苷酸序列編碼的ω3_去飽和酶(o3Des(Pi))，由具有SEQIDNO:15的多核苷酸序列編碼的Δ5-延伸酶(d5Elo(0t))，由具有SEQIDNO:17的多核苷酸序列編碼的Δ4-去飽和酶(d4Des(Tc))，和根據(jù)本發(fā)明的去飽和酶，從而合成長鏈多不飽和脂肪酸。上述多核苷酸描述在W02006/100241中。備選地，還可以使用Δ9-延伸酶和Δ8-去飽和酶替代上述Δ6-去飽和酶和八6-延伸酶，如恥2004/057001中所述。根據(jù)待制備的脂肪酸，可以在下文描述的宿主細胞或轉(zhuǎn)基因生物中共表達，或者在根據(jù)本發(fā)明的方法中使用，根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸與上述去飽和酶或延伸酶的多種組合。下文詳細描述了表1中用于生產(chǎn)花生四烯酸的特別優(yōu)選的組合，表2中用于二十碳五烯酸的和表3中用于二十二碳六烯酸的組合。例如，根據(jù)本發(fā)明的Δ5-去飽和酶可以單獨使用，或者用于合適的組合中(例如Δ12-去飽和酶和Δ15-去飽和酶)，與d6Des(Pir)、d6Elo(Pp)、d5Des(Tc)、ω3Des(Pi)一起用于生產(chǎn)EPA。相同的，單獨的或以合適的組合的根據(jù)本發(fā)明的Δ5-去飽和酶，可以與d6DeS(Pir)、d6Elo(Pp)、(！5Des(Tc)、ω3Des(Pi)、(！5Elo(Ot)、(！4Des(Tc)一起用于生產(chǎn)二十二碳六烯酸。優(yōu)選的，磷脂或CoA脂肪酸酯中、有利的CoA脂肪酸酯中的脂肪酸是去飽和的。因此，簡單、廉價的生產(chǎn)這類多不飽和脂肪酸是可能的，特別是在真核系統(tǒng)中。然后，通過根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸的方法生產(chǎn)的不飽和脂肪酸可以配制成油、脂類和脂肪酸組合物，并可以合適的方式使用。本發(fā)明還涉及包含根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸的載體。術(shù)語“載體”指這樣的核酸分子，所述核酸分子能夠運輸與它結(jié)合的另一核酸分子，例如根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸。載體的一個類型是“質(zhì)?！?，一種環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)，其中可以連接額外的DNA片段。載體的另一個類型是病毒載體，額外的DNA片段可以連接到病毒基因組中。一些載體能夠在已導(dǎo)入這些載體的宿主細胞中自主復(fù)制(例如具有細菌復(fù)制原點的細菌載體)。當(dāng)導(dǎo)入到宿主細胞中時，其它載體有利地整合到宿主細胞的基因組中，并因此隨宿主基因組一起復(fù)制。此外，一些載體可以控制與它有效連接的基因的表達。這些載體在本上下文中稱為“表達載體”。通常，適用于DNA重組技術(shù)的表達載體采用了質(zhì)粒的形式。在本說明書中，由于質(zhì)粒是最常用的載體形式，故“質(zhì)粒”和“載體”可互換使用。然而，本發(fā)明還意在覆蓋具有類似功能的其它形式的表達載體，例如病毒載體。術(shù)語“載體”還意在包含技術(shù)人員熟知的其它載體，例如噬菌體、病毒(如SV40、CMV、TMV)、轉(zhuǎn)座子、IS元件、噬粒、噬菌粒、粘粒、線形或環(huán)形DNA、人工染色體。最后，該術(shù)語還包括用于靶向(即，多核苷酸的同源、重組或異源插入)的構(gòu)建體。通過常規(guī)的轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染技術(shù)，可以將載體導(dǎo)入到原核和真核細胞中。如本文上下文使用的，術(shù)語“轉(zhuǎn)化”和“轉(zhuǎn)染”、接合和轉(zhuǎn)導(dǎo)，意在包含本領(lǐng)域已知的多種用于向宿主細胞導(dǎo)入外源核酸(如DNA)的方法，包括磷酸鈣或氯化鈣共沉淀、DEAE-葡聚糖-介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、天然感受態(tài)、化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移、電穿孔或粒子轟擊。轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細胞，包括植物細胞，的合適方法可見于Sambrook等人(MolecularCloning:ALaboratoryManual.，第2版，ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,1989)和其它的實驗室教科書，例如MethodsinMolecularBiology,1995,第44卷，Agrobacteriumprotocols,Ed.GartlandandDavey,HumanaPress,Totowa,NewJersey。合適的克隆載體通常為技術(shù)人員已知的。特別的是，其包括可以在微生物系統(tǒng)中復(fù)制的載體，主要是確保在酵母或真菌中有效克隆且同時可能穩(wěn)定轉(zhuǎn)化植物的載體。必須提及的載體是適用于T-DNA介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化的多種二元和共整合的載體系統(tǒng)。此類載體系統(tǒng)的特征通常是它們至少包含為農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染所需的vir基因和T-DNA分界序列(T-DNA邊界)。優(yōu)選的，這類載體系統(tǒng)還包括其它順式調(diào)節(jié)區(qū)域，如啟動子和終止子序列和/或選擇標(biāo)志物，通過所述選擇標(biāo)志物可以鑒別合適轉(zhuǎn)化的生物。在共整合載體系統(tǒng)的情況下，vir基因和T-DNA序列在相同載體中排列，而二元系統(tǒng)至少以兩個載體為基礎(chǔ)，其中一個載體攜帶了vir基因但沒有T-DNA，同時第二個載體攜帶了T-DNA而無vir基因。因此所提及的后一種載體相對較小，容易在大腸桿菌(E.coli)中和農(nóng)桿菌中操作和復(fù)制。這類雙元載體包括來自pBIB-HYG、pPZP、pBecks、和pGreen系列的載體。根據(jù)本發(fā)明，Binl9、ρΒΙΙΟΙ、pBinAR、pGPTV和pCAMBIA優(yōu)選使用。雙元載體和它們的用途的綜述可在Hellens等，TrendsinPlantScienceQOOO)5，446-451中找到。具有根據(jù)本發(fā)明的插入的多核苷酸的載體可以在選定條件下在微生物中穩(wěn)定增殖，特別是大腸桿菌和根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)中穩(wěn)定增殖，并能夠?qū)愒碊NA轉(zhuǎn)移到植物或微生物中。通過克隆載體的方式，可以將根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸導(dǎo)入到生物體內(nèi)，例如微生物，并因而用于轉(zhuǎn)化植物。適合該目的的載體公開在PlantMolecularBiologyandBiotechnology(CRCPress,BocaRaton,Florida)，第6/7章，第71-119頁(1993)；F.F.White,VectorsforGeneTransferinHigherPlants；inTransgenicPlants,第1卷，EngineeringandUtilization,編著Kung禾口R.Wu,AcademicPress,1993,15-38；B.Jenes等人，TechniquesforGeneTransfer,in!TransgenicPlants,第1卷，EngineeringandUtilization,編著Kung禾口R.Wu,AcademicPress(1993)，128—143；Potrykus,Annu.Rev.PlantPhysiol.PlantMolec.Biol.42(1991)，205-225。載體優(yōu)選的是表達載體。多核苷酸存在于根據(jù)本發(fā)明的表達載體中，與表達控制序列有效的(即，功能性的)連接。表達控制序列和多核苷酸以及任選的載體的其它序列元件一起，也被稱為表達盒。表達控制序列保證在轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染到宿主細胞后多核苷酸可以表達。待使用的表達控制序列優(yōu)選的包括順式調(diào)控元件，例如啟動子和/或增強子核酸序列，其由宿主細胞的轉(zhuǎn)錄機器識別。該術(shù)語還包括其它表達控制元件，例如多聚腺苷酸信號和RNA穩(wěn)定化序列。這些調(diào)控序列描述在例如Goeddel=GeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology185,AcademicPress,SanDiego,CA(1990)中，或參見Gruber禾口12Crosby,in:MethodsinPlantMolecularBiologyandBiotechnology,CRCPress,BocaRaton,Florida，編著Glick和Thompson，第7章，89-108，包括本文引用的文獻。表達控制序列包括控制核苷酸序列在多種類型的宿主細胞中組成型表達的序列，和控制核苷酸序列只在某些條件下在某些宿主細胞中定向表達的序列。技術(shù)人員已知表達載體的設(shè)計可依賴于這樣的因素，例如待轉(zhuǎn)化宿主細胞的選擇，目的蛋白質(zhì)表達的程度等。根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸可以以一份或多份拷貝存在于表達盒中或在根據(jù)本發(fā)明的表達載體中(例如，以一些表達盒的形式)。在此，如上述，調(diào)控序列或因子可以優(yōu)選的對導(dǎo)入基因的基因表達具有陽性的影響，并從而增加其表達。因此，通過使用強轉(zhuǎn)錄信號，例如啟動子和/或“增強子”，能夠在轉(zhuǎn)錄水平有利的增強調(diào)控元件。此外，通過例如提高mRNA穩(wěn)定性，也可以增強翻譯。在本發(fā)明含義范圍內(nèi)的其它表達控制序列是在待翻譯的多核苷酸的3’末端的翻譯終止子。本文可使用的實例是OCSl終止子。在啟動子的情況下，每種待表達的多核苷酸應(yīng)該使用不同的終止子序列。優(yōu)選的表達控制序列或調(diào)控序列存在于啟動子中，例如cos、tac、trp、tet、trp-tet>lpp、lac、lpp-lac>laclq>T7>T5>T3>gal、trc>ara>SP6>λ—PR5λ—PL啟動子，并有利的用于革蘭氏陰性菌。其它有利的調(diào)控序列是例如，存在于革蘭氏陽性啟動子amy和SP02中，在酵母或真菌啟動子ADCl、MFα、AC、P-60、CYC1、GAPDH、TEF、rp^、ADH中或在植物啟動子CaMV/35S(Franck等人，Cell21(1980)285-294),PRPl(Ward等人，Plant.Mol.Biol.22(1993))、SSU、0CS、lib4、usp、STLS1、B33、nos中，或在泛素或菜豆蛋白啟動子中。在本上下文中，有利的還有誘導(dǎo)型啟動子，例如EP-A-0388186(苯磺酰胺-誘導(dǎo)型)、PlantJ.2，1992:397-404(Gatz等人，四環(huán)素-誘導(dǎo)型)、EP-A-0335528(脫落酸-誘導(dǎo)型)或WO93/21334(乙醇-或環(huán)己烯醇-誘導(dǎo)型)中描述的啟動子。其它合適的植物啟動子是馬鈴薯的細胞質(zhì)FBP酶啟動子或ST-LSI啟動子(Stockhaus等人，EMBOJ.8，1989,2445)、大豆磷酸核糖焦磷酸酰氨基轉(zhuǎn)移酶啟動子(Genbank登錄號U87999)或在EP-A-0M9676中所描述的結(jié)節(jié)特異性啟動子。特別有利的啟動子是使得能夠在參與脂肪酸生物合成的組織中表達的啟動子。非常特別有利的是種子特異性啟動子，例如USP啟動子，以及其它啟動子如LeB4、DC3、菜豆蛋白或油菜籽蛋白啟動子。其它特別有利的啟動子是種子特異性啟動子，可用于單子葉或雙子葉植物，并描述在US5，608，152(油菜籽的油菜籽蛋白啟動子)、WO98/45461(擬南芥的油質(zhì)蛋白啟動子)、US5，504，200(菜豆的菜豆蛋白啟動子)、WO91/13980(蕓苔的Bce4啟動子)、Baeumlein等人，PlantJ.,2,2,1992:233-239(來自豆科植物的LeB4啟動子)中，這些啟動子適于雙子葉植物。適于單子葉植物的啟動子是，例如大麥lpt-2或Ipt-I啟動子(W095/15389和WO95/23230)、W099/16890中所描述的大麥醇溶蛋白啟動子和其它合適啟動子。原則上，可以使用所有的天然啟動子及其(例如上述的)調(diào)控序列作為表達控制序列。還可以單獨或另外的使用合成啟動子，特別是當(dāng)它們介導(dǎo)種子特異性表達時，例如WO99/16890中所述。為了取得特別高的PUFA含量，尤其是在轉(zhuǎn)基因植物中，應(yīng)該以種子特異性的方式在油料作物中表達本發(fā)明的多核苷酸。為實現(xiàn)此目的，可使用種子特異性啟動子，或在胚和/或在胚乳中有活性的啟動子。原則上，可以從雙子葉植物和單子葉植物中分離種子特異性啟動子。有利的優(yōu)選的啟動子列舉如下USP(=未知種子蛋白質(zhì))和豌豆球蛋白(豌豆((Viciafaba))[BSumlein等，Mol.GenGenet.，1991，225(3)]，油菜籽蛋白(油菜籽)[US5，608，152]、?；d體蛋白(油菜籽)[US5，315，001和WO92/18634]、油質(zhì)蛋白(擬南芥)[W098/45461和WO93/20216]、菜豆蛋白(菜豆)[US5,504，200]、Bce4[W091/13980]、豆球蛋白B4(LegB4啟動子)[Baiimlein等，PlantJ.，2，2，1992233-9]，Lpt2和Iptl(大麥)[W095/15389和W095/23230]、來自稻、玉米和小麥的種子特異性啟動子[W099/16890]、Amy32b、Amy6-6和aleurain[US5，677，474]、Bce4(油菜籽)[US5,530，149]、大豆球蛋白(大豆)[EP571741]、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(大豆)[JP06/62870]、ADR12_2(大豆)[TO98/08962]、異檸檬酸裂合酶(油菜籽)[US5，689，040]或α淀粉酶(大麥)[EP781849]。也可以通過化學(xué)誘導(dǎo)型啟動子促進植物基因表達(參見綜述feitZ1997，Annu.Rev.PlantPhysiol.PlantMol.Biol.,48=89-108)當(dāng)需要以時間特異性方式進行基因表達時，化學(xué)誘導(dǎo)型啟動子是特別合適的。此類啟動子的實例是水楊酸誘導(dǎo)型啟動子(W095/19443)、四環(huán)素誘導(dǎo)型啟動子(Gatz^(1992)PlantJ.2,397-404)和乙醇誘導(dǎo)型啟動子。為確保各種生物合成基因經(jīng)多個世代后仍然穩(wěn)定整合在轉(zhuǎn)基因植物中，應(yīng)該在分離的啟動子控制下表達根據(jù)本發(fā)明的各多核苷酸，優(yōu)選的是不同于其它啟動子的啟動子，因為重復(fù)序列基序可導(dǎo)致T-DNA不穩(wěn)定或重組事件。在本上下文中，表達盒有利地按如此方式構(gòu)建，使啟動子后接合適的切割位點(有利地位于多接頭中)，以便插入待表達的核酸，如果適當(dāng)，在多接頭后面放置終止子。上述序列重復(fù)多次，優(yōu)選的重復(fù)三、四或五次，使得一個構(gòu)建體中組合了多達五個基因，并導(dǎo)入轉(zhuǎn)基因植物中以便表達。有利的，序列重復(fù)多達三次。為了表達核酸序列，通過合適的切割位點，例如多接頭，將核酸序列插入到啟動子后面。有利的，每種核酸序列具有其自身的啟動子，并且如果合適具有其自身的終止子。此類有利的構(gòu)建體公開在例如DE10102337或DE10102338中。然而，還可以在啟動子后面插入多個核酸序列，并如果合適，插入在終止子前面。在此，表達盒中的插入位點或插入核酸的序列并不特別重要，也就是說，可以將核酸序列插入到表達盒的最先或最末的位置上，而不顯著影響它的表達。有利的，可以在表達盒中使用不同的啟動子，例如USP、LegB4或DC3啟動子，和不同的終止子。然而，還可以在表達盒中只使用一種類型的啟動子。然而，這可以導(dǎo)致不理想的重組事件。可以設(shè)計所使用的重組表達載體用于在原核或真核細胞中表達。出于簡便性的原因，載體構(gòu)建的中間步驟常在微生物中實施，因此這樣設(shè)計是有利的。利用載體按WO98/01572中描述的轉(zhuǎn)化，例如可以在細菌細胞、昆蟲細胞(使用芽孢桿菌表達載體)、酵母和其它真菌細胞(Romanos，M.A.等人，(199"Foreigngeneexpressioninyeast-.areview",Yeast8:423-488；vandenHondel,C.A.M.J.J.等人’(1991)"Heterologousgeneexpressioninfilamentousfungi，，，in:MoreGeneManipulationsinFungi,J.W.Bennet&L.L.Lasure,編著，第396-428頁；AcademicPressSanDiego；禾口vandenHondel,C.A.M.J.J.,&Punt,P.J.(1991)"Genetransfersystemsandvectordevelopmentforfilamentousfungi,in:AppliedMolecularGeneticsofFungi,Peberdy,J.F.等人編著，第1-28頁，CambridgeUniversityPressCambridge)>藻類(Falciatore等人，1999，MarineBiotechnology.1,3:239-251)、多種類型的纖毛蟲全毛亞綱(Holotrichia)，緣毛亞綱(Peritrichia)，旋毛亞綱(Spirotrichia)，吸管亞綱(Suctoria)，四膜蟲(Tetrahymena)，草履蟲(Paramecium)，豆形蟲(Colpidium)，瞬目蟲(Glaucoma)，匙口蟲(Platyophrya)，Potomacus,Desaturaseudocohnilembus,游仆蟲(Euplotes),Engelmaniella禾口(Stylonychia，X^^StylonychiaIemnae屬，\jt3的在多細胞植物的細胞(參見khmidt，R.和Willmitzer，L.(1988)"HighefficiencyAgrobacteriumtumefaciens-mediatedtransformationofArabidopsisthaiianaleafandcotyledonexplants"PlantCellRep.:583-586；PlantMolecularBiologyandBiotechnology,CPress,BocaRaton,Florida,第6/7章，第71-119頁(1993)；F.F.White,B.Jenes等人，TechniquesforGeneTransfer,inTransgenicPlants,第1卷，EngineeringandUtilization,編著Kung禾口R.Wu,AcademicPress(1993),128-43；Potrykus,Annu.Rev.PlantPhysiol.PlantMolec.Biol.42(1991),205-225(以中弓I用的參考文獻))中，表達Δ12去飽和酶、Δ15去飽和酶、Δ12和Δ15去飽和酶、ω3_去飽和酶、Δ6去飽和酶、Δ6延伸酶、Δ9延伸酶、Δ8去飽和酶、Δ5去飽和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去飽禾口酶基因。在Goeddel,GeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology185，AcademicPress,SanDiego,CA(1990)中進一步討論了合適的宿主細胞。作為備選，可以在體外轉(zhuǎn)錄和翻譯重組表達載體，例如使用T7-啟動子調(diào)控序列和T7-聚合酶。在大多數(shù)情況下，原核生物中的蛋白質(zhì)表達涉及使用包含組成型或可誘導(dǎo)啟動子的載體，所述啟動子控制融合或非融合蛋白質(zhì)的表達。典型的融合表達載體尤其為pGEX(PharmaciaBiotechInc；Smith,D.B.禾口Johnson，K.S.(1988)Gene67:31—40)、pMAL(NewEnglandBiolabs,Beverly,MA)禾口pRIT5(Pharmacia,Piscataway,NJ),其中谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、麥芽糖E結(jié)合蛋白和蛋白A分別與重組靶蛋白融合。合適的誘導(dǎo)型非融合大腸桿菌表達載體的例子尤其為pTrc(Amarm等(1988)Gene69=301-315)和pETIld(1990年加利福尼亞圣迭哥AcademicPress出版社《MethodsinEnzymology》185的Studier等《GeneExpressionl^echnology》第60-89頁)。自pTrc載體表達靶基因是基于宿主RNA聚合酶自雜合trp-lac融合啟動子的轉(zhuǎn)錄。靶基因自pETIld載體的表達是基于經(jīng)共表達的病毒RNA聚合酶(T7-gnl)所介導(dǎo)的T7-gnlO-laC融合啟動子的轉(zhuǎn)錄。該病毒聚合酶由宿主菌株BL21(DE3)或HMS174(DE3)的定居λ-原噬菌體提供，其中所述定居λ-原噬菌體攜帶了受IacUV5啟動子轉(zhuǎn)錄控制的T7gnl基因。其它適用于原核生物的載體為技術(shù)人員所知，這類載體是例如大腸桿菌的pLG338、pACYC184、pBR系列如pBR322、pUC系列如pUC18或pUC19、M113mp系列力1^30邛1印44邯1邛邯241^2364]\^1^4邛1^200、pUR290、pIN-III113-Bl、λgtll或pBdCI，鏈霉菌中的pIJlOl、pIJ364、pIJ702或pIJ361，芽孢桿菌屬中的pUB110、pC194或pBD214，棒桿菌屬中的pSA77或pAJ667。在另一個實施方案中，表達載體是酵母表達載體。用于釀酒酵母中表達的載體的實例包括pYeDesaturasecl(Baldari等.(1987)EmboJ.6:229-234)、pMFa(Kurjan和Herskowitz(1982)Cell30:933-943)、pJRY88(Schultz等(1987)Gene54:113-123)和pYES2(InvitrogenCorporation,SanDiego，CA)。適用于其它真菌(如絲狀真菌)的載體和載體的構(gòu)建方法，包括在vandenHonde1,C.Α.Μ.J.J.,&Punt,P.J.(1991)"Genetransfersystemsandvectordevelopmentforfilamentousfungi,in:AppliedMolecularGeneticsoffungi,J.F.Peberdy等人編著，第1-28頁，CambridgeUniversityPressCambridge中，或者在MoreGeneManipulationsinFungi[J.W.Bennet&L.L.Lasure編著，第396-4頁AcademicPress:SanDiego中詳細描述的。其它合適的酵母載體是，例如pAG-l、YEp6、YEpl3或pEMBLYe23。作為備選，本發(fā)明的多核苷酸還可以使用桿狀病毒表達載體在昆蟲細胞表達?？捎糜谠谂囵B(yǎng)昆蟲細胞(例如Sf9細胞)中表達蛋白質(zhì)的桿狀病毒載體包括pAc系列(Smith等(1983)Mol.CellBiol.3:2156-2165)和pVL系列(Lucklow和Summers(1989)Virology170:31-39)。優(yōu)選的植物表達載體包括在Becker,D.，Kemper,Ε.，Schell，J.和Masterson，R.(1992)"Newplantbinaryvectorswithselectablemarkerslocatedproximaltotheleftborder",PlantMol.Biol.20:1195-1197；和Bevan，M.W.(1984)"BinaryAgrobacteriumvectorsforplanttransformation",Nucl.AcidsRes.12:8711-8721;VectorsforGeneTransferinHigherPlants；inTransgenicPlants,第1卷，EngineeringandUtilization,編著Kung禾口R.Wu,AcademicPress,1993,第15-38頁中詳述的。植物表達盒優(yōu)選的包含能夠在植物細胞中控制基因表達并有效連接的表達控制序列，使得每一種序列都可以實現(xiàn)其功能，例如多聚腺苷酸化信號的轉(zhuǎn)錄終止功能。優(yōu)選的多聚腺苷酸化信號是衍生自根癌農(nóng)桿菌T-DNA的，例如Ti質(zhì)粒pTiACH5(Gielen等人，EMBOJ.3(1984)835等)的基因3的信號，所述基因3是章魚氨酸合酶，或其功能性等同物，但是所有其它在植物中具有功能性活性的終止子序列也是合適的。由于植物基因表達通常不限于轉(zhuǎn)錄水平，植物表達盒優(yōu)選地包含其它有效連接的序列，例如翻譯增強子如超驅(qū)動序列，所述超驅(qū)動序列包括增加蛋白質(zhì)/RNA比的煙草花葉病毒5’-非翻譯前導(dǎo)序列(Gallie等人，1987，Nucl.AcidsResearch15:8693-8711)。如以上所述，植物基因表達必須與合適的啟動子有效連接，所述啟動子引發(fā)基因以正確的時間過程或以細胞或組織特異性方式表達?？墒褂玫膯幼邮墙M成型啟動子(Benfey等，EMBOJ.8(1989)2195-2202)，例如源自植物病毒如:35SCaMV(Franck等，Cell21(1980)285-294)、19SCaMV(還參見US5；35洸05和WO84/02913)的啟動子，或植物啟動子，如在US4,962,028中描述的小Rubisco亞單位的啟動子。用于在植物基因表達盒中有效連接的其它優(yōu)選序列是靶向序列，所述靶向序列是基因產(chǎn)物向其對應(yīng)的細胞區(qū)室中導(dǎo)入所需的(參見綜述Kermode，Crit.Rev.PlantSci.15，4(1996)285-423和其中引用的參考文獻)，例如向液泡、細胞核、所有類型質(zhì)體如造粉體、葉綠體、色質(zhì)體、胞外空間、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、油質(zhì)體、過氧化物酶體和植物細胞的其它區(qū)室中。如上所述，還可以通過化學(xué)誘導(dǎo)型啟動子促進植物基因表達(參見綜述feitz1997,Annu.Rev.PlantPhysiol.PlantMol.Biol.,48:89-108)當(dāng)希望基因表達以時間特異性方式發(fā)生時，化學(xué)誘導(dǎo)型啟動子是特別適合的。此類啟動子的實例是水楊酸誘導(dǎo)型啟動子(W095/19443)、四環(huán)素誘導(dǎo)型啟動子(Gatz^(1992)PlantJ.2,397-404)和乙醇誘導(dǎo)型啟動子。應(yīng)答生物或非生物的脅迫條件的啟動子也是合適的，例如病原誘導(dǎo)的PRPl基因啟動子(Ward等人，Plant.Mol.Biol.22(1993)361-366)、熱誘導(dǎo)的番茄hsp80啟動子(US5，187，267)、冷凍誘導(dǎo)的馬鈴薯α淀粉酶啟動子(W096/12814)或外傷誘導(dǎo)的pinll啟動子(EP-A-0375091)。特別優(yōu)選的是那些在發(fā)生脂肪酸、脂類和油生物合成的組織和器官中，在種子細胞中，如胚乳細胞和發(fā)育胚的細胞中引起基因表達的啟動子。合適的啟動子是油菜籽的油菜籽蛋白基因啟動子(US5,608，152)、蠶豆的USP啟動子(Baeumlein等，MolGengenet,161991,225(3):459-67)、擬南芥的油質(zhì)蛋白啟動子(WO98/4M61)、菜豆的菜豆蛋白啟動子(US5，504，200)、蕓苔屬的Bce4啟動子(W091/13980)或豆球蛋白B4啟動子(LeB4；Baeumlein等，1992，PlantJournal,2(2):233-9)，以及在單子葉植物如玉米、大麥、小麥、黑麥、稻等中引起種子特異性表達的啟動子。值得注意的合適啟動子是大麥的lpt2或Iptl基因啟動子(W095/15389和WO95/23230)，或者在WO99/16890中描述的來自大麥的大麥醇溶蛋白基因、稻的谷蛋白基因、稻的水稻素基因、稻的谷醇溶蛋白基因、小麥的麥醇溶蛋白基因、小麥的谷蛋白基因、玉米的玉米醇溶蛋白基因、燕麥的谷蛋白基因、高粱的kasirin基因或黑麥的裸麥醇溶蛋白基因的啟動子。由于質(zhì)體是合成脂類生物合成的前體和某些終產(chǎn)物的區(qū)室，因此，同樣特別適合的啟動子是引起質(zhì)體特異性表達的啟動子。合適的啟動子，例如病毒RNA聚合酶啟動子，描述在WO95/16783和WO97/06250中，以及來自擬南芥的clpP啟動子，描述在WO99/46394中。上述載體僅僅是對可能適合的載體的概略回顧。其它質(zhì)粒是技術(shù)人員已知的，并描述在例如CloningVectors(編著Pouwels，P.H.，等人，Elsevier,Amsterdam-NewYork-Oxford,1985,ISBN0444904018)。用于原核及真核細胞的其它合適表達系統(tǒng)，參見Sambrook,J.,Fritsch,E.F.禾口Maniatis,Τ·,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第2版，ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,1989的第16和17章。如上所述，除了本發(fā)明的多核苷酸外，表達載體還可以包含將導(dǎo)入生物體中的其它基因?？赡懿?yōu)選的向宿主生物中導(dǎo)入并表達調(diào)控基因，例如誘導(dǎo)子、抑制子或酶的基因，所述基因由于其酶促活性的結(jié)果，參與調(diào)控生物合成途徑的一個或多個基因。這些基因可以是異源或同源起源的。異源基因或多核苷酸源自不同于靶生物的起源生物，所述靶生物是待導(dǎo)入所述基因或多核苷酸的生物。在同源基因或多核苷酸的情況下，靶生物和起源生物是相同的。因此，載體優(yōu)選的包含至少一種其它多核苷酸，所述多核苷酸編碼脂類或脂肪酸生物合成涉及的其它酶。酶優(yōu)選的選自?；?CoA脫氫酶、?；?ACP(=?；d體蛋白)去飽和酶、?；?ACP硫酯酶、脂肪酸?；D(zhuǎn)移酶、?；?CoA溶血磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶、脂肪酸合酶、脂肪酸羥化酶、乙酰輔酶A羧化酶、?；o酶A氧化酶、脂肪酸去飽和酶、脂肪酸炔屬酶(acetylenase)、脂加氧酶、三?；视椭久浮⒀趸┖厦?、氫過氧化物裂合酶、脂肪酸延伸酶、Δ4去飽和酶、Δ5去飽和酶、Δ6去飽和酶、Δ8去飽和酶、Δ9去飽和酶、Δ12去飽和酶、Δ15去飽和酶、Δ12和Δ15去飽和酶、ω3_去飽和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和Δ9延伸酶。特別優(yōu)選的基因組合列舉在下列實施例的表5和6中。本發(fā)明還涉及宿主細胞，所述宿主細胞包含根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸或根據(jù)本發(fā)明的載體。原則上，用于本發(fā)明的目的的宿主細胞可以是所有的真核或原核細胞。它們可以是來自動物、植物或多細胞微生物的原代細胞，例如來自在本說明書他處提及的。此外，該術(shù)語還包括從這些生物獲得的細胞系。然而，用于本發(fā)明的目的的宿主細胞還可以是單細胞的生物，例如細菌或真菌。特別優(yōu)選的微生物是真菌，選自以下科毛殼菌科(Chaetomiaceae)、笄霉科(Choanephoraceae),隱球酵母科(Cryptococcaceae)、小克銀漢霉禾斗(Cunninghamellaceae)、Demetiaceae、淡色抱禾斗(Moniliaceae)、被抱霉禾斗(Mortierellaceae)、毛霉禾斗(Mucoraceae)、腐霉禾斗(Pythiaceae)、酵母科(Sacharomycetaceae)、/K霉科(Saprolegniaceae)、裂殖酵母科(Schizosacharomycetaceae)、Sodariaceae5jl(Tuberculariaceae)。胃它優(yōu)選的微生物選自笄霉科例如布拉霉(Blakeslea)屬、Choanephora；例如屬禾口禾中H3$Jiβ(Blakesleatrispora)、/R胃β(Choanephoracucurbitarum)、Choanephorainfundibuliferavar.cucurbitarum；被抱霄，例如被抱霄屬，例如屬禾口禾中^!!(Mortierellaisabellina)>^(Mortierellapolycephala)>拉曼被孢霉(Mortierellaramanniana)、葡酒色被孢霉(Mortierellavinacea)、Mortierellazonata；毛霉科,例如屬和種米根霉(Rhizopusoryzae)、匍枝根霉(Rhizopusstolonifer)、禾本科鐮孢(Fusariumgraminearum)；腐霉科，例如腐霉屬、疫霉屬，例如屬和種德巴利腐霉(Pythiumdebaryanum)、間型腐霉(Pythiumintermedium)、畸雌腐霉(Pythiumirregulare)>(Pythiummegalacanthum)>{!￠1^(Pythiumparoecandrum)>Pythiumsylvaticum、終極腐霄(Pythiumultimum)^(Phytophthoracactorum)>t章疫β(Phytophthoracinnamomi)、ttttit生疫β(Phytophthoracitricola)>tttto褐腐疫霉(Phytophthoracitrophthora)、β急地疫β(Phytophthoracryptogea)、M氏疫β(Phytophthoradrechsleri)、紅腐疫β(Phytophthoraerythroseptica)、Hβ(Phytophthoralateralis)>i；Sβ(Phytophthoramegasperma)、胃疫β(Phytophthoranicotianae)、煙草疫霄寄生變禾中(Phytophthoranicotianaevar.parasitica)^1^(Phytophthorapalmivora)>iβ(Phytophthoraparasitica)>tttIifβ(Phytophthorasyringae)；BJ(Saccharomycetaceae)，M如漢遜酵母屬(Hansenula)、畢赤酵母屬(Pichia)、酵母屬(Saccharomyces)、類酵母屬(Saccharomycodes)、耶氏酵母屬(Yarrowia)，例如屬和種異常漢遜酵母(Hansenulaanomala)、加利福尼亞漢遜酵母(Hansenulacalifornica)、加拿大漢遜酵母(Hansenulacanadensis)、碎囊漢遜酵母(Hansenulacapsulata)、西弗漢遜酵母(Hansenulaciferrii)>Hansenulaglucozyma、Hansenulahenricii、Hansenulaholstii、小漢遜酵母(Hansenulaminuta)、Hansenulanonfermentans、Hansenulaphilodendri、多形漢遜酵母(Hansenulapolymorpha)、土星漢遜酵母(Hansenulasaturnus)、亞膜漢遜酵母(Hansenulasubpelliculosa)、魏氏漢遜酵母(Hansenulawickerhamii)、溫奇漢遜酵母(Hansenulawingei)、嗜酒畢赤酵母(Pichiaalcoholophila)、安格斯畢赤酵母(Pichiaangusta)、異常畢赤酵母(Pichiaanomala)、雙孢畢赤酵母(Pichiabispora)、伯頓畢赤酵母(Pichiaburtonii)、加拿大畢赤酵母(Pichiacanadensis)、碎囊畢赤酵母(Pichiacapsulata)、+(Pichiacarsonii)>Pichiacellobiosa>HHj-^^Ff^fiJ(Pichiaciferrii)、粉狀畢赤酵母(Pichiafarinosa)、發(fā)酵畢赤酵母(Pichiafermentans)、Pichiafinlandica>Pichiaglucozyma^^iii^-^^ESI^fiJ(Pichiaguilliermondii)、嗜鹽畢赤酵母(Pichiahaplophila)、Pichiahenricii、Pichiaholstii、杰丁畢赤酵BJ(Pichiajadinii)>Pichialindnerii^IMIIi-^^l^fiJ(Pichiamembranaefaciens)>甲醇畢赤酵母(Pichiamethanolica)、小畢赤酵母小型變種(Pichiaminutavar.Minuta)、小畢赤酵母不發(fā)酵型變種(Pichiaminutavar.Nonfermentans)、挪威畢赤酵母(Pichianorvegensis)、奧默畢赤酵母(Pichiaohmeri)、巴斯德畢赤酵母(Pichiapastoris)、Pichiaphilodendri、Pichiapini、多形畢赤酵母(Pichiapolymorpha)、Pichiaquercuum、Pichiarhodanensis、Pichiasargentensis、干畢$__(Pichiastipitis)、Pichiastrasburgensis、亞月莫畢赤(Pichiasubpelliculosa)、Pichiatoletana、Piehiatrehalophila、葡萄酒畢赤酵母(Pichiavini)、木糖畢赤酵母(Pichiaxylosa)、酸酒酵母(Saccharomycesaceti)、拜氏酵母(Saccharomycesbailii)、貝酵母(Saccharomycesbayanus)、二抱酵母(Saccharomycesbisporus)、好望角酵母(Saccharomycescapensis)、卡爾酵母(Saccharomycescarlsbergensis)、酉良酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、酉良酒酵母捕圓變禾中(Saccharomycescerevisiaevar.ellipsoideus)、薛瓦酵母(Saccharomyceschevalieri)、德布爾酵母(Saccharomycesdelbrueckii)、糖化酵母(Saccharomycesdiastaticus)、果蟲黽酵母(Saccharomycesdrosophilarum)、線蟲酵母(Saccharomyceselegans)、捕圓酵母(Saccharomycesellipsoideus)、發(fā)酵酵母(Saccharomycesfermentati)、隱質(zhì)酵母(Saccharomycesflorentinus)、脆壁酵母(Saccharomycesfragilis)、異質(zhì)酵母(Saccharomycesheterogenicus)、SaccharomyceshienipiensiSaccharomycesinusitatus、意大利酵母(Saccharomycesitalicus)、克魯弗酵母(Saccharomyceskluyveri)、克魯其Jf酵母(Saccharomyceskrusei)、乳酸酵母(Saccharomyceslactis)、馬克思酵母(Saccharomycesmarxianus)、小捕圓酵母(Saccharomycesmicroellipsoides)、Saccharomycesmontanus、Saccharomycesnorbensis、Saccharomycesoleaceus、奇異酵母(Saccharomycesparadoxus)、巴斯德酵母(Saccharomycespastorianus)、Saccharomycespretoriensis、攻瑰酵母(Saccharomycesrosei)、魯酵母(Saccharomycesrouxii)λ葡萄汁酵母(Saccharomycesuvarum)、路德類酵母(Saccharomycodesludwigii)、解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytics)、裂殖酵母科，例如裂殖酵母屬(Schizosaccharomyces),如曰本裂殖酵母裂殖變禾中(Schizosaccharomycesjaponicusvar.Japonicus)Λ0(Schizosaccharomycesjaponicusvar.Versatilis)、解蘋果酸裂殖酵母(Schizosaccharomycesmalidevorms)、八孢裂殖酵母(Schizosaccharomycesoctosporus)、粟酒裂殖酵母角軍蘋果酸變禾中(Schizosaccharomycespombevar·Malidevorans)、粟酒裂殖酵母粟酒變種(Schizosaccharomycespombevar.Pombe)，破囊壺菌禾斗，例如Althornia、Aplanochytrium、Japonochytrium、裂殖壺菌(Schizochytrium)、破囊壺菌屬(Thraustochytrium)，例如，裂壺藻(Schizochytriumaggregatum)、Schizochytriumlimacinum、SchizochytriummangroveiΛSchizochytriumminutum、八抱裂殖壺菌(Schizochytriumoctosporum)、Thraustochytriumaggregatum、Thraustochytriumamoeboideum、Thraustochytriumantacticum、ThraustochytriumarudimentaleλThraustochytriumaureum、Thraustochytriumbenthicola、Thraustochytriumglobosum、Thraustochytriumindicum、Thraustochytriumkerguelense、Thraustochytriumkinnei、Thraustochytriummotivum、Thraustochytriummultirudimentale、Thraustochytriumpachydermum、Thraustochytriumproliferum、Thraustochytriumroseum、Thraustochytriumrossii、Thraustochytriumstriatum或Thraustochytriumvisurgense。作為微生物同樣優(yōu)選的是選自芽孢桿菌科、腸桿菌科或根瘤菌科的細菌。特別優(yōu)選的提及選自以下的細菌芽孢桿菌科，例如芽孢桿菌屬，如屬和種酸熱芽孢桿菌(Bacillusacidocaldarius)、酸土芽孢桿菌(Bacillusacidoterrestris)、嗜堿芽孢桿菌(Bacillusalcalophilus)、角軍淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)、角軍淀粉類芽孢桿菌(Bacillusamylolyticus)、短芽孢桿菌(Bacillusbrevis)、蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus)、環(huán)狀芽孢桿菌(Bacilluscirculans)、凝固芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)、梭形氣芽孢桿菌(Bacillussphaericussubsp.Fusiformis)、嗜半乳糖芽孢桿菌(Bacillusgalactophilus)、球孢芽孢桿菌(Bacillusglobisporus)、球孢芽孢桿菌海羊亞禾中(Bacillusglobisporussubsp.Marinus)、口譽鹽芽子包桿菌(Bacillushalophilus)、緩病芽孢桿菌(Bacilluslentimorbus)、遲緩芽孢桿菌(Bacilluslentus)、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽抱桿菌(Bacillusmegaterium)、多粘芽抱桿菌(Bacilluspolymyxa)、冷角軍糖芽孢桿菌(Bacilluspsychrosaccharolyticus)、短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus)、球形芽孢桿菌(Bacillussphaericus)、枯草芽孢桿菌Spizizenii亞禾中(Bacillussubtilissubsp.Spizizenii)、枯草芽孢桿菌枯草亞禾中(Bacillussubtilissubsp.Subtilis)或蘇云金芽包桿菌(Bacillusthuringiensis)；腸桿菌科，例如檸檬酸桿菌屬(CitrcAacter)、愛德華氏菌屬(Edwardsiella)、腸桿菌屬(Enterobacter)、歐文氏菌屬(Erwinia)、埃希氏菌屬(Escherichia)、克雷伯氏菌屬(klebsiella)、沙門氏菌屬(Salmonella)或沙雷氏菌屬Gerratia)，如屬和種非丙二酸檸檬酸桿菌(Citrobacteramalonaticus)、差異檸檬酸桿菌(Citrobacterdiversus)、弗勞地梓様酸桿菌(Citrobacterfreundii)>Citrobactergenomospecies>Citrobactergillenii、中間檸檬酸桿菌(Citrobacterintermedium)、柯氏檸檬酸桿|if(Citrobacterkoseri)>Citrobactermurliniae>^f^@t|f|if(Citrobactersp.)^1科愛德華氏菌(Edwardsiellahoshinae)、餘魚愛德華氏菌(Edwardsiellaictaluri)、遲鈍愛德華氏菌(Edwardsiellatarda)、榿木歐文氏菌(Erwiniaalni)、解淀粉歐文氏菌(Erwiniaamylovora)、Erwiniaananatis、蟲牙蟲歐文氏菌(Erwiniaaphidicola)、Erwiniabillingiae、滅仙人掌歐文氏菌(Erwiniacacticida)、生癌歐文氏菌(Erwiniacancerogena)、大仙人掌歐文氏菌(Erwiniacarnegieana)、胡蘿卜軟腐歐文氏菌黑冑1禾中(Erwiniacarotovorasubsp.Atroseptica)>13卜@冑l^ilftM^lliii禾中(Erwiniacarotovorasubsp.Betavasculorum)、古月胃卜@冑H^t氏禾中(Erwiniacarotovorasubsp.Odorifera)、胡蘿卜軟腐歐文氏菌山葵亞種(Erwiniacarotovorasubsp.ffasabiae)、菊歐文氏菌(Erwiniachrysanthemi)、構(gòu)蘭歐文氏菌(Erwiniacypripedii)、溶角軍歐文氏菌(Erwiniadissolvens)、草生歐文氏菌(Erwiniaherbicola)、食毛歐文氏菌(Erwiniamallotivora)、Erwiniamilletiae、流黑歐文氏菌(Erwinianigrifluens)、超壓歐文氏菌(Erwinianimipressuralis)、桃紅色歐文氏菌(Erwiniapersicina)、番石槽歐文氏菌(Erwiniapsidii)、Erwiniapyrifoliae、櫟歐文氏菌(Erwiniaquercina)、大黃冠腐病歐文氏菌(Erwiniarhapontici)、生紅歐文氏菌(Erwiniarubrifaciens)、柳歐文氏菌(Erwiniasalicis)、斯氏歐文氏菌(Erwiniastewartii)、嗜管歐文嗜菌(Erwiniatracheiphila)、噬夏孢歐文氏菌(Erwiniauredovora)^^1'!(Escherichiaadecarboxylata)^Escherichiaanindolica>CN102066564A說明書18/47頁tfeiHiSlii(Escherichiaaurescens)(Escherichiablattae)|if(Escherichiacoli)、大腸埃希氏菌共生變禾中(Escherichiacolivar.Communior)>大腸可變埃希氏菌(Escherichiacoli-mutabile)、弗格森埃希氏菌(Escherichiafergusonii)、赫曼氏埃希氏菌(Escherichiahermannii)、埃希氏菌(Escherichiasp.)、傷口埃希氏菌(Escherichiavulneris)、產(chǎn)氣克雷伯氏菌(Klebsiellaaerogenes)、愛氏克雷伯氏菌大西洋亞種(Klebsiellaedwardsiisubsp.Atlantae)、解鳥氨酸克雷伯氏菌(Klebsiellaornithinolytica)、產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)、植生克雷伯氏菌(Klebsiellaplanticola)、月市炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)、月市炎克雷伯氏菌月市炎亞禾中(Klebsiellapneumoniaesubsp.Pneumoniae)、克雷伯氏菌(Klebsiellasp.)、土生克雷伯氏菌(Klebsiellaterrigena)、特氏克雷伯氏菌(Klebsiellatrevisanii)、阿博尼沙門氏菌(Salmonellaabony)、亞利桑那沙門菌(Salmonellaarizonae)、乍得沙門氏菌(Salmonellabongori)、豬霍亂沙門氏菌亞利桑那亞種(Salmonellacholeraesuissubsp.Arizonae)、豬霍舌L沙門氏菌乍得亞禾中(Salmonellacholeraesuissubsp.Bongori)、豬霍亂沙門氏菌豬霍亂亞種(Salmonellacholeraesuissubsp.Cholereasuis)、豬霍亂沙門氏菌雙亞利桑那亞種(Salmonellacholeraesuissubsp.Diarizonae)、豬霍亂沙門氏菌豪頓亞種(Salmonellacholeraesuissubsp.Houtenae)、豬霍亂沙門氏菌印度亞種(Salmonellacholeraesuissubsp.Indica)、豬霍舌L沙門氏菌薩拉姆亞種(Salmonellacholeraesuissubsp.Salamae)、達累斯沙門氏菌(Salmonelladaressalaam)、腸沙門氏菌豪頓亞種(Salmonellaentericasubsp.Houtenae)、腸沙門氏菌薩拉姆亞種(Salmonellaentericasubsp.Salamae)、腸炎沙門菌(Salmonellaenteritidis)、雞沙門氏菌(Salmonellagallinarum)、海德爾堡沙門氏菌(Salmonellaheidelberg)、巴拿馬沙門氏菌(Salmonellapanama)、桑夫頓堡沙門氏菌(Salmonellasenftenberg)、H貞^Πft胃(Salmonellatyphimurium)>Bf^WK^(Serratiaentomophila)、無花果沙雷氏菌(Serratiaficaria)、居泉沙雷氏菌(Serratiafonticola)、格氏沙W(Serratiagrimesii)>"Mi^fPm^M(Serratialiquefaciens)>feM^IIK|if(Serratiamarcescens)>Ii1JM^W1lif^WMfΨ(Serratiamarcescenssubsp.Marcescens),fPm^M(Serratiamarinorubra)、^(_^少Il氏lif(Serratiaodorifera)、普城沙雷氏菌(Serratiaplymouthensis)、普利茅斯沙雷氏菌(Serratiaplymuthica)、變形斑病沙雷氏菌(Serratiaproteamaculans)、變形斑病沙雷氏菌食酉昆IE禾中(SerratiaproteamacuIanssubsp.quinovora)、Serratiaquinivorans5深紅沙雷氏菌(Serratiarubidaea)；根瘤菌科，例如農(nóng)桿菌屬(Agrobacterium)、嗜碳菌屬(Carbophilus)、螯合桿菌屬(Chelatobacter)、劍菌屬(Ensifer)、根瘤菌屬(lihizobium)、中華根瘤菌屬(Sinorhizobium)，如屬和種大西洋土壤桿菌(Agrobacteriumatlanticum)、繡色土壤桿菌(Agrobacteriumferrugineum)、食明膠土壤桿菌(Agrobacteriumgelatinovorum)、Agrobacteriumlarrymoorei>梅氏土壤桿菌(Agrobacteriummeteori)、放身寸形土壤桿菌(Agrobacteriumradiobacter)、發(fā)根土壤桿菌(Agrobacteriumrhizogenes)、懸鉤子癌月中病土壤桿菌(Agrobacteriumrubi)、星斑土壤桿菌(Agrobacteriumstellulatum)、根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)、葡萄土壤桿菌(Agrobacteriumvitis)、碳酸口譽碳菌(Carbophiluscarboxidus)>M1合If菌(Chelatobacterheintzii)、米占著(Ensiferadhaerens)λW^'J^(Ensiferarboris)Λ費氏菌(Ensiferfredii)、Ensiferkostiensis、Ensiferkummerowiae、Ensifermedicae、苜猜劍菌(Ensifermeliloti)、薩赫勒劍菌(Ensifersaheli)、適宜劍菌(Ensiferterangae)、新疆劍菌(Ensiferxinjiangensis)、鷹嘴豆根瘤菌(Rhizobiumciceri)、菜豆根瘤菌(Rhizobiumetli)、費氏根瘤菌(Rhizobiumfredii)、山羊豆根瘤菌(Rhizobiumgalegae)、高盧根瘤菌(RhizobiumgalIicum)、Rhizobiumgiardinii、Rhizobiumhainanense、華M豐艮瘤菌(Rhizobiumhuakuii)、Rhizobiumhuautlense、Rhizobiumindigoferae、日本根瘤菌(Rhizobiumjaponicum)、豌豆根瘤菌(Rhizobiumleguminosarum)、Rhizobiumloessense、百脈根根瘤菌(Rhizobiumloti)、習(xí)習(xí)扇豆根瘤菌(Rhizobiumlupini)、Rhizobiummediterraneum、苜猜根瘤菌(Rhizobiummeliloti)、Rhizobiummongolense、菜豆根瘤菌(Rhizobiumphaseoli)、方文身寸根瘤菌(Rhizobiumradiobacter)、發(fā)豐艮豐艮瘤菌(Rhizobiumrhizogenes)、懸鉤子癌月中病豐艮瘤菌(Rhizobiumrubi)、Rhizobiumsullae、天ill豐艮瘤菌(Rhizobiumtianshanense)、三卩十草根瘤菌(Rhizobiumtrifolii)、熱帶根瘤菌(Rhizobiumtropici)、Rhizobiumundicola、葡萄根瘤菌(Rhizobiumvitis)、粘著中華根瘤菌(Sinorhizobiumadhaerens)、棲樹中華根瘤菌(Sinorhizobiumarboris)、費氏中華根瘤菌(Sinorhizobiumfredii)、Sinorhizobiumkostiense、Sinorhizobiumkummerowiae、Sinorhizobiummedicae、首猜中華根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti)、Sinorhizobiummorelense、薩赫勒中華根瘤菌(Sinorhizobiumsaheli)或新|量中華豐艮瘤菌(Sinorhizobinmxinjiangense)0其它可使用宿主細胞詳述在Goeddel，GeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology185，AcademicPress,SanDiego,CA(1990)0可使用的表達菌株，例如具有較低蛋白酶活性的表達菌株，描述在Gottesman，S.，GeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology185，AcademicPress，SanDiego，California(1990)119-128。這包括源自實際的轉(zhuǎn)基因植物的，和/或可用于產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植物的植物細胞和一些組織、所有它們表型形式的器官和部分，如花藥、纖維、根毛、莖、胚、愈傷組織、子葉、葉柄、收獲的材料、植物組織、繁殖組織和細胞培養(yǎng)物，通過現(xiàn)有領(lǐng)域已知的轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染方法，可以將多核苷酸或載體導(dǎo)入到上述宿主細胞中。技術(shù)人員還已知培養(yǎng)宿主細胞的條件和培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明的宿主細胞優(yōu)選的還包括至少一種其它的酶，所述酶參與脂類或脂肪酸的生物合成。優(yōu)選的酶已經(jīng)在本說明書別處提及。酶可以以內(nèi)源形式存在于宿主細胞中，即，宿主細胞已天然的表達了編碼對應(yīng)酶的基因。備選的，還可以將編碼酶的異源多核苷酸導(dǎo)入到宿主細胞中。用于表達異源多核苷酸的合適的方法和手段是現(xiàn)有領(lǐng)域已知的，并在本文中結(jié)合本發(fā)明的多核苷酸、載體和宿主細胞來描述。本發(fā)明還涉及產(chǎn)生具有去飽和酶活性的多肽的方法，包括步驟(a)在宿主細胞中表達如上述定義的本發(fā)明的多核苷酸；和(b)從宿主細胞中獲得由所述多核苷酸編碼的多肽。在本上下文中，可以通過所有現(xiàn)有的蛋白質(zhì)純化方法獲得或分離多肽。方法包括例如親和層析、分子篩層析、高壓液相色譜或蛋白質(zhì)沉淀，如果合適的話使用特異性抗體。雖然是優(yōu)選的，但是方法不是必須提供純的多肽制品。22因此，本發(fā)明還涉及由根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸編碼的，或由上述根據(jù)本發(fā)明的方法可獲得的多肽。術(shù)語“多肽”指基本純的多肽，也指還包含其他組分或雜質(zhì)的多肽制品。該術(shù)語還用于融合蛋白和蛋白聚集物，其包含根據(jù)本發(fā)明的多肽和額外的其它組分。該術(shù)語還指化學(xué)修飾的多肽。在本上下文中，化學(xué)修飾包括人工修飾或天然存在的修飾，例如翻譯后修飾，如磷酸化、十四烷基化、糖基化等。術(shù)語多肽、肽和蛋白質(zhì)是可互換使用的，并相應(yīng)的用于說明書和現(xiàn)有技術(shù)。根據(jù)本發(fā)明的多肽具有上述生物學(xué)活性，即去飽和酶活性，并可以影響多不飽和脂肪酸(PUFA)，優(yōu)選的長鏈PUFA(LCPUFA)的生物合成，如本文所述。本發(fā)明還包括特異性識別根據(jù)本發(fā)明的多肽的抗體?？梢酝ㄟ^已知的方法制備抗根據(jù)本發(fā)明的多肽的抗體，其中使用純化的多肽或其具有合適表位的片段作為抗原?；诒疚奶峁┑母鶕?jù)本發(fā)明的多肽的氨基酸序列，通過確定抗原性的已知算法，可以確定合適的表位。然后，可以合成或通過重組技術(shù)獲得相關(guān)的多肽或片段。利用已知的方法，在免疫動物，優(yōu)選的哺乳動物，例如兔、大鼠或小鼠后，可以從血清中獲得抗體。備選的，可以用已知的方法提供單克隆抗體或抗體片段，參見例如，HarlowfPLane"Antibodies,ALaboratoryManual“,CSHPress,ColdSpringHarbor,1988,或Kohler和Milstein，Nature256(1975)，495，禾口Galfre，Meth.Enzymo1.73(1981)，3?？贵w優(yōu)選的采用單克隆或多克隆抗體、單鏈抗體或嵌合抗體，以及上述抗體的片段的形式，例如Fab、Fv或scFv。在本發(fā)明含義范圍內(nèi)的其它抗體是雙特異性抗體、合成抗體或其化學(xué)修飾的衍生物。根據(jù)本發(fā)明的抗體特異性識別根據(jù)本發(fā)明的多肽，S卩，不與其它蛋白質(zhì)顯著的交叉反應(yīng)。這可以通過現(xiàn)有
技術(shù)領(lǐng)域：
已知的方法測定。例如，抗體可以用于檢測反應(yīng)、免疫沉淀、免疫組織化學(xué)或蛋白質(zhì)純化(例如親和層析)的目的。本發(fā)明還涉及轉(zhuǎn)基因的非人生物，所述非人生物包含本發(fā)明的多核苷酸、載體或宿主細胞。轉(zhuǎn)基因的非人生物優(yōu)選的采用動物、植物或單細胞微生物的形式。術(shù)語“轉(zhuǎn)基因”理解為生物體內(nèi)導(dǎo)入了異源的多核苷酸，即沒有天然存在于相應(yīng)生物體中的多核苷酸。這可以通過多核苷酸的隨機插入，或通過同源重組來實現(xiàn)。天然的，還可以導(dǎo)入根據(jù)本發(fā)明的載體代替多核苷酸。出于隨機插入或同源重組的目的，導(dǎo)入多核苷酸或載體的方法是現(xiàn)有
技術(shù)領(lǐng)域：
已知的，也更詳細的描述在下文中。也可以將包含多核苷酸或載體的宿主細胞導(dǎo)入到生物體內(nèi)，從而產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因生物。在此情況下，此類生物采用嵌合生物的形式，其中僅源自導(dǎo)入細胞的那些細胞是轉(zhuǎn)基因的，即，包含異源多核苷酸。轉(zhuǎn)基因非人生物優(yōu)選的是產(chǎn)油生物，意指用于生產(chǎn)油的生物例如真菌如根瘤菌或破囊壺菌，藻類如裸藻屬、腎藻屬(^phroselmis)、Pseudoscourfielda,青M求(Prasinococcus)>Scherffelia>扁(Tetraselmis)>Mantoniella>蟲毛求(Ostreococcus)、隱甲藻、褐指藻，或硅藻類例如腐霉屬或疫霉屬，或者植物?？梢允褂玫霓D(zhuǎn)基因植物原則上是所有的植物，即雙子葉和單子葉植物。它們優(yōu)選的采用包含大量的脂類化合物的油料作物植物的形式，例如花生、油菜、卡諾拉油菜、向日葵、紅花(Carthamustinctoria)、罌粟、芥菜、大麻、蓖麻、橄欖、芝麻、金盞花、石榴、月見草、毛蕊花、大薊、野玫瑰、榛子、杏仁、澳洲堅果、鱷梨、月桂、西葫蘆/南瓜、亞麻子、大豆、阿月混子、琉璃苣、樹(油棕櫚樹、椰子樹或胡桃樹)或作物例如玉米、小麥、黑麥、燕麥、小黑麥、稻、大麥、棉、木薯、胡椒、萬壽菊、茄科植物例如馬鈴薯、煙草、茄子和番茄、蠶豆屬的種、豌豆、紫花苜蓿或灌木(咖啡、可可、茶)、柳屬的種和多年生牧草及飼料作物。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的植物是油料作物植物如花生、油菜、蕓苔、向日葵、紅花、罌粟、芥菜、大麻、蓖麻、橄欖、金盞花、石榴、月見草、西葫蘆/南瓜、亞麻子、大豆、琉璃苣、樹(油棕櫚樹、可可樹)。尤其優(yōu)選的植物是含有高C18:2和/或C18:3脂肪酸的植物，如向日葵、紅花、煙草、毛蕊花、芝麻、棉、西葫蘆/南瓜、罌粟、月見草、胡1、亞麻子、大麻、大薊或者紅花。非常尤其優(yōu)選的植物是例如紅花、向日葵、罌粟、月見草、胡桃、亞麻子、或大麻。然而，原則上，所有能夠合成脂肪酸的植物都是合適的，例如所有的雙子葉或單子葉植物、藻類或苔蘚。有利的植物選自以下植物科:Adelotheciaceae、漆樹科(Anacardiaceae)、菊禾斗(Asteraceae)、禾斗(Apiaceae)、#禾斗(Betulaceae)、IH禾斗(Boraginaceae)、十字花禾斗(Brassicaceae)、鳳梨禾斗(Bromeliaceae)、番木瓜禾斗(Caricaceae)、大麻禾斗(Cannabaceae)、M$禾4"(Convolvulaceae)、_禾斗(Chenopodiaceae)>Crypthecodiniaceae>葫蘆科(Cucurbitaceae)、牛毛蘚科(Ditrichaceae)、胡頹子科(Elaeagnaceae)、杜鵑花科(Ericaceae)、大卓戈禾斗(Euphorbiaceae)、豆禾斗(Fabaceae)、姚牛兒苗禾斗(Geraniaceae)、禾本禾斗(Gramineae)、核桃禾斗(Juglandaceae)、樟禾斗(Lauraceae)、豆禾斗(Leguminosae)、亞麻科(Linaceae)、或者綠枝藻綱(Prasinophyceae)或蔬菜植物或觀賞植物例如萬壽菊。特別優(yōu)選的提及的實例是選自以下的植物Adelotheciaceae，例如劍葉蘚屬，如屬和種展葉劍葉蘚(Physcomitrellapatens)；漆樹科如黃連木屬(Pistacia)、芒果屬(Mangifera)、腰果屬(Anacardium)例如阿月混子(Pistaciavera[阿月混子實])、芒果(Mangiferindica[芒果])或腰果(Anacardiumoccidentale[腰果])的屬和種、菊科如金蓋花屬(Calendula)、紅藍花屬(Carthamus)、矢車菊屬(Centaurea)、菊苣屬(Cichorium)、菜薊屬(Cynara)、向日葵屬(Helianthus)、萵苣屬(Lactuca)、Locusta、萬壽菊屬、纈草屬(Valeriana)例如金盞花(Calendulaofficinalis[普通金盞花])、紅花(Carthamustinctorius[紅花])、矢車菊(Centaureacyanus[矢車菊])、菊苣(Cichoriumintybus[菊苣])、洋薊(Cynarascolymus[卓月鮮薊])、向日葵(Helianthusannus[向日^])(Lactucasativa)^IH(Lactucacrispa)(Lactucaesculenta)(LactucascariolaL.ssp.Sativa)、LactucascariolaL.var.integr&t&、LactucascariolaL.var.integrifoli^、^^romanaMft(Lactucasativasubsp.Romana)、Locustacommunis、萵苣繳草(Valerianalocusta[沙拉蔬菜])、香葉萬壽菊(Tageteslucida)、萬壽菊(Tageteserecta)或細葉萬壽菊(Tagetestenuifolia)[非洲或法國金盞花]的屬和種、傘形科如胡蘿卜屬(Daucus)例如胡蘿卜(Daucuscarota[胡蘿卜])的屬和種、樺木科如榛屬(Corylus)例如歐洲榛(Corylusavellma)或榛子(Coryluscolurna[榛子])的屬和種、紫草科如琉璃苣、例如，如下的屬和種=Boragooffcinalis[琉璃苣]、十字花科如蕓苔屬(Brassica)、亞麻薺屬(Camelina)、Melmosinapis、白芥屬(Sinapis)、擬南芥屬(Arabadopsis)例如歐洲油菜(Brassicanapus)、蕪青屬某些種(Brassicarapassp.[油菜])、野生歐白芥(Sinapisarvensis)、芥菜(Brassicajuncea)、Brassicajunceavar.juncea、@P十5(Brassicajunceavar.crispifolia)、力口十f胃(Brassicajunceavar.foliosa)ΛM^f(Brassicanigra)ΛBrassicasinapioides、亞麻莽(Camelinasativa)、芥菜(Melanosinapiscommunis[芥菜])、甘藍(Brassicaoleracea[飼用甜菜])或擬南芥(Arabidopsisthalima)的屬和種、鳳梨科如鳳梨屬(Anana)、Bromelia(菠蘿)例如菠蘿(Ananacomosus)、Ananasananas或Bromeliacomosa[菠蘿]的屬和種、番木瓜科如番木瓜屬(Carica)例如番木瓜(Caricapapaya[番木瓜])的屬和種、大麻科如大麻屬(Cannabis)例如大麻(Cannabissativa[大麻])的屬和種、旋花科如番薯屬(Ipomea)、旋花屬(Convolvulus)例如甘薯(Ipomoeabatatus)、提(Ipomoeapandurata)ΛConvolvulusbatatas、Convolvulustiliaceus、IpomoeafastigiataλIpomoeatiliacea、三裂葉暮(Ipomoeatriloba)或Convolvuluspmduratus[甜薯、番薯]的屬和種、藜科如甜菜屬(Betavulgaris)例如甜菜(Betavulgaris)、Betavulgarisvar.已ltissima、^"^^(Betavulgarisvar.vulgaris)ΛBetamaritime、舌甘禾中Betavulgarisvar.perennis、Betavulgarisvar.Conditiva或Betavulgarisvar.esculenta[甜菜]的屬和種、隱甲藻科如隱甲藻屬例如寇氏隱甲藻(Cryptecodiniumcohnii)的屬和種、葫蘆科如南瓜屬(Cucurbita)例如輿瓜(Cucurbitamaxima)、灰子南瓜(Cucurbitamixta)、西葫戸(Cucurbitapepo)或南瓜(Cucurbitamoschata[西葫蘆/南瓜])的屬和種，橋彎藻科(Cymbellaceae)，如雙眉藻屬(Amphora)，橋彎藻屬(Cymbella)，Okedenia，褐指藻屬(Phaeodactylum)，Reimeria,M如，屬和種三角褐指藻(Phaeodactylumtricornutum)，牛毛蘚科(Ditrichaceae)，如牛毛M禾斗(Ditrichaceae),M^MM(Astomiopsis),^ImMM(Ceratodon),Chrysoblastella,牛毛蘚屬(Ditrichum)，對葉蘚屬(Distichium)，Eccremidium,Lophidion,Philibertiella，叢毛蘚屬(Pleuridium)，石縫蘚屬(Saelania)，毛齒蘚屬(Trichodon)，Skottsbergia,例如屬禾口禾中Ceratodonantarcticus，Ceratodoncolumbiae,CeratodonheterophylIus,Ceratodonpurpurascens,角齒薛臺灣變禾中(Ceratodonpurpureus),Ceratodonpurpureusssp.convolutus,Ceratodonpurpureusssp.stenocarpus,角齒薛圓卩十變禾中(Ceratodonpurpureusvar.Rotundifolius)，Ceratodonratodon，撫蒴角齒蘚(Ceratodonstenocarpus)，Chrysoblastellachilensis,Ditrichumambiguum，Ditrichumbrevisetum，當(dāng)皮波牛毛薛(Ditrichumcrispatissimum)，卷葉牛毛蘚(Ditrichumdifficile)，Ditrichumfalcifolium,扭卩十牛毛薛(Ditrichumfiexicaule),Ditrichumgiganteum,牛毛薛(Ditrichumheteromallum)，Ditrichumlineare，Ditrichummontanum，Ditrichummontanum,黃牛毛薛(Ditrichumpallidum),Ditrichumpunctulatum,細卩十牛毛薛(Ditrichumpusillum)，細葉牛毛蘚扭葉變種(Ditrichumpusillumvar.Tortile),Ditrichumrhynchostegium,Ditrichumschimperi，Ditrichumtortile，對葉蘚(Distichiumcapillaceum)，小對葉蘚(Distichiumhagenii)，斜蒴對葉蘚(Distichiuminclinatum)，Distichiummacounii，Eccremidiumfloridanum，Eccremidiumwhiteleggei，Lophidionstrictus，尖葉叢毛蘚(Pleuridiumacuminatum)，Pleuridiumalternifolium，Pleuridiumholdridgei，Pleuridiummexicanum，Pleuridiumravenelii，叢毛蘚(Pleuridiumsubulatum)，石縫蘚(Saelaniaglaucescens)，Trichodonborealis，毛齒薛(Trichodoncylindricus)或Trichodoncylindricusvar·oblongus、胡頹子科如胡頹子屬(Elaeagnus)例如油橄欖(Oleaeuropaea[橄欖])的屬和種、杜鵑花科如山月桂屬(Kalmia)例如闊葉山月桂(Kalmialatifolia)、狹葉山月桂(Kalmiaangustifolia)、小葉山月桂(Kalmiamicrophylla)、沼澤山月桂(Kalmiapolifolia)、西洋山月桂(Kalmiaoccidentalis)、Cistuschamaerhodendros或山月桂(KalmiaIucida[山月桂])的屬和種、大戟科如木薯屬(Manihot)、Jmipha、麻風(fēng)樹屬(Jatropha)、蓖麻屬(Ricinus)例如木薯(Manihotutilissima)、Janiphamanihot、Jatrophamanihot、ManihotaipiK舌甘木薯(Manihotdulcis)、Manihotmanihot、Manihotmelanobasis、木薯(Manihotesculenta[木薯])或蓖麻(Ricinuscommunis[蓖麻])的屬禾口種、豆科如碗豆屬(Pisum)、合歡屬(Albizia)、Cathormion^Feuillea、Inga、Pithecolobium、金合歡屬(Acacia)、含羞草屬(Mimosa)、Medicajo、大豆屬(Glycine)、扁豆屬(Dolichos)、菜豆屬Phaseolus、大豆屬(Soybean)例如豌豆(Pisumsativum)、飼料豌豆(Pisumarvense)、Pisumhumile[豌豆]、Albiziaberteriana、合歡(Albiziajulibrissin)、闊莢合歡(Albizialebbeck)、Acaciaberteriana、Acacialittoralis、Albiziaberteriana、Albizziaberteriana、Cathormionberteriana、Feuilleaberteriana、Ingafragrans、Pithecellobiumberterianum、Pithecellobiumfragrans、PithecolobiumbcrterianumλPseudalbizziaberteriana、Acaciajulibrissin、AcaciaηemuλAlbizianemu、Feuilleeajulibrissin、Mimosajulibrissin、Mimosaspeciosa、Sericanrdajulibrissin、闊莢金合歡(Acacialebbeck)、Acaciamacrophylla、大葉合歡(Albizialebbeck)、Feuilleealebbeck、大葉含羞草(Mimosalebbeck)、Mimosaspeciosa、紫苜猜(Medicagosativa)、里予苜猜(Medicagofalcata)、雜交苜猜(Medicagovaria)[紫花苜蓿]、大豆(Glycinemax)、鐮扁豆(Dolichossoja)、寬葉蔓豆(Glycinegracilis)、大顯(Glycinehispida)、大菜顯(Phaseolusmax)、Sojahispida或Sojamax[大豆]的屬禾口禾中、萌戸薛禾斗(Funariaceae)，如Aphanorrhegma,Entosthodon,萌戸薛屬(Funaria)，劍葉薛屬(Physcomitrella)’立碗蘚屬(Physcomitrium)，例如屬禾口種Aphanorrhegmaserratum，Entosthodonattenuatus，Entosthodonbolanderi，Entosthodonbonplandii，Entosthodoncalifornicus，Entosthodondrummondii，Entosthodonjamesonii，Entosthodonleibergii,Entosthodonneoscoticus，Entosthodonrubrisetus，Entosthodonspathulifolius，Entosthodontucsoni，F(xiàn)unariaamericana，F(xiàn)unariabolanderi，齒葉葫戸蘚(Funariacalcarea)，F(xiàn)unariacalifornica，F(xiàn)unariacalvescens,Funariaconvoluta,Funariaflavicans,Funariagroutiana,蘚(Funariahygrometrica)，F(xiàn)unariahygrometricavar.arctica，葫戸蘚暖地變禾中(Funariahygrometricavar.Calvescens)，F(xiàn)unariahygrometricavar.convoluta,Funariahygrometricavar.muralis，F(xiàn)unariahygrometricavar.utahensis,小口葫戸薛(Funariamicrostoma),Funariamicrostomavar.obtusifolia，剌邊葫戸蘚(Funariamuhlenbergii)，F(xiàn)unariaorcuttii，F(xiàn)unariaplano-convexa,Funariapolaris，F(xiàn)unariaravenelii,Funariarubriseta,Funariaserrata,Funariasonorae,Funariasublimbatus，F(xiàn)unariatucsoni,Physcomitrellacalifornica，展葉劍葉蘚(Physcomitrellapatens)，Physcomitrellareaderi，Physcomitriumaustrale，Physcomitriumcalifornicum，Physcomitriumcollenchymatum,Physcomitriumcoloradense,Physcomitriumcupuliferum，Physcomitriumdrummondii，Physcomitriumeurystomum,Physcomitriumflexifolium,Physcomitriumhookeri,Physcomitriumhookerivar.serratum,Physcomitriumimmersum,Physcomitriumkellermanii,Physcomitriummegalocarpum,Physcomitriumpyriforme,Physcomitriumpyriformevar.serratum,Physcomitriumrufipes,Physcomitriumsandbergii,Physcomitriumsubsphaericum,Physcomitriumwashingtoniense,!牛JL苗禾斗(Geraniaceae)如天竺奏屬(Pelargonium)、挪子屬(Cocos)、Oleum例如挪子(Cocosnucifera)、茶麋子天竺葵(Pelargoniumgrossularioides)或椰子油(Oleumcocois[椰子])的屬和種、禾本科如甘蔗屬(Saccharum)例如甘蔗(Saccharumofficinarum)的屬和種、胡桃科如胡桃屬(Juglans)、Wallia例如胡桃(Juglansregia)、Juglansailanthifolia>山核杉匕(Juglanssieboldiana)、灰核杉匕(Juglanscinerea)>Walliacinerea、Juglansbixbyi、加州黑核桃(Juglanscalifornica)、印度黑核桃(Juglanshindsii)、Juglansintermedia、Juglansjamaicensis、大核桃(Juglansmajor)、Juglansmicrocarpa、黑核桃(Juglansnigra)或胡桃(ffallianigra)[胡桃]的屬和種、樟科如鱷梨屬(Persea)、月桂屬(Laurus)例如月桂(Laurusnobilis[bay])、鱷梨(Perseaamericana)(Perseagratissima)5Perseapersea[avocado]I^JM禾口禾中、豆科如落花生屬(Arachis)例如落花生(Arachishypogaea[花生])的屬和種、亞麻科如亞麻屬、Adenolinum屬例如亞麻(Linumusitatissimum)、Linumhumile、奧地禾Ij亞麻(Linumaustriacum)、Linumbienne、窄葉亞麻(Linumangustifolium)、寫亞麻(Linumcatharticum)、金黃亞麻(Linumflavum)、大花亞麻(Linumgrandiflorum)>Adenolinumgrandiflorum、劉易其Jf亞麻(Linumlewisii)、那旁亞麻(Linumnarbonense)、宿根亞麻(Linumperenne)、宿根亞麻劉易斯變禾中(Linumperennevar.lewisii)、Linumpratense或亞麻子(Linumtrigynum[亞麻子])的屬和種、Lythrarieae如石槽屬(Punica)例如石槽(Punicagranatum[pomegranate])的屬禾口禾中、錦奏禾斗(Malvaceae)如棉屬(Gossypium)例如陸地棉(Gossypiumhirsutum)、樹棉(Gossypiumarboreum)、海島棉(Gossypiumbarbadense)、草棉(Gossypiumherbaceum)或瑟伯棉(Gossypiumthurberi[棉])的屬禾口禾中、地錢禾斗(Marchantiaceae)如地錢屬(Marchantia)例如Marchantiaberteroana>Marchantiafoliacea^^ifeiib,^；(Marchantiamacropora)白勺M禾口禾中、15H禾4"(Musaceae)如芭蕉屬(Musa)例如香蕉(Musanana)、小果野蕉(Musaacuminata)、大蕉(Musaparadisiaca)、胃—屬的禾中(Musaspp.[banana])的屬禾口禾中、才卯口十胃禾斗(Onagraceae)如Camissonia屬、月見草屬(Oenothera)例如月見草(Oenotherabiennis)或夜來香(Camissoniabrevipes[月見草])的屬和種、棕櫚科(Palmae)如油棕屬(Elaeis)，例如以下的屬和種油棕(Elaeisguineensis[油棕櫚])、罌粟科(Papaveraceae)如罌粟屬(Papaver),例如以下的屬禾口種東方Il粟(Papaverorientale)、虞美人(Papaverrhoeas)、長莢罌粟(Papaverdubium[罌粟])、胡麻科(Pedaliaceae)如胡麻屬(Sesamum)例如胡麻(Sesamumindicum[sesame])的屬和種、胡椒科(Piperaceae)如胡椒屬(Piper)、Artanthe、草胡椒屬(Peperomia)、Steffensia例如樹胡椒(Piperaduncum)、Piperamalago、狹卩十古月椒(Piperangustifolium)、大古月椒(Piperauritum)、妻卩十(Piperbetel)、蓽澄茄(Pipercubeba)、蓽菝(Piperlongum)、胡椒(Pipernigrum)、假蓽拔(Piperretrofractum)、Artantheadunca、Artantheelongata、長古月椒27(Peperomiaelongata)、Piperelongatum、Steffensiaelongata[cayennepepper]的屬禾口種、禾本科(Poaceae)如大麥屬(Hordeum)、黑麥屬(kcale)、燕麥屬(Avena)、高梁屬(Sorghum)、須芒草屬(Andropogon)、絨毛草屬(Holcus)、黍?qū)?Pmicum)、稻屬(Oryza)、玉蜀黍?qū)?Zea(maize))、小麥屬(Triticum)例如大麥(Hordeumvulgare)、芒穎大麥草(Hordeumjubatum)、鼠大麥草(Hordeummurinum)、短芒大麥草(Hordeumsecalinum)、栽培二棱大麥(Hordeumdistichon)、Hordeumaegiceras、六列大麥(Hordeumhexastichon)、六棱大麥(Hordeumhexastichum)、不規(guī)貝1J大麥(Hordeumirregulare)、大麥(Hordeumsativum)、短芒大麥草(Hordeumsecalinum)[大麥]、漂麥(Secalecereale[漂麥])、燕麥(Ayenasativa)、里予燕麥(Avenafatua)、地中海紅燕麥(Avenabyzantina)、Avenafatuavar.sativa、雜種燕麥(Avenahybrida[燕麥])、二色高梁(Sorghumbicolor)、石茅高梁(Sorghumhalepense)、舌甘1(Sorghumsaccharatum)λM^(Sorghumvulgare)ΛAndropogondrummondii、二色絨毛草(HoIcusbicolor)、Holcussorghum、Sorghumaethiopicum、Sorghumarundinaceum、Sorghumcaffrorum、垂H高梁草(Sorghumcernuum)、工藝高梁(Sorghumdochna)、Sorghumdrummondii、硬高梁草(Sorghumdurra)、Sorghumguineense、SorghumlanceolatumΛ多脈高梁草(Sorghumnervosum)、舌甘高梁(Sorghumsaccharatum)、Sorghumsubg1abrescens、垂葉高梁草(Sorghumverticilliflorum)、高梁(Sorghumvulgare)、石茅高梁(HoIcushalepensis)、Sorghummiliaceum、■1(Panicummilitaceum[millet])、禾§(Oryzasativa)ΛOryzalatifolia[禾§]、玉米(Zeamays[maize])、小麥(Triticumaestivum)、硬粒小麥(Triticumdurum)、圓柱小麥(Triticumturgidum)、Triticumhybernum、馬卡小麥(Triticummacha)、普通小麥(Triticumsativum或Triticumvulgare)[小麥]、紫球藻禾斗(Porphyridiaceae)如Chroothece屬、Flintiella屬、Petrovanella屬、紫球藻屬(Porphyridium)、Rhodella、Rhodosorus、Vanhoeffenia例如紫球藻(Porphyridiumcruentum)的屬和種、山龍眼科(Proteaceae)如澳洲堅果屬(Macadamia)例如全緣葉澳洲堅果(Macadamiaintergrifolia[macadamia])的屬禾口禾中、蔥綠藻綱(Prasinophyceae)，如腎藻屬(Nephroselmis)，Prasinococcus,Scherffelia,扁藻屬(Tetraselmis)，Mantoniella,Ostreococcus,例如屬禾口禾中綠腎藻(Nephroselmisolivacea),Prasinococcuscapsulatus，Scherifeliadubia，Tetraselmischui，扁藻(Tetraselmissuecica)，Mantoniellasquamata，Ostreococcustauri，菌草禾斗(Rubiaceae)如咖啡屬(Coffea)例如咖啡屬(Coffea)某些種、小果咖啡(Coffeaarabica)、中果咖啡(Coffeacanephora)或大果咖啡(Coffealiberica[coffee])、玄參禾斗(Scrophulariaceae)如毛藍花屬(Verbascum)例如以下的屬和種毛瓣毛蕊花(Verbascumblattaria)、東方毛蕊花(Verbascumchaixii)、密葉毛藍花(Verbascumdensiflorum)、Verbascumlagurus、長葉毛藍花(Verbascumlongifolium)、Verbascumlychnitis、Verbascumnigrum、奧林匹克毛藍花(Verbascumolympicum)、Verbascumphlomoides、紫毛藍花(Verbascumphoenicum)、Verbascumpulverulentum或毛藍花(Verbascumthapsus[mullein])、前禾斗(Solanaceae)如辣椒屬(Capsicum)、煙草屬(Nicotiana)、茄屬(Solanum)、番茄屬(Lycopersicon)例如以T*的iS禾口禾中:(Capsicumannuum)ΛCapsicumannuumvar.glabriusculum、(Capsicumfrutescens[pepper])、紅椒(Capsicumannuum[paprika])、煙草(Nicotianatabacum)、花煙草(Nicotianaalata)、長頭煙草(Nicotianaattenuata)、光煙草(Nicotianaglauca)、NicotianalangsdorffiiΛNicotianaobtusifolia、NicotianaquadrivalvisλNicotianarepanda、黃花煙草(Nicotianarustica)、Nicotianasylvestris[煙草]、馬鈴薯(Solanumtuberosum[番前])、M(Solanummelongena[eggplant])、番Jp(Lycopersiconesculentum)、LycopersiconIycopersicumλ梨形番前(Lycopersiconpyriforme)M(Solanumintegrifolium)或番前(Solanumlycopersicum)[番前]、梧桐禾斗(Sterculiaceae)如可可積屬(Theobroma)例如可可豐對(Theobromacacao[可可])的屬禾口種或山荼科(Theaceae)如山荼屬(Camellia)例如大葉荼(Camelliasinensis[荼])的屬和種?？捎米鬓D(zhuǎn)基因非人生物的多細胞微生物優(yōu)選的是原生生物或硅藻，選自以下科；溝鞭藻科(Dinophyceae)、Turaniellidae或Oxytrichidae，例如屬和種隱甲藻(Crypthecodiniumcohnii)、三角褐指藻(Phaeodactylumtricornutum)、貝臺貝棘尾蟲(Stylonychiamytilus)、Stylonychiapustulata、Stylonychiaputrina、背狀棘尾蟲(Stylonychianotophora)、棘尾蟲屬(Stylonychiasp·)、Colpidiumcampylum或豆形蟲屬(Colpidiumsp)。本發(fā)明還涉及生產(chǎn)具有下文通式I所示結(jié)構(gòu)的物質(zhì)的方法權(quán)利要求1.多核苷酸，其包含選自以下的核酸序列(a)SEQIDNO1顯示的核酸序列；(b)編碼具有SEQIDNO2顯示的氨基酸序列的多肽的核酸序列；(c)與(a)或(b)的核酸序列之一具有至少70%同一性，并且編碼具有去飽和酶活性的多肽的核酸序列；和(d)(a)、(b)或(c)的核酸的片段的核酸序列，其中該片段編碼具有去飽和酶活性的多肽。2.根據(jù)權(quán)利要求1的多核苷酸，其中該多核苷酸由RNA或DNA組成。3.包含根據(jù)權(quán)利要求1或2的多核苷酸的載體。4.根據(jù)權(quán)利要求3的載體，其中所述載體是表達載體。5.根據(jù)權(quán)利要求3或4的載體，其中所述載體包含至少一種其它多核苷酸，所述多核苷酸編碼涉及脂類或脂肪酸生物合成的其它酶。6.宿主細胞，其包含根據(jù)權(quán)利要求1或2的多核苷酸，或包含根據(jù)權(quán)利要求3-5任一項的載體。7.根據(jù)權(quán)利要求6的宿主細胞，其中所述宿主細胞還包含至少一種涉及脂類或脂肪酸生物合成的其它酶。8.根據(jù)權(quán)利要求5的載體或根據(jù)權(quán)利要求7的宿主細胞，其中所述酶選自酰基-CoA脫氫酶、酰基_ACP[=?；d體蛋白]去飽和酶、?；?ACP硫酯酶、脂肪酸?；D(zhuǎn)移酶、?；?CoA溶血磷脂?；D(zhuǎn)移酶、脂肪酸合酶、脂肪酸羥化酶、乙酰輔酶A羧化酶、?；o酶A氧化酶、脂肪酸去飽和酶、脂肪酸炔屬酶、脂加氧酶、三酰基甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氫過氧化物裂合酶、脂肪酸延伸酶、Δ4去飽和酶、Δ5去飽和酶、Δ6去飽和酶、Δ8去飽和酶、Δ9去飽和酶、Δ12去飽和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和Δ9延伸酶。9.產(chǎn)生具有去飽和酶或延伸酶活性的多肽的方法，包括步驟(a)在宿主細胞中表達根據(jù)權(quán)利要求1或2的多核苷酸；和(b)從宿主細胞中獲得由根據(jù)(a)的多核苷酸編碼的多肽。10.多肽，其由根據(jù)權(quán)利要求1或2的多核苷酸編碼或通過權(quán)利要求9的方法可獲得。11.特異性識別根據(jù)權(quán)利要求10的多肽的抗體。12.轉(zhuǎn)基因非人生物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1或2的多核苷酸、根據(jù)權(quán)利要求3-5任一項的載體或根據(jù)權(quán)利要求8的宿主細胞。13.根據(jù)權(quán)利要求12的轉(zhuǎn)基因非人生物，其中所述生物是動物、植物或多細胞微生物。14.產(chǎn)生具有下文通式I所示結(jié)構(gòu)的物質(zhì)的方法15.用于生產(chǎn)油、脂類或脂肪酸組合物的方法，包括根據(jù)權(quán)利要求14的方法的步驟，和將所述物質(zhì)配制成油、脂類或脂肪酸組合物的其它步驟。16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中將所述油、脂類或脂肪酸組合物進一步配制產(chǎn)生藥物、化妝品、食品、飼料，優(yōu)選魚飼料或食品添加物。17.根據(jù)權(quán)利要求1或2的多核苷酸、根據(jù)權(quán)利要求3-5任一項的載體、根據(jù)權(quán)利要求6或7的宿主細胞、根據(jù)權(quán)利要求8的載體或宿主細胞、根據(jù)權(quán)利要求10的多肽，或根據(jù)權(quán)利要求12或13的轉(zhuǎn)基因非人生物在生產(chǎn)油、脂類或脂肪酸組合物中的用途。18.根據(jù)權(quán)利要求17的用途，其中所述油、脂類或脂肪酸組合物用作藥物、化妝品、食品、飼料，優(yōu)選魚飼料或食品添加物。全文摘要本發(fā)明涉及來自海洋球石藻(Emilianahuxleyi)的多核苷酸，所述多核苷酸編碼去飽和酶，并可用于重組生產(chǎn)多不飽和脂肪酸。本發(fā)明還涉及包含根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸的載體、宿主細胞和轉(zhuǎn)基因非人生物，并涉及由所述多核苷酸編碼的多肽。本發(fā)明還涉及針對根據(jù)本發(fā)明的多肽的抗體。最后，本發(fā)明還涉及生產(chǎn)多不飽和脂肪酸和油、脂類和脂肪酸組合物的方法，以及它們作為藥物、化妝品、食品、飼料，優(yōu)選作為魚飼料或食品添加物的用途。文檔編號A01H5/00GK102066564SQ200980119681公開日2011年5月18日申請日期2009年4月29日優(yōu)先權(quán)日2008年4月30日發(fā)明者J·A·內(nèi)皮爾,J·鮑爾,O·薩亞諾娃申請人:羅特哈姆斯泰德研究有限公司