專利名稱：一種利用高產(chǎn)富硒雜交紅米發(fā)酵廢糟培養(yǎng)桑黃的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
—種利用高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟培養(yǎng)桑黃的方法，屬于生物工程 技術(shù)領(lǐng)域。涉及發(fā)酵法培養(yǎng)桑黃菌絲體，是將桑黃子實體接種至新鮮的固體斜面上進(jìn)行培 養(yǎng)，待斜面長好后接種至含較低濃度的高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟的液體培 養(yǎng)基中進(jìn)行種子的培養(yǎng)，即對菌種加以馴化；再接入添加了足量高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/ R319發(fā)酵廢糟的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行深層液體發(fā)酵培養(yǎng)。高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319是四 川大學(xué)與四川農(nóng)業(yè)大學(xué)水稻研究所共同研究的高產(chǎn)雜交富硒紅米，該雜交稻富含硒、鍺等 有益微量元素；該雜交紅米加工成紅米釀后會產(chǎn)生發(fā)酵廢糟，發(fā)酵廢糟中仍含有較高含量 的未被微生物轉(zhuǎn)化的微量元素以及糖類和蛋白質(zhì)，所以可通過培養(yǎng)桑黃菌絲體得到營養(yǎng)豐 富的菌絲體混合液。發(fā)酵結(jié)束后，通過對混合發(fā)酵液進(jìn)行過濾、烘干、粉碎，得到營養(yǎng)物質(zhì)含 量豐富的桑黃菌絲體粉。
二背景技術(shù)：
桑黃(Phelli皿s igniarius)是我國珍稀的一種天然藥物，屬擔(dān)子菌綱，多孔菌 目，多孔菌科。子實體無柄，菌蓋扁半球形或馬蹄形，木質(zhì)，淺肝褐色至暗灰色或黑色。味微 苦，性寒?！侗静菥V目》記載桑黃能"利五臟，宣腸胃氣，排毒氣";現(xiàn)代研究證實桑黃具有很 高的藥用價值，可以強(qiáng)化免疫力，誘導(dǎo)癌細(xì)胞自行死亡，抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，減輕化療和放 療的副作用，預(yù)防和避免癌癥的復(fù)發(fā)；還具有護(hù)肝作用；通過降低和調(diào)整血糖濃度，有效預(yù) 防及改善糖尿??；降低血脂，防止動脈硬化，防止心腦血管病的發(fā)生；預(yù)防和治療類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎；桑黃提取物能夠完全抑制尿酸，對通風(fēng)有良好的效果；抗過敏，對過敏性鼻炎，久 治不愈的濕疹療效很好。 富硒紅米，是在水稻生長發(fā)育過程中通過以微量元素富積技術(shù)為核心而培育出的 具有高含量的微量元素營養(yǎng)功能稻米，以其果皮具有紅色色素沉淀而得名。高產(chǎn)富硒雜交 紅米611A/R319是四川大學(xué)與四川農(nóng)業(yè)大學(xué)水稻研究所共同研究的高產(chǎn)雜交紅米，該雜交 紅米同普通紅米一樣，含有眾多對人體健康有益的活性功能單元，如花青素、黃酮、生物堿、 甾醇、強(qiáng)心甙等，在抗炎、抗過敏、改變體內(nèi)酶活性、改善微循環(huán)、增加冠狀動物血流量、提高 機(jī)體免疫功能、抗氧化和延緩衰老等方面意義重大。此外，還含有較高的蛋白質(zhì)和硒、鐵、鋅 等微量元素。經(jīng)檢測，高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319的發(fā)酵廢糟中也含有較高含量的未被 微生物轉(zhuǎn)化的微量元素以及糖和蛋白質(zhì)。
三
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟培養(yǎng)桑黃 的方法。 本發(fā)明的技術(shù)方案將桑黃子實體接種至新鮮的固體斜面上進(jìn)行培養(yǎng)，待斜面長 好后接種至含較低濃度的高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行種 子的培養(yǎng)，即對菌種加以馴化；再接入添加了足量高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行深層液體發(fā)酵培養(yǎng)。由于高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟中含有豐富的硒、鐵和鋅等微量元素以及糖類和蛋白質(zhì)，所以該混合發(fā)酵液中營養(yǎng)物質(zhì)豐富。發(fā)酵結(jié)束后，通過對混合發(fā)酵液進(jìn)行過濾、烘干、粉碎，得到營養(yǎng)物質(zhì)含量豐富的桑黃菌絲體粉。
步驟為 1)待用菌種的培養(yǎng) 出發(fā)菌株為桑黃(Phellinus igniarius);
①斜面培養(yǎng) 培養(yǎng)基配方以g/L計馬鈴薯200、瓊脂20、葡萄糖5、硫酸鎂2.0、磷酸二氫鉀3.0，pH自然； 培養(yǎng)方法取桑黃子實體中心部分接種于新鮮的斜面上，在25t:下培養(yǎng)7天左右；②500mL —級搖瓶種子培養(yǎng)，裝液量150mL/500mL : 培養(yǎng)基配方以g/L計馬鈴薯200、葡萄糖5、硫酸鎂2. 0、磷酸二氫鉀3. 0、維生素B10. 01， pH自然； 培養(yǎng)方法將培養(yǎng)好的斜面接種至事先滅菌的搖瓶中，在25士rC下，轉(zhuǎn)速110rpm下培養(yǎng)7天；③1000mL 二級搖瓶種子培養(yǎng)，裝液量400mL/1000mL :
培養(yǎng)基配方與一級搖瓶種子培養(yǎng)基配方相同； 培養(yǎng)方法將培養(yǎng)好的一級種子以10%的接種量接種至事先滅菌的搖瓶中，在25t:下，轉(zhuǎn)速110rpm下培養(yǎng)2天，即成待用菌種；
2) 50L —級液體種子培養(yǎng)，裝液量25-30L : ①一級液體種子培養(yǎng)基配方以g/L計葡萄糖5、麩皮50，麩皮水珠后取水溶性麩皮汁、酵母膏3. 0、維生素B10. 01、硫酸鎂2. 0、磷酸二氫鉀3. 0、高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟5，pH自然； ②控制工藝在O. lMpa下滅菌30分鐘，冷卻后按接種量5X-10X接入待用菌種，溫度25士rC，罐壓0. 05Mpa，通氣量1 : 0. 3， V/V，攪拌轉(zhuǎn)速100rpm ; ③轉(zhuǎn)罐標(biāo)準(zhǔn)發(fā)酵時間30-35小時，菌絲球上浮三分之一，鏡檢有鎖狀聯(lián)合，無雜菌； 3) 500L 二級液體種子培養(yǎng)，裝液量250-300L :
①培養(yǎng)基配方與一級液體種子配方相同； ②控制工藝在O. 1Mpa下滅菌30分鐘，冷卻后按接種量10% _15%接入一級種子，溫度25士rC，罐壓0. 05Mpa，通氣量1 : 0. 3， V/V，攪拌轉(zhuǎn)速100rpm ;
③轉(zhuǎn)罐標(biāo)準(zhǔn)發(fā)酵時間30-35小時，菌絲球上浮三分之一，鏡檢有鎖狀聯(lián)合，無雜菌； 4) 3000L深層液體發(fā)酵培養(yǎng)，裝液量1800L : ①發(fā)酵培養(yǎng)基配方以g/L計葡萄糖5 、麩皮50 ，麩皮水煮后取水溶性麩皮汁、酵母膏3. 0、維生素BA 01、硫酸鎂2. 0、磷酸二氫鉀3. 0、高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟10， pH自然；
②控制工藝在O. 1Mpa下滅菌30分鐘，冷卻后按接種量10% _15%接入二級種
子，溫度25士rC，罐壓0. 05Mpa，通氣量1 : 0. 3， V/V，攪拌轉(zhuǎn)速100rpm ; ③放罐標(biāo)準(zhǔn)發(fā)酵時間30-35小時，菌絲球上浮二分之一，鏡檢有鎖狀聯(lián)合，菌絲
球不能自溶； 5)固體發(fā)酵物的收集將培養(yǎng)好的發(fā)酵液用5000-6000rpm的離心機(jī)處理，收集菌
絲體； 6)菌絲體的烘干將收集的菌絲體用真空干燥箱在50-6(TC下烘干； 7)菌絲體的粉碎用帶冷凍的粉碎機(jī)將烘干的菌絲體粉碎至80目以上既得產(chǎn)品。
8)檢驗檢驗標(biāo)準(zhǔn)如下 ①多糖含量^ 4% @蛋白質(zhì)含量>4% ③微量元素含量X). 15ii g/g，《0. 3ii g/g
水分《8% ⑤菌落總數(shù)《1000cfu/g，大腸桿菌《40npn/100g，酵母《25cfu/g，霉菌《25cfu/g，致病菌不得檢出。LD50為陰性。
鉛《1. 5mg/kg，石申《1. Omg/kg。 產(chǎn)品均由衛(wèi)生防疫部門檢測合格后方可銷售。包裝檢驗合格后用鋁膜包裝袋包裝后即得產(chǎn)品桑黃粗菌體粉。 本發(fā)明的有益效果本發(fā)明利用高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟進(jìn)行純種液體深層發(fā)酵培養(yǎng)桑黃菌體，大大縮短了生產(chǎn)周期，提高了產(chǎn)量。本發(fā)明主要采用富硒大米發(fā)酵廢糟，污染小、成本低、工藝簡便、科技含量高、不易被仿冒、有效成分含量高、附加值高，適宜工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式
1、待用菌種的培養(yǎng)將桑黃子實體接種至事先滅好菌的用上述斜面配方配制的一只空白斜面上，在25t:培養(yǎng)6-10天后將斜面上的菌體刮入事先滅好菌的裝有適量無菌水和玻璃珠的三角瓶中，振蕩10分鐘，制成菌懸液。吸4ml該菌懸液于事先滅好菌的一級種子液體培養(yǎng)基中(裝液量150mL/500mL)，在25。C，轉(zhuǎn)速110rpm下培養(yǎng)7天得一級搖瓶種子；無菌條件下，將培養(yǎng)好的一級搖瓶種子一瓶倒入事先滅好菌的用上述二級搖瓶種子配方配制的液體培養(yǎng)基中(裝液量400mL/1000mL)，在25°C ，轉(zhuǎn)速110rpm下培養(yǎng)2天，長好后將兩瓶種子液合并即成待用菌種。 2、一級液體種子培養(yǎng)按上述一級液體中資培養(yǎng)基配方，在O. 1Mpa下滅菌30分鐘冷卻后接入搖瓶種子。按上述一級液體種子培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。采用50L全自動發(fā)酵罐，裝液量為25-30L。 3、二級液體種子培養(yǎng)按上述二級液體種子培養(yǎng)基配方，在O. 1Mpa下滅菌30分鐘冷卻后接入一級種子。按上述二級液體種子培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。采用500L全自動發(fā)酵罐，裝液量為250-300L。 4、深層液體發(fā)酵培養(yǎng)采用3000L發(fā)酵罐，裝液量為1800L。按上述發(fā)酵培養(yǎng)基配方，相同條件滅菌后接入二級液體種子。按上述發(fā)酵罐的培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。
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5、菌絲體的提取將培養(yǎng)好的發(fā)酵液用上述固體發(fā)酵物的收集方法，收集菌絲體，得到250kg濕菌體。 6、菌絲體粉的獲得按上述菌絲體粉的獲得方法，得到20kg菌絲體粉。
權(quán)利要求
一種利用高產(chǎn)富硒雜交紅米發(fā)酵廢糟培養(yǎng)桑黃的方法，其特征是將桑黃子實體接種至新鮮的固體斜面上進(jìn)行培養(yǎng)，待斜面長好后接種至含較低濃度的高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行種子的培養(yǎng)，即對菌種加以馴化；再接入添加了足量高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行深層液體發(fā)酵培養(yǎng)；由于高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟中含有豐富的硒、鐵和鋅等微量元素以及糖類和蛋白質(zhì)，所以該混合發(fā)酵液中營養(yǎng)物質(zhì)豐富；發(fā)酵結(jié)束后，通過對混合發(fā)酵液進(jìn)行過濾、烘干、粉碎，得到營養(yǎng)物質(zhì)含量豐富的桑黃菌絲體粉；步驟為1)待用菌種的培養(yǎng)出發(fā)菌株為桑黃(Phellinus igniarius)；①斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基配方以g/L計馬鈴薯200、瓊脂20、葡萄糖5、硫酸鎂2.0、磷酸二氫鉀3.0，pH自然；培養(yǎng)方法取桑黃子實體中心部分接種于新鮮的斜面上，在25℃下培養(yǎng)7天左右；②500mL一級搖瓶種子培養(yǎng)，裝液量150mL/500mL培養(yǎng)基配方以g/L計馬鈴薯200、葡萄糖5、硫酸鎂2.0、磷酸二氫鉀3.0、維生素B10.01，pH自然；培養(yǎng)方法將培養(yǎng)好的斜面接種至事先滅菌的搖瓶中，在25±1℃下，轉(zhuǎn)速110rpm下培養(yǎng)7天；③1000mL二級搖瓶種子培養(yǎng)，裝液量400mL/1000mL培養(yǎng)基配方與一級搖瓶種子培養(yǎng)基配方相同；培養(yǎng)方法將培養(yǎng)好的一級種子以10％的接種量接種至事先滅菌的搖瓶中，在25℃下，轉(zhuǎn)速110rpm下培養(yǎng)2天，即成待用菌種；2)50L一級液體種子培養(yǎng)，裝液量25-30L①一級液體種子培養(yǎng)基配方以g/L計葡萄糖5、麩皮50，麩皮水珠后取水溶性麩皮汁、酵母膏3.0、維生素B10.01、硫酸鎂2.0、磷酸二氫鉀3.0、高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟5，pH自然；②控制工藝在0.1Mpa下滅菌30分鐘，冷卻后按接種量5％-10％接入待用菌種，溫度25±1℃，罐壓0.05Mpa，通氣量1∶0.3，V/V，攪拌轉(zhuǎn)速100rpm；③轉(zhuǎn)罐標(biāo)準(zhǔn)發(fā)酵時間30-35小時，菌絲球上浮三分之一，鏡檢有鎖狀聯(lián)合，無雜菌；3)500L二級液體種子培養(yǎng)，裝液量250-300L①培養(yǎng)基配方與一級液體種子配方相同；②控制工藝在0.1Mpa下滅菌30分鐘，冷卻后按接種量10％-15％接入一級種子，溫度25±1℃，罐壓0.05Mpa，通氣量1∶0.3，V/V，攪拌轉(zhuǎn)速100rpm；③轉(zhuǎn)罐標(biāo)準(zhǔn)發(fā)酵時間30-35小時，菌絲球上浮三分之一，鏡檢有鎖狀聯(lián)合，無雜菌；4)3000L深層液體發(fā)酵培養(yǎng)，裝液量1800L①發(fā)酵培養(yǎng)基配方以g/L計葡萄糖5、麩皮50，麩皮水煮后取水溶性麩皮汁、酵母膏3.0、維生素B10.01、硫酸鎂2.0、磷酸二氫鉀3.0、高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵廢糟10，pH自然；②控制工藝在0.1Mpa下滅菌30分鐘，冷卻后按接種量10％-15％接入二級種子，溫度25±1℃，罐壓0.05Mpa，通氣量1∶0.3，V/V，攪拌轉(zhuǎn)速100rpm；③放罐標(biāo)準(zhǔn)發(fā)酵時間30-35小時，菌絲球上浮二分之一，鏡檢有鎖狀聯(lián)合，菌絲球不能自溶；5)固體發(fā)酵物的收集將培養(yǎng)好的發(fā)酵液用5000-6000rpm的離心機(jī)處理，收集菌絲體；6)菌絲體的烘干將收集的菌絲體用真空干燥箱在50-60℃下烘干；7)菌絲體的粉碎用帶冷凍的粉碎機(jī)將烘干的菌絲體粉碎至80目以上既得產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明涉及高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319發(fā)酵后的廢糟培養(yǎng)桑黃的方法。高產(chǎn)富硒雜交紅米611A/R319是四川大學(xué)與四川農(nóng)業(yè)大學(xué)水稻研究所共同研究的高產(chǎn)雜交富硒紅米，該雜交稻富含硒、鍺等有益微量元素；該雜交紅米加工成紅米釀后會產(chǎn)生發(fā)酵廢糟，發(fā)酵廢糟中仍含有較高含量的未被微生物轉(zhuǎn)化的微量元素以及糖類和蛋白質(zhì)，所以可通過培養(yǎng)桑黃菌絲體得到營養(yǎng)豐富的菌絲體混合液。本發(fā)明主要包括菌種的培養(yǎng)、液體種子培養(yǎng)、深層液體發(fā)酵培養(yǎng)、固體發(fā)酵物收集、干燥、粉碎。用本發(fā)明方法培養(yǎng)桑黃，其產(chǎn)量高，且生長速度快。該菌絲體粉也可以作為一種食品添加劑，與適當(dāng)?shù)氖称放浔?，制成功能型食品?br> 文檔編號A01G1/04GK101731101SQ20101010109
公開日2010年6月16日 申請日期2010年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月26日
發(fā)明者曹玫, 朱建清, 聶遠(yuǎn)洋, 趙建, 顏亮 申請人:四川大學(xué)