專利名稱：一種春蘭雜交和種子無菌播種育苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體為春蘭的雜交育種和種子繁殖方法。
背景技術(shù)：
蘭花是我國的傳統(tǒng)特色花卉，中國蘭通常是指蘭科(Orchidaceae)蘭屬(Cymbidum)植物中一部分地生種，如春蘭(C. goeringii)、蕙蘭(C. faberi)、建蘭 (C. ensifolium)、墨蘭(C. sinense)和寒蘭(C. kanran)等。蘭花淡雅幽香，倍受詩畫贊美， 被譽(yù)為“花中君子”，儒家文化崇尚“君子比德”，常以花喻人，使得蘭花在東南亞國家也十分 流行。蘭花優(yōu)良品種量少價高，主要靠引種馴化獲得新品種，自20世紀(jì)80年代以來，各地 利用當(dāng)?shù)氐馁Y源優(yōu)勢，進(jìn)行了大規(guī)模的引種選育工作，即為野外大量挖掘后栽培篩選，雖然 培育出了一批新品種，但對野生資源的破壞也是有目共睹的。近十幾年來，國內(nèi)開展了針對 當(dāng)?shù)貒m資源特色的雜交育種科研，如廣東的墨蘭，福建的建蘭和寒蘭，四川的春劍和云南 的蓮瓣蘭等，由于蘭花種子極為細(xì)小，一粒朔果中有成千上萬的種子，但種子沒有胚乳和子 葉，透明種皮內(nèi)只有一發(fā)育不完全的蝌蚪形胚，常規(guī)播種很難萌發(fā)，因此必須通過組培無菌 播種的方法進(jìn)行萌發(fā)。各地國蘭的雜交研究有這明顯的地域性，有的主要以科研為主，選擇 的親本多為性狀一般的草蘭、草蘭的自然雜交或自交，這對優(yōu)秀后代的獲得不利。江浙是 春蘭和蕙蘭的主產(chǎn)區(qū)，沿海經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)，愛蘭人士眾多，蘭花新品種價格奇高，使得野外挖掘 量大，交易頻繁，資源破壞嚴(yán)重，因此，發(fā)揮江浙當(dāng)?shù)氐拇禾m資源優(yōu)勢，有目的地選擇性狀優(yōu) 良的親本，開展春蘭品種間以及和蘭屬內(nèi)的其它種進(jìn)行種間雜交，成功研發(fā)出春蘭雜交種 子無菌播種，提高萌發(fā)率，根狀莖誘導(dǎo)芽，生根壯苗培養(yǎng)和試管苗移栽等無菌播種成苗的關(guān) 鍵技術(shù)，從而選育幽香、花型、花色、彩斑、株型、抗病或生長快速等特性的蘭花新品種，其科 研、環(huán)保和生產(chǎn)意義非常重大，是對國蘭早日產(chǎn)業(yè)化和可持續(xù)發(fā)展的有力保證。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對春蘭雜交育種和種子無菌播種中，如何提高優(yōu)良品種授粉結(jié) 實率、種子萌發(fā)率、誘芽成苗率和試管苗移栽成活率等，提出一種使雜交成苗快、品質(zhì)好，高 效、簡便、推廣性強(qiáng)的春蘭雜交和種子無菌播種育苗方法，是通過解決親本選擇、授粉培育、 果實消毒、前期暗培養(yǎng)、播種成苗過程的三種培養(yǎng)基篩選、移栽介質(zhì)篩選等關(guān)鍵技術(shù)，來實 現(xiàn)發(fā)明的目的。本發(fā)明一種春蘭雜交和種子無菌播種育苗方法，具體通過以下步驟實現(xiàn)(1)獲得人工授粉的雜交種子以具有性狀優(yōu)勢互補(bǔ)的春蘭名品為親本(母本)， 開花2 20天內(nèi)進(jìn)行人工授粉，為防昆蟲，授粉前親本的唇瓣要去掉，授粉前后要用透氣白 色無紡布包蓋蕊柱或整朵花套授粉袋，若花期不遇，花粉塊可在3 5°C低溫、干燥(硅膠) 條件下冷藏備用。所述春蘭名品是在瓣型、花色、花大或彩葉上有優(yōu)勢的品種。所述人工授粉的操作為蘭花授粉的常規(guī)方法，是用尖頭的鐘表鑷子將親本的花藥 帽去掉，將兩個大花粉塊取下，分別放在干凈的白紙上，兩個大花粉塊可以自然分成4小塊，將父本花粉塊用鑷子撿取小心地放在母本的蕊柱凹槽處，注意手勢輕巧，防止鑷子尖頭碰傷蕊柱凹槽壁，4個花粉塊可以授4朵花，以作后備選擇，從而保證授粉的成功率，父母本 也可以互為進(jìn)行正反交，所述人工授粉的操作為蘭花授粉的常規(guī)方法，開花授粉的時間段 為春蘭上試驗結(jié)果。為防昆蟲，授粉前親本的唇瓣可去掉，防止昆蟲停留，授粉前與授粉后要用小塊的 透氣白色無紡布包蓋蕊柱，或是用透氣的半透明紙做的授粉袋套住整朵花，待授粉成功后 再去掉。若親本花期不遇，可將父本的花粉塊取下放于小的自封口塑料袋、小注射藥瓶或 塑料指形管中蓋好，再放到有干燥劑硅膠鋪墊的塑料飯盒中，在干燥低溫(3 5°C)的冰箱 中冷藏備用，當(dāng)母本開花時，將保存的父本花粉塊取出，放在白紙上，在溫度(20 25°C左 右)和濕度(70 80%)適宜的自然環(huán)境下放置30 40分鐘，再進(jìn)行授粉。用氯化三苯四氮唑(TTC)染色法可以測定花粉塊生活力，配制0. 5%的四氮唑溶 液，每月對花粉塊取樣，將花粉塊放在載玻片上，加一滴四氮唑溶液，在適宜的溫濕度環(huán)境 下放置20 30分鐘后觀察著色情況，呈紅色為正常花粉，結(jié)果表明花粉塊可保存8 10 月。人工授粉后，結(jié)實期長達(dá)5 7個月，必須要加強(qiáng)肥水管理，可以施用愛貝施 (APEX) 2號或好康多1號長效緩釋顆粒肥，每盆5 10克左右，以促進(jìn)結(jié)實，并獲得量多的 種子，如果因管理不當(dāng)或親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，后期出現(xiàn)敗育，果柄脫落，可嘗試提前進(jìn)行胚搶救 處理，但由于種子發(fā)育還不夠成熟，呈漿狀或種子量少，萌發(fā)就極為困難。(2)無菌播種待朔果未完全成熟時采下，清洗果實表面，用10%的次氯酸鈉 (NaClO)浸泡10 20分鐘進(jìn)行表面消毒，無菌水沖洗，用滴管吸取懸浮于無菌水中的種子， 均勻滴播于播種培養(yǎng)基上。播種培養(yǎng)基1/2MS+NAA4 5mg/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+ 瓊脂8 10g/l，pH5.4。所述的朔果未完全成熟時，是指朔果膨大、表面呈黃綠色、達(dá)到八 成熟未開裂時。成熟開裂的果實對消毒和萌發(fā)都不利。無菌播種方法是切除多余果柄，清洗果實 表面，將果實放入燒杯，經(jīng)自來水沖洗30分鐘后，放在超凈工作臺上，用70 75%酒精浸 泡30秒鐘，無菌水沖洗3次，再經(jīng)10%次氯酸鈉溶液浸泡10 20分鐘進(jìn)行表面消毒，無 菌水沖洗5次，將消毒好的果實放在無菌濾紙上縱切，可以看到大量細(xì)如白絮的種子，將種 子刮入裝有無菌水的燒杯中，使種子呈懸浮狀態(tài)，用無菌滴管吸入，均勻滴播于播種培養(yǎng)基 上，輕搖三角瓶，使種子均勻分布在培養(yǎng)基表面，三角瓶放在20 25°C的黑暗條件下培養(yǎng) 2 3個月，促進(jìn)種子后熟，以后再放到散射光下培養(yǎng)，光照強(qiáng)度800 lOOOlux，每天光照 12小時，播種3個月左右，種子內(nèi)的胚發(fā)育突破種皮，形成原球莖(protocorm)，原球莖繼續(xù) 生長，伸長，形成根狀莖(rhizome)。根狀莖可以直接誘導(dǎo)芽，也可以保持在繼代增殖狀態(tài)。播種培養(yǎng)基中1/2MS是指MS(MuraShige-Sk00g 1962)基本培養(yǎng)基的母液1、母液 2和母液3等大量元素母液的用量減半，其它鐵鹽、微量元素和維生素母液用量保持不變。 培養(yǎng)基略偏酸性或瓊脂量減少些，使凝固度低，培養(yǎng)基偏軟些，對種子萌發(fā)更有利。種子發(fā)育鏡檢可以用來判斷種子發(fā)育的完好程度，對萌發(fā)率有影響，方法是將消 毒后沒播完的種子用滴管吸入，滴于載玻片上，根據(jù)種子數(shù)決定滴幾滴，一般是1 2滴，蓋 上蓋玻片時防止氣泡產(chǎn)生，在OLMPUS萬能生物顯微鏡下進(jìn)行觀察，在2. 5X目鏡和4X物鏡下選取10個鏡面，統(tǒng)計好胚、弱胚、無胚的個數(shù)，計算出好胚率。一般種子大致可以分成 三類飽滿、發(fā)育正常的種子(好胚)；發(fā)育不良、胚乳較小的種子(弱胚)；沒有胚、空殼的 敗育種子(無胚)。只有發(fā)育正常的種子，才能在適宜的培養(yǎng)基和環(huán)境下萌發(fā)。(3)根狀莖誘導(dǎo)芽播種后在黑暗中培養(yǎng)，使種子在模擬自然生態(tài)條件的環(huán)境以 及富有營養(yǎng)的培養(yǎng)基中后熟生長，萌發(fā)后獲得根狀莖，待根狀莖長至1. 5 2cm長時，接入 誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基，放在溫度20 25°C，在雙支日光燈光照強(qiáng)度25001uX左右，光照12小時/ 天的條件下培養(yǎng)2 3個月，在根狀莖的頂端和側(cè)面有芽點抽出，伸長，當(dāng)芽高4-5cm時可 轉(zhuǎn)至生根壯苗培養(yǎng)。為了得到一定數(shù)量的同一株系，根狀莖可以分割，進(jìn)行不斷的繼代增殖培養(yǎng)，培養(yǎng) 溫度20 25°C，單支日光燈的光照條件下培養(yǎng)，光照強(qiáng)度800 lOOOlux左右。根狀莖誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基1/2MS+NAA0. 2 0. 5mg/l+BAl 2mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂 8 10g/l，pH5. 4，注意誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基不需要添加活性炭，它會嚴(yán)重抑制芽的生長。
根狀莖繼代增殖培養(yǎng)基J/^MS+NAAS 4mg/l+BA0. 1 0. 2mg/l+蛋白胨2 3g/ 1+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+瓊脂8 10g/l，pH5. 4，添加外源營養(yǎng)物質(zhì)蛋白胨，可以使根 狀莖生長更粗壯。(4)生根壯苗培養(yǎng)將芽高4-5cm時可轉(zhuǎn)至生根壯苗培養(yǎng)，放在溫度20 25°C，雙 支日光燈光照強(qiáng)度25001UX左右，光照12小時/天的條件下培養(yǎng)2 3個月，在培養(yǎng)后期 的1 2個月，可放在溫室內(nèi)，靠自然光照培養(yǎng)，可以節(jié)省能源。生根壯苗培養(yǎng)基:1/2MS+NAA1 2mg/l+IBA0. 2 0. 5mg/l+BA0. 5mg/l+ 活性炭 2g/l+蔗糖20g/l+瓊脂8 10g/l，pH5. 4，在生根壯苗階段，如果有條件，可以添加30 50g/l的椰子粉，能使根更加粗壯些。(5)試管苗移栽當(dāng)小苗高約7cm，根數(shù)2 3條，葉片3 4片，即可移栽，煉苗成 活率高達(dá)85 90%，移栽介質(zhì)以珍珠巖、蛭石和泥炭2 1 1為好。優(yōu)質(zhì)試管苗可提高移栽成活率及移栽成活后的生長量，有利于提早開花。春蘭生 長較慢，因此，試管苗的移栽養(yǎng)護(hù)技術(shù)難度較大。除培養(yǎng)壯苗外，應(yīng)注意介質(zhì)、光照、溫度、水 份、營養(yǎng)等因素與蘭花生物學(xué)特性的協(xié)調(diào)統(tǒng)一。移栽具體方法是開瓶口煉苗7 15天，在 有細(xì)孔的塑料筐內(nèi)裝滿介質(zhì)(珍珠巖、蛭石和泥炭以2 1 1混合為好)，將洗凈根部瓊 脂的小苗種植于筐內(nèi)，介質(zhì)填埋于根莖部位，不要種植太深，以防止通氣不夠，引起莖腐爛， 種好后先放置在高濕弱光(15001uX)條件緩苗10 15天，以后放在15°C 25°C，空氣相 對濕度70%左右，光線稍強(qiáng)的條件下養(yǎng)護(hù)，1 2個月噴施1/1000的營養(yǎng)液和抗菌劑，控制 澆水量為栽種的秘訣，成活率可達(dá)85 90 %，蘭苗年生長量達(dá)5 8cm，經(jīng)3 5年種植可 開花選擇。本發(fā)明所具有的優(yōu)點及效果(1)本發(fā)明得出在開花2 20天之內(nèi)進(jìn)行人工授粉，以及花期不遇時，對父本花粉 塊的干燥低溫(3 5°C )冷藏等方法，使得花期合適的優(yōu)良親本的雜交成功率高達(dá)100%， 特別對一些花期不遇的優(yōu)良親本雜交成功率也達(dá)70 90%。(2)本發(fā)明采用10%次氯酸鈉溶液進(jìn)行蒴果消毒，消毒效果好，不污染，可以代替 0. 1 %的氯化汞消毒液，從而使該技術(shù)更安全環(huán)保，便于大規(guī)模的推廣應(yīng)用。(3)本發(fā)明試驗成功在播種期采用暗培養(yǎng)，促進(jìn)種子后熟萌發(fā)，在根狀莖增殖期采用弱光培養(yǎng)，在生根壯苗的后期放在溫室中培養(yǎng)的方法，均取得較好的萌發(fā)率、生長量以及 壯苗量，這使得組培中大量耗電的普遍問題，在本發(fā)明中得到一定的解決，能節(jié)約能源，降 低成本。(4)本發(fā)明篩選優(yōu)化的無菌播種、根狀莖誘導(dǎo)芽和生根壯苗培養(yǎng)的三種培養(yǎng)基，有著簡便易配制，適用性廣而效果好的特點，使得春蘭雜交種子萌發(fā)率高，育苗周期縮短，種 苗品質(zhì)好，較好的解決了春蘭雜交種子由于胚發(fā)育不完全，自然條件下極難萌發(fā)的困難，本 發(fā)明具有較高的應(yīng)用和推廣價值。


圖1為春蘭蒴果。圖2為果實消毒。圖3為蒴果內(nèi)飛絮狀的蘭花種子。圖4為種子鏡檢——好胚、弱胚、無胚。圖5為無菌播種。圖6為種子萌發(fā)成根狀莖。圖7為根狀莖誘導(dǎo)芽。圖8為生根壯苗培養(yǎng)。
具體實施例方式本發(fā)明結(jié)合附圖和實施例作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的內(nèi)容不是僅限于此。實施例一春蘭大富貴和綠云的雜交和種子無菌播種育苗方法(1)人工授粉在2月中下旬，兩個親本同時開花時，可以互為父母本，進(jìn)行正反 交，授粉前后都要注意防止昆蟲影響，授粉時用尖頭的鐘表鑷子將親本的花粉塊取下，互相 交換后，再將父本花粉塊用鑷子撿取小心地放在母本的蕊柱凹槽處，注意手勢輕巧，防止鑷 子尖頭碰傷蕊柱槽壁，1朵花的花粉塊可以授2 4朵花，授粉后要用小塊的白色無紡布 包蓋蕊柱或用半透明紙做的授粉袋套住整朵花，掛上塑料牌，寫清楚父母本、授粉日期和授 粉人，待15 30天后檢查授粉膨大情況，若授粉成功，可以去掉無紡布或授粉袋。結(jié)果率 100%。(2)無菌播種10月中旬，剪下蒴果，流水沖洗30分鐘，在超凈臺上，用75%酒精 浸泡30秒，無菌水沖洗3次，再經(jīng)10%次氯酸鈉溶液浸泡15分鐘，無菌水沖洗5次，將果實 縱切，取種子播于培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)，種子鏡檢好胚率100%。80天后形成根狀莖，種子萌發(fā) 率8%。播種培養(yǎng)基為l/2MS+NAA5mg/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+瓊脂10g/l，pH5. 4。(3)根狀莖誘導(dǎo)芽播種獲得的根狀莖長至1. 5 2cm長時，可以接入誘芽培養(yǎng) 基，在光照下培養(yǎng)3個月(溫度20 25°C、光照強(qiáng)度25001UX)，誘芽率100%，當(dāng)芽高約4cm 時可轉(zhuǎn)至生根壯苗培養(yǎng)。根狀莖誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0. 5mg/l+BA2mg/l+蔗糖20g/l+ 瓊脂 10g/l，pH5. 4。(4)生根壯苗培養(yǎng)高約4cm的芽接入生根壯苗培養(yǎng)基，放在光照下培養(yǎng)3個月 (溫度20 25°C、光照強(qiáng)度25001uX)，生根率95%，生根壯苗培養(yǎng)基為V2MS+NAA 2mg/1+IBAO. 5mg/l+BA0. 5mg/l+ 椰子粉 50g/l+ 活性炭 2g/l+ 蔗糖 20g/l+ 瓊脂 10g/l, pH5. 4。(5)試管苗移栽當(dāng)小苗高約7cm，根數(shù)2 3條，葉片3 4片，根苗茁壯，即可移 栽。移栽具體方法是開瓶口煉苗10天，在有細(xì)孔的塑料筐內(nèi)裝滿介質(zhì)(珍珠巖、蛭石和泥 炭以2 1 1混合為好)，將洗凈根部瓊脂的小苗種植于筐內(nèi)，介質(zhì)填埋于根莖部位，不要 種植太深，以防止通氣不夠，引起莖腐爛，種好后先放置在高濕弱光(15001UX)條件緩苗10 天，以后放在15°C 25°C，空氣相對濕度70%左右，光線稍強(qiáng)的條件下養(yǎng)護(hù)，每隔1個月噴 施1/1000的營養(yǎng)液，春季按用量噴抗菌劑和預(yù)防介殼蟲藥共3次，日?？刂茲菜?，介質(zhì)要 干濕間隔，不要一直太濕，造成不通氣而爛根，移栽成活率可達(dá)90%左右。實施例二春蘭集圓(早)和元紅(d)的雜交和種子無菌播種育苗方法(1)人工授粉元紅花期早于集圓20天，將元紅花粉塊取下，放在小的塑料自封袋 里，在干燥(硅膠)低溫(5°C )的冰箱中保存，當(dāng)集圓開花時，將冷藏的花粉塊取出放于白 紙上，在溫濕度適宜的環(huán)境(溫度20 25°C、濕度70 75% )下放置30分鐘，個別抽樣 用TTC染色法測定，被測花粉塊均有生活力，將其余的花粉塊授于集圓的蕊柱上，授粉后要 用小塊的白色無紡布包蓋蕊柱或用半透明紙做的授粉袋套住整朵花，掛上塑料牌，寫清楚 父母本、授粉日期和授粉人，待15 30天后檢查授粉膨大情況，若授粉成功，可以去掉無紡 布或授粉袋。結(jié)果率87%。(2)無菌播種9月下旬，待朔果八成熟未開裂，表面呈黃綠色時剪下(參見圖1)， 自來水沖洗30分鐘，在超凈臺上，用75%酒精浸泡30秒，無菌水沖洗3次，再經(jīng)10%次氯 酸鈉溶液浸泡15分鐘(參見圖2)，無菌水沖洗5次，將果實縱切(參見圖3)，讓種子懸浮 于無菌水中，吸取種子播于培養(yǎng)基上(參見圖5)，在20 25°C的黑暗條件下培養(yǎng)，促進(jìn)種 子后熟，種子鏡檢好胚率65% (參見圖4)。90天后形成根狀莖(參見圖6)，轉(zhuǎn)移到散射光 下培養(yǎng)(光照強(qiáng)度lOOOlux)，種子萌發(fā)率5%。播種培養(yǎng)基為l/2MS+NAA5mg/l+IBA0. 5mg/ 1+ 活性炭 2g/l+ 蔗糖 20g/l+ 瓊脂 10g/l, ρΗ5· 4。(3)根狀莖誘導(dǎo)芽播種獲得的根狀莖長至1. 5 2cm長時，可以接入誘芽培養(yǎng) 基，在光照下培養(yǎng)3個月(溫度20 25°C、光照強(qiáng)度25001UX)，誘芽率95% (參見圖7)， 當(dāng)芽高約4cm時可轉(zhuǎn)至生根壯苗培養(yǎng)。根狀莖誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0. 5mg/l+BA2mg/ 1+KT0. 2mg/l+ 蔗糖 20g/l+ 瓊脂 10g/l, ρΗ5· 4。(4)生根壯苗培養(yǎng)高約4cm的芽接入生根壯苗培養(yǎng)基，放在光照下培養(yǎng)3個月 (溫度20 25°C、光照強(qiáng)度2500lux)，在培養(yǎng)后期的1 2個月，可放在溫室內(nèi)，靠自然光照 培養(yǎng)，可以省電。生根率90% (參見圖8)，生根壯苗培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 2mg/l+IBA0. 5mg/ 1+BA0. 5mg/l+ 椰子粉 50g/l+ 活性炭 2g/l+ 蔗糖 20g/l+ 瓊脂 10g/l, ρΗ5· 4。(5)試管苗移栽當(dāng)小苗高約7cm，根數(shù)2 3條，葉片3 4片，根苗茁壯，即可移栽。具體方法是開瓶口煉苗10天，在有細(xì)孔的塑料筐內(nèi)裝滿介質(zhì)(珍珠巖、蛭石和泥炭以 2:1: 1混合為好)，將洗凈根部瓊脂的小苗種植于筐內(nèi)，介質(zhì)填埋于根莖部位，不要種植 太深，以防止通氣不夠，引起根莖部位腐爛，種好后先放置在高濕弱光(15001UX)條件緩苗 10天，以后放在15°C 25°C，空氣相對濕度70%左右，光線稍強(qiáng)的條件下養(yǎng)護(hù)，每隔1個月 噴施1/1000的營養(yǎng)液，春季按用量噴抗菌劑和預(yù)防介殼蟲藥共3次，日常控制澆水量，介質(zhì) 要干濕間隔，不要一直太濕，造成不通氣而爛根，移栽成活率可達(dá)85%左右。
權(quán)利要求
一種春蘭雜交和種子無菌播種育苗方法，通過以下步驟實現(xiàn)(1)獲得人工授粉的雜交種子以具有性狀優(yōu)勢互補(bǔ)的春蘭名品為親本，開花2～20天內(nèi)進(jìn)行人工授粉，為防昆蟲，授粉前親本的唇瓣要去掉，授粉前后要用透氣白色無紡布包蓋蕊柱或整朵花套授粉袋，若花期不遇，花粉塊可在3～5℃低溫、干燥條件下冷藏備用；(2)無菌播種待朔果未完全成熟時采下，清洗果實表面，用10％的次氯酸鈉浸泡10～20分鐘進(jìn)行表面消毒，無菌水沖洗，用滴管吸取懸浮于無菌水中的種子，均勻滴播于播種培養(yǎng)基上，播種培養(yǎng)基為1/2MS+NAA4～5mg/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+瓊脂8～10g/l，pH5.4；(3)根狀莖誘導(dǎo)芽播種后在黑暗中培養(yǎng)，萌發(fā)后待根狀莖長至1.5～2cm長時，接入誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基，放在溫度20～25℃，在光照強(qiáng)度2500lux左右，光照12小時/天的條件下培養(yǎng)2～3個月，在根狀莖的頂端和側(cè)面有芽點抽出，伸長，當(dāng)芽高4-5cm時可轉(zhuǎn)至生根壯苗培養(yǎng)，根狀莖誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2～0.5mg/l+BA1～2mg/l+蔗糖20g/l+瓊脂8～10g/l，pH5.4；(4)生根壯苗培養(yǎng)待芽高4-5cm時轉(zhuǎn)至生根壯苗培養(yǎng)，放在溫度20～25℃，光照強(qiáng)度2500lux左右，光照12小時/天的條件下培養(yǎng)2～3個月，在培養(yǎng)后期的1～2個月，放在溫室內(nèi)，靠自然光照培養(yǎng)，生根壯苗培養(yǎng)基1/2MS+NAA 1～2mg/l+IBA0.2～0.5mg/l+BA0.5mg/l+活性炭2g/l+蔗糖20g/l+瓊脂8～10g/l，pH5.4；(5)試管苗移栽當(dāng)小苗長至高6-7cm，根數(shù)2～3條，葉片3～4片時，即移栽，移栽介質(zhì)為珍珠巖∶蛭石∶泥炭＝2∶1∶1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述一種春蘭雜交和種子無菌播種育苗方法，其特征在于，步驟 (1)所述春蘭名品是指在瓣型、花色、花大或彩葉上有優(yōu)勢的品種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述一種春蘭雜交和種子無菌播種育苗方法，其特征在于，步驟(1)中，若親本花期不遇，可將父本的花粉塊取下放于小的自封口塑料袋、小注射藥瓶或塑 料指形管中蓋好，再放到有干燥劑硅膠鋪墊的塑料飯盒中，在干燥、3 5°C低溫的冰箱中 冷藏備用，當(dāng)母本開花時，將保存的父本花粉塊取出，放在白紙上，在20 25°C溫度和70 80%濕度的自然環(huán)境下放置30 40分鐘，再進(jìn)行授粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述一種春蘭雜交和種子無菌播種育苗方法，其特征在于，步驟(2)所述的朔果未完全成熟，是指朔果膨大、表面呈黃綠色、達(dá)到八成熟未開裂。
5.根據(jù)權(quán)利要求1中所述一種春蘭雜交和種子無菌播種育苗方法，其特征在于，步驟(3)所述根狀莖可以直接誘導(dǎo)芽，也可以保持在繼代增殖狀態(tài)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1中所述一種春蘭雜交和種子無菌播種育苗方法，其特征在于，步驟 (3)中為了得到一定數(shù)量的同一株系，根狀莖可以分割，進(jìn)行不斷的繼代增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)溫 度20 25°C，單支日光燈的光照條件下培養(yǎng)，光照強(qiáng)度800 lOOOlux左右，根狀莖繼代增 殖培養(yǎng)基為:1/2MS+NAA3 4mg/l+BA0. 1 0. 2mg/l+蛋白胨2 3g/l+活性炭2g/l+蔗 糖 20g/l+ 瓊脂 8 10g/l, ρΗ5· 4。
全文摘要
本發(fā)明提供一種春蘭雜交和種子無菌播種育苗方法，通過人工授粉后獲得雜交種子，待朔果未完全成熟時采下、經(jīng)表面消毒后進(jìn)行無菌播種，在黑暗中培養(yǎng)、萌發(fā)后獲得根狀莖、接入誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基，根狀莖誘導(dǎo)芽、生根壯苗培養(yǎng)及試管苗移栽等步驟。本發(fā)明采用三種經(jīng)篩選優(yōu)化的培養(yǎng)基，使春蘭雜交種子萌發(fā)率高，育苗周期縮短，種苗品質(zhì)好。本發(fā)明的整套方法，可操作性強(qiáng)，較好的解決了春蘭雜交種子由于胚發(fā)育不完全，自然條件下極難萌發(fā)的困難，具有較高的應(yīng)用和推廣價值。
文檔編號A01H4/00GK101816283SQ20101016413
公開日2010年9月1日 申請日期2010年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月5日
發(fā)明者夏宜平, 李方, 柴明良, 陳昆松, 黃焱 申請人:浙江大學(xué)