專利名稱：一種用啤酒廢渣生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌劑的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌劑方法，具體地說是涉及一種用啤酒廢渣生產(chǎn) 環(huán)鏈擬青霉菌劑的方法。
背景技術：
環(huán)鏈擬青霉(ecilomyces cateniannulatus)能夠防治多種農(nóng)作物害蟲，利用環(huán)鏈 擬青霉的真菌制劑進行農(nóng)作物害蟲的防治具有巨大的潛力。已經(jīng)進行了哺乳動物急慢性毒 理試驗，對哺乳動物安全，多名學者研究指出林間的環(huán)鏈擬青霉的存在量較大，對多種林間 田間的害蟲有生物防治作用。啤酒廢渣的主要成分是麥殼和殘留的淀粉、蛋白質(zhì)等。啤酒廢水主要是啤酒廠的 偏堿性的洗瓶、洗灌水，含有多種營養(yǎng)物質(zhì)和微量元素，適宜微生物生長。據(jù)有關統(tǒng)計資料， 我國啤酒年產(chǎn)已達4000萬t，按每生產(chǎn)1萬t啤酒產(chǎn)干渣280t計，啤酒行業(yè)每年的啤酒干 渣產(chǎn)出量達112萬t以上，目前國內(nèi)啤酒廠家的啤酒廢渣大多數(shù)沒有進行深加工利用，較多 情況是出售給農(nóng)戶成為飼料使用，而根據(jù)研究指出，家禽甚至豬等動物食用啤酒渣后可能 會出現(xiàn)“啤酒渣中毒”現(xiàn)象。所以導致大量的啤酒渣被廢棄，污染環(huán)境，甚至成為多種有害 微生物滋長的溫床。在現(xiàn)在的農(nóng)作物生產(chǎn)中，廣泛使用化學農(nóng)藥，雖然防治效果較好，但是化學農(nóng)藥制 劑高毒性、高殘留的特性污染環(huán)境，污染農(nóng)產(chǎn)品，農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥超標造成中毒，農(nóng)產(chǎn)品被勒 令退回甚至罰沒銷毀的事件時有發(fā)生。農(nóng)藥的生產(chǎn)又大量使用社會緊缺的資源和能源，造 成了大量的溫室氣體的排放。鑒于此，采用生物方法防治農(nóng)作物害蟲代替?zhèn)鹘y(tǒng)的化學防治 成了必然趨勢。由于啤酒渣中含有大量的沒有被完全利用的碳源氮源物質(zhì)，且碳氮比較高，故被 微生物利用后前期產(chǎn)酸性就十分嚴重，嚴重抑制真菌的生長，故國內(nèi)外均較少利用啤酒渣 作為培養(yǎng)基主體培養(yǎng)真菌等微生物。迄今尚未見有用啤酒廢渣作為原料生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌的相關報導。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種用啤酒廢渣生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌劑的方法，解決了以啤 酒渣作為主體培養(yǎng)生防真菌的問題。該方法既可以提供高效無毒的生物防治菌劑，又可以 解決啤酒廢渣排放的問題。本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是一種用啤酒廢渣生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌 劑的方法，包括如下步驟步驟一一級培養(yǎng)，用馬鈴薯_葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PDA斜面上，裝成試管斜面，接種 環(huán)鏈擬青霉菌種，在20-25°C培養(yǎng)7-14天；得到純種斜面培養(yǎng)物；步驟二 二級培養(yǎng)，培養(yǎng)液按重量百分比計5-25%啤酒廢渣、75-95%啤酒廢水， 配比混合，調(diào)PH值5-9 ；經(jīng)高壓滅菌后接種一級培養(yǎng)的純種斜面培養(yǎng)物，通氣震蕩培養(yǎng)，于
3在12-28°C下培養(yǎng)6-14天；得到純種液體培養(yǎng)物；步驟三三級培養(yǎng)，按重量百分比計，培養(yǎng)基組分為85-99%的啤酒廢渣、1-5%的 氯化鈉、5-15%的廢酵母泥提取物與2%碳酸鈣混合，濕度在RH40-75之間，接種二級培養(yǎng) 的純種液體培養(yǎng)物，于在12_28°C下培養(yǎng)6-14天；干燥后成為餅塊狀或顆粒狀固體培養(yǎng)物。優(yōu)選技術方案是，所述的一級培養(yǎng)是在24°C _26°C培養(yǎng)7-9天；所述的二級培養(yǎng)中 培養(yǎng)液是啤酒廢渣啤酒廢水的重量比為20 80 ；培養(yǎng)條件為24°C-26°C、PH 7-7.5，震 蕩培養(yǎng)7-9天；所述的三級培養(yǎng)是重量比為90%啤酒廢渣、氯化鈉和9%啤酒酵母泥培 養(yǎng)基，在濕度RH60-70培養(yǎng)10-12天。所述的步驟三中干燥方法為自然晾干或低于40°C低溫烘干。與已有技術相比，本發(fā)明有益效果體現(xiàn)在本發(fā)明的最大特點在于對啤酒廢渣中的營養(yǎng)成分的綜合利用，且由于采用三步法 培養(yǎng)，解決原本不適宜用在生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌劑的啤酒廢渣的問題。試驗表明，用此法生產(chǎn)的環(huán)鏈擬青霉菌劑，每克樣品含3X 108-9.5X 109孢子，按 照每平方米3克的使用量播撒到農(nóng)田中，可有效降低蟲口密度。環(huán)鏈擬青霉菌劑作為一種 新型生物防治菌劑，可用于溫帶，亞熱帶、熱帶田間和寒帶、溫帶，亞熱帶、熱帶的溫室或大 棚的農(nóng)作物害蟲防治中。有效的降低蟲口密度，提高農(nóng)作物產(chǎn)量，減少化學農(nóng)藥的使用，提 高農(nóng)產(chǎn)品在國際市場的競爭力。并用啤酒的廢料制造該菌劑，使廢料資源化，減少環(huán)境污染 壓力，提高啤酒廢渣利用率，增加其附加價值。下面通過具體實施例來進一步說明本發(fā)明。
具體實施例方式實施例1 用啤酒廢渣生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌劑將純化的環(huán)鏈擬青霉菌種接種到馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PDA斜面上，在 20-25 °C培養(yǎng)8天。用5克啤酒廢渣，95克啤酒廢水，鹽酸和氫氧化鈉調(diào)PH值至6. 5-7. 5，高 壓滅菌后接種一級培養(yǎng)的環(huán)鏈擬青霉，25°C培養(yǎng)8天。再取85克榨干的啤酒廢渣、5克廢酵 母泥提取物、1克氯化鈉和1克碳酸鈣接種等量二級培養(yǎng)物，于25°C培養(yǎng)10天，濕度RH50。 風干后成餅塊狀，干燥方法為自然晾干或低于40°C低溫烘干。稱取1克菌劑，于組織搗碎機內(nèi)加水攪散，定容至100ml，用血球計數(shù)板法計算得 出，每克含孢子3. 5X108個。實施例2 用啤酒廢渣生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌劑將純化的環(huán)鏈擬青霉菌種接種到馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PDA斜面上，在 20-25°C培養(yǎng)8天。用20克啤酒廢渣，80克啤酒廢水，鹽酸和氫氧化鈉調(diào)PH值至6. 5-7. 5， 高壓滅菌后接種一級培養(yǎng)的環(huán)鏈擬青霉，25°C培養(yǎng)8天。再取95克榨干的啤酒廢渣、15克廢 酵母泥提取物、1克氯化鈉和1克碳酸鈣接種等量二級培養(yǎng)物，于25°C培養(yǎng)10天濕度RH50。 風干后成餅塊狀。稱取1克菌劑，于組織搗碎機內(nèi)加水攪散，定容至100ml，用血球計數(shù)板法計算得 出，每克含孢子5. 5X109個。實施例3 用啤酒廢渣生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌劑將純化的環(huán)鏈擬青霉菌種接種到馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PDA斜面上，在20-25 °C培養(yǎng)8天。用25克啤酒廢渣、75克啤酒廢水，鹽酸和氫氧化鈉調(diào)PH值至6. 5-7. 5， 高壓滅菌后接種一級培養(yǎng)的環(huán)鏈擬青霉，25°C _26°C培養(yǎng)8天。再取85克榨干的啤酒廢渣、 15克廢酵母泥提取物、1克氯化鈉和2克碳酸鈣接種等量二級培養(yǎng)物，于25°C培養(yǎng)10天。 風干后成餅塊狀。稱取1克菌劑，于組織搗碎機內(nèi)加水攪散，定容至100ml，用血球計數(shù)板法計算得 出，每克含孢子8. 5X109個。實施例4 用啤酒廢渣生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌劑對蚜蟲的致病性試驗。用純化的環(huán)鏈擬青霉菌種集中到一級培養(yǎng)斜面，25°C培養(yǎng)7天，接種到二級培養(yǎng)， 再在25-27°C培養(yǎng)7天，接種到三級培養(yǎng)，26°C培養(yǎng)10天。風干后成餅狀。經(jīng)此培養(yǎng)后的1 克菌劑經(jīng)血球計數(shù)板計數(shù)，每克含菌劑孢子9 X109個。將本實施例的菌劑1克倒入適量的 0. 05%土溫-80溶液，震蕩后稀釋成各濃度備用。人工飼料飼養(yǎng)得到2、3、4齡幼蟲。準備新鮮的離體甘藍葉片，并以吸足標準十字 花科營養(yǎng)液的棉球包裹葉柄，將20°C下飼養(yǎng)10日齡的桃蚜無翅成蚜移到葉片上，繁殖24h 后移去，保留若蚜飼養(yǎng)至2，3，4齡時供生物測定。
擬青霉菌絲包圍的蟲數(shù)
致死率(％) =- X 100%
總蟲數(shù)摘取長有蚜蟲的甘藍葉柄用浸濕加營養(yǎng)液的脫脂棉球包裹葉柄，然后將葉片(葉 柄不浸入)浸入含有菌懸液的燒杯中2-3S立即取出，室溫下將蚜蟲和葉片晾干，置于鋪濾 紙的培養(yǎng)皿內(nèi)。每皿一片葉每片葉上15-40頭蟲，26°C恒溫培養(yǎng)。每3d給棉球加一次無菌 水，每日光照10h，鏡檢死亡率，連續(xù)8d。致死效果如表1所示。表一、環(huán)鏈擬青霉對不同蚜齡的蚜蟲致死率 本實驗表明，利用本實施例生產(chǎn)的環(huán)鏈擬青霉菌劑，對農(nóng)作物害蟲中為害較為嚴 重的蚜蟲防治效果較好，其致死率和校正致死率均較高。實施例5 環(huán)鏈擬青霉菌劑的田間防治試驗將通過實施例1或2或3生產(chǎn)的環(huán)鏈擬青霉菌劑，于田間取地頭土按照生防菌和 土重量比1 5進行混合，碾碎，于播種前1-2天犁耕后撒播于田間，能有效防治田間蚜蟲， 白粉虱、小菜蛾、菜青蟲等害蟲。利用此法進行田間防治，其防治效果可持續(xù)90天。實施例6 環(huán)鏈擬青霉菌劑的田間防治試驗將通過實施例1或2或3生產(chǎn)的環(huán)鏈擬青霉菌劑，碾碎后直接拌種，播撒至田間， 然后可直接進行其他標準的田間后續(xù)操作，本方法可有效防治地老虎等嚙根莖害蟲。
權利要求
一種用啤酒廢渣生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌劑的方法，包括如下步驟步驟一一級培養(yǎng)，用馬鈴薯 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PDA斜面上，裝成試管斜面，接種環(huán)鏈擬青霉菌種，在20 25℃培養(yǎng)7 14天；得到純種斜面培養(yǎng)物；步驟二二級培養(yǎng)，培養(yǎng)液按重量百分比計5 25％啤酒廢渣、75 95％啤酒廢水，配比混合，調(diào)PH值5 9；經(jīng)高壓滅菌后接種一級培養(yǎng)的純種斜面培養(yǎng)物，通氣震蕩培養(yǎng)，于在12 28℃下培養(yǎng)6 14天；得到純種液體培養(yǎng)物；步驟三三級培養(yǎng)，按重量百分比計，培養(yǎng)基組分為85 99％的啤酒廢渣、1 5％的氯化鈉、5 15％的廢酵母泥提取物與2％碳酸鈣混合，濕度在RH40 75之間，接種二級培養(yǎng)的純種液體培養(yǎng)物，于在12 28℃下培養(yǎng)6 14天；干燥后成為餅塊狀或顆粒狀固體培養(yǎng)物。
2.如權利要求1所述的用啤酒廢渣生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌劑的方法，其特征是所述的一 級培養(yǎng)是在24°C _26°C培養(yǎng)7-9天；所述的二級培養(yǎng)中培養(yǎng)液是啤酒廢渣啤酒廢水的重 量比為20 80;培養(yǎng)條件為24°C-26°C、PH 7-7. 5，震蕩培養(yǎng)7_9天；所述的三級培養(yǎng)是重 量比為90%啤酒廢渣、氯化鈉和9%啤酒酵母泥培養(yǎng)基，在濕度RH60-70培養(yǎng)10-12天。
3.如權利要求1或2所述的用啤酒廢渣生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌劑的方法，其特征是所述 的步驟三中干燥方法為自然晾干或低于40°C低溫烘干。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用啤酒廢渣生產(chǎn)環(huán)鏈擬青霉菌劑的方法，先將純化后的環(huán)鏈擬青霉菌種接種在真菌培養(yǎng)基斜面上，經(jīng)培養(yǎng)后再接種到由啤酒廢渣、啤酒廢水配成的液體培養(yǎng)基，震蕩培養(yǎng)擴繁后再接種到由啤酒廢渣為主要原料的固體培養(yǎng)基上，在12℃-28℃下培養(yǎng)6-14天，即得。制成的環(huán)鏈擬青霉固體菌劑作為一種殺蟲劑，可用于多種農(nóng)作物的害蟲防治。有效地降低蟲口密度，提高農(nóng)作物產(chǎn)量，減少化學農(nóng)藥的使用。并且用啤酒的廢料制造該菌劑，使廢料資源化，減少環(huán)境污染，提高啤酒廢渣利用率，增加其附加價值。
文檔編號A01N63/04GK101892161SQ20101016899
公開日2010年11月24日 申請日期2010年5月12日 優(yōu)先權日2010年5月12日
發(fā)明者吳衛(wèi)東, 張俊, 李豐伯, 杜繼龍, 魯超 申請人:黃山市迎客松生物科技有限公司;李豐伯