專利名稱：一種爪哇木棉種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及爪哇木棉的種植技術(shù)，尤其是一種直接誘導(dǎo)爪哇木棉種苗莖段產(chǎn)生不 定芽的方法。
背景技術(shù)：
爪哇木棉(Ceiba pentandra)，木棉科(Bombaceae)吉貝屬(Ceiba)，又名美洲木 棉。吉貝，原產(chǎn)熱帶美洲和東印度群島，現(xiàn)廣泛引種于東南亞及非洲熱帶地區(qū)，我國云南、 廣西、廣東、海南等熱帶地區(qū)也有栽培。喜光，喜暖熱氣候，耐熱不耐寒；對土壤要求不嚴(yán)， 耐瘠抗旱。落葉大喬木，高約30m，有大而輪生的側(cè)枝，幼枝平伸，有刺；掌狀復(fù)葉互生，小葉 5-9，長圓狀披針形；花多數(shù)簇生于上部葉腋，花瓣淡紅或黃白色，外面密被白色長柔毛，花 期3-4月。果內(nèi)棉毛可作枕、褥、救生圈等填充料。是木本纖維林發(fā)展的優(yōu)先樹種。育苗多 用種子繁殖，也可用扦插及嫁接法繁殖，但由于種子帶棉毛，常常隨風(fēng)飄散，很難收集，對用 實生苗繁殖苗木帶來一定困難。另外，實生苗的株高、樹型、花朵大小、花色等分化嚴(yán)重，亦 影響觀賞效果。采用組培技術(shù)可在短時間內(nèi)快速繁殖大量苗木，并能保證株型、花色等整齊 一致。爪哇木棉的兩大特點是(1)爪哇木棉纖維林培育具有可再生、負(fù)碳排放和不占用農(nóng) 地等特點，用爪哇木棉纖維取代化纖，可減少對石油的依賴，成為一種天然、可再生、負(fù)碳排 放(爪哇木棉林具有固碳功能)的可持續(xù)資源。由于爪哇木棉具有耐貧瘠、抗旱和固土功能 強等特點，可栽植于立地較差的荒山荒坡，因此爪哇木棉人工林種植不僅改善環(huán)境，而且不 占用農(nóng)地，這種天然可再生纖維的采用，可為我國石油能源安全和糧食安全提供支持。(2) 爪哇木棉纖維紡織具有極高的附加值，目前爪哇木棉纖維紡織技術(shù)屬首創(chuàng)。據(jù)研究，爪哇木 棉纖維不僅具有一般纖維的功能，還有驅(qū)螨、防蟲和保健等功能。在相關(guān)企業(yè)和研究機構(gòu)的 努力下，已經(jīng)開發(fā)出多種具有健身功能的爪哇木棉高端紡織品，爪哇木棉纖維紡織產(chǎn)業(yè)潛 力極大。爪哇木棉纖維林培育正在大力開發(fā)，而采用傳統(tǒng)的播種和扦插育苗方式繁殖效率 低，生長周期長，很難在短時間內(nèi)滿足爪哇木棉大面積推廣種植的需要。目前關(guān)于爪哇木棉 相對成熟的組織培養(yǎng)技術(shù)主要通過頂芽或腋芽誘導(dǎo)愈傷組織后再誘導(dǎo)出不定芽，但是這種 組培技術(shù)培育效率低，難以滿足爪哇木棉大規(guī)模種植需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的就是目前通過爪哇木棉頂芽或腋芽先誘導(dǎo)愈傷組織后再誘導(dǎo) 不定芽的組培技術(shù)培育效率低，難以滿足爪哇木棉大規(guī)模種植需求的問題，提供一種直接 通過離體種苗莖段誘導(dǎo)出不定芽的方法。本發(fā)明的一種爪哇木棉種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法，包括無菌苗的培育、 不定芽誘導(dǎo)、不定芽繼代增殖、不定芽生根以及煉苗移栽步驟，其特征在于所述的不定芽 誘導(dǎo)是通過將無菌苗幼嫩莖段切成數(shù)段，然后將莖段接種在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上產(chǎn)生不定 芽。所述的不定芽誘導(dǎo)是將無菌苗幼嫩莖段切成長為0. 5厘米的數(shù)段，平鋪后接種在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA0. 5mg/L+IBA0. lmg/L上，培養(yǎng)基內(nèi)加3 %蔗糖以及0. 9 %瓊 脂條，PH值為5.8，此期間內(nèi)培養(yǎng)室溫度需為22-28°C，每天光照時間12-14小時，光強為 2000-3000LUX，幼嫩莖段與培養(yǎng)基接觸的部位均形成微帶綠色的致密愈傷組織，數(shù)天培育 后產(chǎn)生大量的不定芽。所述的無菌苗的培育過程具體是將種子用流水沖洗1小時，放入60°C的溫水中浸 泡30分鐘，之后放入濃度為75%的酒精中消毒10秒鐘，再放入濃度為0. 的升汞中消毒 8分鐘或濃度為2%的次氯酸鈉中消毒10分鐘；用無菌水沖洗4-5次；然后將消毒后的種子 按3-5粒/瓶的密度放在初級培養(yǎng)基MS+6-BA0. 3mg/L上，培養(yǎng)基內(nèi)加3%蔗糖以及0. 9% 瓊脂條，PH值為5. 8，此期間內(nèi)培養(yǎng)室溫度需為22-28°C，每天光照時間12-14小時，光強為 2000-3000Lux,獲得無菌苗。所述的不定芽繼代增殖是將產(chǎn)生的不定芽小芽叢及周圍少量的愈傷切成1-2厘 米大小的塊后轉(zhuǎn)接到增殖與繼代培養(yǎng)基MS+6-BA0. 3mg/L+IBA0. 05mg/L上，培養(yǎng)基內(nèi)加3% 蔗糖以及0.9%瓊脂條，PH值為5. 8，此期間內(nèi)培養(yǎng)室溫度需為22-28°C，每天光照時間 12-14小時，光強為2000-3000Lux，增殖出原來4_5倍的不定芽。將多周期轉(zhuǎn)接后獲得的大量2厘米高的不定芽轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基上，所用生根培 養(yǎng)基配方為MS+IBA1. Omg/L，約14天后便開始生根。所述的不定芽生根是把轉(zhuǎn)接后獲得的大量2厘米高的不定芽切下轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng) 基MS+IBA1. Omg/L上，培養(yǎng)基內(nèi)加3%蔗糖以及1. 0%瓊脂條，PH值為5. 8，此期間內(nèi)培養(yǎng)室 溫度需為22-28°C，每天光照時間15小時，光強為3000-5000LUX，得到生根苗。所述的煉苗移栽是將生根苗在室溫中度過1. 5周進(jìn)行煉苗后放入0. 02mg/L NAA 的溶液浸泡1分鐘，移栽入混合基質(zhì)中，混合基質(zhì)由草炭、蛭石、珍珠巖和礦物質(zhì)構(gòu)成，草 炭、蛭石、珍珠巖和礦物質(zhì)按重量各占1/4。移栽后的爪哇木棉種苗只需正常的水、肥、藥管理，無需特別照顧，成活率就可達(dá) 90%以上。本發(fā)明的這種爪哇木棉種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法生產(chǎn)成本低，生產(chǎn)周期 短，操作流程簡單，爪哇木棉種子的出芽率可以達(dá)到95 %以上，移栽后成活率可達(dá)90 %以 上，能有效地滿足爪哇木棉大規(guī)模生產(chǎn)的需求，有利于推廣爪哇木棉種植產(chǎn)業(yè)。
具體實施例方式實施例1 爪哇木棉種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法，包括以下的培育步驟(1)無菌苗的培育選取當(dāng)年采集的爪哇木棉的飽滿種子，首先用流水沖洗種子1 小時，然后放入60°C的溫水中浸泡30分鐘，之后放入濃度75%的酒精中消毒10秒鐘，再放 入濃度0. 升汞中消毒8分鐘或濃度為2%的次氯酸鈉中消毒10分鐘，最后用無菌水沖 洗4-5次，通過對種子表皮進(jìn)行處理可以促進(jìn)種子發(fā)芽，提高發(fā)芽率。把消毒后的種子直接 接種在MS+6-BA0. 3mg/L初級培養(yǎng)基上，每瓶培養(yǎng)基接種3_5粒，放在光強2000_3000Lux、每 天光照時間12-14小時、溫度22-28°C的環(huán)境中，7天后種子開始萌發(fā)，14天后便可得到生長 健壯的無菌苗。(2)不定芽的誘導(dǎo)將無菌苗的幼嫩莖段切成0.5厘米長的數(shù)段，接種在 MS+6-BA0. 5mg/L+IBA0. lmg/L的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；10天后無菌苗與培養(yǎng)基接觸部位形成致密微帶綠色的愈傷組織，21天后開始產(chǎn)生大量的不定芽。(3)不定芽繼代增殖將不定芽小芽叢及周圍少量的愈傷組織切成1-2厘米大小 的塊狀后轉(zhuǎn)接到增殖與繼代培養(yǎng)基MS+6-BA0. 3mg/L+IBA0. 05mg/L上，20天后便可生成大 量的不定芽，且不定芽伸長明顯，增殖倍數(shù)可達(dá)4-5倍。(4)不定芽生根將經(jīng)過2-3次轉(zhuǎn)接后獲得的大量2厘米高的不定芽切下，轉(zhuǎn)至生 根培養(yǎng)基MS+IBA1. Omg/L上，14天后不定芽開始生根；(5)煉苗移栽把生根苗放在室溫下過渡1. 5周進(jìn)行煉苗，取出生根苗，洗凈沾附 在苗上的培養(yǎng)基，放入0. 02mg/LNAA的溶液中浸泡1分鐘，便可移栽到經(jīng)過滅菌的草炭、蛭 石、珍珠巖和礦物質(zhì)按重量各占1/4的混合基質(zhì)中，進(jìn)行正常苗木的水、肥、藥管理即可，成 活率可達(dá)90%以上。以上⑴ ⑷步驟中的培養(yǎng)基均需加3%蔗糖以及瓊脂條，瓊脂條除生根培養(yǎng)基 硬度為1.0%瓊脂條外，其余為0.9%瓊脂條，PH值為5. 8，便于幼嫩莖段和芽苗吸收營養(yǎng)。 此時(1) (3)步驟中需要的培育條件是光強2000-3000LUX，每天光照時間12-14小時， 溫度22-28°C。(4)步驟中需要的培育條件是光強3000-5000LUX，每天光照時間15小時， 溫度22-28°C。可以在一定程度上有效地減少愈傷組織的生成，利于苗木移栽成活。除以上方法外，還可以將消毒種子后得到的無菌苗，將其莖段轉(zhuǎn)至分化培養(yǎng)基上， 同樣也可以誘導(dǎo)出大量的不定芽。
權(quán)利要求
一種爪哇木棉種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法，包括無菌苗的培育、不定芽誘導(dǎo)、不定芽繼代增殖、不定芽生根以及煉苗移栽步驟，其特征在于所述的不定芽誘導(dǎo)是通過將無菌苗幼嫩莖段切成數(shù)段，然后將莖段接種在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上產(chǎn)生不定芽。
2.如權(quán)利要求1所述的一種爪哇木棉種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于 所述的不定芽誘導(dǎo)是將無菌苗幼嫩莖段切成長為0. 5厘米的數(shù)段，平鋪后接種在不定芽誘 導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA0. 5mg/L+IBA0. lmg/L上，培養(yǎng)基內(nèi)加3%蔗糖以及0. 9%瓊脂條，PH值為 5. 8，此期間內(nèi)培養(yǎng)室溫度需為22-28°C，每天光照時間12-14小時，光強為2000-3000Lux， 幼嫩莖段與培養(yǎng)基接觸的部位均形成微帶綠色的致密愈傷組織，數(shù)天培育后產(chǎn)生大量的不 定芽。
3.如權(quán)利要求1所述的一種爪哇木棉種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在 于所述的無菌苗的培育過程具體是將種子用流水沖洗1小時，放入60°C的溫水中浸泡30 分鐘，之后放入濃度為75%的酒精中消毒10秒鐘，再放入濃度為0. 的升汞中消毒8分 鐘或濃度為2%的次氯酸鈉中消毒10分鐘；用無菌水沖洗4-5次；然后將消毒后的種子按 3-5粒/瓶的密度放在初級培養(yǎng)基MS+6-BA0. 3mg/L上，培養(yǎng)基內(nèi)加3%蔗糖以及0. 9%瓊 脂條，PH值為5.8，此期間內(nèi)培養(yǎng)室溫度需為22-281，每天光照時間12-14小時，光強為 2000-3000Lux,獲得無菌苗。
4.如權(quán)利要求1所述的一種爪哇木棉種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于 所述的不定芽繼代增殖是將產(chǎn)生的不定芽小芽叢及周圍少量的愈傷組織切成1-2厘米大 小的塊后轉(zhuǎn)接到增殖與繼代培養(yǎng)基MS+6-BA0. 3mg/L+IBA0. 05mg/L上，培養(yǎng)基內(nèi)加3%蔗糖 以及0. 9%瓊脂條，PH值為5. 8，此期間內(nèi)培養(yǎng)室溫度需為22-28°C，每天光照時間12-14小 時，光強為2000-3000LUX，增殖出原來4_5倍的不定芽。
5.如權(quán)利要求1所述的一種爪哇木機種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征 在于所述的不定芽生根是把轉(zhuǎn)接后獲得的大量2厘米高的不定芽切下轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng)基 MS+IBA1. Omg/L上，培養(yǎng)基內(nèi)加3%蔗糖以及1. 0%瓊脂條，PH值為5. 8，此期間內(nèi)培養(yǎng)室溫 度需為22-28°C，每天光照時間15小時，光強為3000-5000LUX，得到生根苗。
6.如權(quán)利要求1所述的一種爪哇木棉種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于 所述的煉苗移栽是將生根苗在室溫中度過1. 5周進(jìn)行煉苗后放入0. 02mg/L NAA的溶液浸 泡1分鐘，移栽入混合基質(zhì)中，混合基質(zhì)由草炭、蛭石、珍珠巖和礦物質(zhì)構(gòu)成，草炭、蛭石、珍 珠巖和礦物質(zhì)按重量各占1/4。
全文摘要
一種爪哇木棉種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法，涉及爪哇木棉的種植技術(shù)，尤其是一種直接誘導(dǎo)爪哇木棉種苗莖段產(chǎn)生不定芽的方法。本發(fā)明的一種爪哇木棉種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法，包括無菌苗的培育、不定芽誘導(dǎo)、不定芽繼代增殖、不定芽生根以及煉苗移栽步驟，其特征在于所述的不定芽誘導(dǎo)是通過將無菌苗幼嫩莖段切成數(shù)段，然后將莖段接種在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上產(chǎn)生不定芽。本發(fā)明的這種爪哇木棉種苗莖段快速誘導(dǎo)再生植株的方法生產(chǎn)成本低，生產(chǎn)周期短，操作流程簡單，爪哇木棉種子的出芽率可以達(dá)到95％以上，移栽后成活率可達(dá)90％以上，能有效地滿足爪哇木棉大規(guī)模生產(chǎn)的需求，有利于推廣爪哇木棉種植產(chǎn)業(yè)。
文檔編號A01H4/00GK101828526SQ201010172359
公開日2010年9月15日 申請日期2010年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月14日
發(fā)明者伍建榕, 周紅芬, 唐軍榮, 汪洋, 馬煥成, 高峰 申請人:云南攀大木棉科技應(yīng)用有限公司