專利名稱：斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的組培方法，尤其是涉及一種斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
斑點(diǎn)大吳風(fēng)草為常綠多年生草本，根莖粗大，莖高30 70cm，葉多為基生，亮綠色，葉上密布星點(diǎn)狀黃斑，腎形，邊緣波角狀，頭狀花序組成松散復(fù)傘狀，黃色，晚秋開花，喜半陰和濕潤(rùn)環(huán)境；耐寒，在江南地區(qū)能露地越冬；怕陽光直射；對(duì)土壤適應(yīng)度較好，以肥沃疏松、排水好的壤土為宜。本品種在園林中廣泛應(yīng)用，多片植做林下地被，或叢植于花境或庭院，是優(yōu)秀的疏林地被植物，也是良好的花鏡與庭院材料。由于其為國外引進(jìn)的品種，引種數(shù)量較少，而且分株慢，導(dǎo)致種苗供應(yīng)受限制，無法滿足市場(chǎng)的需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種提高繁殖速度、 保持母本性狀的斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，其特征在于，該組織培養(yǎng)方法包括無菌處理、分化增殖、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)及煉苗移栽五個(gè)步驟，具體步驟如下所示(1)無菌處理將斑點(diǎn)吳風(fēng)草小芽用自來水沖洗池后于超凈工作臺(tái)上，依次采用濃度為75%的乙醇浸泡20-30s、l%。的升汞浸泡10-15min、無菌水沖洗5_6次并用無菌濾紙吸干表面水分，將小芽基部切成Icm長(zhǎng)度后接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為 24-260C，光照為70-90 μ mol/ms，進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；(2)分化增殖小芽接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后開始膨大并出現(xiàn)黃綠色突起，再培養(yǎng)2周后小芽長(zhǎng)勢(shì)明顯，繼續(xù)培養(yǎng)1個(gè)月，切下帶芽愈傷組織接種于增殖培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為M_26°C，光照為70-90 μ mol/ms，進(jìn)行增殖培養(yǎng)；(3)壯苗培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出叢生芽，每叢有2-3株可以伸長(zhǎng)，將其分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為M_26°C，光照為70-90ymol/mS，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，20天后可以長(zhǎng)到2-3cm ；(4)生根培養(yǎng)將壯苗培養(yǎng)基中的植株轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中控制培養(yǎng)溫度為 24-260C，光照為70-90 μ mol/ms,進(jìn)行生根培養(yǎng)，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基20天后出現(xiàn)眾多須根；(5)煉苗移栽生根培養(yǎng)25-30天，根系長(zhǎng)至l-2cm，選擇根系發(fā)達(dá)生長(zhǎng)健壯的無菌苗在室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂并在溫室中繼續(xù)馴化40-50天，將其可移栽室外即可。所述步驟(1)中芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA1. 0 5. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L。所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)選MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L0
所述步驟O)中增殖培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA1. 0 3. 0mg/L+NAA0. 1 0. 3mg/L。所述增殖培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)選MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L0所述步驟(3)中壯苗培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA0. 5 2. Omg/L+NAAO. 1 0. 2mg/L。所述壯苗培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)選MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L。所述步驟中生根培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+NAA0. 05 0. 2mg/L0所述生根培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)選MS+NAAO. lmg/L。所述的培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分包括蔗糖30g/L及瓊脂6g/L。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過使用組織培養(yǎng)技術(shù)，提高了植株的繁殖速度，從而能夠滿足市場(chǎng)需求，另外，本方法可以保持原有的母本性狀，植株的整齊度也較高。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例1斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，該組織培養(yǎng)方法包括無菌處理、分化增殖、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)及煉苗移栽五個(gè)步驟，具體步驟如下所示(1)無菌處理將斑點(diǎn)吳風(fēng)草小芽用自來水沖洗池后于超凈工作臺(tái)上，依次采用濃度為75%的乙醇浸泡20s、l%。的升汞浸泡IOmiru無菌水沖洗5次并用無菌濾紙吸干表面水分，將小芽基部切成Icm長(zhǎng)度后接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為M°C， 光照條件為70ymol/mS，培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分為蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，主要營(yíng)養(yǎng)成分為 MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L,培養(yǎng)基的 pH 值為 5. 6 ；(2)分化增殖小芽接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后開始膨大并出現(xiàn)黃綠色突起，再培養(yǎng)2周后小芽長(zhǎng)勢(shì)明顯，繼續(xù)培養(yǎng)1個(gè)月，切下帶芽愈傷組織接種于增殖培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為，光照條件為70 μ mol/ms,培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分為蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，主要營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L，培養(yǎng)基的pH值為5. 6，基部愈傷組織比較多， 但不影響不定芽的增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)壯苗培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出叢生芽，每叢有2株可以伸長(zhǎng)，其余處于矮化狀態(tài)，將其分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為，光照條件為 70 μ mol/ms,培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分為蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，主要營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA1. Omg/ L+NAA0. lmg/L,培養(yǎng)基的pH值為5. 6，20天后植株可以長(zhǎng)到2cm ；(4)生根培養(yǎng)將壯苗培養(yǎng)基中的植株轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根，控制培養(yǎng)溫度為，光照條件為70 μ mol/ms,培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分為蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，主要營(yíng)養(yǎng)成分為MS+NAAO. 05mg/L,培養(yǎng)基的pH值為5. 6，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基20天后出現(xiàn)眾多須根，根系粗壯，生根率接近100% ；(5)煉苗移栽生根培養(yǎng)25天，根系長(zhǎng)至1cm，選擇根系發(fā)達(dá)生長(zhǎng)健壯的無菌苗在室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂并在溫室中繼續(xù)馴化40天，將其可移栽室外即可， 移栽成活率接近95%。
實(shí)施例2斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，該組織培養(yǎng)方法包括無菌處理、分化增殖、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)及煉苗移栽五個(gè)步驟，具體步驟如下所示(1)無菌處理將斑點(diǎn)吳風(fēng)草小芽用自來水沖洗池后于超凈工作臺(tái)上，依次采用濃度為75wt%的乙醇浸泡30s、lwt%。的升汞浸泡15min、無菌水沖洗6次并用無菌濾紙吸干表面水分，將小芽基部切成Icm長(zhǎng)度后接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為25V， 光照條件為80 μ mol/ms,培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分為蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，主要營(yíng)養(yǎng)成分為 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L,培養(yǎng)基的 pH 值為 5. 8 ；(2)分化增殖小芽接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后開始膨大并出現(xiàn)黃綠色突起，再培養(yǎng)2周后小芽長(zhǎng)勢(shì)明顯，繼續(xù)培養(yǎng)1個(gè)月，切下帶芽愈傷組織接種于增殖培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為25V，光照條件為80 μ mol/ms,培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分為蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，主要營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L,培養(yǎng)基的pH值為5. 8，基部愈傷組織比較多， 但不影響不定芽的增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)壯苗培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出叢生芽，每叢有3株可以伸長(zhǎng)，其余處于矮化狀態(tài)，將其分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為25X，光照條件為 80 μ mol/ms,培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分為蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，主要營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA1. Omg/ L+NAA0. lmg/L,培養(yǎng)基的pH值為5. 8，20天后植株可以長(zhǎng)到3cm ；(4)生根培養(yǎng)將壯苗培養(yǎng)基中的植株轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根，控制培養(yǎng)溫度為25V，光照條件為80 μ mol/ms,培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分為蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，主要營(yíng)養(yǎng)成分為MS+NAA0. lmg/L，培養(yǎng)基的pH值為5. 8，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基20天后出現(xiàn)眾多須根，根系粗壯，生根率接近100% ；(5)煉苗移栽生根培養(yǎng)30天，根系長(zhǎng)至2cm，選擇根系發(fā)達(dá)生長(zhǎng)健壯的無菌苗在室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂并在溫室中繼續(xù)馴化50天，將其可移栽室外即可， 移栽成活率接近95%。實(shí)施例3斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，該組織培養(yǎng)方法包括無菌處理、分化增殖、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)及煉苗移栽五個(gè)步驟，具體步驟如下所示(1)無菌處理將斑點(diǎn)吳風(fēng)草小芽用自來水沖洗池后于超凈工作臺(tái)上，依次采用濃度為75%的乙醇浸泡30s、l%。的升汞浸泡15min、無菌水沖洗6次并用無菌濾紙吸干表面水分，將小芽基部切成Icm長(zhǎng)度后接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為^TC, 光照條件為100 μ mol/ms,培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分為蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，主要營(yíng)養(yǎng)成分為 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L,培養(yǎng)基的 pH 值為 5. 9 ；(2)分化增殖小芽接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后開始膨大并出現(xiàn)黃綠色突起，再培養(yǎng)2周后小芽長(zhǎng)勢(shì)明顯，繼續(xù)培養(yǎng)1個(gè)月，切下帶芽愈傷組織接種于增殖培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為26°C，光照條件為100 μ mol/ms,培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分為蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，主要營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L,培養(yǎng)基的pH值為5. 9，基部愈傷組織比較多， 但不影響不定芽的增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；
(3)壯苗培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出叢生芽，每叢有3株可以伸長(zhǎng)，其余處于矮化狀態(tài)，將其分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為26°C，光照條件為 100 μ mol/ms,培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分為蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，主要營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L,培養(yǎng)基的pH值為5. 9，20天后植株可以長(zhǎng)到3cm ；(4)生根培養(yǎng)將壯苗培養(yǎng)基中的植株轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根，控制培養(yǎng)溫度為26°C，光照條件為100 μ mol/ms,培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分為蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，主要營(yíng)養(yǎng)成分為MS+NAAO. ang/L，培養(yǎng)基的pH值為5. 9，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基20天后出現(xiàn)眾多須根，根系粗壯，生根率接近100% ；(5)煉苗移栽生根培養(yǎng)30天，根系長(zhǎng)至2cm，選擇根系發(fā)達(dá)生長(zhǎng)健壯的無菌苗在室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂并在溫室中繼續(xù)馴化50天，將其可移栽室外即可， 移栽成活率接近95%。
權(quán)利要求
1.斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，其特征在于，該組織培養(yǎng)方法包括無菌處理、分化增殖、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)及煉苗移栽五個(gè)步驟，具體步驟如下所示(1)無菌處理將斑點(diǎn)吳風(fēng)草小芽用自來水沖洗池后于超凈工作臺(tái)上，依次采用濃度為75%的乙醇浸泡20-30s、1%。的升汞浸泡10-15min、無菌水沖洗5_6次并用無菌濾紙吸干表面水分，將小芽基部切成Icm長(zhǎng)度后接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為M_26°C， 光照為70-90 μ mol/ms，進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；(2)分化增殖小芽接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后開始膨大并出現(xiàn)黃綠色突起，再培養(yǎng) 2周后小芽長(zhǎng)勢(shì)明顯，繼續(xù)培養(yǎng)1個(gè)月，切下帶芽愈傷組織接種于增殖培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為M_26°C，光照為70-90 μ mol/ms，進(jìn)行增殖培養(yǎng)；(3)壯苗培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出叢生芽，每叢有2-3株可以伸長(zhǎng)，將其分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為M_26°C，光照為70-90ymol/mS，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，20天后可以長(zhǎng)到2-3cm ；(4)生根培養(yǎng)將壯苗培養(yǎng)基中的植株轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中控制培養(yǎng)溫度為M_26°C， 光照為70-90 μ mol/ms，進(jìn)行生根培養(yǎng)，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基20天后出現(xiàn)眾多須根；(5)煉苗移栽生根培養(yǎng)25-30天，根系長(zhǎng)至l-2cm，選擇根系發(fā)達(dá)生長(zhǎng)健壯的無菌苗在室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂并在溫室中繼續(xù)馴化40-50天，將其可移栽室外即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(1)中芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA1. 0 5. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，其特征在于，所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)選 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟( 中增殖培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA1. 0 3. 0mg/L+NAA0. 1 0. 3mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，其特征在于，所述增殖培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)選 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟C3)中壯苗培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA0. 5 2. 0mg/L+NAA0. 1 0. 2mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，其特征在于，所述壯苗培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)選 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(4)中生根培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+NAA0. 05 0. 2mg/L0
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)選MS+NAA0. lmg/L。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的培養(yǎng)基的基準(zhǔn)成分包括蔗糖30g/L及瓊脂6g/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及斑點(diǎn)吳風(fēng)草的植株培養(yǎng)方法，該方法通過組織培養(yǎng)技術(shù)獲得斑點(diǎn)吳風(fēng)草植株，具體步驟包括無菌處理、分化增殖、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)及煉苗移栽。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過組織培養(yǎng)技術(shù)，提高了植株的繁殖速度，從而能夠滿足市場(chǎng)需求，另外，本方法可以保持原有的母本性狀，植株的整齊度也較高。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102273404SQ20101019678
公開日2011年12月14日 申請(qǐng)日期2010年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月9日
發(fā)明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請(qǐng)人:上海上房園藝有限公司