專利名稱：一種培育紅桿芋的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種草本植物的組織培養(yǎng)方法，尤其是涉及一種培育紅桿芋的方法。
背景技術(shù)：
紅桿芋Colocasia ‘Red Mem’，為多年生草本植物，株高50-60厘米。葉柄為紫紅色，為人工選育的優(yōu)良品種。紅桿芋性喜高溫多濕，適應(yīng)性強(qiáng)，可在岸邊、濕地種植，觀賞效果好。做為國外引進(jìn)的品種引種數(shù)量較少，其分株慢，市場需求量大，種苗供應(yīng)受限制。通過組培技術(shù)，極大提高繁殖速度和苗的整齊度，更好地保持原有的母本性狀。紅桿芋 Colocasia ‘Red Stem’在國內(nèi)的組培報道尚未見。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種可極大提高繁殖速度和苗的整齊度，更好地保持原有的母本性狀的一種培育紅桿芋的方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡20-40s，lwt%。的升汞溶液浸泡10-20min，經(jīng)無菌水沖洗5-6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖是小芽接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后，小芽基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養(yǎng)1個月，然后切下帶芽愈傷組織放入不定芽增殖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出的叢生芽，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基上，不定芽迅速伸長，20天后可以長成2-3cm的小植株；(4)生根培養(yǎng)取高度為2_3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)20-30天，根系長至l-2cm時，選擇根系發(fā)達(dá)生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可。所述的小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成分為MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L 或 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。所述的小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成分優(yōu)選MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。所述的增殖培養(yǎng)基的成分為MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L 或 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。所述的增殖培養(yǎng)基的成分優(yōu)選MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L0所述的壯苗培養(yǎng)基的成分為MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L 或 MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基的成分優(yōu)選MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L。所述的生根培養(yǎng)基的成分為MS+NAAO. 05mg/L、MS+NAA0. lmg/L 或 MS+NAAO. 2mg/L。
所述的生根培養(yǎng)基的成分優(yōu)選MS+NAAO. lmg/L。所述的小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，該培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度為2446°C，光照為70-90 μ mol/ms，pH值為 5. 5-6. O。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過組培技術(shù)，可大大提高繁殖速度和苗木的整齊度，更好地保持原有的母本性狀，并且能夠提高成活率，從而提高產(chǎn)量。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實施例1一種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌化處理春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡30s，Iwt%。的升汞溶液浸泡15min，經(jīng)無菌水沖洗5-6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA5. Omg/ L+NAAO. 5mg/L 上；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后，小芽基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養(yǎng)1個月后，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)基MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L進(jìn)行培養(yǎng)，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出叢生芽，叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基MS+6-BAlmg/L+NAA0. lmg/L上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養(yǎng)取高度為2-3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基MS+NAAO. lmg/L中誘導(dǎo)生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 100% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)25天，根系長至l-2cm時，選擇根系發(fā)達(dá)生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可，移栽成活率為95%。
實施例2一種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌化處理春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡20s，Iwt%。的升汞溶液浸泡lOmin，經(jīng)無菌水沖洗5-6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L 上；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后，小芽基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養(yǎng)1個月后，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)基MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L進(jìn)行培養(yǎng)，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出叢生芽，叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養(yǎng)取高度為2-3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基MS+NAAO. 05mg/L中誘導(dǎo)生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至2-3cm ；(5)煉苗與移栽繼續(xù)生根培養(yǎng)20天，根系長至l-2cm時，選擇根系發(fā)達(dá)生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可，移栽成活率為95%。實施例3一種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌化處理春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡40s，Iwt%。的升汞溶液浸泡20min，經(jīng)無菌水沖洗5_6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L 上；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后，小芽基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養(yǎng)1個月后，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)基MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L進(jìn)行培養(yǎng)，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出叢生芽，叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；
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(4)生根培養(yǎng)取高度為2-3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基MS+NAAO. 2mg/L中誘導(dǎo)生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至2-3cm ；(5)煉苗與移栽繼續(xù)生根培養(yǎng)30天，根系長至l-2cm時，選擇根系發(fā)達(dá)生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可，移栽成活率為95%。實施例4一種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌化處理春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡30s，Iwt%。的升汞溶液浸泡15min，經(jīng)無菌水沖洗5-6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L 上；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后，小芽基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養(yǎng)1個月后，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)基MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L進(jìn)行培養(yǎng)，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出叢生芽，叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養(yǎng)取高度為2-3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基MS+NAAO. lmg/L中誘導(dǎo)生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至2-3cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 100% ；(5)煉苗與移栽繼續(xù)生根培養(yǎng)25天，根系長至l-2cm時，選擇根系發(fā)達(dá)生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可，移栽成活率為95%。所述的小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基成分還包括蔗糖 30g/L、瓊脂6g/L，該培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度為M°C，光照為70μπιΟ1/πι8，ρΗ值為5. 5。實施例5—種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌化處理春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡20s，Iwt%。的升汞溶液浸泡lOmin，經(jīng)無菌水沖洗5-6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA 1. Omg/L+NAAO. lmg/L 上；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后，小芽基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養(yǎng)1個月后，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)基MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L進(jìn)行培養(yǎng)，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出叢生芽，叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養(yǎng)取高度為2-3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基MS+NAAO. 05mg/L中誘導(dǎo)生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至2-3cm ；(5)煉苗與移栽繼續(xù)生根培養(yǎng)20天，根系長至l-2cm時，選擇根系發(fā)達(dá)生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可，移栽成活率為95%。所述的小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基成分還包括蔗糖 30g/L、瓊脂6g/L，該培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度為25°C，光照為SOymol/ms，pH值為5. 8。實施例6一種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌化處理春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡40s，Iwt%。的升汞溶液浸泡20min，經(jīng)無菌水沖洗5_6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA5. Omg/ L+NAAO. 5mg/L 上；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后，小芽基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養(yǎng)1個月后，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)基MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L進(jìn)行培養(yǎng)，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出叢生芽，叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養(yǎng)取高度為2-3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基MS+NAAO. 2mg/L中誘導(dǎo)生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至2-3cm ；(5)煉苗與移栽
繼續(xù)生根培養(yǎng)30天，根系長至l-2cm時，選擇根系發(fā)達(dá)生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可，移栽成活率為95%。所述的小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基成分還包括蔗糖 30g/L、瓊脂6g/L，該培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度為^°C，光照為90μπιΟ1/πι8，ρΗ值為6. 0。
權(quán)利要求
1.一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得春天紅桿芋剛萌芽時挖取其基部小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用濃度為75wt%的乙醇浸泡20-40s，lwt%。的升汞溶液浸泡10-20min，經(jīng)無菌水沖洗5-6次后用無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成Icm長接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖是小芽接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后，小芽基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，培養(yǎng)1個月，然后切下帶芽愈傷組織放入不定芽增殖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出的叢生芽，將大叢芽分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基上，不定芽迅速伸長，20天后可以長成2-;3em的小植株；(4)生根培養(yǎng)取高度為2-3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)20-30天，根系長至l_2cm時，選擇根系發(fā)達(dá)生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成分為 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6_BA3. 0mg/L+NAA0. !3mg/L 或 MS+6-BA5. Omg/ L+NAA0. 5mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成分優(yōu)選 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的增殖培養(yǎng)基的成分為 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L 或 MS+6-BA3. Omg/ L+NAA0. 3mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的增殖培養(yǎng)基的成分優(yōu)選 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基的成分為 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L 或 MS+6-BA2. Omg/ L+NAA0. 2mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基的成分優(yōu)選 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基的成分為 MS+NAA0. 05mg/L、MS+NAA0. lmg/L 或 MS+NAA0. 2mg/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基的成分優(yōu)選 MS+NAA0. lmg/L ο
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種培育紅桿芋的方法，其特征在于，所述的小芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，該培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度為M_26°C，光照為70-90ymol/ms, pH值為5. 5-6. 0。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種培育紅桿芋的方法，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得；(2)芽的分化和增殖；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)；(4)生根培養(yǎng)；(5)煉苗與移栽。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過組培技術(shù)，可大大提高繁殖速度和苗木的整齊度，更好地保持原有的母本性狀，并且能夠提高成活率，從而提高產(chǎn)量，移栽成活率可達(dá)95％。
文檔編號A01H4/00GK102273406SQ20101020095
公開日2011年12月14日 申請日期2010年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月12日
發(fā)明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請人:上海上房園藝有限公司