專利名稱：哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座果的制劑的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物肥料領域，特別涉及哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座 果制劑的方法。
背景技術：
木霉(Trichoderma. Spp)屬于半知菌類的叢胞菌綱，叢梗孢目叢梗孢科，廣泛存 在于土壤、植物根圍、種子、葉緣和腐爛木材等生態(tài)環(huán)境中。出于木霉菌的廣泛適應性、廣譜 性及多機制性，根據(jù)本發(fā)明專利申請者長期研究結果表明，木霉不僅一直是植物病生防學 家研究重點對象，而且通過物理學方法有目的的改造(如N+束、紫外線、射線照射等技 術)，從腐爛木材分離篩選出的木霉突變株(H-13)?；瘜W肥料和有機農藥(含植物生長調節(jié)劑)對生態(tài)環(huán)境的污染，推動人們對農產 品安全性的重視。我國加入WT0后農產品的衛(wèi)生質量問題尤為突出。當前無公害農產品的 生產和消費熱潮正在興起，隨著化學物質在農業(yè)生產中的應用限制越來越嚴，對于農業(yè)生 產中發(fā)揮重要增產作用的植物生長促進劑無疑提出了更高的要求，各國研究者正在尋找天 然微生物肥料和生物源農藥?；瘜W肥料在使用過程中破壞了土壤結構和微生物生長環(huán)境， 影響土壤微生物對營養(yǎng)物質的分解與利用，不利于植物對營養(yǎng)物質的吸收。由木霉產生的 植物生長調節(jié)物質能促進作物生長，并能改善因長期使用化學肥料而使土壤結構破壞、污 染農產品及危害人畜的狀況，是化學合成調節(jié)劑的極具潛力的替代之一。

發(fā)明內容
為了彌補現(xiàn)有技術的缺點與不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種哈茨木霉固體 發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座果制劑的方法。本發(fā)明的另一目的在于提供一種上述方法制備的哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生 作物授粉和座果制劑。本發(fā)明的又一目的在于提供上述哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座果 制劑的應用。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案一種哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱 生作物授粉和座果的制劑的方法，包括以下操作步驟(1)配制固體培養(yǎng)基將質量百分數(shù)90%的曬干磨碎的甘蔗渣粉或秸稈粉，與質 量百分數(shù)2%的培養(yǎng)液混合拌勻，加入質量百分數(shù)5%的雞糞和質量百分數(shù)3%的蔗糖，加 水充分拌勻，控制濕度為70% 75%，于120 123°C高溫和1. 05 1. 35大氣壓條件下蒸 汽消毒40 60分鐘，得到固體培養(yǎng)基；(2)在固體培養(yǎng)基中以每升含19. 5 20. 5萬個孢子的量接種哈茨木霉H_13孢 子，充分拌勻，得到發(fā)酵基料；(3)將發(fā)酵基料蓋上塑料布，送入經過過濾的空氣中，在溫度26 30°C條件下，發(fā)
5酵5 7天，發(fā)酵過程中以每分鐘65 80rpm的攪拌速度進行翻動，每隔30分鐘 2小時 置換經過過濾的空氣，濕度保持在72 78% ；(4)打開塑料布，涼至室溫，通風干燥，使含水量降至質量百分含量10 15%，烘 干后，再粉碎成粒狀發(fā)酵物，得到促旱生作物授粉和座果的制劑。步驟(2)所述哈茨木霉H-13孢子的種子發(fā)酵液按如下方法配制配制液體PDA培養(yǎng)基，添加質量百分數(shù)1 % 5%木糖+蔗糖或纖維素二糖+葡萄 糖作為碳源，再添加質量百分數(shù)0. 2% 7%的畜禽血粉、質量體積比7. 5 19. Omg/L的 硼酸鈉、質量體積比20 30mg/L的硫酸鋅(ZnS04)、質量百分數(shù)0. 02% 0. 3%的磷酸二 氫鉀(KH2P04)、質量百分數(shù)0.05% 0.5%的磷酸氫二鉀(K2HP04)、質量百分數(shù)0.05% 0. 4%的硫酸鎂(MgS04)和水，混合拌勻，控制濕度為72% 78%，調pH至5. 7 6. 5后高 壓滅菌，得到液體培養(yǎng)液；按照每升液體培養(yǎng)液中接入9個直徑為9cm的培養(yǎng)皿的哈茨木霉 H-13孢子量的比例，接入哈茨木霉H-13孢子，發(fā)酵溫度設為25 40°C，發(fā)酵時間為5 7 天，得到種子發(fā)酵液；所述木糖+蔗糖中的木糖和蔗糖以質量比2 1混合；所述纖維素二 糖+葡萄糖中的纖維素二糖和葡萄糖以質量比21混合。步驟(2)所述哈茨木霉H-13孢子的種子發(fā)酵液優(yōu)選按如下方法配制配制液體PDA培養(yǎng)基，添加質量百分數(shù)2. 0% 4. 5%的木糖+蔗糖或纖維素二 糖+葡萄糖作為碳源，再添加質量百分數(shù)1. 5% 3. 5%的畜禽血粉、質量體積比8. 0 17. Omg/L的硼酸鈉、質量體積比20 30mg/L的硫酸鋅、質量百分數(shù)0. 02% 0. 2%的磷酸 二氫鉀、質量百分數(shù)0. 05 % 0. 1 %的磷酸氫二鉀、質量百分數(shù)0. 05 % 0. 4 %的硫酸鎂和 水，混合拌勻，控制濕度為72% 78%，調pH至6. 0 6. 2后高壓滅菌，得到液體培養(yǎng)液； 按照每升液體培養(yǎng)液中接入9個直徑為9cm的培養(yǎng)皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入 哈茨木霉H-13孢子，發(fā)酵溫度設為26 28°C，發(fā)酵時間為6 8天，得到種子發(fā)酵液；所 述木糖+蔗糖中的木糖和蔗糖以質量比2 1混合；所述纖維素二糖+葡萄糖中的纖維素 二糖和葡萄糖以質量比2 1混合。步驟(1)所述甘蔗渣粉或秸稈粉為180目；所述秸稈粉為玉米秸稈粉、黃豆秸稈 粉、高山野草秸稈粉或高粱秸稈粉；步驟(1)所述培養(yǎng)液由以下按質量百分數(shù)計的組分配制而成碳源粉 5%
畜禽血粉0. 2%--7%
硼酉堯鈉7. 5 19. Omg/L
硫酉堯鋅20 30mg/L
磷酉I二氫鉀0. 02% 0. 3%
磷酉I氫二鉀0. 05% 0. 5%
硫酉堯鎂0. 05% 0. 4%
水^^ 革:o步驟(1)所述培養(yǎng)液優(yōu)選由以下按質量百分數(shù)計的組分配制而成碳源粉2.0% 4. 5%畜禽血粉 1. 5 % 3. 5 %硼酸鈉8. 0 17. Omg/L
硫酸鋅20 30mg/L磷酸二氫鉀0. 02% 0. 2%磷酸氫二鉀 0. 05% 0. 1%硫酸鎂 0. 05% 0. 4%水 余重步驟(1)所述培養(yǎng)液更加優(yōu)選由以下按質量百分數(shù)計的組分配制而成碳源粉 3%畜禽血粉 2%硼酸鈉17. 2mg/L硫酸鋅25. lmg/L

磷酸二氫鉀0. 1% 磷酸氫二鉀0. 15% 硫酸鎂 0. 2%水余重所述碳源粉為馬鈴薯全粉、山芋全粉、麥麩水煎液溶解物或米糠水煎液溶解物； 所述畜禽血粉的制備按以下操作步驟將雞、鴨、鵝、豬或牛屠宰的鮮血經質量百分比濃度 為0. 3%的檸檬酸鈉抗凝后，虹吸法去血清，在血球沉淀物中加入60°C、占血球沉淀物體積 的10%的水破壞紅血球，再用醋酸或含醋酸質量百分比濃度15%的食用醋調pH至4. 6 4. 8，沉淀蛋白，用200 240目尼龍布過濾沉淀物，用沉淀物質量20 %的體積百分比濃度為 95%的酒精洗滌2 3次，然后在40 45°C烘干后磨成粉，得到畜禽血粉。所述碳源粉為麥麩水煎液溶解物時，麥麩水煎液溶解物的制備和加入按以下步 驟稱取33. 3 166. 5mg麥麩，以0. 5mg每毫升水的量加水煎煮得濾液，然后將濾液、畜禽 血粉、硼酸鈉、硫酸鋅、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂和水混合配制成培養(yǎng)液，培養(yǎng)液定 容為1升；所述碳源粉為米糠水煎液溶解物時，米糠水煎液溶解物的制備和加入按以下步 驟稱取33. 3 166. 5mg米糠，以0. 5mg每毫升水的量加水煎煮得濾液，然后將濾液、畜禽 血粉、硼酸鈉、硫酸鋅、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂和水混合配制成培養(yǎng)液，培養(yǎng)液定 容為1升。一種根據(jù)上述方法制備的促旱生作物授粉和座果的制劑。上述的促旱生作物授粉和座果的制劑應用于促進旱生作物及油茶早開花傳粉、提 高座果率和抗土傳病。可應用本發(fā)明中哈茨木霉H-13種子發(fā)酵液經發(fā)酵后的發(fā)酵液與已在作物種植拐 角所堆積并經發(fā)酵的雜草混合，使雜草堆保持30% 45%的濕度，蓋好雙層塑料布，四周 用碎石壓好，挖溝排水，密閉發(fā)酵4 5天后，翻堆，再發(fā)酵5天，即可掀開塑料布，取出發(fā)酵 物即為可就地使用的木霉促作物開花和座果率的有機肥。若有條件，可就地粉碎分級裝袋 制成有機農家肥。本發(fā)明制劑經蒸餾水浸提并提取出的發(fā)酵液經江蘇省疾病預防控制中心進行毒 性試驗(試驗編號20020571)，大鼠急性經口 LD50 > 4640mg/kg，屬低毒級。本發(fā)明制劑作為作物促授粉和座果率使用，作為基肥每畝40公斤施入作物基部，于開花前15天使用時與雜草混合埋于作物根下，上蓋表土 ；若土地較干，適量澆水；也可采 用重量比1 5自來水浸提后過濾，取濾液進行葉面噴施。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有如下的優(yōu)勢(1)本發(fā)明制劑原料來源廣，購買方便，價格低廉，對環(huán)境無公害，作為有機肥料既 能提高傳粉率和座果率，還使作物提前開花；特別是秋末冬初開花的油茶等，開花均在寒露 至小雪之后，傳粉昆蟲較少，影響產量；若于秋分前施用該肥料即可使開花時間提前15 20天，使畝產提高15%左右，甚至可翻一番；本制劑可使蔬菜增產20%，玉米增產15%，黃 瓜增產28%，水稻增產5. 3%，小麥在尿素對每畝耕地減少1/2量增施該固體肥料，小麥增 產10%以上，油茶現(xiàn)狀每畝增產一倍(長江以南原每畝20Kg，而沿江江南丘陵山區(qū)每畝僅 3_5kg)。(2)本發(fā)明固體培養(yǎng)基兼顧產孢量和菌絲體分解土壤基料能力作為自身生長的 基礎，培養(yǎng)基的玉米桿子、高粱稈、夏秋之交的雜草自發(fā)發(fā)酵物和甘蔗楂粉為最大的基礎基 質，不僅提供碳素和降解對象，起優(yōu)化土壤結構、抑制其它雜菌生長，而且保護自身菌落的 形成。(3)本發(fā)明制劑制備過程中具有氧氣分壓、空氣凈化和溫度最優(yōu)發(fā)酵條件，發(fā)酵效 果好。(4)孢子生成量與碳源種類緊密相關，而本發(fā)明采用經篩選的木糖/蔗糖或纖維 素二糖/葡萄糖為初始直接碳源，這兩個碳源的組合要以四種秸稈中的糖份種類而定，哪 種組分高，即那種組合；(5)本發(fā)明選取芳香味，同時含微量元素較高的雞糞、鴨糞，以改善環(huán)境，防止惡臭。(6)本發(fā)明制劑活性穩(wěn)定，若在0 5°C保藏一年，其活性仍可保持95%以上，并對 土傳病相關菌物有較強防治作用。
具體實施例方式下面結合具體的實例對本發(fā)明作進一步詳細的敘述，但本發(fā)明的實施方法靈活， 不僅僅限于此例所述的具體操作方式。實施例1(1)配制固體培養(yǎng)基將質量百分數(shù)90%的曬干磨碎的甘蔗渣粉或秸稈粉，與質 量百分數(shù)2%的培養(yǎng)液混合拌勻，加入質量百分數(shù)5%的雞糞和質量百分數(shù)3%的蔗糖，加 水充分拌勻，控制濕度為75%，于122°C高溫和1. 25大氣壓條件下蒸汽消毒45分鐘，得到
固體培養(yǎng)基；
所述培養(yǎng)液由以下按質量百分數(shù)計的組分配制而成
馬鈴薯全粉1%
畜禽血粉7%
硼酸鈉7. 5mg/L
硫酸醉25mg/L
磷酸B 二氫鉀0. 02%
磷酸B氫二鉀0. 05%
硫酸鎂0.4%水余重；所述畜禽血粉的制備按以下操作步驟將雞屠宰的鮮血經質量百分比濃度為 0. 3 %的檸檬酸鈉抗凝后，虹吸法去血清，在血球沉淀物中加入60°C、占血球沉淀物體積的 10%的水破壞紅血球，再用醋酸或含醋酸質量百分比濃度15%的食用醋調pH至4. 8，沉淀 蛋白，用210目尼龍布過濾沉淀物，用沉淀物質量20%的體積百分比濃度為95%的酒精洗 滌2次，然后在43°C烘干后磨成粉，得到畜禽血粉。(2)在固體培養(yǎng)基中以每升含19. 5萬個孢子的量接種哈茨木霉H-13孢子，充分拌 勻，得到發(fā)酵基料；所述哈茨木霉H-13孢子的種子發(fā)酵液按如下方法配制配制液體PDA培養(yǎng)基，添加質量百分數(shù) 5%木糖+蔗糖作為碳源，再添加質 量百分數(shù)0. 2% 7%的畜禽血粉、質量體積比7. 5 19. Omg/L的硼酸鈉、質量體積比20 30mg/L的硫酸鋅(ZnS04)、質量百分數(shù)0. 02% 0. 3%的磷酸二氫鉀(KH2P04)、質量百分數(shù) 0. 05% 0. 5%的磷酸氫二鉀(K2HP04)和質量百分數(shù)0. 05% 0. 4%的硫酸鎂(MgS04)，余 量加水，混合拌勻，控制濕度為72%，調pH至5. 7后高壓滅菌，得到液體培養(yǎng)液；按照每升 液體培養(yǎng)液中接入9個直徑為9cm的培養(yǎng)皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入哈茨木霉 H-13孢子，發(fā)酵溫度設為25°C，發(fā)酵時間為7天，得到種子發(fā)酵液；所述木糖+蔗糖中的木 糖和蔗糖以質量比2 1混合。(3)將發(fā)酵基料蓋上塑料布，送入經過過濾的空氣中，在溫度29°C條件下，發(fā)酵7 天，發(fā)酵過程中以每分鐘70rpm的攪拌速度進行翻動，每隔30分鐘置換經過過濾的空氣，濕 度保持在73%。(4)打開塑料布，涼至室溫，通風干燥，使含水量降至質量百分含量14%，烘干后， 再粉碎成粒狀發(fā)酵物，得到促旱生作物授粉和座果的制劑。實施例2(1)配制固體培養(yǎng)基將質量百分數(shù)90%的曬干磨碎的甘蔗渣粉或秸稈粉，與質 量百分數(shù)2%的培養(yǎng)液混合拌勻，加入質量百分數(shù)5%的雞糞和質量百分數(shù)3%的蔗糖，加 水充分拌勻，控制濕度為70%，于121°C高溫和1. 15大氣壓條件下蒸汽消毒50分鐘，得到 固體培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)液由以下按質量百分數(shù)計的組分配制而成山芋全粉3%
畜禽血粉2%
硼酉堯鈉17. 2mg/L
硫酉堯鋅25. lmg/L
磷酉I二氫鉀0. 1%
磷酉I氫二鉀0. 15%
硫酉堯鎂0. 2%
水余重； 所述畜禽血粉的制備按以下操作步驟將雞、鴨、鵝、豬或牛屠宰的鮮血經質量百 分比濃度為0. 3%的檸檬酸鈉抗凝后，虹吸法去血清，在血球沉淀物中加入60°C、占血球沉 淀物體積的10%的水破壞紅血球，再用醋酸或含醋酸質量百分比濃度15%的食用醋調pH至4. 6，沉淀蛋白，用220目尼龍布過濾沉淀物，用沉淀物質量20%的體積百分比濃度為 95%的酒精洗滌2次，然后在43°C烘干后磨成粉，得到畜禽血粉。(2)在固體培養(yǎng)基中以每升含20. 5萬個孢子的量接種哈茨木霉H-13孢子，充分拌 勻，得到發(fā)酵基料；所述哈茨木霉H-13孢子的種子發(fā)酵液按如下方法配制配制液體PDA培養(yǎng)基，添加質量百分數(shù) 5%纖維素二糖+葡萄糖作為碳源， 再添加質量百分數(shù)0. 2% 7%的畜禽血粉、質量體積比7. 5 19. Omg/L的硼酸鈉、質量體 積比20 30mg/L的硫酸鋅(ZnS04)、質量百分數(shù)0. 02%~ 0. 3%的磷酸二氫鉀(KH2P04)、 質量百分數(shù)0. 05% 0. 5%的磷酸氫二鉀(K2HP04)和質量百分數(shù)0. 05% 0. 4%的硫酸鎂 (MgS04)，余量加水，混合拌勻，控制濕度為78%，調pH至6. 5后高壓滅菌，得到液體培養(yǎng)液； 按照每升液體培養(yǎng)液中接入9個直徑為9cm的培養(yǎng)皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入 哈茨木霉H-13孢子，發(fā)酵溫度設為40°C，發(fā)酵時間為5天，得到種子發(fā)酵液；所述纖維素二 糖+葡萄糖中的纖維素二糖和葡萄糖以質量比21混合。(3)將發(fā)酵基料蓋上塑料布，送入經過過濾的空氣中，在溫度28°C條件下，發(fā)酵6 天，發(fā)酵過程中以每分鐘75rpm的攪拌速度進行翻動，每隔2小時置換經過過濾的空氣，濕 度保持在78%。(4)打開塑料布，涼至室溫，通風干燥，使含水量降至質量百分含量12%，烘干后， 再粉碎成粒狀發(fā)酵物，得到促旱生作物授粉和座果的制劑。實施例3(1)配制固體培養(yǎng)基將質量百分數(shù)90%的曬干磨碎的甘蔗渣粉或秸稈粉，與質 量百分數(shù)2%的培養(yǎng)液混合拌勻，加入質量百分數(shù)5%的雞糞和質量百分數(shù)3%的蔗糖，加 水充分拌勻，控制濕度為72%，于123°C高溫和1. 35大氣壓條件下蒸汽消毒40分鐘，得到 固體培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)液由以下按質量百分數(shù)計的組分配制而成麥麩水煎液溶解物3%畜禽血粉0.2%硼酸鈉19. Omg/L硫酸鋅30mg/L磷酸二氫鉀0.3%磷酸氫二鉀0.5%硫酸鎂0.05%水 余重；所述畜禽血粉的制備按以下操作步驟將雞、鴨、鵝、豬或牛屠宰的鮮血經質量百 分比濃度為0. 3%的檸檬酸鈉抗凝后，虹吸法去血清，在血球沉淀物中加入60°C、占血球沉 淀物體積的10%的水破壞紅血球，再用醋酸或含醋酸質量百分比濃度15%的食用醋調pH 至4. 7，沉淀蛋白，用240目尼龍布過濾沉淀物，用沉淀物質量20%的體積百分比濃度為 95%的酒精洗滌2次，然后在45°C烘干后磨成粉，得到畜禽血粉；所述碳源粉為麥麩水煎液溶解物時，麥麩水煎液溶解物的制備和加入按以下步 驟稱取lOOmg麥麩，以0. 5mg每毫升水的量加水煎煮得濾液，然后將濾液、畜禽血粉、硼酸 鈉、硫酸鋅、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂和水混合配制成培養(yǎng)液，培養(yǎng)液定容為1升。
(2)在固體培養(yǎng)基中以每升含20萬個孢子的量接種哈茨木霉H-13孢子，充分拌 勻，得到發(fā)酵基料；所述哈茨木霉H-13孢子的種子發(fā)酵液按如下方法配制配制液體PDA培養(yǎng)基，添加質量百分數(shù)1 % 5%纖維素二糖+葡萄糖作為碳源， 再添加質量百分數(shù)0. 2% 7%的畜禽血粉、質量體積比7. 5 19. Omg/L的硼酸鈉、質量體 積比20 30mg/L的硫酸鋅(ZnSO4)、質量百分數(shù)0. 02% 0. 3%的磷酸二氫鉀(KH2PO4)、 質量百分數(shù)0. 05% 0. 5%的磷酸氫二鉀(K2HPO4)和質量百分數(shù)0. 05% 0. 4%的硫酸鎂 (MgSO4)，余量加水，混合拌勻，控制濕度為75%，調pH至6. O后高壓滅菌，得到液體培養(yǎng)液； 按照每升液體培養(yǎng)液中接入9個直徑為9cm的培養(yǎng)皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入 哈茨木霉H-13孢子，發(fā)酵溫度設為30°C，發(fā)酵時間為6天，得到種子發(fā)酵液；所述纖維素二 糖+葡萄糖中的纖維素二糖和葡萄糖以質量比21混合。(3)將發(fā)酵基料蓋上塑料布，送入經 過過濾的空氣中，在溫度30 0C條件下，發(fā)酵5 天，發(fā)酵過程中以每分鐘SOrpm的攪拌速度進行翻動，每隔30分鐘置換經過過濾的空氣，濕 度保持在75%。(4)打開塑料布，涼至室溫，通風干燥，使含水量降至質量百分含量15%，烘干后， 再粉碎成粒狀發(fā)酵物，得到促旱生作物授粉和座果的制劑。實施例4(1)配制固體培養(yǎng)基將質量百分數(shù)90%的曬干磨碎的甘蔗渣粉或秸稈粉，與質 量百分數(shù)2%的培養(yǎng)液混合拌勻，加入質量百分數(shù)5%的雞糞和質量百分數(shù)3%的蔗糖，力口 水充分拌勻，控制濕度為75%，于120°C高溫和1. 05大氣壓條件下蒸汽消毒60分鐘，得到 固體培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)液由以下按質量百分數(shù)計的組分配制而成米糠水煎液溶解物5%畜禽血粉5%硼酸鈉9.5mg/L硫酸鋅22mg/L磷酸二氫鉀0.1%磷酸氫二鉀0.4%硫酸鎂0.2%水余重；所述畜禽血粉的制備按以下操作步驟將雞、鴨、鵝、豬或牛屠宰的鮮血經質量百 分比濃度為0. 3%的檸檬酸鈉抗凝后，虹吸法去血清，在血球沉淀物中加入60°C、占血球沉 淀物體積的10%的水破壞紅血球，再用醋酸或含醋酸質量百分比濃度15%的食用醋調pH 至4. 6，沉淀蛋白，用200目尼龍布過濾沉淀物，用沉淀物質量20%的體積百分比濃度為 95%的酒精洗滌2次，然后在40°C烘干后磨成粉，得到畜禽血粉；所述碳源粉為米糠水煎液溶解物時，米糠水煎液溶解物的制備和加入按以下步 驟稱取166. 5mg米糠，以0. 5mg每毫升水的量加水煎煮得濾液，然后將濾液、畜禽血粉、 硼酸鈉、硫酸鋅、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂和水混合配制成培養(yǎng)液，培養(yǎng)液定容為1 升。(2)在固體培養(yǎng)基中以每升含19. 5萬個孢子的量接種哈茨木霉H-13孢子，充分拌勻，得到發(fā)酵基料；所述哈茨木霉H-13孢子的種子發(fā)酵液按如下方法配制配制液體PDA培養(yǎng)基，添加質量百分數(shù) 5%木糖+蔗糖作為碳源，再添加質量百分數(shù)0. 2% 7%的畜禽血粉、質量體積比7. 5 19. Omg/L的硼酸鈉、質量體積比20 30mg/L的硫酸鋅(ZnSO4)、質量百分數(shù)0. 02% 0. 3%的磷酸二氫鉀(KH2PO4)、質量百分數(shù) 0. 05% 0. 5%的磷酸氫二鉀(K2HPO4)和質量百分數(shù)0. 05% 0. 4%的硫酸鎂(MgSO4)，余 量加水，混合拌勻，控制濕度為76%，調pH至5. 9后高壓滅菌，得到液體培養(yǎng)液；按照每升 液體培養(yǎng)液中接入9個直徑為9cm的培養(yǎng)皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入哈茨木霉 H-13孢子，發(fā)酵溫度設為35°C，發(fā)酵時間為6天，得到種子發(fā)酵液；所述木糖+蔗糖中的木 糖和蔗糖以質量比2 1混合。(3)將發(fā)酵基料蓋上塑料布，送入經過過濾的空氣中，在溫度26°C條件下，發(fā)酵7 天，發(fā)酵過程中以每分鐘65rpm的攪拌速度進行翻動，每隔1小時置換經過過濾的空氣，濕 度保持在78%。(4)打開塑料布，涼至室溫，通風干燥，使含水量降至質量百分含量10%，烘干后， 再粉碎成粒狀發(fā)酵物，得到促旱生作物授粉和座果的制劑。上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內。
權利要求
一種哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座果的制劑的方法，其特征在于包括以下操作步驟(1)配制固體培養(yǎng)基將質量百分數(shù)90％的曬干磨碎的甘蔗渣粉或秸稈粉，與質量百分數(shù)2％的培養(yǎng)液混合拌勻，加入質量百分數(shù)5％的雞糞和質量百分數(shù)3％的蔗糖，加水充分拌勻，控制濕度為70％～75％，于120～123℃高溫和1.05～1.35大氣壓條件下蒸汽消毒40～60分鐘，得到固體培養(yǎng)基；(2)在固體培養(yǎng)基中以每升含19.5～20.5萬個孢子的量接種哈茨木霉H-13孢子，充分拌勻，得到發(fā)酵基料；(3)將發(fā)酵基料蓋上塑料布，送入經過過濾的空氣中，在溫度26～30℃條件下，發(fā)酵5～7天，發(fā)酵過程中以每分鐘65～80rpm的攪拌速度進行翻動，每隔30分鐘～2小時置換經過過濾的空氣，濕度保持在72～78％；(4)打開塑料布，涼至室溫，通風干燥，使含水量降至質量百分含量10～15％，烘干后，再粉碎成粒狀發(fā)酵物，得到促旱生作物授粉和座果的制劑。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座果的制劑 的方法，其特征在于步驟(2)所述哈茨木霉H-13孢子的種子發(fā)酵液按如下方法配制配制液體PDA培養(yǎng)基，添加質量百分數(shù)1 % 5 %木糖+蔗糖或纖維素二糖+葡萄糖 作為碳源，再添加質量百分數(shù)0. 2% 7%的畜禽血粉、質量體積比7. 5 19. Omg/L的硼酸 鈉、質量體積比20 30mg/L的硫酸鋅、質量百分數(shù)0. 02% 0. 3%的磷酸二氫鉀、質量百 分數(shù)0. 05% 0. 5%的磷酸氫二鉀和質量百分數(shù)0. 05% 0. 4%的硫酸鎂，余量加水，混合 拌勻，控制濕度為72% 78%，調pH至5. 7 6. 5后高壓滅菌，得到液體培養(yǎng)液；按照每升 液體培養(yǎng)液中接入9個直徑為9cm的培養(yǎng)皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入哈茨木霉 H-13孢子，發(fā)酵溫度設為25 40°C，發(fā)酵時間為5 7天，得到種子發(fā)酵液；所述木糖+蔗 糖中的木糖和蔗糖以質量比2 1混合；所述纖維素二糖+葡萄糖中的纖維素二糖和葡萄 糖以質量比2 1混合。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座果的制劑 的方法，其特征在于步驟(2)所述哈茨木霉H-13孢子的種子發(fā)酵液按如下方法配制配制液體PDA培養(yǎng)基，添加質量百分數(shù)2. 0 % 4. 5 %的木糖+蔗糖或纖維素二糖+葡 萄糖作為碳源，再添加質量百分數(shù)1. 5% 3. 5%的畜禽血粉、質量體積比8. 0 17. Omg/L 的硼酸鈉、質量體積比20 30mg/L的硫酸鋅、質量百分數(shù)0. 02% 0. 2%的磷酸二氫鉀、 質量百分數(shù)0. 05% 0. 的磷酸氫二鉀、質量百分數(shù)0. 05% 0. 4%的硫酸鎂和水，混合 拌勻，控制濕度為72 % 78 %，調pH至6. 0 6. 2后高壓滅菌，得到液體培養(yǎng)液；按照每升 液體培養(yǎng)液中接入9個直徑為9cm的培養(yǎng)皿的哈茨木霉H-13孢子量的比例，接入哈茨木霉 H-13孢子，發(fā)酵溫度設為26 28°C，發(fā)酵時間為6 8天，得到種子發(fā)酵液；所述木糖+蔗 糖中的木糖和蔗糖以質量比2 1混合；所述纖維素二糖+葡萄糖中的纖維素二糖和葡萄 糖以質量比2 1混合。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座果的制劑 的方法，其特征在于步驟(1)所述甘蔗渣粉或秸稈粉為180目；所述秸稈粉為玉米秸稈 粉、黃豆秸稈粉、高山野草秸稈粉或高粱秸稈粉；步驟(1)所述培養(yǎng)液由以下按質量百分數(shù)計的組分配制而成碳源粉 5%畜禽血粉 0.2% 7% 硼酸鈉 7. 5 19. Omg/L 硫酸鋅 20 30mg/L 磷酸二氫鉀 0.02% 0.3% 磷酸氫二鉀 0. 05 % 0. 5 % 硫酸鎂 0.05% 0.4% 水余重。
5.根據(jù)權利要求4所述的一種哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座果的制劑 的方法，其特征在于步驟(1)所述培養(yǎng)液由以下按質量百分數(shù)計的組分配制而成碳源粉 2.0% 4. 5% 畜禽血粉 1.5% 3. 5% 硼酸鈉8. 0 17. Omg/L硫酸鋅20 30mg/L磷酸二氫鉀 0.02% 0.2% 磷酸氫二鉀 0.05% 0.1% 硫酸鎂0.05% 0.4%水余重。
6.根據(jù)權利要求4所述的一種哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座果的制劑 的方法，其特征在于步驟(1)所述培養(yǎng)液由以下按質量百分數(shù)計的組分配制而成碳源粉3%畜禽血粉 2% 硼酸鈉17. 2mg/L硫酸鋅25. lmg/L磷酸二氫鉀 0.1% 磷酸氫二鉀 0. 15% 硫酸鎂0.2%水余重。
7.根據(jù)權利要求4 6任一項所述的一種哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座 果的制劑的方法，其特征在于所述碳源粉為馬鈴薯全粉、山芋全粉、麥麩水煎液溶解物或米糠水煎液溶解物； 所述畜禽血粉的制備按以下操作步驟將雞、鴨、鵝、豬或牛屠宰的鮮血經質量百分比 濃度為0. 3%的檸檬酸鈉抗凝后，虹吸法去血清，在血球沉淀物中加入60°C、占血球沉淀 物體積的10%的水破壞紅血球，再用醋酸或含醋酸質量百分比濃度15%的食用醋調pH至 4. 6 4. 8，沉淀蛋白，用200 240目尼龍布過濾沉淀物，用沉淀物質量20%的體積百分比 濃度為95%的酒精洗滌2 3次，然后在40 45°C烘干后磨成粉，得到畜禽血粉。
8.根據(jù)權利要求4所述的一種哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座果的制劑 的方法，其特征在于所述碳源粉為麥麩水煎液溶解物時，麥麩水煎液溶解物的制備和加入按以下步驟稱取33. 3 166. 5mg麥麩，以0. 5mg每毫升水的量加水煎煮得濾液，然后將濾液、畜禽血粉、 硼酸鈉、硫酸鋅、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂和水混合配制成培養(yǎng)液，培養(yǎng)液定容為1 升；所述碳源粉為米糠水煎液溶解物時，米糠水煎液溶解物的制備和加入按以下步驟稱 取33. 3 166. 5mg米糠，以0. 5mg每毫升水的量加水煎煮得濾液，然后將濾液、畜禽血粉、 硼酸鈉、硫酸鋅、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂和水混合配制成培養(yǎng)液，培養(yǎng)液定容為1升。
9.一種根據(jù)權利要求1 7任一項所述方法制備的促旱生作物授粉和座果的制劑。
10.根據(jù)權利要求9所述的促旱生作物授粉和座果的制劑應用于促進旱生作物及油茶 早開花傳粉、提高座果率和抗土傳病。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種哈茨木霉固體發(fā)酵制造促旱生作物授粉和座果的制劑及其方法和應用。該方法的步驟包括(1)配制固體培養(yǎng)基；(2)在培養(yǎng)基中接種哈茨木霉孢子，拌勻得到發(fā)酵基料；(3)將發(fā)酵基料蓋上塑料布，再輸入經過過濾的空氣，于26～30℃下發(fā)酵5～7天，發(fā)酵過程中進行翻動，定時置換過濾空氣，濕度保持在72～78％；(4)打開塑料布，涼至室溫，通風干燥，使含水量降至10～15％后烘干粉碎成粒狀發(fā)酵物，即得到促旱生作物授粉和座果的有機肥料。該制劑可使蔬菜增產20％，玉米增產15％，黃瓜增產28％，水稻增產5.3％，在每畝耕地尿素施用量減半時增施該固體肥料，能使小麥增產10％以上，油茶現(xiàn)狀每畝增產一倍。
文檔編號C05F17/00GK101870596SQ201010201299
公開日2010年10月27日 申請日期2010年6月12日 優(yōu)先權日2010年6月12日
發(fā)明者羅曼, 蔣立科 申請人:暨南大學