專利名稱：促進(jìn)甘薯種質(zhì)資源間基因交流的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種種子改良技術(shù)，具體是一種促進(jìn)甘薯種質(zhì)資源間基因交流的方法。
背景技術(shù)：
甘薯作為重要的飼料、加工、糧食及生物能源作物，并具有高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、適應(yīng)性廣、 抗病性強(qiáng)的特點(diǎn)，目前在我國仍然是廣泛種植的主要作物之一。由于我國不是甘薯起源中 心，甘薯資源比較匱乏，優(yōu)良新品種的選育要求有豐富的優(yōu)異種質(zhì)資源，種質(zhì)的創(chuàng)新與利用 是育種的基礎(chǔ)。目前甘薯種質(zhì)創(chuàng)新主要采用有性雜交、遺傳轉(zhuǎn)化、體細(xì)胞雜交、誘變等；由于 甘薯通常情況下自交不親和、部分種間雜交不親和、甚至同群內(nèi)品種間雜交不親和和結(jié)實(shí) 率低、基因型依賴性等原因，一定程度上延緩了甘薯遺傳改良。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種促進(jìn)甘薯種質(zhì)資源間基因交流的方法，打破種間及不親和群品種 間雜交障礙，具有操作方便快捷，為甘薯種質(zhì)創(chuàng)新提供新的技術(shù)方法，加快甘薯遺傳改良。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種促進(jìn)甘薯種質(zhì)資源間基因交流的方法， 其特征是通過甘薯組織培養(yǎng)獲得供體和受體植株；將供體和受體植株在離體、無菌條件 下，進(jìn)行無性嫁接，促使甘薯品種間基因滲透，創(chuàng)新甘薯種質(zhì)，為甘薯種間及不同不親和群 品種間基因交流，進(jìn)而創(chuàng)新及豐富甘薯種質(zhì)資源。所述的通過甘薯組織培養(yǎng)獲得供體和受體植株是通過莖尖分生組織培養(yǎng)基莖尖 分生組織培養(yǎng)，得到再生嫁接所需的供體和受體植株。所述的供體和受體植株在離體、無菌條件下進(jìn)行無性嫁接，是將粗細(xì)程度比較相 近的供體和受體植株，在超凈工作臺(tái)即無菌條件下，切取接穗植株2-3節(jié)，切口呈契型；砧 木材料去所有葉片和萌發(fā)的腋芽，接口處從中間劈開，然后將接穗插入，用無菌Parafilm 對(duì)嫁接傷口進(jìn)行包裹，完成嫁接的植株接種在MS固體培養(yǎng)基中，嫁接后20-30天，將嫁接成 活植株，自接口部位切開，去掉接口處0. 5-lcm莖段，將接穗和砧木分別接種在MS固體培養(yǎng) 基中。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明主要是利用供體和受體試管組培培養(yǎng)植株，在離體、 無菌條件下，通過無性嫁接，促進(jìn)甘薯品種間基因滲透，有助于甘薯種間及不同不親和群品 種間基因交流，豐富了甘薯種質(zhì)創(chuàng)新方法，該方法操作方便、快捷，不受季節(jié)限制。


圖1是嫁接后砧木和接穗的ISSR檢測(cè)；圖2是部分砧木和接穗ISSR檢測(cè)，在圖1中鑒定的基因滲透株系及部分非基因滲 透株系的ISSR重復(fù)鑒定，進(jìn)一步證實(shí)了擴(kuò)增的可靠性及濟(jì)薯18和鄭薯20間基因滲透的真 實(shí)性。
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圖3是部分砧木和接穗RAPD檢測(cè)，在圖1中鑒定的基因滲透株系及部分非基因滲 透株系的RAPD (引物BA0023)擴(kuò)增結(jié)果。圖4是整個(gè)離體嫁接操作流程。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的方法和效果，但限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1本實(shí)驗(yàn)首先是通過莖尖分生組織培養(yǎng)，再生嫁接所需的濟(jì)薯18和鄭薯20。莖尖 分生組織培養(yǎng)基條件為ILMS基本培養(yǎng)基添加NAAO. lmg/L和6_BA2mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂 9g/L，滅菌前PH值為5. 8-6. 0.培養(yǎng)條件為光照2000Lux，溫度25士2°C .選用濟(jì)薯18和鄭薯20莖尖分生組織培養(yǎng)再生植株，粗細(xì)程度比較相近或者砧木 較接穗粗些。在超凈工作臺(tái)(無菌條件下)，以鄭薯20作為砧木，以濟(jì)薯18作為接穗；切 取接穗植株2-3節(jié)，切口呈契型；砧木材料去所有葉片和萌發(fā)的腋芽，接口處從中間劈開， 深度約0. 5cm,然后將接穗插入，用無菌Parafilm對(duì)嫁接傷口進(jìn)行包裹，完成嫁接的植株接 種在MS固體培養(yǎng)基中，所用的固體培養(yǎng)基是1LMS基本培養(yǎng)基+蔗糖15g+瓊脂9g，PH值 5.8。嫁接后20-30天，將嫁接成活植株，自接口部位切開，去掉接口處0.5-lcm莖段(嫁接 部位)，將接穗和砧木分別接種在MS固體培養(yǎng)基中。嫁接具體操作流程見圖4。圖中，1 從中間劈開的砧木和契型接穗；2 接穗和砧木 的嫁接；3 接口的包裹；4 嫁接好的植株；5 嫁接植株的培養(yǎng)；6 嫁接成活的植株。對(duì)嫁接后的砧木和接穗葉片分別進(jìn)行取樣提取DNA，進(jìn)行ISSR和RAPD擴(kuò)增，鑒定 品種間基因滲透。選用的ISSR引物和RAPD引物個(gè)5條，具體見表1.表1 =ISSR引物和RAPD引物
權(quán)利要求
一種促進(jìn)甘薯種質(zhì)資源間基因交流的方法，其特征是通過甘薯組織培養(yǎng)獲得供體和受體植株；將供體和受體植株在離體、無菌條件下，進(jìn)行無性嫁接，促使甘薯品種間基因滲透，創(chuàng)新甘薯種質(zhì)，為甘薯種間及不同不親和群品種間基因交流，進(jìn)而創(chuàng)新及豐富甘薯種質(zhì)資源。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)甘薯種質(zhì)資源間基因交流的方法，其特征是所述的通 過甘薯組織培養(yǎng)獲得供體和受體植株是通過莖尖分生組織培養(yǎng)基莖尖分生組織培養(yǎng)，再生 嫁接所需的供體和受體植株。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的促進(jìn)甘薯種質(zhì)資源間基因交流的方法，其特征是莖尖分生 組織培養(yǎng)基條件為1LMS基本培養(yǎng)基添加NAAO. lmg/L、6-BA2mg/L、蔗糖30g/L和瓊脂9g/ L，滅菌前PH值為5. 8-6. 0 ；培養(yǎng)條件為光照2000LUX，溫度25士2°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)甘薯種質(zhì)資源間基因交流的方法，其特征是所述的供 體和受體植株在離體、無菌條件下進(jìn)行無性嫁接，是將粗細(xì)程度相近的供體和受體植株，在 超凈工作臺(tái)即無菌條件下，切取接穗(受體)植株2-3節(jié)，切口呈契型；砧木(供體)材料去 所有葉片和萌發(fā)的腋芽，接口處從中間劈開，然后將接穗插入，用無菌Parafilm對(duì)嫁接傷 口進(jìn)行包裹，完成嫁接的植株接種在MS固體培養(yǎng)基中，嫁接后20-30天，將嫁接成活植株， 自接口部位切開，去掉接口處0. 5-lcm莖段，將接穗和砧木分別接種在MS固體培養(yǎng)基中。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的促進(jìn)甘薯種質(zhì)資源間基因交流的方法，其特征是接口處從 中間劈開的深度為0. 5cm。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的促進(jìn)甘薯種質(zhì)資源間基因交流的方法，其特征是所述的MS 固體培養(yǎng)基是1LMS基本培養(yǎng)基+蔗糖15g+瓊脂9g，PH值5. 8。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種促進(jìn)甘薯種質(zhì)資源間基因交流的方法，屬通過甘薯組織培養(yǎng)獲得供體和受體植株；將供體和受體植株在離體、無菌條件下，進(jìn)行無性嫁接，促使甘薯品種間基因滲透，創(chuàng)新甘薯種質(zhì)，為甘薯種間及不同不親和群品種間基因交流，進(jìn)而創(chuàng)新及豐富甘薯種質(zhì)資源。有益效果是本發(fā)明打破種間及不親和群品種間雜交障礙，為甘薯種質(zhì)創(chuàng)新提供了新的技術(shù)方法，加快甘薯遺傳改良。該方法操作方便、快捷，不受季節(jié)限制。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101933458SQ20101022840
公開日2011年1月5日 申請(qǐng)日期2010年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月5日
發(fā)明者史新敏, 周志林, 唐君, 曹清河, 趙冬蘭 申請(qǐng)人:江蘇徐州甘薯研究中心