專利名稱：鐵皮石斛自然光快繁育苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種珍稀瀕危中藥材鐵皮石斛自然光快繁育 苗的方法。
背景技術(shù)：
鐵皮石斛是《中國(guó)藥典》收載的主要品種之一，藥用價(jià)值高、保健功能強(qiáng)，主要成分 為多糖、石斛堿、氨基酸和微量元素等，具有滋陰清熱、益胃生津、清嗓明目、增強(qiáng)人體免疫 力、抗衰老、抗腫瘤等功效。多年來(lái)，由于產(chǎn)區(qū)藥農(nóng)毀滅性采挖，使野生鐵皮石斛資源瀕臨滅 絕，國(guó)家已將鐵皮石斛列為重點(diǎn)保護(hù)的珍稀瀕危物種，并鼓勵(lì)人工大面積栽培鐵皮石斛，變 野生為家種，以保障鐵皮石斛資源的可持續(xù)性利用和發(fā)展。本發(fā)明運(yùn)用現(xiàn)代生物組培繁育技術(shù)，大膽突破傳統(tǒng)利用日光燈管提供光照培養(yǎng) 苗的方法，在國(guó)內(nèi)首家采用自然光快繁育苗，通過(guò)合理配置遮陽(yáng)系統(tǒng)，提供更為適宜的光 照度來(lái)培養(yǎng)苗，取得了良好成效。一顆鐵皮石斛蒴果通過(guò)5 6月的組培培養(yǎng)可快繁培 育出12萬(wàn)株以上石斛組培苗，煉苗移栽成活率達(dá)到98%以上。而目前國(guó)內(nèi)很多科研單 位和公司均采用日光燈管提供光照來(lái)培育苗，比如“一種鐵皮石斛快繁的組培方法”(申 請(qǐng)?zhí)?008101108704. 5)、“一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖的育苗方法”(申請(qǐng)?zhí)?200710066480. 1)、“一種應(yīng)用鐵皮石斛激素自養(yǎng)型莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)藥材的方法”(申請(qǐng)?zhí)?02136925. 9)、“一種鐵皮石斛的培育方法”(申請(qǐng)?zhí)?00410017380. 6)等，不但浪費(fèi)消耗了 能源，增加了組培生產(chǎn)成本，而且培養(yǎng)出的苗，明顯光照不夠，植株較弱。本發(fā)明的目的在于利用現(xiàn)代生物技術(shù)，充分利用自然光來(lái)培養(yǎng)苗，提高了鐵皮石 斛種苗的擴(kuò)繁速度和生產(chǎn)量，節(jié)約了能源，降低了組培生產(chǎn)成本，提高了組培苗的煉苗移栽 成活率，對(duì)瀕危緊缺藥用植物資源再生和持續(xù)利用具有十分積極的影響。

發(fā)明內(nèi)容
為了實(shí)現(xiàn)這一目的，發(fā)明人經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，成功完成了可用于鐵皮石斛種苗組培生產(chǎn) 中不同階段的自然光照度和培養(yǎng)基配方的控制使用，對(duì)自然光遮蔭度和培養(yǎng)基配方進(jìn)行了 試驗(yàn)和完善，特別是對(duì)不同階段組培苗的適宜光照控制進(jìn)行了多次研究和試驗(yàn)，獲得了獨(dú) 創(chuàng)的培養(yǎng)方法，取得了良好效果，解決了鐵皮石斛組培苗生產(chǎn)過(guò)程中能耗高、苗嫩弱的問(wèn) 題，完成了鐵皮石斛自然光快繁育苗生產(chǎn)技術(shù)的發(fā)明研究。鐵皮石斛自然光快繁育苗方法分為三個(gè)階段1、將成熟的鐵皮蒴果或儲(chǔ)存的種子經(jīng)過(guò)消毒處理程序，播入1/2MS基本培養(yǎng)基+ 土豆汁15% (V/V) +瓊脂5g/L的培養(yǎng)基里，進(jìn)行種子萌發(fā)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度22 25°C。通過(guò) 雙層遮陽(yáng)控制系統(tǒng)，光照度控制在800 15001x，每日光照10 12小時(shí)，約15 20天種 胚膨大、萌發(fā)形成綠色的原球莖；2、將原球莖轉(zhuǎn)入MS基本培養(yǎng)基+BA (6-芐基腺嘌呤)0. 01 0. 5mg/L+NAA ( α -萘 乙酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁20% (V/V) +瓊脂5g/L的培養(yǎng)基里進(jìn)行原球莖增殖、分化培
3養(yǎng)。通過(guò)雙層遮陽(yáng)控制系統(tǒng)，光照度控制在1500 25001x，每日光照10 12小時(shí)，約1 1. 5月可觀察到瓶?jī)?nèi)原球莖重疊堆積在培養(yǎng)基中，并有葉原莖和小苗出現(xiàn)，小苗高度1 2cm。將小苗轉(zhuǎn)入同樣的培養(yǎng)基和同樣的光照條件，繼續(xù)培養(yǎng)1.5月，將小苗培養(yǎng)成中苗，苗 高3 4cm左右；3、將中苗轉(zhuǎn)入MS基本培養(yǎng)基+ΝΑΑ(α-萘乙酸)0.01 0. 5mg/L+香蕉汁15% (V/ V) +土豆汁10% (V/V)+瓊脂6g/L的壯苗培養(yǎng)基。通過(guò)雙層遮陽(yáng)控制系統(tǒng)，光照度控制在 2000 40001x，每日光照10 12小時(shí)，約1.5個(gè)月可培養(yǎng)出5cm高以上的大苗，大苗可出 瓶煉苗、移栽。上述的鐵皮石斛自然光快繁育苗方法中，所提到的對(duì)于鐵皮石斛各生長(zhǎng)過(guò)程光照 度控制和培養(yǎng)基的配方是⑴種胚誘導(dǎo)提供800 15001X的弱光和1/2MS基本培養(yǎng)基 + 土豆汁15% (V/V) +瓊脂5g/L的培養(yǎng)基(2)原球莖增殖與分化提供1500 25001x的 較強(qiáng)光和MS基本培養(yǎng)基+BA(6-芐基腺嘌呤)0. 01 0. 5mg/L+NAA(a -萘乙酸)0. 01
0.5mg/L+ 土豆汁20% (V/V) +瓊脂5g/L的培養(yǎng)基(3)壯苗生根提供2000 40001x的強(qiáng) 光和MS基本培養(yǎng)基+NAA(a-萘乙酸)0.01 0. 5mg/L+香蕉汁15% (V/V) +土豆汁10% (V/V)+瓊脂6g/L的培養(yǎng)基。采用本發(fā)明所提供的鐵皮石斛自然光快繁育苗方法，可有效解決鐵皮石斛種苗組 培生產(chǎn)中高能耗、高成本和苗弱的問(wèn)題。通過(guò)自然光培養(yǎng)的陽(yáng)光苗，植株強(qiáng)壯、細(xì)胞質(zhì)密度 高，葉片厚實(shí)，植株移栽后不脫水、不黃葉，極大提高了組培苗的移栽成活率；另外由于光照 加強(qiáng)，極大刺激了植株酶的活性和光合作用，組培苗生長(zhǎng)速度也較傳統(tǒng)的日光燈管培養(yǎng)法 有所提高。采用本發(fā)明方法，從鐵皮石斛種子到培養(yǎng)成大苗，只需5 6個(gè)月，大大縮短了 種苗組培時(shí)間和成本，與傳統(tǒng)種苗擴(kuò)繁相比，種苗的擴(kuò)繁速度和生產(chǎn)量都有了較大的提高。本發(fā)明研究結(jié)果對(duì)解決鐵皮石斛種苗組培生產(chǎn)中存在的高能耗、高成本、種苗嫩 弱等問(wèn)題，起到了關(guān)鍵性的作用，對(duì)推動(dòng)鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；l(fā)展，提供了科學(xué)依據(jù)和 有力保證。本發(fā)明具有良好的社會(huì)效益、經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 鐵皮石斛自然光快繁育苗方法將收集的鐵皮石斛種源在每年4 5月開(kāi)花時(shí)進(jìn)行異花授粉，在當(dāng)年的10月底蒴 果成熟后進(jìn)行采收，放在干凈的培養(yǎng)皿里，放于冰箱內(nèi)保存。a、將成熟的鐵皮蒴果或儲(chǔ)存的種子經(jīng)過(guò)消毒處理程序，播入1/2MS基本培養(yǎng)基+ 土豆汁15% (V/V) +瓊脂5g/L的培養(yǎng)基里，進(jìn)行種子萌發(fā)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度22 25°C。通過(guò) 雙層遮陽(yáng)控制系統(tǒng)，光照度控制在800 15001x，每日光照10 12小時(shí)，約25 30天種 胚膨大、萌發(fā)形成綠色的原球莖；b、將原球莖轉(zhuǎn)入MS基本培養(yǎng)基+BA (6-芐基腺嘌呤)0. 01 0. 5mg/L+NAA ( α -萘 乙酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁20% (V/V) +瓊脂5g/L的培養(yǎng)基里進(jìn)行原球莖增殖、分化培 養(yǎng)。通過(guò)雙層遮陽(yáng)控制系統(tǒng)，光照度控制在1500 25001x，每日光照10 12小時(shí)，約1
1.5月可觀察到瓶?jī)?nèi)原球莖重疊堆積在培養(yǎng)基中，并有葉原莖和小苗出現(xiàn)，小苗高度1 2cm。將小苗轉(zhuǎn)入同樣的培養(yǎng)基和同樣的光照條件，繼續(xù)培養(yǎng)1.5月，將小苗培養(yǎng)成中苗，苗 高3 4cm左右；
C、將中苗轉(zhuǎn)入MS基本培養(yǎng)基+ΝΑΑ(α-萘乙酸)0.01 0. 5mg/L+香蕉汁15% (V/ V) +土豆汁10% (V/V)+瓊脂6g/L的壯苗培養(yǎng)基。通過(guò)雙層遮陽(yáng)控制系統(tǒng)，光照度控制在 2000 40001x，每日光照10 12小時(shí)，約1.5個(gè)月可培養(yǎng)出5cm高以上的大苗，大苗可出 瓶煉苗、移栽。
權(quán)利要求
1. 一種鐵皮石斛自然光快繁育苗方法，其特征在于該方法降低能耗、降低組培成本，可 大量快速培育出合格的鐵皮石斛試管苗，包括下列步驟完成(1)將成熟的鐵皮蒴果或儲(chǔ)存的種子經(jīng)過(guò)消毒處理程序，播入1/2MS基本培養(yǎng)基+土豆 汁15% (V/V) +瓊脂5g/L的培養(yǎng)基里，進(jìn)行種子萌發(fā)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度22 25°C。通過(guò)雙層 遮陽(yáng)控制系統(tǒng)，光照度控制在800 15001x，每日光照10 12小時(shí)，約15 20天種胚膨 大、萌發(fā)形成綠色的原球莖；(2)將原球莖轉(zhuǎn)入MS基本培養(yǎng)基+BA(6-芐基腺嘌呤)0.01 0. 5mg/L+NAA( α -萘乙 酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁20% (V/V)+瓊脂5g/L的培養(yǎng)基里進(jìn)行原球莖增殖、分化培 養(yǎng)。通過(guò)雙層遮陽(yáng)控制系統(tǒng)，光照度控制在1500 25001x，每日光照10 12小時(shí)，約1 1. 5月可觀察到瓶?jī)?nèi)原球莖重疊堆積在培養(yǎng)基中，并有葉原莖和小苗出現(xiàn)，小苗高度1 2cm。將小苗轉(zhuǎn)入同樣的培養(yǎng)基和同樣的光照條件，繼續(xù)培養(yǎng)1.5月，將小苗培養(yǎng)成中苗，苗 高3 4cm左右；(3)將中苗轉(zhuǎn)入MS基本培養(yǎng)基+NAA(α-萘乙酸)0.01 0.5mg/L+香蕉汁15%(V/ V) +土豆汁10% (V/V)+瓊脂6g/L的壯苗培養(yǎng)基。通過(guò)雙層遮陽(yáng)控制系統(tǒng)，光照度控制在 2000 40001x，每日光照10 12小時(shí)，約1.5個(gè)月可培養(yǎng)出5cm高以上的大苗，大苗可出 瓶煉苗、移栽。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種珍稀瀕危中藥材鐵皮石斛自然光快繁育苗方法。本發(fā)明的目的在于利用現(xiàn)代生物技術(shù)，大膽突破傳統(tǒng)利用日光燈管提供光照培養(yǎng)苗的方法，在國(guó)內(nèi)首家采用自然光快繁育苗，通過(guò)合理配置遮陽(yáng)系統(tǒng)，提供更為適宜的光照度來(lái)培養(yǎng)苗，取得了良好成效，一顆鐵皮石斛蒴果通過(guò)5～6月的組培培養(yǎng)可快繁培育出12萬(wàn)株以上石斛組培苗。本發(fā)明方法提高了鐵皮石斛種苗的擴(kuò)繁速度和生產(chǎn)量，節(jié)約了能源，降低了組培生產(chǎn)成本，提高了組培苗的煉苗移栽成活率，對(duì)瀕危緊缺藥用植物資源再生和持續(xù)利用具有十分積極的影響。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102119655SQ20101024233
公開(kāi)日2011年7月13日 申請(qǐng)日期2010年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月29日
發(fā)明者張世定, 邊云哲 申請(qǐng)人:云南紅土生源藥用生物科技開(kāi)發(fā)有限公司