專利名稱:一種簡(jiǎn)單高效的天門冬快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域,具體是一種簡(jiǎn)單高效的藥用植物天門冬快繁方法。
背景技術(shù):
天門冬(Asparagus cochinchinensis (Lour. )Merr.),又名天冬,為百合科天門冬 屬植物,原產(chǎn)非洲,我國主產(chǎn)于貴州、云南、四川、湖南、湖北等省,是傳統(tǒng)的中草藥,在我國 已有幾千年的使用歷史,在《神農(nóng)本草經(jīng)》和《千金方》等中均有記載,是多個(gè)民族的常用 藥,其塊根有養(yǎng)陰潤燥、清肺生津的功效,常用于治療肺燥干咳,咽干口渴,腸燥便秘等癥, 并具有抗菌、抗腫瘤、殺滅蚊蠅幼蟲等生理活性,也常用作滋補(bǔ)品、收斂藥使用。天門冬作 為我國一種傳統(tǒng)的中藥,毒副作用較少,極具開發(fā)價(jià)值,近年來由于天門冬出口量大增,野 生天門冬資源逐年減少,貨源緊缺,價(jià)格逐年攀升。2004年至2008年每公斤價(jià)格上漲了近 30元。自2001年以來,天門冬的種植開始發(fā)展,但由于天門冬的種植周期較長(zhǎng),從種植到 收獲要3-4年,且天門冬種子常規(guī)條件下很難萌發(fā),發(fā)芽率極低。而組織培養(yǎng)是解決依靠種 子繁殖難的植物繁殖的有效途徑,且組織培養(yǎng)周期短,見效快。1902年,德國著名植物學(xué)家 G. Haberlandt根據(jù)細(xì)胞學(xué)理論,提出了 “高等植物的器官和組織可以不斷分割,直到單個(gè) 細(xì)胞,即植物體細(xì)胞,在適當(dāng)?shù)臈l件下,具有不斷分裂和繁殖、發(fā)育成完整植株的潛力”的觀 點(diǎn)_即植物細(xì)胞具有全能性。1958年,Steward和Reinert在胡蘿卜愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)中獲得了植株,證實(shí)了“植物細(xì)胞的全能性”,為植物組織培養(yǎng)技術(shù)奠定了理論基礎(chǔ)。經(jīng) 過30多年的實(shí)驗(yàn)研究,目前已有600多種植物能用組織培養(yǎng)方法形成芽、胚狀體及完整的 植株。在離體培養(yǎng)下植物細(xì)胞所具有的這種能重新形成新個(gè)體的“全能性”,使組織培養(yǎng)技 術(shù)在保持優(yōu)良種質(zhì),加速植物的無性繁殖等應(yīng)用中,取得了越來越多的成功,是快速繁殖優(yōu) 良植株的捷徑。目前尚未見有用組織培養(yǎng)方法繁殖天門冬的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種簡(jiǎn)單高效的天門冬快繁方法,采用組織培養(yǎng)方法,解決 天門冬依靠種子繁殖難的問題,同時(shí)解決繁殖培養(yǎng)過程中的營養(yǎng)及成活率等問題。本發(fā)明解決問題所采用的技術(shù)方案是一種簡(jiǎn)單高效的天門冬快繁方法,采用組 織培養(yǎng)方法,包括如下步驟1)外植體的準(zhǔn)備和消毒;2)接種及愈傷組織的誘導(dǎo);3)愈傷組織的分化;4)生根;5)煉苗;6)栽培所述的外植體的準(zhǔn)備和消毒操作人員消毒,將外植體、接種工具進(jìn)行消毒。所述的接種及愈傷組織的誘導(dǎo)進(jìn)行接種,接種后放置于光照培養(yǎng)箱中。
所述的愈傷組織的分化愈傷組織誘導(dǎo)3-7天后,待出現(xiàn)較大團(tuán)狀的淡黃色愈傷 組織時(shí),將愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基,繼續(xù)放置于光照培養(yǎng)箱中。所述的生根愈傷組織分化7-10天后,待出現(xiàn)1-3個(gè)枝芽時(shí),轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基 中,繼續(xù)放置于光照培養(yǎng)箱中。所述的煉苗在生根培養(yǎng)基中10-25天后,待出現(xiàn)一定數(shù)量的白根,形成幼苗,這 時(shí)把帶幼苗的培養(yǎng)瓶取出進(jìn)行煉苗,首先揭蓋,加入少量雙蒸水并蓋上蓋,以防組培苗失水 及培養(yǎng)基被污染,擱置培養(yǎng)箱中2-3天,然后取出培養(yǎng)箱,加入少量自來水,放在室內(nèi)自然 光照20-28°C下培養(yǎng)2-3天,接著揭蓋培養(yǎng)。所述的栽培待瓶?jī)?nèi)長(zhǎng)出新鮮的嫩葉后,從瓶?jī)?nèi)取出苗并洗凈培養(yǎng)基,放在營養(yǎng)土 里栽培成株,待幼苗出現(xiàn)3-5個(gè)新枝后入土栽培。所述的誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基配方為l/2MS+1.0mg/L 6-BA+O. 5mg/L NAA+瓊 脂 0. 7% + 蔗糖 3%,PH = 5. 8。所述的分化培養(yǎng)基配方為MS+1. 5mg/L 6-BA+O. 5mg/L IAA+瓊脂0. 7 % +蔗糖 3%, PH = 5. 8。所述的生根培養(yǎng)基中配方為l/2MS+0. 5mg/L IBA+0. 5mg/LIAA+瓊脂0. 7% +蔗糖2%,其中MS培養(yǎng)基中的Fe鹽的濃度降低到0. 25mg/L,PH =5. 8。天門冬種子常規(guī)條件下很難萌發(fā),發(fā)芽率極低,為此,湖南省高校創(chuàng)新平臺(tái)開放基 金項(xiàng)目(09K106)資助對(duì)此進(jìn)行研究,根據(jù)研究結(jié)果提出了本發(fā)明。根據(jù)本發(fā)明的方法繁殖 天門冬,解決了依靠種子繁殖難的問題。本方法采用組織培養(yǎng)法,在離體培養(yǎng)下進(jìn)行植物的 無性繁殖,是快速繁殖優(yōu)良植株的捷徑;本申請(qǐng)?zhí)岢龅奶扉T冬外植體在組織的誘導(dǎo)、分化、 生根過程中的各種培養(yǎng)基配方,更有利于其繁殖及存活;本申請(qǐng)還發(fā)明了一種煉苗的方法, 解決一般煉苗方法中幼苗成活率低的問題。本方法可以達(dá)到快速繁殖,節(jié)約了大量時(shí)間,能 夠投入生產(chǎn)實(shí)踐中。
圖1-2是外植體;圖3-4是愈傷組織的誘導(dǎo);圖5-6是愈傷組織的分化;圖7-8是生根;圖9-10是煉苗;圖11-12是栽培。
具體實(shí)施例方式一種簡(jiǎn)單高效的天門冬快繁方法,主要包括如下步驟1)外植體的準(zhǔn)備和消毒采用常規(guī)消毒法,用酒精棉球擦拭手掌,將外植體移入工作臺(tái)面,用升汞(1% )浸 泡8分鐘,再用75%酒精浸泡5分鐘;無菌水漂洗3-4次。點(diǎn)燃酒精燈,用具入酒精瓶(酒 精濃度為75%)浸泡數(shù)分鐘,取出在酒精燈上灼燒。把接種刀和鑷子放在酒精燈火焰上灼燒,初次2-3分鐘,以后30-60秒左右即可。2)接種及愈傷組織的誘導(dǎo)接種工具和外植體消毒后,進(jìn)行接種。每接種完一瓶,均應(yīng)把接種刀和鑷子放 入酒精瓶中浸泡,灼燒后再接下一瓶,以免引起交叉感染。接種時(shí)瓶口進(jìn)行火焰滅菌,然 后用鑷子夾外植體在培養(yǎng)基,培養(yǎng)基為誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基,配方為dAMS+l.Omg/L 6-BA+O. 5mg/LNAA+瓊脂0. 7% +蔗糖3%,PH = 5. 8。接種后放置于光照培養(yǎng)箱中,光照強(qiáng)度設(shè) 置為 4000LX,溫度為 26°C 士 1°C。3)愈傷組織的分化愈傷組織誘導(dǎo)3-7天時(shí),會(huì)出現(xiàn)較大團(tuán)狀的淡黃色愈傷組織時(shí),這時(shí)將愈傷組 織轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基為分化培養(yǎng)基,配方為MS+1. 5mg/L 6-BA+O. 5mg/L IAA+瓊脂 0. 7% +蔗糖3%,PH = 5. 8。繼續(xù)放置于光照培養(yǎng)箱中,條件同上。4)生根愈傷組織分化7-10天時(shí),會(huì)出現(xiàn)1-3個(gè)枝芽時(shí),這時(shí)轉(zhuǎn)入到新的培養(yǎng)基中,該培養(yǎng) 基為生根培養(yǎng)基中,1/2MS+0. 5mg/L IBA+0. 5mg/L IAA+瓊脂0. 7% +蔗糖2%,其中MS培養(yǎng) 基中的Fe鹽的濃度降低到0. 25mg/L, PH = 5. 8。繼續(xù)放置于光照培養(yǎng)箱中,條件同上。5)煉苗在生根培養(yǎng)基中10-25天后,待出現(xiàn)一定數(shù)量的白根,形成幼苗,這時(shí)把帶幼苗的 培養(yǎng)瓶取出進(jìn)行煉苗,首先揭蓋,加入少量雙蒸水并蓋上蓋,以防組培苗失水及培養(yǎng)基被污 染,擱置培養(yǎng)箱中2-3天,然后取出培養(yǎng)箱,加入少量自來水,放在室內(nèi)自然光照20-28°C下 培養(yǎng)2-3天,接著揭蓋培養(yǎng)。6)栽培待瓶?jī)?nèi)長(zhǎng)出新鮮的嫩葉后,從瓶?jī)?nèi)取出苗并洗凈培養(yǎng)基,用一定濃度, 100-200mg · Γ1濃度的生根劑浸根20 30min后晾干,最后放在營養(yǎng)土里栽培成株,待幼 苗出現(xiàn)3-5個(gè)新枝后入土栽培。
權(quán)利要求
一種簡(jiǎn)單高效的天門冬快繁方法,采用組織培養(yǎng)方法,包括如下步驟1)外植體的準(zhǔn)備和消毒;2)接種及愈傷組織的誘導(dǎo);3)愈傷組織的分化;4)生根;5)煉苗;6)栽培所述的外植體的準(zhǔn)備和消毒操作人員消毒,將外植體、接種工具進(jìn)行消毒。所述的接種及愈傷組織的誘導(dǎo)進(jìn)行接種,接種后放置于光照培養(yǎng)箱中。所述的愈傷組織的分化愈傷組織誘導(dǎo)3 7天后,待出現(xiàn)較大團(tuán)狀的淡黃色愈傷組織時(shí),將愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基,繼續(xù)放置于光照培養(yǎng)箱中。所述的生根愈傷組織分化7 10天后,待出現(xiàn)1 3個(gè)枝芽時(shí),轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基中,繼續(xù)放置于光照培養(yǎng)箱中。所述的煉苗在生根培養(yǎng)基中10 25天后,待出現(xiàn)一定數(shù)量的白根,形成幼苗,這時(shí)把帶幼苗的培養(yǎng)瓶取出進(jìn)行煉苗,首先揭蓋,加入少量雙蒸水并蓋上蓋,以防組培苗失水及培養(yǎng)基被污染,擱置培養(yǎng)箱中2 3天,然后取出培養(yǎng)箱,加入少量自來水,放在室內(nèi)自然光照20 28℃下培養(yǎng)2 3天,接著揭蓋培養(yǎng)。所述的栽培待瓶?jī)?nèi)長(zhǎng)出新鮮的嫩葉后,從瓶?jī)?nèi)取出苗并洗凈培養(yǎng)基,放在營養(yǎng)土里栽培成株,待幼苗出現(xiàn)3 5個(gè)新枝后入土栽培。
2.一種簡(jiǎn)單高效的天門冬快繁方法,其特征在于所述的誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基配方 為:1/2MS+1. Omg/L 6-BA+O. 5mg/L NAA+ 瓊脂 0. 7% + 蔗糖 3%, PH = 5. 8
3.一種簡(jiǎn)單高效的天門冬快繁方法,其特征在于所述的分化培養(yǎng)基配方為 MS+1. 5mg/L 6-BA+O. 5mg/L IAA+ 瓊脂 0. 7% + 蔗糖 3%, PH = 5. 8
4.一種簡(jiǎn)單高效的天門冬快繁方法,其特征在于所述的生根培養(yǎng)基中配方為 1/2MS+0. 5mg/L IBA+0. 5mg/L IAA+瓊脂0. 7% +蔗糖2%,其中MS培養(yǎng)基中的Fe鹽的濃度 降低到 0. 25mg/L, PH = 5. 8。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種簡(jiǎn)單高效的天門冬快繁方法,就是采用組織培養(yǎng)方法,它包括如下步驟1)外植體的準(zhǔn)備和消毒;2)接種及愈傷組織的誘導(dǎo);3)愈傷組織的分化;4)生根;5)煉苗;6)栽培。本發(fā)明解決了天門冬依靠種子繁殖難的問題。本方法采用組織培養(yǎng)法,在離體培養(yǎng)下進(jìn)行植物的無性繁殖,是快速繁殖優(yōu)良植株的捷徑;本申請(qǐng)?zhí)岢龅奶扉T冬外植體在組織的誘導(dǎo)、分化、生根過程中的各種培養(yǎng)基配方,更有利于其繁殖及存活;本申請(qǐng)還發(fā)明了一種煉苗的方法,解決一般煉苗方法中幼苗成活率低的問題。本方法可以達(dá)到快速繁殖,節(jié)約了大量時(shí)間,可以投入生產(chǎn)實(shí)踐中。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101946705SQ20101026032
公開日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2010年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月18日
發(fā)明者楊加強(qiáng), 歐立軍, 許棟 申請(qǐng)人:懷化學(xué)院;歐立軍