專利名稱：蛭弧菌混合體菌液在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術領域，涉及一種細菌的應用，特別涉及蛭弧菌蛭質體與游泳 體混合體菌液在斑節(jié)對蝦等海產品養(yǎng)殖中的應用。
背景技術：
斑節(jié)對蝦(Penaeus monodon)俗稱鬼蝦、草蝦、花蝦、竹節(jié)蝦、斑節(jié)蝦、牛形對蝦，聯(lián) 合國糧農組織通稱大虎蝦。是對蝦中個體最大的一種，成熟個體一般體長22cm-32cm，體重 137g-211g，為當今世界上蝦類養(yǎng)殖最普遍的品種之一。近年來，養(yǎng)殖者為了追求高產量，對蝦的放養(yǎng)密度過大。在養(yǎng)殖過程中因過量投餌 和對蝦排泄物引起底質極端惡化，水質發(fā)生突變，極易引起蝦體的免疫力下降，從而引發(fā)蝦 病的發(fā)生。傳統(tǒng)方法具有調控養(yǎng)殖水體的優(yōu)點的同時，缺點也比比皆是。中草藥對斑節(jié)對蝦 生長性能具有無藥物殘留、經濟效益高的優(yōu)點，但有見效慢的缺點?？股貙σ种撇≡⑸?物的繁殖，減少其代謝毒素對蝦的毒害作用等方面起到了積極的作用，但是長期使用抗生 素，特別是濫用抗生素，其種種弊端也逐漸顯露出來。如破壞蝦塘中自然生態(tài)平衡，對蝦的 機體免疫力產生不良影響，產生耐藥性和藥物殘留等副作用，給養(yǎng)殖業(yè)和作為消費者的人 類的健康都帶來了潛在的危害。因此，開發(fā)一種簡便易行、安全、優(yōu)質、營養(yǎng)的無公害健康的 斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖新技術已經成為當今社會的共識。蛭弧菌是寄生于其他細菌，并能導致宿主細菌裂解的一類細菌。比一般細菌小，能 通過細菌濾器，有類似噬菌體的作用。單細胞，呈弧形或逗點狀，有時呈螺旋狀，大小一般 (0. 2-0. 6) X (0. 8-1. 2)微米，端生鞭毛，多為一根。革蘭氏染色呈陰性，可以裂解包括副溶 血弧菌、溶藻弧菌等引發(fā)蝦病害的潛在致病菌。蛭弧菌游泳體是指蛭弧菌侵入宿主細菌前 的生長形式。蛭弧菌在游泳體階段，識別并與宿主發(fā)生不可逆結合，然后侵入宿主，蛭弧菌 游泳體侵入宿主細菌的過程非?？?，一般幾秒鐘內即可完成。蛭弧菌蛭質體是蛭弧菌在特 定宿主細菌的周質空間內進行生長繁殖的形式。蛭弧菌進入宿主菌細胞周質空間后，主要 通過降解宿主細胞的大分子成為單體，然后攝入用于其生物大分子的合成。蛭弧菌的生活史可分為脫離宿主細菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳體狀態(tài)和在宿 主細菌內生長發(fā)育的蛭質體狀態(tài)。游泳體蛭弧菌侵入宿主的周質空間的同時失去鞭毛，宿 主細胞外膜產生一個孔隙供蛭弧菌入侵，當蛭弧菌侵入到宿主體內后，孔隙重新封閉。宿主 細胞及在其周質空間的蛭弧菌則為"蛭質體"。與游泳體相比，蛭質體不僅具有制備、保 存更為方便，環(huán)境耐受力強，作用時間雖略慢但更久的特點，同時還具有潛在的滅活疫苗功 能。當游泳體蛭弧菌入侵宿主細胞后，宿主細胞的呼吸作用(respiration)很快被停止。 蛭弧菌也進入蛭質體狀態(tài)，開始分泌多種酶，消解宿主細胞的大分子為小分子物質，進而整 合為自身的營養(yǎng)物質，使自身生長，變長。最終，長條狀的蛭質體分成很多短的節(jié)段，長出鞭 毛，重新成為游泳體。之后，它們分泌必需的酶類，破壁而出，再次成為脫離宿主細菌、具有 鞭毛、自由游泳的游泳體。在此蛭質體發(fā)育期間，蛭弧菌并不改變宿主細胞的表面結構，使原宿主仍具有抗原作用，可刺激生物體，產生免疫應答反應。這一潛在功能使得應用蛭弧菌 蛭質體于斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中，可有效預防對蝦弧菌病的產生，提高對蝦抗病能力。蛭弧菌游泳體和蛭質體的混合菌劑兼具游泳體起效快，活力強和蛭質體制備、保 存容易，殺菌作用時間更久，環(huán)境耐受力更強，以及具有潛在的免疫疫苗功效。目前，應用蛭 弧菌游泳體和蛭質體的混合菌劑來提高斑節(jié)對蝦成活率，促進斑節(jié)對蝦快速生長的養(yǎng)殖方 式，預防對蝦弧菌病提高對蝦抗病能力在國內外均未報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的弊端，提供蛭弧菌蛭質體與游泳體混合體菌劑 在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用方法。其特征按照養(yǎng)殖生態(tài)學原理，海洋生物的生長環(huán)境要求，生 物之間的相互關系及無公害養(yǎng)殖標準，人工營造養(yǎng)殖環(huán)境，減少投入成本，提高斑節(jié)對蝦免 疫力，促進斑節(jié)對蝦快速生長，提高經濟效益。本發(fā)明的目的通過下述方案實現(xiàn)，蛭弧菌混合體菌液在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用，其特征在于所述蛭弧菌混合體菌 液為蛭弧菌蛭質體菌液和游泳體菌液混合。所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，于2009年8月7日保藏于中國 典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國武漢武漢大學，保藏編號為CCTCC NO =M 209172。所述蛭弧菌混合體菌液為蛭質體菌液與游泳體菌液按細菌數(shù)1 1混合。所述蛭弧菌混合體菌液在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用是將飼料在蛭弧菌混合體菌液 中浸泡15-45min。所述蛭弧菌混合體菌液在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用是在水體中添加蛭弧菌混合體 菌液，使水體中蛭弧菌混合體濃度為IO1 l(fpfu/mL。所述蛭弧菌混合體菌液的制備方法如下所述蛭弧菌蛭質體菌液按照以下方法制備得到接種宿主于營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基 中，在:35°C和200rpm搖床培養(yǎng)12h，培養(yǎng)液經4°C，5000 8000rpm離心10 20min后，沉 淀加入至DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌BDFM05，在溫度25 下，以150 300rpm搖 床培養(yǎng)36 48h，得到含蛭弧菌蛭質體和蛭弧菌游泳體的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液在4°C溫度下以 6000 8000rpm離心15 20min后，去除含蛭弧菌游泳體的上清，得到的沉淀即為蛭弧菌 蛭質體；將蛭弧菌蛭質體用DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0. 2mol/L pH值為7. 2 7. 6 的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到濃度為IO6 lOYfu/mL的蛭弧菌蛭質體菌液；所述蛭弧菌游泳體菌液按照以下方法制備得到將蛭弧菌蛭質體制備方法中的含 蛭弧菌游泳體的上清經16000 18000rpm離心15 20min后，沉淀用DNB液體培養(yǎng)基、水、 生理鹽水或0. 2mol/L pH值為7. 2 7. 6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到濃度為IO6 109pfu/ mL的蛭弧菌游泳體菌液。將蛭弧菌蛭質體菌液和游泳體菌液混合得蛭弧菌混合體菌液。本發(fā)明相對于現(xiàn)有 技術，具有如下的優(yōu)點及效果1、本發(fā)明所述蛭弧菌游泳體和蛭質體的混合體菌劑兼具游泳體起效快，活力強和 蛭質體制備、保存容易，殺菌作用時間更久和環(huán)境耐受力更強的優(yōu)點，效果更好。2、本發(fā)明采用營養(yǎng)配制、蛭弧菌混合體菌劑預防和調節(jié)、環(huán)境調控相結合的方案，達到了提高斑節(jié)對蝦成活率，增強免疫力，促進斑節(jié)對蝦攝食和快速生長，降低生產成本， 提高經濟效益的效果。3、本發(fā)明所述蛭弧菌游泳體和蛭質體的混合體菌劑對大多數(shù)的水產致病菌，特別 是海洋弧菌有較強的裂解力，對水質也有一定的凈化作用，最長可達到30天不換水。在養(yǎng) 殖水體中潑灑一定濃度的蛭弧菌混合體菌劑，既能促進斑節(jié)對蝦的生長，又能凈化水質，從 而克服了抗生素濫用帶來的副作用和對養(yǎng)殖廢水進行處理的高成本，為人類提供安全、綠 色、無公害的水產品，提高養(yǎng)殖戶的收入。4、本發(fā)明所述蛭弧菌游泳體和蛭質體混合體菌劑在斑節(jié)對蝦的應用中安全性好。5、本發(fā)明所述蛭弧菌游泳體和蛭質體混合菌劑在斑節(jié)對蝦的應用中作用效果好， 且應用廣泛，可推廣。
具體實施例方式下面結合實施例及表格對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限 于此。實施例1混合體菌劑的制備所述的蛭質體通過以下方法得到在IL含有副溶血弧菌(接種濃度為IO7Cfu/ mL的菌ImL) (Vibrio parahaemolyticus，購于美國典型物種保藏中心American Type Culture Collection,ATCC 17802)的 IL DNB(dilute nutrientbroth)液體培養(yǎng)基(營養(yǎng) 肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. lg，溶于IOOOmL蒸餾水中，pH值為7. 6)中 接入ImL濃度為103pfu/mL蛭弧菌，于、250rpm培養(yǎng)48h，培養(yǎng)液經4°C 6000rpm離心 15min后，去除上清，沉淀即是蛭質體，沉淀用IOOmL DNB液體培養(yǎng)基懸浮，蛭弧菌BDFM05 蛭質體菌體的濃度達到109pfu/mL。所用的蛭弧菌游泳體通過高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵方法進行發(fā)酵分別在3個 裝有IOOmL營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基(蛋白胨10g，酵母膏5g，蒸餾水lOOOmL，pH 7. 2)的錐 形瓶中接種 ImL 濃度為 107cfu/mL 副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus ATCC 17802， 購于美國典型物種保藏中心American Type Culture Collection)，200rpmJ8 °C搖床 培養(yǎng)18小時，培養(yǎng)液分別于4°C、5000rpm離心15min，棄上清。將沉淀加入到3個裝有 IOOmLDNB (dilute nutrient broth)液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g， 酵母精提物0. Ig,海水晶^g，溶于IOOOmL蒸餾水，pH值為7. 6)的錐形瓶中，再分別接 入ImL濃度為IO3pfu/mL蛭弧菌BDFM05。恒溫搖床250rpmJ8°C培養(yǎng)36h。培養(yǎng)液分別于 40C 6000rpm離心20min，取上清液，再將上清液分別于4°C 16000rpm離心20min，保留沉 淀，加入IOOmL DNB液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. Ig, 海水晶^g，溶于IOOOmL蒸餾水中，pH值為7. 6)重新懸浮沉淀物，游泳體菌體的濃度達到 109pfu/mLo實施例2混合體菌劑在斑節(jié)對蝦普通養(yǎng)殖中的應用實驗本發(fā)明的具體實施地點為華南地區(qū)某養(yǎng)殖場，實施時間為3個月。(1)養(yǎng)殖池塘條件，養(yǎng)殖池底面積為10畝，池深2m，池底為泥沙質，池底平整，養(yǎng)殖 池配備水泵、增氧機，并配備泵站間門和較完備的進排水系統(tǒng)；(2)放養(yǎng)前的準備，試驗地海域的水源水質符合中華人民共和國國家標準漁業(yè)水質標準(GB11607-89)要求，海水經過砂濾、沉淀處理后進入養(yǎng)殖池，符合農業(yè)部《無公害食 品海水養(yǎng)殖用水水質》(NY5052-2001)要求。放苗前10天，用80目的袖狀網過濾后進水， 同時施氮、磷、鉀復合肥培養(yǎng)餌料生物，使池水透明度達到40cm，養(yǎng)殖池水鹽度10%。；(3)蝦苗選擇與放養(yǎng)，蝦苗選擇個體大小整齊，體長1. 1-1. 3cm的黑殼蝦苗，群體 發(fā)育整齊，肌肉飽滿透明，附肢中色素正常，胃腸充滿食物，蝦苗流動活潑，對水流刺激反應 靈敏，無外部寄生物及附著污物，放苗時水溫20°C，3月20日放苗。養(yǎng)成池水色為黃綠色、 透明度30cm，pH在8. 5，投放密度為5萬只/畝。蝦苗運至養(yǎng)殖池邊，用充氧氣頭向苗袋內 充氧半小時，同時逐步加入養(yǎng)殖池水，使逐步縮小溫差和醒苗；(4)投飼管理，配合飼料1號(購買于廣東恒興集團有限公司，下同)為常規(guī)的 對蝦養(yǎng)殖飼料，符合中華人民共和國農業(yè)行業(yè)標準《無公害食品漁用配合飼料安全限量》 (NY5072-2002)的規(guī)定。每次投餌前，將配合飼料1號用蛭弧菌游泳體與蛭質體混合菌劑浸 泡30min，菌劑中的混合菌體濃度達到IO1UO3UO5UOWmL,養(yǎng)殖前期和中期，蝦平均體 長6cm以下時，日投2次，日投放量控制在蝦重的15% ；養(yǎng)殖后期，平均體長6cm以上時，日 投5次，日投放量控制在蝦重的8% ；(5)養(yǎng)殖期的水環(huán)境管理，養(yǎng)殖期間正常曝氣，使水中溶解氧達到5mg/L。采取不 同換水周期，5、10、15、20、25、30天換水一次，每次換掉25cm深的水(量)，透明度保持在 30cm，每次換水后加蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑，使水體中的菌體濃度達到10\103、 105、107pfu/mL,加菌方法為用相應的池水稀釋菌液后，均勻潑灑全池，使菌液混合均勻。實驗分組采用隨機區(qū)組試驗設計，平均分為A-D 4個試驗組，B、C、D每個試驗組有6個小組， 分別為 Bi、Cl、Dl ；B2、C2、D2 ;B3、C3、D3、；B4、C4、D4 ；B5、C5、D5 ；B6、C6、D6 ；B1-D6 每小組 再分為4組，即Bl-l-Bl-4. . . D6-1-D6-4，每組2個重復。對4組試驗對蝦初始體重進行方 差整齊性檢驗，組間差異不顯著(P > 0. 05)。四組試驗組的處理如下A組工廠生產的養(yǎng)殖方式，池塘水透明度低于20cm時進行換水，每次換水換掉 50cm深的水(量)，維持池水透明度在35cm，投放配合飼料1號B組在水中潑灑蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑，使水體中菌體濃度分別達到 Io1UO3UO5UObfuAiL,投放配合飼料1號C組投喂?jié)舛葹?01、ΙΟ3、105、107pfu/mL的蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑浸泡 后的配合飼料1號D組在水中加入蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑，使菌體濃度分別達到101、103、 105U07pfu/mL,同時分別投喂?jié)舛葹镮o1UO3UO5UOYfuAiL的蛭弧菌蛭質體與游泳體混合 菌劑浸泡后的配合飼料1號；Bi、Cl、Dl組每5天換水一次，換掉25cm深的水(量)B2、C2、D2組每10天換水一次，換掉25cm深的水(量)B3、C3、D3組每15天換水一次，換掉25cm深的水(量)B4、C4、D4組每20天換水一次，換掉25cm深的水(量)B5、C5、D5組每25天換水一次，換掉25cm深的水(量)B6、C6、D6組每30天換水一次，換掉25cm深的水(量)B1-1、C1-1、D1_1. . . D6_l換水后加入蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑使水體中菌體濃度為IO1PfuAiLB1-2、C1-2、D1_2. . . D6_2換水后加入蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑使水體中菌 體濃度為l(fpfu/mLB1-3、C1-3、D1_3. . . D6_3換水后加入蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑使水體中菌 體濃度為105pfu/mLB1-4、C1-4、D1_4. . . D6_4換水后加入蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑使水體中菌 體濃度為l(fpfu/mL斑節(jié)對蝦實驗效果檢測(1)生長指標的測定每組隨機抽取50尾對蝦檢測生長情況，對蝦長度測定采用精度為0. Imm的游標卡 尺度量，體重采用電子天平稱量。試驗生長指標按如下公式計算成活率(％) = Nt/NoX100% ；增重率(%) = (Wt-W0)/W0X 100% ；體長增長率(%) = (Lt-L0)/L0X 100% ；式中N。為試驗開始時斑節(jié)對蝦總尾數(shù)；Nt為試驗結束時斑節(jié)對蝦總尾數(shù)；W。為試 驗開始時斑節(jié)對蝦體重；Wt為試驗結束時斑節(jié)對蝦體重；L。為試驗開始時斑節(jié)對蝦體長；Lt 為試驗結束時斑節(jié)對蝦體長；試驗測得的斑節(jié)對蝦各項生長指標見表一-表四從表中可以看出，與A組相 比，B、C、D組的成活率、增重率、體長增長率均有明顯提高，B、C、D組成活率的增加值分別 彡25. 38%,26. 28%,28. 55%;增重率的增加值分別彡40. 54%,65. 62%,86. 3%;體長增長 率增加值分別彡1. 89%、2. 99%、3. 03%。從表一-表四可以看出，在對蝦養(yǎng)殖過程中，在相同的換水周期下，隨著蛭弧菌蛭 質體與游泳體混合菌劑濃度升高，成活率、增重率、體長增長率都明顯升高，且都明顯高于 工廠生產對照A組，說明采用添加蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑的方法，能明顯提高斑 節(jié)對蝦的成活率、增重率、體長增長率，這在實際生產過程中，不僅大大節(jié)約了用水量，而且 節(jié)省了大量的人力，物力資源，節(jié)約了養(yǎng)殖成本；從不同換水周期來看，相同濃度下的各組 對蝦成活率、增重率、體長增長率沒有明顯的變化。說明新型養(yǎng)殖方法下，5-30天不換水蛭 弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑均能促進對蝦的生長。就B、C、D三組不同處理方式而言，均 提高對蝦的養(yǎng)殖成活率、增重率和體長增長率，同時在水體與飼料中添加蛭弧菌蛭質體與 游泳體混合菌劑效果最佳。因此，無論在水中添加蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑，使水體蛭弧菌蛭質體與 游泳體混合菌劑菌體濃度為IO1-IO7PfuAiL,或者是在飼料中添加濃度為IO1-KfpfuAiL蛭 弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑，或是兩者兼用，雖長達30天不換水，均可促進斑節(jié)對蝦的 攝食和快速生長，并且同時在水中與飼料中添加菌液的效果最好。表一斑節(jié)對蝦生長指標的檢測
權利要求
1.蛭弧菌混合體菌液在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用，其特征在于所述蛭弧菌混合體菌液 為蛭弧菌蛭質體菌液和游泳體菌液混合。
2.根據權利要求1所述蛭弧菌混合體菌液在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用，其特征在于所 述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，于2009年8月7日保藏于中國典型培養(yǎng)物 保藏中心，保藏編號為CCTCC NO =M 209172。
3.根據權利要求1所述蛭弧菌混合體菌液在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用，其特征在于所 述蛭弧菌混合體菌液為蛭質體菌液與游泳體菌液按細菌數(shù)11混合。
4.根據權利要求1所述蛭弧菌混合體菌液在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用，其特征在于 所述蛭弧菌混合體菌液在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用是將飼料在蛭弧菌混合體菌液中浸泡 15-45min。
5.根據權利要求1所述蛭弧菌混合體菌液在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用，其特征在于所 述蛭弧菌混合體菌液在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用是在水體中添加蛭弧菌混合體菌液，使水體 中蛭弧菌混合體濃度為IO1 l(fpfu/mL。
6.根據權利要求1所述蛭弧菌混合體菌液在斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖中的應用，其特征在于所 述蛭弧菌混合體菌液的制備方法如下所述蛭弧菌蛭質體菌液按照以下方法制備得到接種宿主于營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中， 在;35°C和200rpm搖床培養(yǎng)12h，培養(yǎng)液經4°C，5000 8000rpm離心10 20min后，沉淀 加入至DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌BDFM05，在溫度25 下，以150 300rpm搖 床培養(yǎng)36 48h，得到含蛭弧菌蛭質體和蛭弧菌游泳體的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液在4°C溫度下以 6000 8000rpm離心15 20min后，去除含蛭弧菌游泳體的上清，得到的沉淀即為蛭弧菌 蛭質體；將蛭弧菌蛭質體用DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0. 2mol/L pH值為7. 2 7. 6 的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到濃度為IO6 lOYfu/mL的蛭弧菌蛭質體菌液；所述蛭弧菌游泳體菌液按照以下方法制備得到將蛭弧菌蛭質體制備方法中的含蛭弧 菌游泳體的上清經16000 18000rpm離心15 20min后，沉淀用DNB液體培養(yǎng)基、水、生 理鹽水或0. 2mol/L pH值為7. 2 7. 6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到濃度為IO6 109pfu/mL 的蛭弧菌游泳體菌液。將蛭弧菌蛭質體菌液和游泳體菌液混合得蛭弧菌混合體菌液。
全文摘要
本發(fā)明特別涉及蛭弧菌蛭質體與游泳體混合體菌液在斑節(jié)對蝦等海產品養(yǎng)殖中的應用，方法為在水體中添加蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑，使水體蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌體濃度為101-107pfu/mL，同時飼料要用濃度為101-107pfu/mL的蛭弧菌蛭質體與游泳體混合菌劑浸泡30min，養(yǎng)殖期間可達到30天換水一次。本發(fā)明為生物養(yǎng)殖方法，綠色、安全、無污染，效果顯著，能夠改善水質，促進斑節(jié)對蝦生長，提高免疫力，提高成活率，有極好的發(fā)展前景。對提高經濟效益和食用安全性，保障人類健康具有十分重要的意義。
文檔編號A23K1/18GK102038089SQ20101026864
公開日2011年5月4日 申請日期2010年8月31日 優(yōu)先權日2010年8月31日
發(fā)明者王沛賢, 蔡俊鵬 申請人:華南理工大學