專利名稱：一種節(jié)能減排的鮑魚育苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種水產(chǎn)養(yǎng)殖貝類育苗方法，特別涉及促進(jìn)鮑苗快速生長、增強(qiáng)免疫 力，并能提高鮑苗成活率的方法。
背景技術(shù)：
鮑魚為一種海生貝類動(dòng)物，鮑魚除肉質(zhì)鮮美，營養(yǎng)價(jià)值高外，其彩虹色的貝殼形狀 奇特，閃閃發(fā)光，是制作上乘工藝品的原料，又是護(hù)眼、保肝的藥材，因此既是營養(yǎng)食品又是 不可多得的海洋藥物。隨著人們生活水平的日益提高，國際市場對(duì)鮑魚的需求大增，市場前 景廣闊。近期澳大利亞等國成功地在鮑魚體內(nèi)培育珍珠，使養(yǎng)鮑業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益進(jìn)一步提高。 我國是世界上最早食用鮑魚的國家之一。近三十年來我國養(yǎng)鮑現(xiàn)狀可謂發(fā)展迅速、成果喜 人，但我們也要清楚地看到養(yǎng)殖過程還存在水質(zhì)、餌料、密度、管理、病害等諸多問題，制約 著養(yǎng)鮑業(yè)的持續(xù)、穩(wěn)定、健康的發(fā)展。鮑病在養(yǎng)殖的很多階段都有可能發(fā)生，特別是在育苗 過程中，常常爆發(fā)大規(guī)模的掉板現(xiàn)象，很多養(yǎng)殖場連續(xù)多批培苗卻顆粒無收，給養(yǎng)殖戶帶來 了極大的經(jīng)濟(jì)損失。目前常規(guī)的防治鮑魚掉板的方法主要是定期施用抗生素，抗生素的優(yōu)點(diǎn)是藥物直 接入水、濃度高、吸收快、療效好；缺點(diǎn)是可能會(huì)對(duì)鮑魚產(chǎn)生刺激性、引發(fā)新病癥。如果長期 大量使用抗生素不僅會(huì)使致病菌耐藥菌株增加，也會(huì)使一些鮑病例變得難以治愈。此外鮑 體內(nèi)抗生素殘留會(huì)影響鮑魚品質(zhì)，不利于銷售，進(jìn)而造成養(yǎng)殖者的經(jīng)濟(jì)損失。中草藥防治鮑 魚掉板也是一種常見的辦法，具有無藥物殘留、經(jīng)濟(jì)效益高的優(yōu)點(diǎn)，但也有見效慢的缺點(diǎn)， 因而尋求一種更高效、經(jīng)濟(jì)的辦法顯得極為迫切。蛭弧菌為寄生性革蘭氏陰性菌，具有寄生、進(jìn)而裂解其它細(xì)菌的作用，是一種優(yōu)良 的微生物控制劑。蛭弧菌蛭質(zhì)體是蛭弧菌在特定宿主細(xì)菌的周質(zhì)空間內(nèi)進(jìn)行生長繁殖的 形式；蛭弧菌游泳體是蛭弧菌侵入宿主細(xì)菌前的生長形式。用蛭弧菌蛭質(zhì)體合蛭弧菌游泳 體制成的蛭弧菌混合菌液，兼具兩者的優(yōu)點(diǎn)。在鮑魚育苗過程中，傳統(tǒng)的養(yǎng)殖模式是流水 養(yǎng)殖，每天不間斷流水或一天幾個(gè)交換量，這樣就造成了大量的能耗，同時(shí)由于養(yǎng)殖水體沒 有經(jīng)過任何處理直接排放，造成了環(huán)境污染。因此，“綠色養(yǎng)殖”成為許多養(yǎng)殖者的需求，引 起水產(chǎn)界的廣泛關(guān)注，目前用蛭弧菌混合菌液來進(jìn)行鮑魚育苗的養(yǎng)殖方式在國內(nèi)外尚未報(bào) 道。已有的研究表明，作為一種有益微生物制劑，無論是在食品工業(yè)還是在(海洋) 水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域，蛭弧菌的應(yīng)用均是安全的。例如在國外，Lenz and Hespell (1978) 研究發(fā)現(xiàn)，蛭弧菌及對(duì)動(dòng)物及人的細(xì)胞不具侵染性[Lenz R. W.，HespellR. B. Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animal cells. Archives of Microbiology, 1978,119(3) =245-248] 在國內(nèi)，林茂等(2006)研究了蛭弧菌對(duì)魚類細(xì) 胞的作用，發(fā)現(xiàn)它對(duì)魚類細(xì)菌沒有侵染作用[林茂，楊先樂，薛暉，曹海鵬，邱軍強(qiáng)。蛭弧菌 BDH2102對(duì)魚類細(xì)胞及病原菌的作用。微生物學(xué)通報(bào)，2006，33(1) :7_11]。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種節(jié)水型的綠色育苗新方 法，在節(jié)水的同時(shí)，能夠提高鮑魚免疫力，促進(jìn)鮑魚生長，提高鮑苗成活率。本發(fā)明的目的通過下述方案實(shí)現(xiàn)一種節(jié)水型的鮑魚育苗方法，其特征在于，育苗過程如下(1)培藻在育苗池中注入海水并曝氣，自然培藻，附著基為聚乙烯波紋板，光照 控制在2000-50001ux，海水水溫控制在15-28°C ；(2)育苗培藻40天后，開始在育苗池中布卵，并添加蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混 合菌液，使混合菌在水體中的濃度至少達(dá)到10pfu/mL ；其中光照控制在200-30001UX，水溫 控制在15-28 0C ；(3)換水布卵后每5-30天換水一次，每次為全池?fù)Q水；換水后立即添加蛭弧菌混 合菌液，并使蛭弧菌混合菌在水體中的濃度至少達(dá)到lOpfu/mL ；(4)采收待幼鮑殼長到3. 0-6. 5mm,即可進(jìn)行采收；所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp. )BDFM05，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保 藏，其簡稱為CCTCC，保藏編號(hào)為CCTCC NO =M 209172，保藏日期為2009年8月7日。蛭弧 菌BDFM05呈單細(xì)胞，橢圓形，大小為1. 43X0. 53 μ m,端生鞭毛，鞭毛長度至少2 μ m ；蛭弧菌 BDFM05以雙層平板法于28°C培養(yǎng)三天可形成直徑2 3mm的透明圓形噬菌斑。優(yōu)選地，步驟(2)中所述布卵前，育苗池徹底換水，所述蛭弧菌混合菌液在換水后 立即添加進(jìn)去。優(yōu)選地，所述蛭弧菌混合菌在水體濃度為10-107pfu/mL。優(yōu)選地，所述海水經(jīng)過砂濾和沉淀處理。優(yōu)選地，所述布卵初始量為1 3萬粒/m3養(yǎng)殖水體。優(yōu)選地，所述曝氣量控制在10-100L/h/m3。優(yōu)選地，所述布卵后，根據(jù)藻生長狀態(tài)，添加營養(yǎng)鹽3-5g/m3，2_4天添加一次。優(yōu)選地，所述蛭弧菌混合菌液的制作方法，具體步驟為在含副溶血弧菌的DNB培養(yǎng)基中接入蛭弧菌CCTCC M 209172，恒溫?fù)u床160rpm 250rpm、25 32°C培養(yǎng)12 36h ；培養(yǎng)物經(jīng)過6000rpm、4°C離心20min，得到沉淀和上清 液，向沉淀中加入DNB液體培養(yǎng)基懸浮蛭弧菌沉淀物，即制得蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液；將上清液 16000rpm、4°C離心20min，得到沉淀，向沉淀中加入DNB液體培養(yǎng)基懸浮蛭弧菌沉淀物，即 制得蛭弧菌游泳體菌液；將上述制得的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液與蛭弧菌游泳體菌液等濃度、等 體積混合(即細(xì)菌數(shù)1 1混合)，得到蛭弧菌混合菌液。本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果1、本發(fā)明所述的蛭弧菌混合菌液能消除養(yǎng)殖環(huán)境中的鮑魚致病菌。所述蛭弧菌混合菌液對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境中的常見細(xì)菌，包括副溶血弧菌、河流弧菌、溶藻 弧菌等鮑魚致病菌有很強(qiáng)的消除作用。兼具游泳體起效快，活力強(qiáng)和蛭質(zhì)體制備、保存容 易，殺菌時(shí)間久、環(huán)境耐受力強(qiáng)的雙重優(yōu)點(diǎn)。2、本發(fā)明所述的蛭弧菌混合菌液能顯著提高鮑苗體質(zhì)，增強(qiáng)免疫力。本發(fā)明中所述的蛭弧菌混合菌液在控制鮑魚養(yǎng)殖環(huán)境、水體中細(xì)菌的效果顯著， 能夠明顯改善鮑苗體質(zhì)，增強(qiáng)免疫力，從而提高了鮑苗培育的成活率。
4
3、本發(fā)明所述的蛭弧菌混合菌液在控制和消除鮑魚細(xì)菌應(yīng)用中安全性好。蛭弧菌 混合菌液通過裂解致病菌的方法是生物方法。蛭弧菌混合菌液可侵染、裂解宿主細(xì)菌的特 性使之適合作為生物凈化因子，且其在裂解完宿主細(xì)菌后，會(huì)因饑餓而自動(dòng)消亡，從而克服 了抗生素濫用帶來的副作用和常規(guī)消毒液對(duì)鮑魚的不利影響。同時(shí)已有研究證明蛭弧菌對(duì)
人等無毒。4、所述的蛭弧菌混合菌液能凈化水質(zhì)并促進(jìn)鮑魚生長。蛭弧菌混合菌液對(duì)水質(zhì)有凈化作用，能改善動(dòng)物胃腸道環(huán)境，促進(jìn)生長。5、含有本發(fā)明所述的蛭弧菌混合菌液適合推廣應(yīng)用于鮑魚和其他水產(chǎn)養(yǎng)殖過程。蛭弧菌混合菌液對(duì)人和鮑魚無毒副作用。適合于鮑魚大規(guī)模工廠化養(yǎng)殖，可以為 鮑魚的綠色加工生產(chǎn)提供保障并且為控制和消除鮑魚致病菌提供了一種新方法。6、本發(fā)明采用周期換水并添加蛭弧菌混合菌液濃縮液的養(yǎng)殖模式，不僅大量節(jié)約 養(yǎng)殖用水，同時(shí)能提高鮑苗成活率。7、用蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體制成的混合菌液作為控制鮑魚育苗水體細(xì)菌的蛭弧 菌混合菌液，兼具游泳體起效快，活力強(qiáng)和蛭質(zhì)體制備、保存容易，殺菌時(shí)間久、環(huán)境耐受力 強(qiáng)的雙重優(yōu)點(diǎn)。這些優(yōu)點(diǎn)使得蛭弧菌混合菌液非常適合作為抑止或清除生物體及其環(huán)境 中致病菌的生物凈化因子，從而克服了抗生素濫用帶來的副作用和中草藥見效慢的不利因 素，對(duì)防止脫板癥，提高幼鮑在波紋板上的附著量和生長速度有著極其重要的意義。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步具體詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限 于此，對(duì)于未特別注明的工藝參數(shù)，可參照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。本發(fā)明的實(shí)施地位于山東某養(yǎng)殖場，本發(fā)明的鮑苗為皺紋盤鮑，由該養(yǎng)殖場提供。 本發(fā)明實(shí)施地的養(yǎng)殖池建在養(yǎng)殖大棚內(nèi)，每個(gè)水池規(guī)格為2X2X0. 75m，水深為0. 45m。培 藻前各池均用高錳酸鉀溶液消毒，反復(fù)沖洗干凈。水池上方蓋上遮光度為60%的遮光布，避 免光照過強(qiáng)。光照強(qiáng)度一般控制在(200-5000) lux。實(shí)施例1蛭弧菌混合菌液的制備蛭弧菌游泳體的制備將蛭弧菌蛭質(zhì)體制備方法中的含蛭弧菌游泳體的上清經(jīng) 16000rpm離心20min后，得到的沉淀即是蛭弧菌游泳體，加入DNB液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯 0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. Ig,溶于IOOOmL蒸餾水中，pH值為7. 2 7. 6) 懸浮蛭弧菌游泳體，得到10-109pfU/mL的蛭弧菌游泳體濃縮液。蛭弧菌蛭質(zhì)體的制備所述蛭弧菌(Bdellovibrio sp. )BDFM05以雙層平板法于 28°C培養(yǎng)三天可形成直徑2 3mm的透明圓形噬菌斑，所用的蛭弧菌混合菌液以下方法進(jìn) 行發(fā)酵在裝有IOOmL營養(yǎng)肉湯(蛋白胨10g，牛肉膏粉3g，氯化鈉5g，pH 7. 4士0. 2)的錐 形瓶中接種0. 5mL107cfu/mL副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus，購于美國典型微生 物菌種保藏中心 American TypeCulture Collection，編號(hào)ATCC 17802)，200rpm、28°C搖 床培養(yǎng)18小時(shí)，培養(yǎng)液分別于4°C、5000rpm離心15min，棄上清。用5mL生理鹽水懸浮沉 淀菌體，之后加入到一個(gè)裝有IOOmL DNB(dilute nutrient broth)液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉 湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. lg，海水晶28g，溶于IOOOmL蒸餾水，pH值為7. 2 7. 6)的錐形瓶中，再加入ImL含103pfu/mL的蛭弧菌BDFM05 (CCTCC M209172)。恒 溫?fù)u床250rpm、28°C培養(yǎng)36h。培養(yǎng)液于4°C 6000rpm離心20min，保留沉淀，加入IOmL DNB 液體培培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. lg，海水晶28g，溶于 IOOOmL蒸餾水中，pH值為7. 2 7. 6)懸浮沉淀物，得到107-109pfu/mL的蛭弧菌蛭質(zhì)體。將同濃度的游泳體和蛭質(zhì)體等體積混合，可得到蛭弧菌混合菌液。實(shí)施例21、蛭弧菌混合菌液在育苗中應(yīng)用本發(fā)明一共可以分為兩個(gè)階段。第一階段是培藻，在育苗池中注入經(jīng)過砂濾和 沉淀處理的海水并曝氣，附著基為聚乙烯波紋板，光照控制在2000-50001UX，水溫控制在 15-28°C，培藻時(shí)間為40天，這一階段不添加蛭弧菌混合菌液；第二階段是育苗，本發(fā)明的 內(nèi)容主要在此階段展開，培藻40天后，開始在育苗池中布鮑魚受精卵，育苗時(shí)間為40天，這 一階段實(shí)驗(yàn)組在每次換水后立即添加蛭弧菌混合菌液。將實(shí)施例1得到的蛭弧菌混合菌 液，以不同的換水周期，分別向養(yǎng)殖水體投不同濃度的蛭弧菌混合菌液。所有實(shí)驗(yàn)池所處環(huán) 境條件，包括溫度、光照、Ph值、鹽度等相同。所有試驗(yàn)池的換水周期及加菌濃度如下下面具體對(duì)本實(shí)施步驟進(jìn)行描述A組正常流水，日換水量為池水量的2倍，每天早上6:00用高壓水沖洗池子，期 間不加蛭弧菌混合菌液，同工廠生產(chǎn)方式一樣；B 組(B-l、B-2、B_3、B-4) 5 天換(全池)水一次；C 組(C-l、C-2、C-3、C-4) 10 天換(全池)水一次；D 組(D-l、D-2、D_3、D-4) 15 天換(全池)水一次；E 組(E-l、E-2、E_3、E-4) 20 天換(全池)水一次；F 組(F-l、F-2、F_3、F-4) 25 天換(全池)水一次；G 組(G-l、G-2、G_3、G-4) 30 天換(全池)水一次；B-I、C-I、D-I、E-I、F-I、G-I組為每次換水后立即往水池中潑灑蛭弧菌混合菌液， 使水體中蛭弧菌混合菌液濃度達(dá)到10pfu/mL。B-2、C-2、D-2、E-2、F-2、G-2組為每次換水后立即往水池中潑灑蛭弧菌混合菌液， 使水體中蛭弧菌混合菌液濃度達(dá)到103pfu/mL。B-3、C-3、D-3、E_3、F_3、G_3組為每次換水后立即往水池中潑灑蛭弧菌混合菌液， 使水體中蛭弧菌混合菌液濃度達(dá)到105pfu/mL。B-4、C-4、D-4，E_4、F_4、G_4組為每次換水后立即往水池中潑灑蛭弧菌混合菌液， 使水體中蛭弧菌混合菌液濃度達(dá)到107pfu/mL。在第一階段培藻過程中，曝氣量控制在50L/h/m3，并密切觀察，從第五天開始，可 以觀察到黃色的波紋板兩面不均勻附有褐藻，此時(shí)控制光照在2000-50001UX左右，水溫控 制在15-28°C ；根據(jù)藻生長狀況適量添加營養(yǎng)鹽(N P Si Fe = 5 1 1 1)，一 般的，3-5g/m3水體，2-4天添加一次，并及時(shí)將采苗框翻轉(zhuǎn)，利于藻均勻附著在波紋板上。十 天后，可以觀察到波紋板的兩面都較均勻的附著一薄層褐藻，取少量在顯微鏡下鏡檢，所見 主要有大型舟形藻、小型舟形藻、菱形藻和卵形藻等，比例不一。在第二階段育苗過程中，需要合理調(diào)節(jié)光照，光照一般控制在200-20001UX之間， 為藻提供比較適度的條件，以防止藻生長過快加速老化或生長速度過慢而被鮑苗消耗殆
6盡。在藻培起來后，把皺紋盤鮑的受精卵潑灑到水池里。每池潑灑(也叫布卵)5萬個(gè)，布 卵水溫控制在17-22°C左右，布卵3天內(nèi)，可以觀察到水體中很多浮游的擔(dān)輪幼蟲，這一時(shí) 期換水需要用200目濾網(wǎng)過濾，以防止幼蟲流失。七天后，在藻板的兩面都可以看到附著有 微小的匍匐幼體，小心刮取顯微鏡下鏡檢，觀察其活力，隨著鮑苗的生長，需要消耗波紋板 上的藻類，所以需要根據(jù)板上藻的狀態(tài)適度添加營養(yǎng)鹽，到大多數(shù)板兩面的藻快要吃光時(shí)， 要及時(shí)下板。從培藻到采苗，時(shí)間為80天，稚鮑體長至3. 0-6. 5mm即可收苗，波紋板上的單細(xì)胞 藻類部分老化，少數(shù)波紋板上的藻已被吃光，所有水池沒有發(fā)現(xiàn)白板或脫板現(xiàn)象，每張波紋 板上的附苗量為300-600粒不等，最多的一張板上達(dá)到1200粒左右，具體的育苗指標(biāo)與測 量方法如下(1)鮑苗初始量，每池5萬苗。(2)收苗平均殼長，隨機(jī)抽取50粒鮑苗，測量殼長，取平均值。(3)殼長平均日增長量，收苗平均殼長，取30天的平均值。(4)鮑苗平均個(gè)體重量，隨機(jī)抽取50粒鮑苗，稱其總重后取平均值。(5)收苗量，稱取5g鮑苗，計(jì)算其粒數(shù)，將收集的鮑苗稱其總重，后估算鮑苗的粒 數(shù)。(6)成活率，某階段結(jié)束時(shí)鮑苗量占該階段投苗量的百分率。此種方法對(duì)鮑魚育苗的各項(xiàng)指標(biāo)影響具體見以下各表。2、鮑魚免疫指標(biāo)測定試驗(yàn)結(jié)束每組取樣120個(gè)，20個(gè)/管放于6個(gè)分別盛有l(wèi)mLHank’ s緩沖液(pH值 7-8)的2mL-Eppendorf管中，貯于-80°C以備抗免疫指標(biāo)的測定。測定時(shí)取出樣品，使其在 冰上融化，進(jìn)行勻漿，然后eOOOr/min，_4°C離心5min，取上清用于免疫指標(biāo)的測定。①酚氧化物酶的測定酚氧化物酶的活性測定是通過測定和L-DOPA (左旋多巴)反應(yīng)生成的多巴胺的吸 光值來計(jì)算的。把每個(gè)樣品100 μ L加到1. 5mL的Eppendorf管中，每個(gè)樣品重復(fù)三次。再 加入用PBS液配制的0. 5mg/mL海藻酸鈉在26_27°C下反應(yīng)30min，加入50 μ L的用PBS液 配制的3mg/ml的L-DOPA (左旋多巴)，IOmin后，在490nm處讀取吸光值。對(duì)照液用相應(yīng)的 PBS液代替海藻酸鈉。②溶菌酶活力測定以溶壁微球菌凍干粉為底物。用0. lmol/L,pH = 6.4的磷酸鹽緩沖液配成底物懸 液(OD57tlnm 0. 3)，取3. OmL該懸液于試管內(nèi)置冰浴中，再加入50 μ L待測血清，混合，測Atl 值。然后將試液移入37°C溫浴中置30min，取出后再置于冰浴中l(wèi)Omin，以終止反應(yīng)，測其A 值。溶菌活力Ul按(A。-A) /A式計(jì)算。③感染實(shí)驗(yàn)感染試驗(yàn)于預(yù)先消毒的盛有15L砂濾海水(鹽度29 30%。)的透明水族箱中進(jìn) 行，從A、B-I、B-2. . . . G-4各個(gè)組隨機(jī)取鮑魚苗200顆，平均分成兩組，設(shè)兩個(gè)重復(fù)。一組 在水體加入副溶血弧菌懸液，并使水體中副溶血弧菌濃度達(dá)到IO8 9CfuAiL ；另一組不在養(yǎng) 殖水體中加任何菌液，正常養(yǎng)殖。試驗(yàn)水溫保持在18 24°C，每天換水量50 %，5天徹底 換水，充氣培養(yǎng)。人工感染后，記錄鮑苗的殼色變化、運(yùn)動(dòng)、攝食及死亡情況連續(xù)觀察IOd以上，最終計(jì)算成活率，采用相對(duì)存活率(Relative Percent Survival, RPS)計(jì)算式RPS (% ) = (1-免疫組死亡率/對(duì)照組死亡率)X 100%此種方法對(duì)育苗的各項(xiàng)指標(biāo)影響具體見下表表15天換水周期對(duì)皺紋盤鮑育苗的影響
^^^^^^號(hào)AB-IB-2B-3B-4鮑苗初始量(粒)5000050000500005000050000收苗平均殼長(mm)4.294.845.325.685.89殼長平均日增長量(μηι)107.46121.00133.00142.02147.25平均個(gè)體重量(毫克)11.8414.4616.5823.7623.78收苗量(粒)3278537445431704506545690成活率(％)65.5774.8986.3490.1391.38酚氧化酶活性(U/mL)0.6970.8750.9641.1621.346溶菌酶活性(U/mL)0.3550.4370.5560.6670.689RPS(%)088.692.597.7100 表210天換水周期對(duì)皺紋盤鮑育苗的影響
AC-IC-2C-3C-4鮑苗初始量(粒)5000050000500005000050000收苗平均殼長(mm)4.294.755.405.655.81殼長日增長量((μιη)107.46118.75135.00141.40145.25平均個(gè)體重量(毫克)11.8414.8616.3623.7523.79收苗量(粒)3278537380432254504545585成活率(％)65.5774.7686.4590.0991.17酚氧化酶(PO) 活性(U/mL)0.6970.8730.9621.1591.342溶菌酶活性(U/mL)0.3550.4350.5510.6640.687
RPS(%)086.690.695.5100 表3 15天換水周期對(duì)皺紋盤鮑育苗的影響
權(quán)利要求
一種節(jié)能減排的鮑魚育苗方法，其特征在于，包括如下步驟(1)培藻在育苗池中注入海水并曝氣，自然培藻，附著基為聚乙烯波紋板，光照控制在2000 5000lux，水溫控制在15 28℃；(2)育苗培藻40天后，開始在育苗池中布卵，并添加蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合菌液，使混合菌在水體中的濃度至少達(dá)到10pfu/mL；其中光照控制在200 3000lux，水溫控制在15 28℃；(3)換水布卵后每5 30天換水一次，每次為全池?fù)Q水；換水后立即添加蛭弧菌混合菌液，并使蛭弧菌混合菌在水體中的濃度至少達(dá)到10pfu/mL；(4)采收待幼鮑殼長達(dá)到3.0 6.5mm，即可進(jìn)行采收；所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其簡稱為CCTCC，保藏編號(hào)為CCTCC NOM 209172，保藏日期為2009年8月7日。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的育苗方法，其特征在于，步驟(2)中在鮑魚布卵前，育苗池徹 底換水，所述蛭弧菌混合菌液在換水后立即添加進(jìn)去。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的育苗方法，其特征在于，步驟(2)和(3)中所述蛭弧菌混合菌 在水體中的濃度為10-107pfu/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的育苗方法，其特征在于，步驟(1)中所述海水經(jīng)過砂濾和沉淀 處理。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的育苗方法，其特征在于，步驟(1)中所述藻為底棲硅藻。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的育苗方法，其特征在于，步驟(2)中所述曝氣量控制在 10-100L/h/m3。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的育苗方法，其特征在于，步驟(2)中所述鮑魚布卵初始量為 1 3萬粒/m3，布卵后，根據(jù)藻生長狀態(tài)，添加營養(yǎng)鹽3-5g/m3，2-4天添加一次。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述的育苗方法，其特征在于，所述蛭弧菌混合菌液的 制備方法為在含副溶血弧菌的DNB培養(yǎng)基中接入蛭弧菌BDFM05，恒溫?fù)u床160rpm 250rpm、25 32°C培養(yǎng)12 36h ；培養(yǎng)物經(jīng)過6000rpm、4°C離心20min，得到沉淀和上清液，向沉淀中加 入DNB液體培養(yǎng)基懸浮蛭弧菌沉淀物，即制得蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液；將上清液16000rpm、4°C 離心20min，得到沉淀，向沉淀中加入DNB液體培養(yǎng)基懸浮蛭弧菌沉淀物，即制得蛭弧菌游 泳體菌液；將上述制得的蛭弧菌蛭質(zhì)體與游泳體的菌液混合，即為蛭弧菌混合菌液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的育苗方法，其特征在于，所述蛭弧菌蛭質(zhì)體與游泳體按細(xì)菌 數(shù)1 1的比例混合。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種節(jié)能減排的鮑魚育苗方法，育苗過程如下(1)培藻；(2)育苗在育苗過程中添加蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合菌液液，使混合菌在水體濃度至少達(dá)到10pfu/mL；所述蛭弧菌菌株為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號(hào)為CCTCC NOM 209172，保藏日期為2009年8月7日；(3)換水布卵后每5-30天一次，換水后立即添加蛭弧菌混合菌液液；(4)采收。所述蛭弧菌混合菌液對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境中的常見細(xì)菌有很強(qiáng)的消除作用。由于蛭弧菌混合菌液對(duì)鮑魚無毒副作用，因此適合于鮑魚大規(guī)模工廠化養(yǎng)殖，能提高鮑苗培育成活率。
文檔編號(hào)A01K61/00GK101933479SQ20101027086
公開日2011年1月5日 申請(qǐng)日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者蔣小平, 蔡俊鵬 申請(qǐng)人:華南理工大學(xué)