專利名稱：一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖貝類育苗方法領(lǐng)域，特別涉及一種能夠促進(jìn)九孔鮑(Haliotis diversicolor aquatilis)鮑苗生長的新型、節(jié)水節(jié)能、綠色環(huán)保的育苗方法。
背景技術(shù)：
鮑為我國的八大海珍之一，具有很高的經(jīng)濟(jì)和藥用價(jià)值。我國的鮑養(yǎng)殖于20世 紀(jì)70年代開始起步，到80年代中期已形成規(guī)模化生產(chǎn)，此后更是發(fā)展迅猛，沿海各地的 養(yǎng)鮑業(yè)都形成了較大的規(guī)模。然而隨著環(huán)境污染的加劇、養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大和集約化程度 的提高，鮑苗的病害也相繼發(fā)生，并且有逐年加重的趨勢，已經(jīng)對我國養(yǎng)鮑業(yè)的發(fā)展構(gòu) 成嚴(yán)重威脅。尤其是九孔鮑鮑苗，從2000年開始，各養(yǎng)殖場相繼出現(xiàn)九孔鮑苗大規(guī)模掉 板的現(xiàn)象，病害問題頻繁，嚴(yán)重影響了鮑養(yǎng)殖生產(chǎn)，致使許多養(yǎng)殖戶放棄養(yǎng)殖九孔鮑。病原體感染是引起九孔鮑掉板的主要原因，人工養(yǎng)殖條件下主要是細(xì)菌性疾病 和病毒性疾病。常見的細(xì)菌性病原體有副溶血弧菌、河流弧菌、副溶藻弧菌等。副溶 血弧菌主要導(dǎo)致鮑魚肌肉萎縮病，死亡率可達(dá)50%左右，而河流弧菌和副溶藻弧菌引發(fā) 的感染可造成60 70%的死亡率。目前常規(guī)的防治鮑魚掉板的方法主要是定期施用抗 生素，抗生素的優(yōu)點(diǎn)是藥物直接入水、濃度高、吸收快、療效好；缺點(diǎn)是可能會(huì)對鮑魚 產(chǎn)生刺激性、引發(fā)新病癥。如果長期大量使用抗生素不僅會(huì)使致病菌抗藥性增強(qiáng)，也會(huì) 使一些鮑病例變得難以治愈。此外鮑體內(nèi)抗生素殘留會(huì)影響鮑魚品質(zhì)，不利于銷售，進(jìn) 而造成養(yǎng)殖者的經(jīng)濟(jì)損失。中草藥防治鮑魚掉板也是一種常見的辦法，雖具有無藥物殘 留、經(jīng)濟(jì)效益高的優(yōu)點(diǎn)，但也有見效慢的缺點(diǎn)，因而尋求一種更高效、經(jīng)濟(jì)的育苗方法 顯得極為迫切。蛭弧菌是寄生于其他細(xì)菌，并能導(dǎo)致宿主細(xì)菌裂解的一類細(xì)菌；比一般細(xì)菌 小，能通過細(xì)菌濾器，有類似噬菌體的作用；革蘭氏染色呈陰性，可以裂解包括副溶血 弧菌、溶藻弧菌等引發(fā)鮑病害的潛在致病菌。用蛭弧菌游泳體和蛭質(zhì)體的混合制劑作為 九孔鮑育苗的微生物制劑，兼具游泳體起效快，活力強(qiáng)和蛭質(zhì)體制備、保存容易，殺菌 作用時(shí)間更久和環(huán)境耐受力更強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。這些特性使得蛭弧菌混合制劑適合作為一種微 生物制劑，以應(yīng)用于九孔鮑的育苗過程中。另外，本發(fā)明中育苗技術(shù)采用的是周期換 水，如此不僅減少養(yǎng)殖用水量和廢水排放，更是減少能耗，降低了養(yǎng)殖成本。因此，該 方法是一種便利可行、綠色、低碳、節(jié)能環(huán)保的育苗方法。已有的研究表明，作為一種有益微生物制劑，無論是在食品工業(yè)還是在(海洋) 水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域，蛭弧菌的應(yīng)用均是安全的。例如在國外，Lenz and Hespell(1978) 研究發(fā)現(xiàn)，蛭弧菌及對動(dòng)物及人的細(xì)胞不具侵染性[Lenz R.W., Hespell R.B.Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animal cells.Archives of Microbiology, 1978, 119(3) 245-248]。在國內(nèi)，林茂等(2006)研究了蛭弧菌對魚類細(xì)胞的作用，發(fā)現(xiàn)它對 魚類細(xì)菌沒有侵染作用[林茂，楊先樂，薛暉，曹海鵬，邱軍強(qiáng)。蛭弧菌BDH2102對魚 類細(xì)胞及病原菌的作用。微生物學(xué)通報(bào)，2006，33(1) 7-11]。

發(fā)明內(nèi)容
為克服上述現(xiàn)有育苗技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種節(jié)能減排 的九孔鮑育苗方法。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法，包 括以下操作步驟(1)培藻采苗前30 45天開始在培藻池中進(jìn)行培藻；培藻過程中控制光照強(qiáng) 度在2000 50001ux，控制水溫在15 28°C ；(2)加營養(yǎng)鹽培藻期間，按照3 5g/m3養(yǎng)殖水體，2 4天添加一次的方式 添加營養(yǎng)鹽；(3)采苗布卵將培藻池?fù)Q掉池水，加入蛭弧菌混合制劑，使池水中的蛭弧菌 混合制劑的起始濃度達(dá)10 IO7PfuAnL;下苗時(shí)每池布九孔鮑受精卵4 5萬粒，并按照 曝氣量10 60L/h/m3進(jìn)行曝氣，光照控制在200 30001ux，水溫控制在15 28°C ；(4)換水每隔5 30天換水一次，每次換水后加入蛭弧菌混合制劑，使池水 中的蛭弧菌混合制劑濃度達(dá)到10 107pfu/mL ；(5)剝離采收下苗30 50天，稚鮑殼長達(dá)到3.0 7.0mm后進(jìn)行剝離采收。步驟(1)所述培藻池洗刷干凈后采用高錳酸鉀溶液進(jìn)行消毒，然后注入經(jīng)過砂 濾和沉淀處理的海水；培藻池在注入海水之前，在池進(jìn)水管口包扎一過濾袋，防止細(xì)沙 入池。步驟(1)所述藻為底棲硅藻；所述底棲硅藻優(yōu)選為月形藻、菱形藻、舟形藻和 卵形藻。步驟⑴所述培藻以無色透明聚乙烯薄膜為附著基。步驟(2)所述營養(yǎng)鹽含有質(zhì)量比為5 1 1 1的N元素、P元素、Si元素 禾口 Fe元素。步驟(3)和⑷所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05,所述蛭弧菌于 2009年8月7日保藏于湖北省武漢市珞珈山武漢大學(xué)內(nèi)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏 編號(hào)為 CCTCC NO: M 209172。所述蛭弧菌BDFM05進(jìn)行負(fù)染后于電子顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)觀察BDFM05呈 單細(xì)胞，橢圓形，大小為1.43X0.53um，端生鞭毛，鞭毛長度至少2um ；所述蛭弧菌 BDFM05以雙層平板法于28°C培養(yǎng)三天可形成直徑2 3mm的透明圓形噬菌斑；步驟(3)和(4)所述蛭弧菌混合制劑為蛭弧菌游泳體菌液和蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液按 細(xì)菌個(gè)數(shù)1 1混合而成。所述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液按照以下方法制備得到接種宿主于營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng) 基中，在35°C和200rpm搖床培養(yǎng)12h，培養(yǎng)液經(jīng)4°C，5000 8000rpm離心10 20min 后，沉淀加入至DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌BDFM05，在溫度25 35°C下，以 150 300rpm搖床培養(yǎng)36 48h，得到含蛭弧菌蛭質(zhì)體和蛭弧菌游泳體的培養(yǎng)液，培養(yǎng) 液在4°C溫度下以6000 8000rpm離心15 20min后，去除含蛭弧菌游泳體的上清， 得到的沉淀即為蛭弧菌蛭質(zhì)體；將蛭弧菌蛭質(zhì)體用DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或 0.2mol/L pH值為7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到濃度為IO6 109pfo/mL的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液；所述蛭弧菌游泳體菌液按照以下方法制備得到將蛭弧菌蛭質(zhì)體制備方法中的 含蛭弧菌游泳體的上清經(jīng)16000 18000rpm離心15 20min后，沉淀用DNB液體培養(yǎng) 基、水、生理鹽水或0.2mol/LpH值為7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到濃度為IO6 109pfU/mL的蛭弧菌游泳體菌液。所述宿主為嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)；所述DNB液體培養(yǎng)基是將 營養(yǎng)肉湯0.8g、酪蛋白酸水解物0.5g和酵母精提物O.lg溶于IOOOmL蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH 值至7.2 7.6。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果(1)本發(fā)明的蛭弧菌混合制劑對水產(chǎn)致病或潛在致病菌有強(qiáng)的裂解力，而且蛭弧 菌混合制劑本身能改善養(yǎng)殖生物腸道環(huán)境，促進(jìn)生長，提高鮑苗免疫力。因此，與其他 的微生物制劑相比，本發(fā)明中的蛭弧菌混合制劑具有提高鮑苗自身的免疫力，提高其存 活率，加快鮑苗的生長速度等特點(diǎn)。(2)蛭弧菌混合制劑包括蛭弧菌蛭質(zhì)體，而蛭弧菌蛭質(zhì)體還具有潛在的滅活疫苗 功能。在蛭質(zhì)體發(fā)育期間，蛭弧菌并不改變宿主細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)，使原宿主仍具有免疫 原性，可刺激生物體，產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。因此，可有效預(yù)防九孔鮑鮑苗的細(xì)菌性疾病 的發(fā)生，提高育苗成活率。(3)現(xiàn)有的九孔鮑育苗技術(shù)采用的是流水的方式，不僅耗費(fèi)了大量的人力、物 力、財(cái)力，還會(huì)對環(huán)境造成一定的污染。而利用該蛭弧菌混合制劑的九孔鮑育苗方法可 以減少了供水量的需求，很大程度上節(jié)約了生產(chǎn)成本，而且不會(huì)對環(huán)境造成不良影響， 對鮑業(yè)及其他水產(chǎn)品養(yǎng)殖的可持續(xù)發(fā)展有著重要的意義。


圖1為各組的細(xì)菌感染實(shí)驗(yàn)的檢測結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于 此。對于未特別注明的工藝參數(shù)，可參照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。本發(fā)明實(shí)施地為福建某鮑魚養(yǎng)殖場。養(yǎng)殖池建在養(yǎng)殖大棚內(nèi)，每個(gè)水池規(guī)格為 2X2X0.75m,水深為0.40m。各池均用高錳酸鉀溶液消毒，反復(fù)沖洗干凈。水池上方 蓋上遮光度為80%的遮光布，避免光照過強(qiáng)。光照強(qiáng)度一般控制在(200 5000)lux。實(shí)施例1(1)用于九孔鮑(Haliotisdiversicoloraquatilis)育苗的蛭弧菌混合制劑的制備蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的制備在一個(gè)裝有IOOmL營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基(蛋白胨 IOg,牛肉膏粉3g，氯化鈉5g，pH 7.4士0.2)的錐形瓶中接種0.5mL107cfo/mL嗜水氣單 胞菌(Aeromonas hydrophila，菌種編號(hào)GIM 1.172，來源于廣東省微生物菌種保藏中 心)，200rpm、35°C搖床培養(yǎng)12小時(shí)，培養(yǎng)液于4°C、5000rpm離心15min，棄上清。 用5mL生理鹽水懸浮沉淀菌體，之后加入到一個(gè)裝有IOOmL DNB液體培養(yǎng)基(營養(yǎng)肉 湯0.8g,酪蛋白酸水解物0.5g，酵母精提物O.lg，溶于IOOOmL蒸餾水中，pH值為7.2 7.6)的錐形瓶中，再接入ImL含103pfu/mL的的蛭弧菌BDFM05 (CCTCC M209172)。恒 溫?fù)u床250rpm、28°C培養(yǎng)36h。培養(yǎng)液于4°C 6000rpm離心20min，去除含蛭弧菌游泳體 的上清，保留沉淀(即蛭弧菌蛭質(zhì)體)，加入IOmL DNB液體培養(yǎng)基重新懸浮蛭弧菌蛭質(zhì) 體，即得到濃度為109pfu/mL的蛭弧菌BDFM05蛭質(zhì)體菌液；蛭弧菌游泳體菌液的制備將上述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液制備方法中的含蛭弧菌游 泳體的上清經(jīng)16000rpm離心20min后，得到的沉淀即是蛭弧菌游泳體，加入IOmL DNB 液體培養(yǎng)基懸浮蛭弧菌游泳體即，得到濃度為109pfU/mL的蛭弧菌BDFM05游泳體菌液。蛭弧菌混合制劑由蛭弧菌BDFM05游泳體菌液和蛭弧菌BDFM05蛭質(zhì)體菌液按 細(xì)菌數(shù)11混合組成；(2)蛭弧菌混合制劑在九孔鮑育苗中的應(yīng)用本發(fā)明一共可以分為兩個(gè)階段。第一階段是培藻，培藻時(shí)間為35天，該階段不 添加蛭弧菌混合制劑；第二階段是育苗階段，本發(fā)明的內(nèi)容主要在此階段展開。育苗時(shí) 間為40天，這一階段實(shí)驗(yàn)組在每次換掉全池的水后立即添加蛭弧菌混合制劑。以不同的 換水周期，分別向養(yǎng)殖水體投不同濃度的蛭弧菌混合制劑。換水周期分別為5、10、 15、20、25、30天，每次換水量為一個(gè)量程。所有實(shí)驗(yàn)池所處環(huán)境條件，包括溫度、光 照、pH值、鹽度等相同。所有試驗(yàn)池共分25組，為A、B-U B-2、B_3、B_4，C_l、 C-2、C-3、C-4, D-I、D-2、D_3、D_4，E_l、E_2、E_3、E_4，F(xiàn)_l、F_2、F_3、 F-4，G-U G-2、G-3、G_4，每組2個(gè)平行。各組的換水周期及加菌濃度如下下面具體對本實(shí)施步驟進(jìn)行描述A組正常流水，日換水量為池水量的3倍，每天早上7:00用高壓水沖洗池 子，期間不加蛭弧菌混合制劑，為工廠生產(chǎn)方式；Bii (B-UB-2、B-3、B-4)5天換(全池)水一.次；
Cii (C-UC-2、C-3、C-4)10天換(全池)水--次
Dla (D-uD-2、D-3、D-4)15天換(全池)水一次
Eg1 (E-UE-2、E-3、E-4)20天換(全池)水--次;
Fi1 (F-UF-2、F-3、F-4)25天換(全池)水一次；
G 組(G-1、G-2、G-3、G-4)30天換(全池)水一次B-U C-U D-U E-U F-U G_1組為每次換水后立即往水池中潑灑蛭弧菌混 合制劑，使水體中蛭弧菌混合制劑菌體濃度達(dá)到lOpfo/mL。B-2、C-2、D-2、E_2、F_2、G_2組為每次換水后立即往水池中潑灑蛭弧菌混 合制劑，使水體中蛭弧菌混合制劑菌體濃度達(dá)到103pfU/mL。B-3、C-3、D-3、E_3、F_3、G_3組為每次換水后立即往水池中潑灑蛭弧菌混 合制劑，使水體中蛭弧菌混合制劑菌體濃度達(dá)到105pfU/mL。B-4、C-4、D-4，E_4、F_4、G_4組為每次換水后立即往水池中潑灑蛭弧菌混 合制劑，使水體中蛭弧菌混合制劑菌體濃度達(dá)到107pfU/mL。在第一階段培藻過程中，每池布附著基膜20張，接藻種(當(dāng)?shù)睾Ｋ凶匀?生的)，控制光照強(qiáng)度在2000 50001ux，水溫在15 25°C;根據(jù)藻生長狀況，按 照5g/m3水體，4天添加一次的方式添加營養(yǎng)鹽，施加比例為N P Si Fe =5:1:1: l(ppm)，10天后，可以觀察到整張薄膜上呈淡綠和金黃半透明色，其為附 著一薄層藻，取少量在顯微鏡下鏡檢，所見藻類主要有大型舟形藻、小型舟形藻、菱形 藻和卵形藻等，比例不一。在第二階段育苗過程中，也需要合理調(diào)節(jié)光照，光照一般控制在200-20001UX之 間，為藻提供比較適度的條件，以防止藻生長過快加速老化或生長速度過慢而被鮑苗消耗。在藻培起來后，把九孔鮑的受精卵潑灑到水池里。每池潑灑(也叫布卵)5萬 個(gè)。布卵水溫控制在17-22°C左右，布卵3天內(nèi)，可以觀察到水體中浮游很多擔(dān)輪幼蟲， 這一時(shí)期換水需要用200目濾網(wǎng)過濾，以防止幼蟲流失。七天后，幼蟲開始變態(tài)，在附 著基上可以看到附著有微小的匍匐幼體，小心刮取顯微鏡下鏡檢，觀察其活力。從培藻到收苗，時(shí)間為75天，稚鮑體長至3.0 7.0mm，附著基上的單細(xì)胞藻 類部分老化，少數(shù)附著基上的藻已被吃光，所有水池沒有發(fā)現(xiàn)白板或脫板現(xiàn)象，每張膜 上的附苗量為300 700粒不等，最多的一張板上可以到達(dá)1100粒左右，具體育苗指標(biāo) 與測量方法如下1)九孔鮑鮑苗生長及存活情況a鮑苗初始量，每池5萬苗。b收苗平均殼長，隨機(jī)抽取100粒鮑苗，測量殼長，取平均值。c殼長平均日增長量，收苗平均殼長，取40天的平均值。d鮑苗平均個(gè)體重量，隨機(jī)取100粒鮑苗，稱其總重后取平均值。e收苗量，稱取IOg鮑苗，計(jì)算其粒數(shù)，將收集的鮑苗稱其總重后估算鮑苗的粒 數(shù)。f成活率，某階段結(jié)束時(shí)鮑苗量占該階段投苗量的百分率。2)鮑苗免疫指標(biāo)測定試驗(yàn)結(jié)束每組取樣100個(gè)，20個(gè)/管放于5個(gè)分別盛有ImL Hank，s緩沖液(pH =7.8)的Eppendoff管中，貯于_80°C以備抗免疫指標(biāo)的測定。測定時(shí)取出樣品，使其在 冰上融化。進(jìn)行勻漿，然后eOOOr/min，4°C離心5min，取上清用于免疫指標(biāo)的測定。參 照 Bradford 方 法(文 獻(xiàn) Bradford M.A rapid and sensitive method for thequantification of microgram quantities of protein[J].Analytical Biochemistry, 1976, 72 248-254)測定樣品蛋白含量，以小牛血清蛋白為標(biāo)準(zhǔn)蛋白，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以考馬斯亮 藍(lán)為顯色劑，于96孔酶標(biāo)板中反應(yīng)lOmin，用酶標(biāo)儀測量各反應(yīng)體系中的OD595nm值。a、超氧化物歧化酶(SOD)活力的測定連苯三酚自氧化速率的測定，在25°C下，于4.5mL 50mmol/L，Ph = 8.30的 K2HPO4-KH2PO4緩沖液中加入10 μ L 50mmol/L連苯三酚，迅速搖勻，倒入光徑Icm的 比色杯內(nèi)，在325nm波長下每隔30s測A值一次，要求自氧化速率在0.0700D/min左右。 酶活性測定，在加入連苯三酚前，加入待測SOD樣，測得數(shù)據(jù)，按下式計(jì)算酶活性酶活性=(0.070-A325nm) /minX 100 % X反應(yīng)液總體積X樣液稀釋倍數(shù)/ (0.070X50% X樣液體積)酶活單位定義每毫升反應(yīng)液中，每分鐘抑制連苯三酚自氧化速率達(dá)50%的酶 量定義為一個(gè)酶活單位(U/mL)。
b、溶菌酶活力測定以溶壁微球菌凍干粉為底物。用O.lmol/L，pH = 6.4的磷酸鹽緩沖液配成底物 懸液(OD57tlnnMU)，取3.0mL該懸液于試管內(nèi)置冰浴中，再加入50 μ L待測樣，混合， 測Atl值。然后將試液移入37°C溫浴中置30min，取出后再置于冰浴中l(wèi)Omin，以終止反 應(yīng)，測其A值。溶菌活力隊(duì)按(AcrA) /A式計(jì)算。3)細(xì)菌感染實(shí)驗(yàn)感染試驗(yàn)于預(yù)先消毒的盛有5L砂濾海水的水池中進(jìn)行。從對照組(A組)和各 個(gè)實(shí)驗(yàn)組(B-G組)分別隨機(jī)抽取100只鮑苗，殼長4.5 6.0mm。向各組水體中添加嗜 水氣單胞菌菌液，使水體中嗜水氣單胞菌菌體濃度達(dá)到108Cfu/mL。實(shí)驗(yàn)期間不流水養(yǎng) 殖，正常投餌，以5L/h/m3連續(xù)曝氣，水溫為20°C，pH控制在7.2。人工感染后，連續(xù) 觀察5天，最終計(jì)算成活率，采用相對存活率(Relative Percent Survival，RPS)計(jì)算式RPS(% ) = (1-免疫組死亡率/對照組死亡率)X 100%實(shí)驗(yàn)結(jié)果由表1和表2所示。表1指不同的育苗方法對九孔鮑苗生長情況的影 響。可見，比起對照組(A組)，所有實(shí)驗(yàn)組更顯著地提高鮑苗的存活率，并促進(jìn)鮑苗的 生長。在相同的換水周期下，隨著添加的蛭弧菌混合制劑濃度的升高，鮑苗的成活率和 殼長也逐漸呈上升趨勢。表2指不同育苗方式對九孔鮑苗免疫力的影響。數(shù)據(jù)表明，比起對照組(A 組)，所有實(shí)驗(yàn)組的SOD活力和溶菌酶活力都有明顯的提高；在相同的換水周期下，隨 著添加的蛭弧菌混合制劑濃度的升高，鮑苗免疫力也有一定的增強(qiáng)。細(xì)菌感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果由圖1所示。結(jié)果表明，采用工廠流水式養(yǎng)殖的對照組(A 組)，其鮑苗的相對存活率為O ；其他實(shí)驗(yàn)組中，無論采用何種換水周期，隨著蛭弧菌混 合制劑在水體中濃度的升高，鮑苗的相對存活率也會(huì)逐漸上升。另外，采用添加蛭弧菌 混合制劑的實(shí)驗(yàn)組，每組鮑苗的相對存活率都達(dá)到90%以上。這說明蛭弧菌混合制劑中 的蛭弧菌蛭質(zhì)體能夠發(fā)揮一個(gè)潛在疫苗的作用，增強(qiáng)九孔鮑苗的免疫力。水質(zhì)方面，氨態(tài)氮用次溴酸納氧化法測定(GB12763.4-91)；亞硝酸鹽氮用重 氮-偶氮光度法測定(GB12763.4-91)。經(jīng)過測定，A組水池中的各項(xiàng)水質(zhì)測定值均 高于試驗(yàn)組(B-G組)。其中，A組氨態(tài)氮和亞硝酸鹽氮的檢測結(jié)果分別為0.084mg/ L和O.Ollmg/L，而試驗(yàn)組(B-G組)中，氨態(tài)氮和亞硝酸鹽氮的檢測結(jié)果分別為 0.075-0.081mg/L和0.006-0.009mg/L。另外，細(xì)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)檢測方面，分別采用 涂布營養(yǎng)肉湯平板法和TCBS平板法檢測。結(jié)果顯示，A組水體中的細(xì)菌總數(shù)和弧菌總 數(shù)分別達(dá)到IO5和IO3的數(shù)量級(jí)(cfu/mL)，添加蛭弧菌混合制劑的實(shí)驗(yàn)組的細(xì)菌總數(shù)和弧 菌總數(shù)分別為IO2 IO3和IO1 IO2的數(shù)量級(jí)(cfu/mL)，比對照組低。說明蛭弧菌混合 制劑能有效控制水體的細(xì)菌數(shù)量，改善水質(zhì)。綜合各方面結(jié)果，添加蛭弧菌混合制劑，能明顯的提高鮑苗的生長速度，提高 成活率，增強(qiáng)免疫力，而且能夠改善水質(zhì)，達(dá)到節(jié)水節(jié)能的良好效果。表1不同的育苗方法對九孔鮑苗生長情況的影響
權(quán)利要求
1.一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法，其特征在于包括以下操作步驟(1)培藻采苗前30 45天開始在培藻池中進(jìn)行培藻；培藻過程中控制光照強(qiáng)度在 2000 50001ux，控制水溫在15 ；(2)加營養(yǎng)鹽培藻期間，按照3 相/m3養(yǎng)殖水體，2 4天添加一次的方式添加營養(yǎng)鹽；(3)采苗布卵將培藻池?fù)Q掉池水，加入蛭弧菌混合制劑，使池水中的蛭弧菌混合 制劑的起始濃度達(dá)10 l(fpfu/mL下苗時(shí)每池布九孔鮑受精卵4 5萬粒，并按照曝氣 量10 60L/h/m3進(jìn)行曝氣，光照控制在200 30001ux，水溫控制在15 ；(4)換水每隔5 30天換水一次，每次換水后加入蛭弧菌混合制劑，使池水中的 蛭弧菌混合制劑濃度達(dá)到10 107pfu/mL ；(5)剝離采收下苗30 50天，稚鮑殼長達(dá)到3.0 7.0mm后進(jìn)行剝離采收。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法，其特征在于步驟(1) 所述培藻池洗刷干凈后采用高錳酸鉀溶液進(jìn)行消毒，然后注入經(jīng)過砂濾和沉淀處理的海 水；培藻池在注入海水之前，在池進(jìn)水管口包扎一過濾袋，防止細(xì)沙入池。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法，其特征在于步驟(1)所 述藻為底棲硅藻。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法，其特征在于所述底棲 硅藻為月形藻、菱形藻、舟形藻和卵形藻。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法，其特征在于步驟(1)所 述培藻以無色透明聚乙烯薄膜為附著基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法，其特征在于步驟(2)所 述營養(yǎng)鹽含有質(zhì)量比為5 :1:1: 1的N元素、P元素、Si元素和Fe元素。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法，其特征在于步驟⑶和 (4)所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，所述蛭弧菌于2009年8月7日保藏 于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCCNO M 209172。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法，其特征在于步驟⑶和 (4)所述蛭弧菌混合制劑為蛭弧菌游泳體菌液和蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液按細(xì)菌個(gè)數(shù)1 1混合 而成。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法，其特征在于所述蛭弧 菌蛭質(zhì)體菌液按照以下方法制備得到接種宿主于營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中，在35°C和 200rpm搖床培養(yǎng)12h，培養(yǎng)液經(jīng)4°C，5000 8000rpm離心10 20min后，沉淀加入至 DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌BDFM05，在溫度25 下，以150 300rpm搖床 培養(yǎng)36 48h，得到含蛭弧菌蛭質(zhì)體和蛭弧菌游泳體的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液在4°C溫度下以 6000 8000rpm離心15 20η ι后，去除含蛭弧菌游泳體的上清，得到的沉淀即為蛭弧 菌蛭質(zhì)體；將蛭弧菌蛭質(zhì)體用DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0.2mol/L pH值為7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到濃度為IO6 109pfo/mL的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液；所述蛭弧菌游泳體菌液按照以下方法制備得到將蛭弧菌蛭質(zhì)體制備方法中的含蛭 弧菌游泳體的上清經(jīng)16000 18000rpm離心15 20η ι后，沉淀用DNB液體培養(yǎng)基、 水、生理鹽水或0.2mol/L pH值為7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到濃度為IO6 109pfu/mL的蛭弧菌游泳體菌液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法，其特征在于所述宿主 為嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)；所述DNB液體培養(yǎng)基是將營養(yǎng)肉湯0.8g、酪蛋 白酸水解物0.5g和酵母精提物O.lg溶于IOOOmL蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH值至7.2 7.6。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種節(jié)能減排的九孔鮑育苗方法。該方法包括步驟(1)培藻；(2)加營養(yǎng)鹽；(3)采苗布卵將培藻池?fù)Q掉水后，加入蛭弧菌混合制劑，使池水中的蛭弧菌混合制劑起始濃度達(dá)10～107pfu/mL；下苗時(shí)每池布九孔鮑受精卵4～5萬粒；(4)換水每隔5～30天換掉池水一次，每次換水后加入蛭弧菌混合制劑，使池水中的蛭弧菌菌液濃度達(dá)到10～107pfu/mL；(5)剝離采收。本發(fā)明育苗方法對九孔鮑鮑苗的生長有了明顯的促進(jìn)作用，并且極大地提高了九孔鮑鮑苗的存活率，同時(shí)改善了養(yǎng)殖環(huán)境的水質(zhì)。由于蛭弧菌對鮑魚無毒副作用，因此適合于鮑魚大規(guī)模工廠化養(yǎng)殖，為促進(jìn)九孔鮑育苗及生長提供了一種新的養(yǎng)殖技術(shù)。
文檔編號(hào)A01K61/00GK102017906SQ20101027100
公開日2011年4月20日 申請日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者蔡俊鵬, 陳小紅 申請人:華南理工大學(xué)