專利名稱：一種節(jié)能減排的海參工廠化養(yǎng)殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于海參類養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種提高海參成活率和免疫力，促 進(jìn)海參快速生長、改善水質(zhì)、節(jié)水節(jié)能、綠色低碳的海參無公害養(yǎng)殖新方法。
背景技術(shù)：
海參(Apostichopus japonicus),屬海參綱(Holothurioidea),廣布于世界各海洋
中。海參同人參、燕窩、魚翅齊名，是世界八大珍品之一。海參不僅是珍貴的食品，也 是名貴的藥材。近年來，海參消費(fèi)需求量逐年的增加，導(dǎo)致海參自然資源的過度開發(fā)和 種群數(shù)量的急劇下降。因此，海參的人工養(yǎng)殖隨之興起。隨著海參養(yǎng)殖的逐年遞增，養(yǎng)殖密度過大，養(yǎng)殖容量超載以及養(yǎng)殖環(huán)境的惡 化，疾病頻繁爆發(fā)，常見的是養(yǎng)成期的腐皮病，腫嘴病等。目前，海參疾病的預(yù)防和治 療主要靠抗生素藥浴方法來處理。抗生素的反復(fù)使用，病原微生物的抗藥性增加，不能 從根本上解決問題，病情反復(fù)發(fā)作，又給養(yǎng)殖戶造成了新困難。且過量的抗生素和化學(xué) 藥品的使用造成海參體內(nèi)的抗生素殘留超標(biāo)，不但影響海參的生長，同時(shí)還影響海參的 商品品質(zhì)，對(duì)人的使用安全造成威脅。其它類化學(xué)類消毒劑的使用也嚴(yán)重污染水質(zhì)，破 壞環(huán)境。中草藥雖然具有無藥物殘留、經(jīng)濟(jì)效益高的優(yōu)點(diǎn)，但見效慢較慢，短期內(nèi)解決 不了流行性疾病另一方面，目前海參的養(yǎng)殖模式需要大量的換水和頻繁的倒池，不僅浪費(fèi)了人 力物力資源，而且大量的用水容易引起海岸帶海水入侵，導(dǎo)致土地鹽堿化，給生態(tài)環(huán)境 造成了危害。按照常用的方法對(duì)廢水進(jìn)行處理，循環(huán)使用廢水，則需要較高的投資，增 加了能源消耗和養(yǎng)殖成本。因而尋求一種更高效、更經(jīng)濟(jì)的辦法來提高海參的成活率和免疫力，促進(jìn)海參 的快速生長，顯得極為迫切?！熬G色養(yǎng)殖”不但克服了抗生素濫用帶了的副作用，還能 夠改善水質(zhì)，增強(qiáng)苗種免疫力，提高海參的成活率，促進(jìn)海參的生長。成為近年來國家 的重大需求，引起水產(chǎn)界的廣泛關(guān)注。目前，用蛭質(zhì)體蛭弧菌來進(jìn)行海參養(yǎng)殖的方式在 國內(nèi)外尚未見報(bào)道。已有的研究表明，作為一種有益微生物制劑，無論是在食品工業(yè)還是在(海洋) 水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域，蛭弧菌的應(yīng)用均是安全的。例如在國外，Lenz and Hespell(1978) 研究發(fā)現(xiàn)，蛭弧菌及對(duì)動(dòng)物及人的細(xì)胞不具侵染性[Lenz R.W., Hespell R.B.Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animal cells.Archives of Microbiology, 1978, 119(3) 245-248]。在國內(nèi)，林茂等(2006)研究了蛭弧菌對(duì)魚類細(xì)胞的作用，發(fā)現(xiàn)它對(duì) 魚類細(xì)菌沒有侵染作用[林茂，楊先樂，薛暉，曹海鵬，邱軍強(qiáng)。蛭弧菌BDH2102對(duì)魚 類細(xì)胞及病原菌的作用。微生物學(xué)通報(bào)，2006，33(1) 7-11]。

發(fā)明內(nèi)容
為克服上述現(xiàn)有養(yǎng)殖技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種節(jié)能減排 的海參養(yǎng)殖方法；該方法通過在飼料和水體中添加蛭弧菌蛭質(zhì)體實(shí)現(xiàn)，具體包括養(yǎng)殖水 源選擇，池水的處理，飼料的處理，換水周期的控制，其特征按照養(yǎng)殖生態(tài)學(xué)原理，海 洋生物的生長環(huán)境要求，生物之間的相互關(guān)系及無公害養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)，人工創(chuàng)造養(yǎng)殖環(huán)境， 減少投入成本，改善水質(zhì)，提高海參免疫力，促進(jìn)海參快速生長，提高經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)一種節(jié)能減排的海參養(yǎng)殖方法，包括 以下操作步驟(1)取海域無污染的海水作為養(yǎng)殖用水；養(yǎng)殖用水經(jīng)砂濾、沉淀后，注入養(yǎng)殖 池；養(yǎng)殖池中放置經(jīng)過消毒的波紋板(用于海參的附著生長)；(2)在養(yǎng)殖池中加入蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液，并加大曝氣，攪拌均勻，使池水中的蛭 弧菌蛭質(zhì)體的濃度達(dá)10 107pfu/mL ；(3)向養(yǎng)殖池中投放海參苗；(4)養(yǎng)殖期間正常曝氣，控制水溫在15 30°C，池水的鹽度保持在23%。
30%。，日投餌量為海參體重的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的3 5%，餌料在投入前，用濃度為10 107pfu/mL的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液浸泡15 30min ；每隔5 40天換掉池水(全池)一 次，每次換(全池)水后加入蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液，使池水中的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液濃度達(dá)到 10 107pfu/mL。步驟(1)所述養(yǎng)殖池在注入養(yǎng)殖用水之前清洗消毒干凈；所述養(yǎng)殖池中3m2 4m2布置1個(gè)散氣石(用于充氣)。步驟(2)和(4)所述加入蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的方法為用養(yǎng)殖池中的池水稀釋菌 液后，均勻潑灑全池。步驟(2)所述加大曝氣的曝氣量為90 100L/h/m3 ；步驟(4)所述正常曝氣的 曝氣量為70 80L/h/m3。步驟(3)所述投放海參苗在水溫15 30°C時(shí)按照以下標(biāo)準(zhǔn)海參苗規(guī)格為400 頭/kg時(shí)，投放密度為600頭/m2;海參苗規(guī)格為200頭/kg時(shí)，投放密度為400尾/m2; 海參苗規(guī)格為100頭/kg時(shí)，投放密度為300尾/m2。步驟(4)所述餌料為配合飼料，每天投餌兩次；每隔5 7天采用虹吸法進(jìn)行養(yǎng) 殖池底的吸污。步驟⑵禾Π (4)所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.Strain) BDMO1，所述蛭弧 菌于2008年4月28日保藏于湖北省武漢市珞珈山武漢大學(xué)內(nèi)的中國典型培養(yǎng)物保藏中 心，保藏編號(hào)為CCTCCNO M208066。BDMOl由蛭弧菌BDJOl (保藏編號(hào)為CCTCC M 208011)進(jìn)行紫外誘變得到，對(duì)其進(jìn)行負(fù)染后于電子顯微鏡下形態(tài)觀察蛭弧菌BDMOl 呈單細(xì)胞，弧形，大小為1.7X1.0 μ m，端生鞭毛，鞭毛長度為3.5μιη;將其以雙層平板 法于28°C培養(yǎng)三天可形成直徑3-4mm的透明圓形噬菌斑。所述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液按照以下方法制備得到接種0.5mL濃度為107cfo/mL嗜 水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila，購于廣東省微生物所菌種保藏中心，編號(hào)GIM1.172) 于營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中，26 30°C培養(yǎng)20h，培養(yǎng)液經(jīng)5000 8000rpm離心10 20min后，沉淀用ImL生理鹽水懸浮后，加入至DNB液體培養(yǎng)基中，再接入ImL含10pfu/mL蛭弧菌BDMOl的菌液，于25 35°C、150 300rpm培養(yǎng)36 48h，培養(yǎng)液 在4°C下經(jīng)6000 8000rpm離心15 20min后，去除含蛭弧菌游泳體的上清液，沉淀用 DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0.2mol/L pH值為7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得 到濃度為108pfu/ml的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液；所述DNB液體培養(yǎng)基是將營養(yǎng)肉湯0.8g、酪蛋白酸水解物0.5g和酵母精提物 o.lg溶于IOOOml蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH值至7.2 7.6。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果發(fā)展無公害養(yǎng)殖，提高海參的成活率和免疫力，促進(jìn)海參的快速生長，降低生 產(chǎn)成本，提高經(jīng)濟(jì)效益，是我國海水養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的必有之路。蛭弧菌能改善海參的胃腸 道環(huán)境，提高免疫力，促進(jìn)生長?，F(xiàn)有的研究表明蛭弧菌對(duì)棘皮動(dòng)物類類無毒性作用， 對(duì)人類無致病性。蛭弧菌的生活史可分為脫離宿主細(xì)菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳體狀態(tài)和在 宿主細(xì)菌內(nèi)生長發(fā)育的蛭質(zhì)體狀態(tài)。蛭弧菌游泳體侵入宿主時(shí)，在宿主細(xì)胞壁上產(chǎn)生一 個(gè)孔隙，當(dāng)蛭弧菌侵入到宿主的周質(zhì)空間后孔隙重新封閉。游泳體失去鞭毛，和宿主細(xì) 胞一起被稱為“蛭質(zhì)體”。與游泳體相比，蛭質(zhì)體不僅具有制備、保存更為方便，環(huán)境耐受力強(qiáng)，作用時(shí) 間雖略慢但更久的特點(diǎn)，同時(shí)還具有潛在的滅活疫苗功能。當(dāng)游泳體蛭弧菌入侵宿主細(xì) 胞后，宿主細(xì)胞的呼吸作用(respiration)很快被停止。蛭弧菌也進(jìn)入蛭質(zhì)體狀態(tài)，開始分 泌多種酶，消解宿主細(xì)胞的大分子為小分子物質(zhì)，進(jìn)而整合為自身的營養(yǎng)物質(zhì)，使自身 生長，變長。最終，長條狀的蛭質(zhì)體分成很多短的節(jié)段，長出鞭毛，重新成為游泳體。 之后，它們分泌必需的酶類，破壁而出，再次成為脫離宿主細(xì)菌、具有鞭毛、自由游泳 的游泳體。在此蛭質(zhì)體發(fā)育期間，蛭弧菌并不改變宿主細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)，使原宿主仍具 有抗原作用，可刺激生物體，產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。這一潛在功能使得應(yīng)用蛭質(zhì)體蛭弧菌 于海參養(yǎng)殖中，可有效預(yù)防參苗細(xì)菌病的產(chǎn)生，提高養(yǎng)殖成活率等。這些優(yōu)點(diǎn)使得蛭質(zhì)體同樣適合作為抑止或清除生物體及其環(huán)境中致病菌的生物 凈化因子。蛭質(zhì)體對(duì)水體中的致病或者潛在致病菌有較強(qiáng)的裂解力，對(duì)水質(zhì)也有一定的 凈化作用，用蛭質(zhì)體浸泡飼料，并在池水中潑灑一定濃度的蛭質(zhì)體菌液，最長可達(dá)40天 不換水。既能促進(jìn)海參的生長，提高免疫力，又能凈化水質(zhì)，減少換水量和能源消耗， 從而克服了抗生素濫用帶來的副作用和對(duì)養(yǎng)殖廢水進(jìn)行處理的高成本，為人類提供安 全、綠色、無公害的水產(chǎn)品，提高養(yǎng)殖戶的收入。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。本發(fā)明的具體實(shí)施地點(diǎn)為山東某海參養(yǎng)殖場，海參種類為仿刺參(Apostichopus japonicus)。實(shí)施時(shí)間為4個(gè)月。試驗(yàn)地海域的水源水質(zhì)符合中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) 漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GBl 1607-89)要求，海水經(jīng)過砂濾、沉淀處理后進(jìn)入養(yǎng)殖池，符合農(nóng)業(yè) 部《無公害食品海水養(yǎng)殖用水水質(zhì)》(NY5052-2001)要求。海參的養(yǎng)殖池建在養(yǎng)殖大棚 內(nèi)，挑選體質(zhì)健康、個(gè)體大小均勻的幼參，平均體長4 6cm，采用隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)， 按照50 70頭/m2的養(yǎng)殖密度投入池中。
平均分為A-D 4個(gè)試驗(yàn)組，B、C、D每個(gè)試驗(yàn)組有8個(gè)小組，分別為Bi、Cl、 Dl ； B2、C2、D2 ； 、B3、C3、D3 ； B4、C4、D4 ； B5、C5、D5 ； B6、C6、D6 ；
B7、C7、D7 ； B8、C8、B8 ； B1-D8 每小組再分為 4 組，即 B1-1 Bl-4···D8-1 D8-4，每組2個(gè)重復(fù)。試驗(yàn)的處理如下A組正常流水，投喂正常的配合飼料(工廠生產(chǎn)的養(yǎng)殖方式)B組在水中潑灑蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液，使水體中蛭弧菌蛭質(zhì)體濃度分別達(dá)到 10、ΙΟ3、105、107pfo/mL，投喂配合飼料；C組投喂?jié)舛葹?0、ΙΟ3、105、107pfo/mL的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液浸泡后的配合 飼料；D組在水中加入蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液，使菌體濃度分別達(dá)到10、ΙΟ3、105、 107pfu/mL,同時(shí)分別投喂?jié)舛葹?0、ΙΟ3、105、107pfu/mL的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液浸泡后
的配合飼料；
Bi、CUDl組每5天換(全池)水一-次，換水后重新加菌；
B2、C2、D2組每10天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
B3、C3、D3組每15天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
B4、C4、D4組每20天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
B5、C5、D5組每25天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
B6、C6、D6組每30天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
B7、C7、D7組每35天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
B8、C8、D8組每40天換(全池)水-一次，換水后]重新加菌
Bl-1、Cl-1、D1-1-D8-1投放的菌液濃度為10pfo/mL ；Bl-2、C1-2、01-2丨08-2投放的菌液濃度為103 份/11^;Bl-3、C1-3、01-3丨08-3投放的菌液濃度為105 份/11^;Bl-4、Cl-4、Dl-4... D8-4 投放的菌液濃度為 107pfu/mL ；所用飼料符合中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《無公害食品漁用配合飼料安全限 量》(NY5072-2002)的規(guī)定。試驗(yàn)期間，每日投喂2次，早上、晚上各一次。試驗(yàn)結(jié) 束測量海參的生長指標(biāo)、免疫指標(biāo)、水質(zhì)及微生物情況。1、海參生長指標(biāo)的測定方法如下喂養(yǎng)4個(gè)月后，統(tǒng)計(jì)每口池子所存活的海參數(shù)目，分別從每口池子各隨機(jī)抽取 120頭海參，用游標(biāo)卡尺測量其體長(mm)，電子天平測其重量(g)，計(jì)算以下參數(shù)(1)成活率(％ ) = Nt/N。X 100% ；(2)增重率(％ ) = (WrW0) W0X 100% ；(3)體長增長率(% ) = (LrL0)/L0X 100% ；式中N。為試驗(yàn)開始時(shí)海參總頭數(shù)；Nt為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)海參總頭數(shù)；W。為試驗(yàn)開 始時(shí)海參體重；Wt為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)海參體重；L。為試驗(yàn)開始時(shí)海參體長；Lt為試驗(yàn)結(jié)束時(shí) 海參體長；2、海參的免疫指標(biāo)的測定(1)堿性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性均采用Kruzel (1982)的磷酸苯
二鈉法
從海參的腹面口后1/3穿刺抽取血液，置于離心管中，于4°C，3000r/min離心 IOmin,取上清，即為海參的血清。置于冰盒中保存。酸性磷酸酶(ACP)的測定采用磷酸苯二鈉法。以每IOOmL血清在37°C與底物 磷酸苯二鈉作用60min，產(chǎn)生Img酚者定義為一個(gè)酶活力單位。堿性磷酸酶(AKP)的測定采用磷酸苯二鈉法。以每IOOmL血清在37°C與底物 磷酸苯二鈉作用15min，產(chǎn)生Img酚者定義為一個(gè)酶活力單位。(2)感染實(shí)驗(yàn)感染試驗(yàn)于預(yù)先消毒的盛有1噸砂濾海水(鹽度29 30%。)的水池中進(jìn)行。 從實(shí)驗(yàn)A組、Bl-1、B1-2…D8-3、D8-4共97組中每個(gè)組隨機(jī)取海參100頭，體長 為10士 lcm。用無菌注射器經(jīng)海參腹腔注射300uL濃度為108Cfu/mL嗜水氣單胞菌 (Aeromonas hydrophila,購于廣東省微生物所菌種保藏中心，編號(hào)GIM1.172)，對(duì)海參進(jìn) 行感染。試驗(yàn)水溫保持在15 30°C，流水養(yǎng)殖，充氣培養(yǎng)。人工感染后，記錄海參的 運(yùn)動(dòng)、攝食及死亡情況。連續(xù)觀察10天，最終計(jì)算成活率，采用相對(duì)存活率(Relative Percentage Survival, RPS)計(jì)算式RPS(% ) = (1-免疫組死亡率/對(duì)照組死亡率)X 100%3、水質(zhì)的測定氨態(tài)氮用次溴酸納氧化法測定(GB12763.4-91)；亞硝酸鹽氮用重氮-偶氮光度法測定(GB12763.4-91)4、弧菌總數(shù)的測定用TCBS培養(yǎng)基檢測弧菌總數(shù)具體步驟為用磷酸緩沖鹽(PBS)對(duì)所取水樣樣品進(jìn)行10稀釋，至10_4。取原 液和各濃度的稀釋液(10入1(Γ2、1(Γ3、10_4)0.5mL，涂布于TCBS固體培養(yǎng)基上，菌落 計(jì)數(shù)，計(jì)算水中的弧菌總數(shù)。海參的生長指標(biāo)、免疫活性指標(biāo)及總菌數(shù)的測定結(jié)果見表一 表四從表 中可以看出，A組成活率、增重率、體長增長率、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶 (AKP)分別為 82.76 %、838.88 281.29 0.030U/mL、0.033U/mL,弧菌總數(shù)為 6.89X IO2CFUAnL。與A組相比，C、D、E組的成活率、增重率、體長增長率、酸性 磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)都明顯升高，而弧菌總數(shù)明顯降低。說明在常規(guī)的養(yǎng) 殖方式下，不換水會(huì)影響海參的成活率、增重率、體長增長率、酸性磷酸酶和堿性磷酸 酶活力。在相同的換水周期下，隨著蛭弧菌蛭質(zhì)體的濃度升高，成活率、增重率、體長 增長率、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活力在逐漸的升高，弧菌總數(shù)明顯降低；說明蛭弧菌 蛭質(zhì)體的濃度越高，海參的免疫力越強(qiáng)，成活率越高，患病機(jī)率越小。Bl-I B8-1··· D1-4 D8-4之間的成活率、增重率、體長增長率、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶 (AKP)、弧菌總數(shù)幾乎無明顯差異，說明在水中或者是在飼料中添加濃度為10 IO7Pfu/ mL蛭質(zhì)體蛭弧菌菌液，5-40天換(全池)水一次，對(duì)海參的育苗成活率、增重率、體長 增長率、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、弧菌總數(shù)影響不大，均可達(dá)到提高成 活率和免疫力，促進(jìn)生長的目的。感染實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，A組的相對(duì)存活率(Relative Percentage Survival，RPS)為
0，與A組相比，B、C、D組的相對(duì)存活率均有明顯提高，從表五可以看出，在相同的換水周期下，隨著蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液濃度的升高，相對(duì)存活率逐漸升高，且都明顯高于 工廠生產(chǎn)的A組，說明采用新型的添加蛭弧菌蛭質(zhì)體的養(yǎng)殖方法，能明顯提高海參的相 對(duì)存活率，即提高海參的免疫抵抗力；從不同換水周期來看，相同濃度下的各組海參相 對(duì)存活率沒有顯著的變化。說明新型養(yǎng)殖方法中，5-40天不換水，蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液都 能增強(qiáng)海參的免疫能力。就B、C、D三組不同處理方式而言，均能提高海參的相對(duì)存 活率，且在水體與飼料中同時(shí)添加，效果最佳。因此，無論在水中還是飼料中添加一定濃度的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液，長達(dá)40天不 換水，都會(huì)提高海參的免疫抵抗力，在水中與飼料中同時(shí)添加，效果最好。從而進(jìn)一步 表明蛭弧菌蛭質(zhì)體具有潛在的疫苗作用，能夠刺激海參產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，抵御氣單胞 菌的侵害，有助于提高海參的成活率。經(jīng)過測定，A組水池中的各項(xiàng)水質(zhì)測定值均高于試驗(yàn)組B、C、D組的。其中， A組氨態(tài)氮的檢測結(jié)果為0.286mg/L，高于B組的0.124 0.211mg/L、C組的0.127 0.232mg/L、D組的0.095 0.198mg/L ； A組的亞硝酸鹽氮的檢測結(jié)果為0.078mg/L，高 于 B 組的 0.024 0.055mg/L、C 組的 0.031 0.062mg/L、D 組的 0.019 0.036mg/L。
由以上結(jié)果分析可知，應(yīng)用濃度為10-107pfU/mL蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液可有效改善養(yǎng)殖水體 環(huán)境，調(diào)節(jié)水中氨態(tài)氮、亞硝酸鹽氮的含量，從而提供有利于海參生存的水體環(huán)境，并 且在水體和飼料中同時(shí)添加，效果最佳。由此可見，無論在水中還是在飼料中添加濃度為10 107pfu/mL的蛭弧菌蛭質(zhì) 體菌液，40天換(全池)水一次，都能夠達(dá)到提高海參的免疫力和成活率，促進(jìn)生長，且 可控制水中弧菌數(shù)量，降低水中氨態(tài)氮、亞硝酸鹽氮的含量，改善水質(zhì)。在水中和飼料 中同時(shí)添加，效果更佳。既能夠節(jié)約地下水資源，保護(hù)環(huán)境，又能夠節(jié)省成本，提高經(jīng) 濟(jì)效益，促進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展。表一海參的生長指標(biāo)、免疫指標(biāo)及弧菌總數(shù)的測定
權(quán)利要求
1.一種節(jié)能減排的海參養(yǎng)殖方法，其特征在于包括以下操作步驟(1)取海域無污染的海水作為養(yǎng)殖用水；養(yǎng)殖用水經(jīng)砂濾、沉淀后，注入養(yǎng)殖池； 養(yǎng)殖池中放置經(jīng)過消毒的波紋板；(2)在養(yǎng)殖池中加入蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液，并加大曝氣，攪拌均勻，使池水中的蛭弧菌 蛭質(zhì)體的濃度達(dá)10 l(fpfu/mL ；(3)向養(yǎng)殖池中投放海參苗；(4)養(yǎng)殖期間正常曝氣，控制水溫在15 30°C，池水的鹽度保持在23%。 30%。，日 投餌量為海參體重的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的3 5%，餌料在投入前，用濃度為10 l(fpfu/mL的 蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液浸泡15 30min ；每隔5 40天換掉池水一次，每次換水后加入蛭弧 菌蛭質(zhì)體菌液，使池水中的蛭弧菌蛭質(zhì)體濃度達(dá)到10 107pfu/mL。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的海參養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(1)所述 養(yǎng)殖池在注入養(yǎng)殖用水之前清洗消毒干凈；所述養(yǎng)殖池中3m2 4m2布置1個(gè)散氣石。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的海參養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(2)和 (4)所述加入蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的方法為用養(yǎng)殖池中的池水稀釋菌液后，均勻潑灑全 池。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能型海參養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟( 所述加大 曝氣的曝氣量為90 100L/h/m3 ；步驟(4)所述正常曝氣的曝氣量為70 80L/h/m3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的海參養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟C3)所述 投放海參苗在水溫15 30°C時(shí)按照以下標(biāo)準(zhǔn)海參苗規(guī)格為400頭/kg時(shí)，投放密度為 600頭/m2 ；海參苗規(guī)格為200頭/kg時(shí)，投放密度為400尾/m2 ；海參苗規(guī)格為100頭 /kg時(shí)，投放密度為300尾/m2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的海參養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(4)所述 餌料為配合飼料，每天投餌兩次；每隔5 7天采用虹吸法進(jìn)行養(yǎng)殖池底的吸污。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的海參養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(2)和 (4)所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDMOl，所述蛭弧菌于2008年4月觀日保藏 于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCCNO M208066。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)能減排的海參養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(2)和 (4)所述所述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液按照以下方法制備得到接種0.5mL濃度為IO7CfuAnL嗜 水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)于營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中，沈 30°C培養(yǎng)20h，培 養(yǎng)液經(jīng)5000 8000rpm離心10 20η ι后，沉淀用ImL生理鹽水懸浮后，加入至DNB 液體培養(yǎng)基中，再接入ImL含l(fpfu/mL蛭弧菌BDMOl的菌液，于25 !35°C、150 300rpm培養(yǎng)36 48h，培養(yǎng)液在4°C下經(jīng)6000 8000rpm離心15 20η ι后，去除含蛭 弧菌游泳體的上清液，沉淀用DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0.2mol/L pH值為7.2 7.6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到濃度為IO9CfuAnL的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種節(jié)能減排的海參育苗方法，其特征在于所述DNB液 體培養(yǎng)基是將營養(yǎng)肉湯0.相、酪蛋白酸水解物0. 和酵母精提物O.lg溶于IOOOrnl蒸餾水 中，調(diào)節(jié)pH值至7.2 7.6。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種節(jié)能減排的海參養(yǎng)殖方法。該方法包括養(yǎng)殖水源選擇，池水的處理，飼料的處理，換水周期的控制，按照養(yǎng)殖水體生態(tài)學(xué)原理，海洋生物的生長環(huán)境要求，生物之間的相互關(guān)系及無公害養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)，采用生物生態(tài)學(xué)的方法控制養(yǎng)殖環(huán)境。關(guān)鍵技術(shù)是在水體中添加蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液，同時(shí)飼料也用蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液浸泡，養(yǎng)殖期間可達(dá)到40天換掉池水一次。本發(fā)明為生物養(yǎng)殖方法，綠色、安全、無污染，效果顯著，能夠改善水質(zhì)，促進(jìn)海參攝食，提高免疫力，促進(jìn)生長，并提高成活率，有極好的發(fā)展前景。對(duì)提高經(jīng)濟(jì)效益和食用安全性，保障人類健康具有十分重要的意義。
文檔編號(hào)A01K61/00GK102017914SQ20101027106
公開日2011年4月20日 申請(qǐng)日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者何偉杰, 蔡俊鵬 申請(qǐng)人:華南理工大學(xué)