專利名稱：利用香蕉泥促進(jìn)甘蔗壯苗的組培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種甘蔗組織培養(yǎng)的方法，具體涉及一種利用香蕉泥促進(jìn)甘蔗壯苗的 組培方法。
背景技術(shù)：
妨MXSaccharum Complex)是我國最主要的糖料作物，甘蔗糖產(chǎn)量占我國食糖總 產(chǎn)量的90%以上。甘蔗育種周期長(zhǎng)，又系無性繁殖作物，常規(guī)用營養(yǎng)體蔗莖自留種作為種 苗，加上蔗田長(zhǎng)期連作，使得蔗莖種苗中病原體累積嚴(yán)重，尤其是維管束系統(tǒng)性侵染的病原 包括真菌性病原如甘蔗赤腐病菌、甘蔗黑穗病菌和甘蔗梢腐病菌；病毒性病原如甘蔗花 葉病毒、甘蔗黃葉病毒、甘蔗桿狀病毒等；細(xì)菌性病原如甘蔗宿根矮化病菌、甘蔗白條病菌 等。這些病原體不僅影響輸導(dǎo)組織輸送養(yǎng)分和水分，部分病原如甘蔗花葉病毒、甘蔗黃葉 病毒等還影響甘蔗光合作用，從而導(dǎo)致甘蔗品種退化，嚴(yán)重影響甘蔗的產(chǎn)量和品質(zhì)。雖然種 植抗病品種是根本的控制技術(shù)，但是，要培育抗多種病害的品種非常困難，加上甘蔗為異源 多倍體和非整倍體作物，遺傳背景非常復(fù)雜，基因組龐大，因此，要培育具有抗多種類型多 種病害的品種是不可能的，采用去除病原的脫毒健康種苗是快速實(shí)現(xiàn)病害有效防控防治和 增產(chǎn)、增效的有效措施。目前健康種苗在巴西、古巴、美國、澳大利亞等國家得到了廣泛的利 用，其中巴西、美國等90%蔗區(qū)實(shí)現(xiàn)甘蔗用種健康、無毒化。同時(shí)，巴西已通過政府立法，在 全國建立甘蔗脫毒健康種苗生產(chǎn)繁殖體系，種植者不得自留甘蔗種莖，通過糖廠提供健康 種苗。該技術(shù)可使甘蔗增產(chǎn)15 % 30 %，糖分提高0.5%。在國內(nèi)，在國家甘蔗產(chǎn)業(yè)技術(shù)體 系的積極推動(dòng)下，已在甘蔗主要蔗區(qū)大面積示范甘蔗健康種苗技術(shù)，計(jì)劃在2013年推廣健 康種苗30萬畝以上。生產(chǎn)甘蔗健康種苗的主流技術(shù)也是最重要的技術(shù)是采用組織培養(yǎng)技術(shù)培育無毒 健康的離體繁殖小苗，再結(jié)合后續(xù)有效控制繁殖過程的健康種苗生產(chǎn)。甘蔗是最早獲得組 織培養(yǎng)成功的作物，已有近40年的歷史，但是，由于組培過程是在營養(yǎng)物質(zhì)豐富，嚴(yán)格控制 光照、溫度、濕度等條件下培育而成的，抗逆性不強(qiáng)，需要經(jīng)過苗床假植并生長(zhǎng)2個(gè)月后再 種植到田間。因此，提高組培苗的假植苗成活率已成為甘蔗健康種苗生產(chǎn)過程中的一個(gè)關(guān) 鍵環(huán)節(jié)。雖然國內(nèi)外對(duì)甘蔗組織培養(yǎng)技術(shù)研究較多，但對(duì)如何提高出瓶后假植苗成活率卻 研究的較少，一般假植成活率只有70%左右，有時(shí)甚至低于50%，大多都是因?yàn)槠棵缣酰?假植后不能適應(yīng)外界環(huán)境而死亡。甘蔗組培苗假植成活率低已成為我國甘蔗生產(chǎn)上健康種 苗生產(chǎn)的一個(gè)“瓶頸”問題。雖然假植苗成活率受各種因素影響，但瓶苗的健壯程度對(duì)提高 成活率至關(guān)重要。因此，要提高假植苗成活率，首先要培育健壯的瓶苗。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在甘蔗假植苗成活率低的問題，提供一種利用 香蕉泥促進(jìn)甘蔗壯苗的組培方法，培養(yǎng)出健壯的甘蔗瓶苗。所述甘蔗瓶苗指增殖階段的甘 蔗組培苗。本發(fā)明的目的是通過以下方法實(shí)現(xiàn)的
一種利用香蕉泥促進(jìn)甘蔗壯苗的組培方法，包括材料選擇、誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、分化 培養(yǎng)和壯苗培養(yǎng)，其特征在于所述壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L BA+0. 5 mg/L KT + 50 g/L 150 g/L香蕉泥+20 g/L蔗糖+6 g/L瓊脂粉；所述MS培養(yǎng)基為1962年，Murashige 和Skoog公開的MS培養(yǎng)基；所述香蕉泥，指成熟香蕉果肉勻漿物；所述BA，指6 —芐胺基嘌 吟；所述KT，指6 —糠胺基腺嘌吟。具體實(shí)施步驟
1、材料選擇取健壯的甘蔗植株，從最高肥厚帶往下30cm處切下，用75%的酒精表 面消毒；
2、誘導(dǎo)培養(yǎng)切取生長(zhǎng)點(diǎn)以上10cm內(nèi)的幼嫩心葉，將其切成小于3 mm厚度的圓片，接 種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；培養(yǎng)室溫度為25 °C-28 °C，暗培養(yǎng)；
3、繼代培養(yǎng)愈傷組織形成后轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基上，每15天繼代一次；培養(yǎng)室溫度為 25-28 °C，暗培養(yǎng)；
4、分化培養(yǎng)選取金黃色的愈傷組織，接種到分化培養(yǎng)基中，培養(yǎng)15天即可分化出叢 芽；培養(yǎng)室溫度為25 V -28 °C，光照12h，光照強(qiáng)度為1 200 lx -1 500 lx ；
5、壯苗培養(yǎng)壯苗培養(yǎng)基的配方為MS+1.0 mg/L BA+0. 5 mg/L KT + 50 g/L 150 g/ L香蕉泥+20 g/L蔗糖+ 6 g/L瓊脂粉；先稱取瓊脂粉、白砂糖，加入占?jí)衙缗囵B(yǎng)基總體積 1/3的蒸餾水中，煮沸后再按壯苗培養(yǎng)基配方的用量加入其余各種原料，用蒸餾水定容至所 要配制的培養(yǎng)基總量后，再用1 mol/L的NaOH或1 mol/L的HC1調(diào)節(jié)pH值至5. 8 ；然后， 分裝到容器中封口 ；在1. 1 kg/cm2壓力下滅菌20分鐘，冷卻凝固后即為壯苗培養(yǎng)基；將上 述分化培養(yǎng)的叢芽切成0. 2 cm2大小，接種到壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)室溫度為25°C -28 光照12 h，光照強(qiáng)度為1 200 lx-1 500 lx的條件下培養(yǎng)15天，叢芽即可長(zhǎng)成大苗。為了探討有效增加甘蔗瓶苗壯苗數(shù)量的的方法，我們將香蕉泥作為甘蔗組織培養(yǎng) 的添加劑，設(shè)計(jì)了壯苗培養(yǎng)基，并作了壯苗培養(yǎng)基中使用0g/L 300g/L香蕉泥對(duì)甘蔗叢芽 壯苗的影響試驗(yàn)。結(jié)果如表1所示，壯苗培養(yǎng)基中含50g/L 150g/L的香蕉泥，可以有效 提高甘蔗瓶苗的壯苗數(shù)量；其中，以含100g/L香蕉泥的壯苗效果為最好。香蕉泥中的微量 元素，以及未知的內(nèi)源激素是促進(jìn)甘蔗瓶苗健壯的主要因素。經(jīng)多次試驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)分析，表明 在培養(yǎng)基中加入100g/L香蕉泥的處理，每叢壯苗株數(shù)明顯比不加香蕉泥高，從6. 2提高到 8. 2，平均每叢多2. 0株，一瓶5叢，多了 10. 0株，壯苗數(shù)提高了 32. 3%，達(dá)到極顯著水平。不 過，高于200g/L香蕉泥，也明顯抑制了瓶苗的生長(zhǎng)，比不加香蕉泥的還差，統(tǒng)計(jì)分析未達(dá)到 顯著水平。從長(zhǎng)勢(shì)看，加了香蕉泥的瓶苗葉片濃綠、植株健壯，有利于下一步的生根和瓶苗 的移栽。 表1 壯苗培養(yǎng)基中香蕉泥的不同用量對(duì)甘蔗叢芽壯苗的影響
權(quán)利要求
一種利用香蕉泥促進(jìn)甘蔗壯苗的組培方法，包括材料選擇、誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、分化培養(yǎng)和壯苗培養(yǎng)，其特征在于所述壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L BA+0.5 mg/L KT＋50 g/L～150 g/L 香蕉泥＋20 g/L蔗糖＋6 g/L瓊脂粉；所述MS培養(yǎng)基為1962年，Murashige和Skoog公開的MS培養(yǎng)基；所述香蕉泥，指成熟香蕉果肉勻漿物；所述BA，指6－芐胺基嘌吟；所述KT，指6－糠胺基腺嘌吟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用香蕉泥促進(jìn)甘蔗壯苗的組培方法，其特征在于所述 壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+1. O mg/L BA+0. 5 mg/L KT + 100 g/L香蕉泥+ 20 g/L蔗糖+ 6 g/L瓊脂粉。
全文摘要
一種利用香蕉泥促進(jìn)甘蔗壯苗的組培方法，包括材料選擇、誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、分化培養(yǎng)和壯苗培養(yǎng)；其中，壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+1.0mg/LBA+0.5mg/LKT＋50g/L～150g/L香蕉泥＋20g/L蔗糖＋6g/L瓊脂粉。培養(yǎng)基中香蕉泥中的微量元素，以及未知的內(nèi)源激素是促進(jìn)甘蔗瓶苗健壯的主要因素。經(jīng)多次試驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)分析，表明在培養(yǎng)基中加入100g/L香蕉泥的處理，壯苗株數(shù)明顯比不加香蕉泥高，壯苗數(shù)可提高32.3%，達(dá)到極顯著水平，且移苗成活率達(dá)93.0%；操作方法簡(jiǎn)單，實(shí)用性強(qiáng)，推廣性好。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101940164SQ20101051987
公開日2011年1月12日 申請(qǐng)日期2010年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月26日
發(fā)明者林慶良, 許莉萍, 陳如凱 申請(qǐng)人:福建農(nóng)林大學(xué)