專利名稱：絲光綠蠅幼蟲(chóng)的培養(yǎng)與消毒方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種昆蟲(chóng)的培養(yǎng)與昆蟲(chóng)活體的消毒方法，具體的說(shuō)是一種絲光綠蠅幼 蟲(chóng)的培養(yǎng)與消毒方法。
背景技術(shù)：
臨床上用于治療感染創(chuàng)面的昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)主要是絲光綠蠅的幼蟲(chóng)。絲光綠蠅別名綠頭 蒼蠅，呈世界性分布。屬雙翅目，成蠅體長(zhǎng)5mm 10mm。體色綠，帶金屬光澤，頰部銀白色， 中胸背板上的鬃毛發(fā)達(dá)，腋瓣上無(wú)毛。肩鬃后區(qū)小毛在6根以上，在額的最狹處。第五腹板 莖部的長(zhǎng)度大于側(cè)葉長(zhǎng)的1/2。肛尾葉后視端部向末端尖削。絲光綠蠅一生要經(jīng)過(guò)卵、幼蟲(chóng) (蛆)、蛹、成蟲(chóng)(蠅)四個(gè)時(shí)期，其幼蟲(chóng)期可作為醫(yī)用昆蟲(chóng)，具有食腐性，自然環(huán)境中繁殖生 長(zhǎng)能力很強(qiáng)，但在室內(nèi)人工飼養(yǎng)、繁殖和消毒沒(méi)有成熟的方法。目前有應(yīng)用亞硫酸和甲醛聯(lián) 合對(duì)蟲(chóng)卵消毒，然后在無(wú)菌的環(huán)境下孵化，用消毒的食物飼養(yǎng)，并應(yīng)用于臨床，這樣可以避 免繼發(fā)感染，但是應(yīng)用亞硫酸和甲醛對(duì)蟲(chóng)卵消毒會(huì)導(dǎo)致蟲(chóng)卵死亡的幾率增大，不利于穩(wěn)定 傳代。也有應(yīng)用3%煤酚皂溶液對(duì)蟲(chóng)卵進(jìn)行消毒，并且無(wú)菌飼養(yǎng)傳代，但是仍然有20-30% 的死亡率。因此，目前臨床上急需開(kāi)發(fā)一種既能保持蟲(chóng)體有效傳代，又能使消毒后的絲光綠 蠅幼蟲(chóng)保持活力的制備方法。參考文獻(xiàn)[1]Mumcuoglu KY. Clinical applications formaggots in wound care[J]. Am J Clin Dermatol, 2001，2 :219-227.[2]Sherman RA. Maggot versus conservative debridement therapy for the treatment of ρ ressure ulcers[J]. Wound RepairRegen, 2002,10 :208-214.[3]Smith KE, Wal1R. The use of carrion as breeding sites by the blowfly Lucilia sericata and other Calliphoridae[J]. Med Vet Entmol,1997,11(1) :38-44.[4]Amin AR, Shoukry A, Morsy TA, et al. Studies of wound myiasis among sheep and goats in North Sonai Governorate [J]. J Egyp t SocParasitol,1997, 27(3) :719-737.[5]許兵紅，陳正躍，艾予川.絲光綠蠅飼養(yǎng)初步研究[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1999， 16(1) :30-31.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種絲光綠蠅幼蟲(chóng)的培養(yǎng)與消毒方法，在室內(nèi)條件下對(duì)絲光綠蠅進(jìn) 行人工飼養(yǎng)并有效傳代，對(duì)蟲(chóng)卵和幼蟲(chóng)進(jìn)行消毒，獲得了具有生命活力的活體絲光綠蠅幼 蟲(chóng)。本發(fā)明的技術(shù)方案包括絲光綠蠅蟲(chóng)卵收集、蟲(chóng)卵消毒、幼蟲(chóng)飼養(yǎng)與傳代、幼蟲(chóng)的選 擇與無(wú)菌處理，其具體步驟如下第一步、絲光綠蠅蟲(chóng)卵收集
根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知如何操作收集蟲(chóng)卵，本發(fā)明人建議收集絲 光綠蠅在藍(lán)點(diǎn)馬鮫魚(鲅魚)魚目中所產(chǎn)的蟲(chóng)卵；第二步、蟲(chóng)卵消毒①將卵塊浸入0. 5-1%的亞硫酸鈉溶液中搖晃3-5min，使粘著的卵塊相互分離， 避免在消毒過(guò)程中有害物質(zhì)殘留于卵塊之間；②在無(wú)菌條件下濾出液體，將蟲(chóng)卵浸入5-6%次氯酸鈉溶液中消毒3-5min ；③蟲(chóng)卵用無(wú)菌生理鹽水漂洗3-5次；④無(wú)菌吸水紙吸干蟲(chóng)卵表面水分；⑤取500ml無(wú)菌瓷罐作為養(yǎng)蟲(chóng)罐，罐中放入經(jīng)過(guò)高溫滅菌的鯉魚魚目研磨而成的 魚目粉50g，無(wú)菌蒸餾水40ml，作為飼料，將卵塊接種入養(yǎng)蟲(chóng)罐中，每罐約接種蟲(chóng)卵300-500 粒，再用無(wú)菌透氣黑色棉布包扎罐口 ；第三步、幼蟲(chóng)飼養(yǎng)與傳代①飼養(yǎng)條件絲光綠蠅飼養(yǎng)室的室內(nèi)面積為IOmX 10m，室內(nèi)溫度保持22_25°C，空 氣濕度為50-55% ；室內(nèi)放置飼養(yǎng)籠，其大小為IOOcmX IOOcmX 120cm，四面為紗窗，底面采 用鐵制，正面開(kāi)口處用網(wǎng)布做成袖狀，以便手伸入籠內(nèi)換取材料；在蠅籠上方設(shè)置兩個(gè)40 瓦日光燈管，平行放置在飼養(yǎng)籠頂端，每日持續(xù)保持光照8-10小時(shí)，蠅籠中需要放置水盤 (放入吸水的棉花或海棉，水面不要超過(guò)棉花以避免成蟲(chóng)溺斃)、成蠅食盤(配料鯉魚魚目 粉20克)、養(yǎng)蟲(chóng)罐(鯉魚魚目粉50克、無(wú)菌蒸餾水40ml)；水盤及食盤每晚八點(diǎn)進(jìn)行更換， 養(yǎng)蟲(chóng)罐保持潮濕；②飼養(yǎng)方法發(fā)現(xiàn)有絲光綠蠅幼蟲(chóng)長(zhǎng)成，需要每天更換飼料，將幼蟲(chóng)連同飼料倒入 無(wú)菌盆中，幼蟲(chóng)有避光性，會(huì)漸漸潛到盆底，移走上面的飼料分離出幼蟲(chóng)，更換飼料；蟲(chóng)體化 蛹前顏色開(kāi)始變黃，將幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到裝有無(wú)菌細(xì)沙的瓷罐(500ml)中，用無(wú)菌透氣黑棉布扎 緊瓶口 ；幼蟲(chóng)化蛹后，收集蠅蛹，置于蠅籠中，每籠置蛹500個(gè)，待蛹羽化成蠅后，絲光綠蠅 第一次傳代結(jié)束；每天察看蠅籠，若發(fā)現(xiàn)新生的蟲(chóng)卵，則將其放入新的養(yǎng)蟲(chóng)罐中，重復(fù)上述 蟲(chóng)卵消毒、幼蟲(chóng)飼養(yǎng)和傳代過(guò)程，每代需更換新的無(wú)菌飼養(yǎng)設(shè)備；連續(xù)培養(yǎng)三代，發(fā)現(xiàn)了人 工無(wú)菌培養(yǎng)的絲光綠蠅從卵(1天)、幼蟲(chóng)(各蟲(chóng)齡期，5-7天)、蛹(7-8天)到成蟲(chóng)(13-14 天)的時(shí)間規(guī)律及穩(wěn)定傳代特點(diǎn)；第四步、幼蟲(chóng)的選擇與無(wú)菌處理①絲光綠蠅幼蟲(chóng)的選擇與蟲(chóng)齡觀察絲光綠蠅幼蟲(chóng)有三個(gè)齡期1齡幼蟲(chóng)體長(zhǎng)1 3mm，僅有后氣門；蛻皮后變?yōu)?齡 幼蟲(chóng)，長(zhǎng)3 5mm，有前氣門，后氣門有2裂；再次蛻皮即為3齡幼蟲(chóng)，長(zhǎng)5 13mm，后氣門 3裂；鑒于幼蟲(chóng)各齡期的特點(diǎn)，3齡幼蟲(chóng)蟲(chóng)體較大，攝食和分泌能力較強(qiáng)，本制備方法選擇在 無(wú)菌環(huán)境下，培養(yǎng)的絲光綠蠅3齡幼蟲(chóng)；②絲光綠蠅幼蟲(chóng)蟲(chóng)體消毒法I將在無(wú)菌環(huán)境下培養(yǎng)的3齡幼蟲(chóng)放在0. 3-0. 5%碘伏溶液中4-5min，然后用蒸餾 水洗滌三遍，每遍anin ；II再將幼蟲(chóng)放入0. 新潔爾滅溶液中4-6min，然后用蒸餾水洗滌三遍，每遍 2min ；其中所有百分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
采用以上方法消毒后的幼蟲(chóng)均保持生命活力，隨機(jī)選取蟲(chóng)體100條充分勻漿，漿 液成分經(jīng)細(xì)菌檢驗(yàn)(平板培養(yǎng)法)和病毒學(xué)檢驗(yàn)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))，未見(jiàn)細(xì)菌和病毒生 長(zhǎng)(見(jiàn)表)。表(絲光綠蠅幼蟲(chóng)細(xì)菌和病毒學(xué)檢測(cè))
權(quán)利要求
1.絲光綠蠅幼蟲(chóng)的培養(yǎng)與消毒方法，包括絲光綠蠅蟲(chóng)卵收集、蟲(chóng)卵消毒、幼蟲(chóng)飼養(yǎng)與傳 代、幼蟲(chóng)的選擇與無(wú)菌處理；其特征在于蟲(chóng)卵消毒的方法是①將卵塊浸入0.5-1%的亞硫酸鈉溶液中搖晃3-5min，使粘著的卵塊相互分離；②在無(wú)菌條件下濾出液體，將蟲(chóng)卵浸入5-6%次氯酸鈉溶液中消毒3-5min；③蟲(chóng)卵用無(wú)菌生理鹽水漂洗3-5次；④無(wú)菌吸水紙吸干蟲(chóng)卵表面水分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絲光綠蠅幼蟲(chóng)的培養(yǎng)與消毒方法，其特征在于幼蟲(chóng)的選擇與 無(wú)菌處理方法是①將在無(wú)菌環(huán)境下培養(yǎng)的3齡幼蟲(chóng)放在0.3-0. 5%碘伏溶液中4-5min，然后用蒸餾水 洗滌三遍，每遍anin ；②再將幼蟲(chóng)放入0.新潔爾滅溶液中4-6min，然后用蒸餾水洗滌三遍，每遍aiiin。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的絲光綠蠅幼蟲(chóng)的培養(yǎng)與消毒方法，其特征在于所收集的 蟲(chóng)卵是絲光綠蠅在藍(lán)點(diǎn)馬鮫魚魚目中所產(chǎn)的卵。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的絲光綠蠅幼蟲(chóng)的培養(yǎng)與消毒方法，其特征在于所用飼料 為鯉魚魚目粉。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的絲光綠蠅幼蟲(chóng)的培養(yǎng)與消毒方法，其特征在于所述的幼 蟲(chóng)的飼養(yǎng)條件是每日光照8-10小時(shí)，室內(nèi)溫度22-25°C，空氣濕度50-55%。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種絲光綠蠅幼蟲(chóng)的培養(yǎng)與消毒方法，尤其涉及培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)蟲(chóng)卵的消毒以及幼蟲(chóng)的消毒。本發(fā)明所述的蟲(chóng)卵消毒方法是先將卵塊浸入0.5-1％的亞硫酸鈉溶液中搖晃3-5min，使粘著的卵塊相互分離，過(guò)濾后再將蟲(chóng)卵浸入5-6％次氯酸鈉溶液中消毒3-5min；幼蟲(chóng)消毒方法是采用0.3-0.5％碘伏溶液和0.1％新潔爾滅溶液分兩步對(duì)幼蟲(chóng)進(jìn)行消毒。本發(fā)明所述的方法對(duì)蠅卵的生命活力影響小，死亡率為0％，幼蟲(chóng)消毒作用迅速而持久，毒性低，受有機(jī)物影響??；既能保持蟲(chóng)體有效傳代，又能使消毒后的絲光綠蠅幼蟲(chóng)保持活力，而且操作簡(jiǎn)單，容易掌握，適合大范圍的推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)A01K67/033GK102106316SQ201010611090
公開(kāi)日2011年6月29日 申請(qǐng)日期2010年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月29日
發(fā)明者呂德成, 張振, 王壽宇 申請(qǐng)人:大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院