專利名稱：一種葡萄砧木組培快繁和移栽方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及葡萄砧木雜交種組培快繁和移栽方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體為一 種葡萄砧木組培快繁和移栽方法。
背景技術(shù)：
近年來，我國葡萄產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅猛，鮮食葡萄產(chǎn)量居世界首位，釀酒葡萄規(guī)模居世 界第五位。在栽培方式上，呈現(xiàn)出由傳統(tǒng)自根苗向嫁接苗逐漸過渡的發(fā)展趨勢，篩選和引 進(jìn)了許多優(yōu)良砧木，其中包括了適應(yīng)性廣的SO4*貝達(dá)等品種。葡萄砧木SO4 (Selection Oppenheim NO. 4)是德國奧本海姆國立葡萄果樹研究所，以冬葡萄X河岸葡萄選育而 成。樹勢強(qiáng)，抗寒、抗旱、抗?jié)駶车染C合性狀具佳，嫁接親合力強(qiáng)。葡萄砧木貝達(dá)(Vitis ripariaXV. labrusca)系美洲種，原產(chǎn)美國，為美洲葡萄和河岸葡萄的雜交種。樹勢強(qiáng)，耐 寒、耐旱、耐澇、耐瘠薄、不易感染病毒，且嫁接親合力強(qiáng)。由于葡萄嫁接栽培的發(fā)展，優(yōu)良砧 木種苗供不應(yīng)求，因此，提高葡萄砧木育苗的繁殖效率非常必要。組培快繁技術(shù)正好解決這 —難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明正是針對以上技術(shù)問題，提供可提高葡萄砧木育苗的繁殖效率，為葡萄砧 木的規(guī)?；缣峁┯行緩降囊环N葡萄砧木組培快繁和移栽方法。本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下
一種葡萄砧木組培快繁方法，包括以下步驟
(A)材料選擇采集葡萄砧木半木質(zhì)化新枝為外植體，去除葉片，留葉柄，將枝條剪成 5 6cm長度；
(B)材料清洗自來水流水沖洗枝條1小時后，用75%酒精浸泡30秒，再用0.1% HgCl2 滅菌7、min，無菌水清洗3次，消毒后剪切成2cm左右?guī)Ч?jié)間的莖段；
(C)啟動培養(yǎng)以1/2MS或MS或GS為基本培養(yǎng)基，在其中添加不同濃度的吲哚丁酸 (IBA)、萘乙酸(NAA)和6-芐基氨基嘌呤(6-BA)的不同組合，配制成葡萄砧木離體培養(yǎng)的啟 動培養(yǎng)基⑴_(7)號，其中吲哚丁酸濃度為0. 1 mg/L、0. 2 mg/L和0. 3 mg/L ；萘乙酸濃度為 0. 02 mg/L、0. 1 mg/L 和 0. 2 mg/L ；6-芐基氨基嘌呤濃度為0. 01 mg/L 和 2. 0 mg/L ；把處 理后的莖段接種于如下⑴-⑵號啟動培養(yǎng)基上
(1)1/2MS + IBA 0. 1 mg/L
(2)1/2MS + IBA 0. 2 mg/L
(3)1/2MS + IBA 0. 3 mg/L
(4)MS + 6-BA 2. 0 mg/L + NAA 0. 2 mg/L
(5)MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0. 02 mg/L
(6)GS + IBA 0. 1 mg/L + NAA 0. 1 mg/L
(7)GS + IBA 0. 1 mg/L + NAA 0. 1 mg/L + 6-BA 0. 01 mg/L在(1)- (7)號啟動培養(yǎng)基上，結(jié)果表示25天左右⑴-⑶號培養(yǎng)基上既有芽又有根 的分化，最佳組合為⑵號1/2MS + IBA 0.2 mg/L培養(yǎng)基；⑷和( 號培養(yǎng)基上先誘導(dǎo)生成愈 傷組織繼代后產(chǎn)生叢生芽；(6)和(7)號效果不理想；
(D)增殖培養(yǎng)將⑷和( 號培養(yǎng)基上誘導(dǎo)的愈傷組織轉(zhuǎn)接入⑷號MS+ 6-ΒΑ 2.0 mg/L + NAA 0. 2 mg/L培養(yǎng)基中35天左右即可產(chǎn)生叢生芽；
(E)生根培養(yǎng)待⑷號MS+ 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L培養(yǎng)基中長出的叢生芽 苗高纊3cm后，轉(zhuǎn)入⑵號1/2MS + IBA 0.2 mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)25天左右便有根的發(fā)生；
(F)—步誘導(dǎo)成苗將滅菌處理后的葡萄砧木莖段初次接種在⑵號1/2MS+ IBA 0.2 mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天后，既出苗又生根。所述的啟動培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)基中分別添加25g/L的蔗糖，用5. 5飛g/L 的瓊脂固化，PH值為5. 8，并將接種后的培養(yǎng)材料置于溫度25士2°C、光照時間14h/d、光照 強(qiáng)度1500-20001x的培養(yǎng)室培養(yǎng)。在所述的葡萄砧木離體培養(yǎng)中，材料清洗滅菌時間可根據(jù)材料的老嫩，適當(dāng)調(diào)整 0. 1% HgCl2及滅菌時間。一種葡萄砧木移栽方法，將葡萄砧木瓶苗植株高達(dá)5cm以上、根長3-8cm、根數(shù)5_7 根的無菌苗在室內(nèi)(或大棚內(nèi))自然光下煉苗3-5天，再開瓶煉苗7天后，取苗出瓶洗凈根上 的瓊脂移栽入珍珠巖中，蓋塑料薄膜保持葉片濕度，避免強(qiáng)光直射，室溫25°C左右。珍珠巖 中假植15-20天，便可移栽定植于疏松的地里，成活率在90%以上，緩苗后，可噴施0. 2%的 葉面肥。在所述的葡萄砧木移栽過程中，試管苗出瓶后葉片保濕。本發(fā)明的積極效果體現(xiàn)在可提高葡萄砧木育苗的繁殖效率，為葡萄砧木的規(guī)模 化育苗提供有效途徑。
具體實(shí)施例方式下面根據(jù)具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。實(shí)施例一
2009年5月5日上午采集葡萄砧木SO4和貝達(dá)新枝，去除葉片，留葉柄，剪切成5飛cm 長的枝條，自來水沖洗1小時后備用。將清洗干凈的外植體置于超凈工作臺上，材料用75% 酒精浸泡30秒，再用0. 1% HgCl2滅菌7、min，無菌水清洗3次，然后將其剪切成2cm左右 帶節(jié)間的莖段，接種于⑴_(7)號啟動培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度25 士 2°C、光照時間14h/d、光照強(qiáng) 度 1500 20001x。將⑷和( 號培養(yǎng)基上誘導(dǎo)的愈傷組織，轉(zhuǎn)接如⑷號MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0. 2 mg/L培養(yǎng)基上，于溫度25士2°C、光照時間14h/d、光照強(qiáng)度150(Γ20001χ下培養(yǎng)35天
左右即可產(chǎn)生叢生芽。待長出的叢生芽苗高2 3cm后，轉(zhuǎn)入⑵號1/2MS + IBA 0.2 mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)25 天左右便有根的發(fā)生。培養(yǎng)條件同啟動培養(yǎng)。葡萄砧木一步誘導(dǎo)成苗，葡萄砧木接種在⑵號1/2MS + IBA 0.2 mg/L培養(yǎng)基中培 養(yǎng)30天后，既出苗又生根。培養(yǎng)條件同啟動培養(yǎng)。將瓶中苗高5cm以上、根長3-8cm、根數(shù)5_7根的無菌苗在室內(nèi)(或大棚內(nèi))自然光下煉苗3-5天，再開瓶煉苗7天后，取苗出瓶洗凈根上的瓊脂移栽入珍珠巖中，蓋塑料薄膜 保持葉片濕度，避免強(qiáng)光直射，室溫25°C左右。珍珠巖中假植15-20天，便可移栽定植于疏 松的地里，成活率在90%以上，緩苗后，可噴施0. 2%的葉面肥。實(shí)施例二
2009年7月1日上午采集葡萄砧木SO4和貝達(dá)半木質(zhì)化新枝，去除葉片，留葉柄，剪切 成5飛cm長的枝條，自來水沖洗1小時后備用。將清洗干凈的外植體置于超凈工作臺上，材 料用75%酒精浸泡30秒，再用0. 1% HgCl2滅菌7、min，無菌水清洗3次，然后將其剪切成 2cm左右?guī)Ч?jié)間的莖段，接種于⑵號1/2MS + IBA 0.2 mg/L+25g/L蔗糖+瓊脂5. 5g/L培養(yǎng) 基中培養(yǎng)30天后，既出苗又生根。待其試管苗在⑵號培養(yǎng)基中長至5cm以上后，剪去大葉片，保留小葉片，并剪切成 2-3cm左右?guī)Ч?jié)間的莖段，繼續(xù)轉(zhuǎn)接于⑵號培養(yǎng)基中，25天左右即可成苗。培養(yǎng)周期為25 天左右，培養(yǎng)溫度25士2°C、光照時間14h/d、光照強(qiáng)度150(Γ20001χ。將瓶中苗高5cm以上，根長3-8cm，根數(shù)5_7根的無菌苗在室內(nèi)(或大棚內(nèi))自然光 下煉苗3-5天，再開瓶煉苗7天后，取苗出瓶洗凈根上的瓊脂移栽入珍珠巖中，蓋塑料薄膜 保持葉片濕度，避免強(qiáng)光直射，室溫25°C左右。珍珠巖中假植15-20天，便可移栽定植于疏 松的地里，成活率在90%以上，緩苗后，可噴施0. 2%的葉面肥。實(shí)施例三
2010年6月20日上午采集葡萄砧木SO4和貝達(dá)半木質(zhì)化新枝，去除葉片，留葉柄，剪切 成5飛cm長的枝條，自來水沖洗1小時后備用。將清洗干凈的外植體置于超凈工作臺上，材 料用75%酒精浸泡30秒，再用0. 1% HgCl2滅菌7、min，無菌水清洗3次，然后將其剪切成 2cm左右?guī)Ч?jié)間的莖段，接種于⑵號1/2MS + IBA 0.2 mg/L+25g/L蔗糖+瓊脂5. 5g/L培養(yǎng) 基中培養(yǎng)30天后，既出苗又生根。待其試管苗在⑵號培養(yǎng)基中長至5cm以上后，剪去大葉片，保留小葉片，并剪切成 2-3cm左右?guī)Ч?jié)間的莖段，繼續(xù)轉(zhuǎn)接于⑵號培養(yǎng)基中，25天左右即可成苗。培養(yǎng)周期為25 天左右。培養(yǎng)溫度25士2°C、光照時間14h/d、光照強(qiáng)度150(Γ20001χ。將瓶中苗高5cm以上、根長3-8cm、根數(shù)5_7根的無菌苗在室內(nèi)(或大棚內(nèi))自然光 下煉苗3-5天，再開瓶煉苗7天后，取苗出瓶洗凈根上的瓊脂移栽入珍珠巖中，蓋塑料薄膜 保持葉片濕度，避免強(qiáng)光直射，室溫25°C左右。珍珠巖中假植15-20天，便可移栽定植于疏 松的地里，成活率在90%以上，緩苗后，可噴施0. 2%的葉面肥。
權(quán)利要求
1.一種葡萄砧木組培快繁方法，其特征在于包括以下步驟(A)材料選擇采集葡萄砧木半木質(zhì)化新枝為外植體，去除葉片，留葉柄，將枝條剪成 5 6cm長度；(B)材料清洗自來水流水沖洗枝條1小時后，用75%酒精浸泡30秒，再用0. 1% HgCl2 滅菌7、min，無菌水清洗3次，消毒后剪切成2cm左右?guī)Ч?jié)間的莖段；(C)啟動培養(yǎng)以1/2MS或MS或GS為基本培養(yǎng)基，在其中添加不同濃度的吲哚丁酸 (IBA)、萘乙酸(NAA)和6-芐基氨基嘌呤(6-BA)的不同組合，配制成葡萄砧木離體培養(yǎng)的啟 動培養(yǎng)基⑴-⑵號，其中吲哚丁酸濃度為0. 1 mg/L、0.2 mg/L和0. 3 mg/L ；萘乙酸濃度 為0. 02 mg/L、0· 1 mg/L 和 0.2 mg/L ；6-芐基氨基嘌呤濃度為0.01 mg/L 和 2.0 mg/L ； 把處理后的莖段接種于如下⑴-⑵號啟動培養(yǎng)基上；(1)1/2MS + IBA 0. 1 mg/L(2)1/2MS + IBA 0. 2 mg/L(3)1/2MS + IBA 0. 3 mg/L(4)MS + 6-BA 2. 0 mg/L + NAA 0. 2 mg/L(5)MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0. 02 mg/L(6)GS + IBA 0. 1 mg/L + NAA 0. 1 mg/L(7)GS + IBA 0. 1 mg/L + NAA 0. 1 mg/L + 6-BA 0. 01 mg/L結(jié)果顯示25天左右⑴-⑶號培養(yǎng)基上既有芽又有根的分化，最佳組合為⑵號1/2MS + IBA 0.2 mg/L培養(yǎng)基；⑷和⑶號培養(yǎng)基上先誘導(dǎo)生成愈傷組織繼代后產(chǎn)生叢生芽；(6)和(7) 號效果不理想；(D)增殖培養(yǎng)將⑷和( 號培養(yǎng)基上誘導(dǎo)的愈傷組織轉(zhuǎn)接入⑷號MS + 6-ΒΑ 2.0 mg/ L + NAA 0. 2 mg/L培養(yǎng)基中35天左右即可產(chǎn)生叢生芽；(E)生根培養(yǎng)待⑷號MS+ 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L培養(yǎng)基中長出的叢生芽 苗高纊3cm后，轉(zhuǎn)入⑵號1/2MS + IBA 0.2 mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)25天左右便有根的發(fā)生；(F)—步誘導(dǎo)成苗將滅菌處理后的葡萄砧木莖段初次接種在⑵號1/2MS+ IBA 0.2 mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天后，既出苗又生根。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種葡萄砧木組培快繁方法，其特征在于所述的啟動培養(yǎng)、 增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)基中分別添加25g/L的蔗糖，用5. 5-6g/L的瓊脂固化，pH值為5. 8，并 將接種后的培養(yǎng)材料置于溫度25士2°C、光照時間14h/d、光照強(qiáng)度1500-20001X的培養(yǎng)室 培養(yǎng)。
3.—種葡萄砧木移栽方法，其特征在于將葡萄砧木組培快繁后瓶苗植株高達(dá)5cm以 上、根長3-8cm、根數(shù)5-7根的無菌苗在室內(nèi)(或大棚內(nèi))自然光下煉苗3_5天，再開瓶煉苗 7天后，取苗出瓶洗凈根上的瓊脂移栽入珍珠巖中，蓋塑料薄膜保持葉片濕度，避免強(qiáng)光直 射，室溫25°C左右，珍珠巖中假植15-20天，便可移栽定植于疏松的地里，成活率在90%以 上，緩苗后，可噴施0. 2%的葉面肥。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葡萄砧木組培快繁方法，其特征在于在所述的葡萄砧木離 體培養(yǎng)中，材料清洗滅菌時間可根據(jù)材料的老嫩，適當(dāng)調(diào)整0. 1% HgCl2及滅菌時間。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葡萄砧木組培快繁方法，其特征在于在所述的葡萄砧木移 栽過程中，試管苗出瓶后葉片保濕。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種葡萄砧木組培快繁和移栽技術(shù)。該技術(shù)通過對葡萄砧木離體培養(yǎng)，建立起葡萄砧木組培快繁體系，包括材料選擇、材料清洗、啟動培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)及煉苗移栽，成活率可達(dá)90%以上。葡萄砧木組培快繁和移栽方法的建立，解決了葡萄砧木雜種不育與組培苗移栽成活難等問題，適用于葡萄砧木苗商業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A01G17/02GK102144547SQ201110007348
公開日2011年8月10日 申請日期2011年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月14日
發(fā)明者倪蘇, 呂秀蘭, 張雅新, 陳洪強(qiáng), 韋欣玲 申請人:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)