專(zhuān)利名稱(chēng)：用于枯萎病生物測(cè)定的黃瓜幼苗的培育方法
用于枯萎病生物測(cè)定的黃瓜幼苗的培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物培育方法，尤其涉及一種用于枯萎病生物測(cè)定的黃瓜幼苗的培育方法。
背景技術(shù)：
農(nóng)作物的枯萎病是一種毀滅性的真菌土傳病害，而尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum Schl)是其主要的病原菌。該病危害范圍廣泛，包括(1)經(jīng)濟(jì)作物棉花、油桐、 蓖麻、亞麻等；(2)茄科作物番茄、胡椒、茄子、煙草、馬鈴薯等；(3)瓜類(lèi)作物黃瓜、節(jié)瓜、 冬瓜、西瓜、南瓜、西葫蘆、甜瓜、絲瓜、白瓜、越瓜、苦瓜、葫蘆瓜、哈密瓜等；(4)豆科作物 大豆、四季豆、豇豆、豬屎豆、豌豆等；( 花卉植物康乃馨、郁金香、魚(yú)尾菊、非洲菊、鳶尾、 水仙、翠菊、合歡、百合、仙人掌、穿心蓮、一品紅、草坪草等；(6)林果植物松樹(shù)、相思樹(shù)、柑桔、沙棘、水杉、鐵線蓮屬植物、梨樹(shù)等；(7)其它植物萵苣、小麥、大蒜、荸薺、蘆筍、姜、香蕉等。在我國(guó)南方，作物枯萎病中以瓜類(lèi)枯萎病發(fā)生最為嚴(yán)重；在我國(guó)北方，以棉花枯萎病發(fā)生最為嚴(yán)重?？菸≡谥仓甑娜诰砂l(fā)生，一旦發(fā)病就難以根除，隨著連作年份的增加，發(fā)病率越發(fā)嚴(yán)重。20世紀(jì)90年代以來(lái)，我國(guó)設(shè)施蔬菜瓜類(lèi)作物面積不斷增加， 由于在相對(duì)封閉的設(shè)施內(nèi)形成的特殊小氣候既有利于蔬菜生長(zhǎng)，也成為各種病蟲(chóng)害滋生的溫床，加之長(zhǎng)年連作，使土壤中病原菌的數(shù)量不斷增加，設(shè)施栽培蔬菜的枯萎病發(fā)生越來(lái)越重。有關(guān)研究結(jié)果顯示作物枯萎病一般導(dǎo)致減產(chǎn)20-30%，嚴(yán)重田塊可達(dá)50-80%，甚至絕產(chǎn)，已成為限制著我國(guó)作物生產(chǎn)發(fā)展重要因素。選用抗病品種是防治作物枯萎病最常用的方法之一，而抗病鑒定工作是進(jìn)行抗枯萎病育種的重要環(huán)節(jié)。在枯萎病菌的致病性測(cè)定中，黃瓜苗是一種最常用的材料之一，不但所需量大，而且對(duì)幼苗的要求甚為嚴(yán)格。以往大多采用大田土壤育苗、栽培，采用這種方法育出的苗，接種后植株的感病情況難以準(zhǔn)確判斷或確定，因?yàn)榇筇锿寥莱煞輳?fù)雜，土壤結(jié)構(gòu)及微生物群系易發(fā)生變化，難以確保每次試驗(yàn)的一致性，而且土壤中的微生物也可能參與致病菌的致病作用，導(dǎo)致生物測(cè)定實(shí)驗(yàn)失敗，影響抗病育種工作的進(jìn)程，另外，傳統(tǒng)的育苗方法所需的時(shí)間較長(zhǎng)，一般不少于30天，因此，尋找一種相對(duì)無(wú)菌且快速的育苗手段是必需的。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種用于枯萎病生物測(cè)定的黃瓜幼苗的培育方法，不僅可縮短育苗時(shí)間、出苗率高，而且采用基質(zhì)培育能夠不受土壤微生物及土壤結(jié)構(gòu)等因素的影響，使得幼苗生長(zhǎng)均勻一致。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問(wèn)題的一種用于枯萎病生物測(cè)定的黃瓜幼苗的培育方法，其包括如下步驟先把備好的黃瓜種子浸于盛有無(wú)菌水的容器中，并將該容器置于恒溫?fù)u床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，溫度設(shè)定為25°C，轉(zhuǎn)速90r/min，待容器中的黃瓜種子發(fā)芽且芽長(zhǎng)至0. 4-0. 6cm后停止振蕩，接著將發(fā)芽的黃瓜種子播入盛有消過(guò)毒的培育基質(zhì)的育苗盤(pán)中，然后將該育苗盤(pán)置于25°C的人工氣候箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中的光周期為 12h光照、1 黑暗，以營(yíng)養(yǎng)液澆灌，培養(yǎng)20-22天后即可將幼苗用于枯萎病生物測(cè)定。進(jìn)一步地，所述培育基質(zhì)是由珍珠巖與泥炭按1 3的體積比組成。進(jìn)一步地，所述營(yíng)養(yǎng)液為市售普通花卉的營(yíng)養(yǎng)液，其組分為過(guò)磷酸鈣800mg/L、 硝酸鉀700mg/L、硝酸鈣700mg/L、硫酸鎂^Omg/L、硫酸鐵120mg/L、硼酸0. 6mg/L、硫酸錳 0. 6mg/L、硫酸鋅0. 6mg/L、硫酸銅0. 6mg/L、硫酸銨0. 6mg/L,以水配制。本發(fā)明的有益效果在于相比傳統(tǒng)大田土壤育苗，不僅可縮短育苗時(shí)間、出苗率高，而且采用基質(zhì)培育能夠不受土壤微生物及土壤結(jié)構(gòu)等因素的影響，使得幼苗生長(zhǎng)均勻一致，進(jìn)而提高后續(xù)枯萎病生物測(cè)定的可靠性和準(zhǔn)確性。
具體實(shí)施方式本發(fā)明用于枯萎病生物測(cè)定的黃瓜幼苗的培育方法包括如下步驟先把備好的黃瓜種子浸于盛有無(wú)菌水的容器中，并將該容器置于恒溫?fù)u床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，溫度設(shè)定為 25°C，轉(zhuǎn)速90r/min，待容器中的黃瓜種子發(fā)芽且芽長(zhǎng)至0. 4-0. 6cm (約振蕩培養(yǎng)Mh)后停止振蕩，接著將發(fā)芽的黃瓜種子播入盛有消過(guò)毒的培育基質(zhì)的育苗盤(pán)中，然后將該育苗盤(pán)置于25°C的人工氣候箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中的光周期為1 光照、1 黑暗，以營(yíng)養(yǎng)液澆灌， 培養(yǎng)20-22天后即可將幼苗用于枯萎病生物測(cè)定。其中，所述培育基質(zhì)是由珍珠巖與泥炭按1 3的體積比組成；所述營(yíng)養(yǎng)液為市售普通花卉的營(yíng)養(yǎng)液，其組分為過(guò)磷酸鈣800mg/L、硝酸鉀700mg/L、硝酸鈣700mg/L、硫酸鎂 ^Omg/L、硫酸鐵 120mg/L、硼酸 0. 6mg/L、硫酸錳 0. 6mg/L、硫酸鋅 0. 6mg/L、硫酸銅 0. 6mg/L、 硫酸銨0. 6mg/L,以水配制。以下是本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例及利用該實(shí)施例培育得到的黃瓜幼苗進(jìn)行枯萎病的生物測(cè)定。1.用于枯萎病生物生物測(cè)定的黃瓜幼苗的培育(1)材料黃瓜種子，培育基質(zhì)，營(yíng)養(yǎng)液(2)培育方法的具體步驟先把備好的黃瓜種子浸于盛有20ml無(wú)菌水的150ml三角瓶中，并將三角瓶置于恒溫?fù)u床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，以促進(jìn)種子發(fā)芽及提高種子萌發(fā)率，且溫度設(shè)定為25°C，轉(zhuǎn)速 90r/min，待容器中的黃瓜種子發(fā)芽且芽長(zhǎng)至約0. 5cm(約振蕩培養(yǎng)Mh)后停止振蕩，接著將發(fā)芽的黃瓜種子播入盛有消過(guò)毒的培育基質(zhì)的育苗盤(pán)中，然后將該育苗盤(pán)置于25°C的人工氣候箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中的光周期為1 光照、1 黑暗，并以市售普通花卉的營(yíng)養(yǎng)液澆灌，22天后即可培育出可用于枯萎病生物測(cè)定的黃瓜幼苗，相比傳統(tǒng)的大田土壤育苗方法，本發(fā)明不僅在培育時(shí)間上縮短了 1/3左右，且獲得的黃瓜幼苗苗狀一致，易于挑選。2.枯萎病的生物測(cè)定(1)供試枯萎病病原菌孢子懸浮液的制備先把供試枯萎病病原菌(Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum)置于PS液體培養(yǎng)基(馬鈴薯200g，蔗糖20g)中，且將該培養(yǎng)基置于搖床上培養(yǎng)7天，培養(yǎng)溫度設(shè)定為，轉(zhuǎn)速170r/min，接著把培養(yǎng)后所得的菌液用雙層紗布濾去菌絲，最后將濾液配制成lX107CFU/ml的孢子懸浮液備用。
(2)枯萎病的生物測(cè)定一般采取以下兩種接種方法a.澆灌接菌法挑選長(zhǎng)勢(shì)均一的黃瓜幼苗，輕輕拔出后將其主根及2根須根截?cái)嗪笠圃匀胨芰侠忣^，且每株根部澆入 IOml枯萎病病原菌孢子懸浮液；b.浸根接菌法挑選長(zhǎng)勢(shì)均一的黃瓜幼苗，輕輕拔出后用無(wú)菌水洗凈根部，接著將其主根及2根須根截?cái)嗪蠼腈咦討腋∫褐?，池后移栽入盛有已澆清水的無(wú)菌基質(zhì)的塑料缽頭中。每一種接種方法均同時(shí)設(shè)置對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組采用1中所得成活后的黃瓜幼苗，而對(duì)照組采用傳統(tǒng)大田育苗所獲得的黃瓜幼苗，且實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的苗期管理措施相同。逐日觀察兩組中黃瓜幼苗的生長(zhǎng)與感染情況，并比較30天后各組中黃瓜幼苗的感病情況。結(jié)果表明，接種病原菌30天后，兩對(duì)照組中黃瓜幼苗的枯萎病發(fā)病率均在60%以下，并且發(fā)病表現(xiàn)相當(dāng)不一致，難以給出統(tǒng)一評(píng)價(jià)；而實(shí)驗(yàn)組無(wú)論是采用澆灌接種法還是浸根接種法，其黃瓜幼苗的枯萎病發(fā)病率均達(dá)到100 %，不僅高度感病，而且感病表現(xiàn)一致，進(jìn)而表明按照本發(fā)明方法獲得的黃瓜幼苗能完全滿足生物測(cè)定和抗病育種的要求。
權(quán)利要求
1.一種用于枯萎病生物測(cè)定的黃瓜幼苗的培育方法，其特征在于包括如下步驟先把備好的黃瓜種子浸于盛有無(wú)菌水的容器中，并將該容器置于恒溫?fù)u床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)， 溫度設(shè)定為25°c，轉(zhuǎn)速90r/min，待容器中的黃瓜種子發(fā)芽且芽長(zhǎng)至0. 4-0. 6cm后停止振蕩，接著將發(fā)芽的黃瓜種子播入盛有消過(guò)毒的培育基質(zhì)的育苗盤(pán)中，然后將該育苗盤(pán)置于 25°C的人工氣候箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中的光周期為1 光照、1 黑暗，以營(yíng)養(yǎng)液澆灌，培養(yǎng) 20-22天后即可將幼苗用于枯萎病生物測(cè)定。
2.如權(quán)利要求1所述的用于枯萎病生物測(cè)定的黃瓜幼苗的培育方法，其特征在于所述培育基質(zhì)是由珍珠巖與泥炭按13的體積比組成。
3.如權(quán)利要求1所述的用于枯萎病生物測(cè)定的黃瓜幼苗的培育方法，其特征在于所述營(yíng)養(yǎng)液為市售普通花卉的營(yíng)養(yǎng)液，其組分為過(guò)磷酸鈣800mg/L、硝酸鉀700mg/L、硝酸鈣 700mg/L、硫酸鎂 ^Omg/L、硫酸鐵 120mg/L、硼酸 0. 6mg/L、硫酸錳 0. 6mg/L、硫酸鋅 0. 6mg/L、 硫酸銅0. 6mg/L、硫酸銨0. 6mg/L,以水配制。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于枯萎病生物測(cè)定的黃瓜幼苗的培育方法，其具體步驟先把備好的黃瓜種子浸于盛有無(wú)菌水的容器中，并將該容器置于恒溫?fù)u床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，溫度設(shè)定為25℃，轉(zhuǎn)速90r/min，待容器中的黃瓜種子發(fā)芽且芽長(zhǎng)至約0.5cm后停止振蕩，接著將發(fā)芽的黃瓜種子播入盛有消過(guò)毒的培育基質(zhì)的育苗盤(pán)中，然后將該育苗盤(pán)置于25℃的人工氣候箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中的光周期為12h光照、12h黑暗，以營(yíng)養(yǎng)液澆灌，約20天后即可將幼苗用于枯萎病生物測(cè)定。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于不僅可縮短育苗時(shí)間、出苗率高，而且采用基質(zhì)培育能夠不受土壤微生物及結(jié)構(gòu)等因素的影響，使得幼苗生長(zhǎng)均勻一致。
文檔編號(hào)A01C1/00GK102165914SQ20111000775
公開(kāi)日2011年8月31日 申請(qǐng)日期2011年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月14日
發(fā)明者劉波, 唐建陽(yáng), 朱育菁, 肖榮鳳, 車(chē)建美, 鄭雪芳 申請(qǐng)人:福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物資源研究所