專利名稱：牡丹花瓣愈傷組織誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種愈傷組織培養(yǎng)方法，尤其涉及一種牡丹花瓣愈傷組織誘導(dǎo)方法。
背景技術(shù)：
牡丹為中國(guó)十大名花之一，也是中國(guó)的國(guó)花，有“花中之王”的美譽(yù)。牡丹組織培 養(yǎng)主要是利用芽進(jìn)行誘導(dǎo)植株和利用外植體通過(guò)愈傷組織途徑進(jìn)行誘導(dǎo)，而牡丹的愈傷組 織誘導(dǎo)對(duì)于再生植株是一個(gè)重要的階段，較高的愈傷組織誘導(dǎo)率對(duì)于后期愈傷組織的分化 奠定良好的基礎(chǔ)，如何獲得較高的愈傷組織誘導(dǎo)率與培養(yǎng)基類型、激素的種類和濃度以及 培養(yǎng)條件有密切的關(guān)系。愈傷組織培養(yǎng)是一種最常見(jiàn)的培養(yǎng)形式，除莖尖分生組織培養(yǎng)和一部分器官培養(yǎng) 以外，其他幾種植物組織培養(yǎng)形式最終都要經(jīng)歷愈傷組織才能產(chǎn)生植株。此外愈傷組織還 常常是懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞和原生質(zhì)體的來(lái)源。愈傷組織分為胚性愈傷組織和非胚性愈傷組 織，胚性愈傷組織是指體細(xì)胞胚的愈傷組織，經(jīng)過(guò)分化成幼嫩的植株?，F(xiàn)有技術(shù)中，牡丹組織培養(yǎng)研究已經(jīng)有較長(zhǎng)的歷史，研究?jī)?nèi)容也主要集中在外植 體選擇、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)配比和培養(yǎng)基配方等領(lǐng)域，主要是利用莖尖直接發(fā)育成植株，而利用 外植體誘導(dǎo)愈傷組織，然后利用愈傷組織分化產(chǎn)生植株的研究相對(duì)較少，而愈傷組織的誘 導(dǎo)是愈傷組織分化產(chǎn)生植株的前提條件。上述現(xiàn)有技術(shù)至少存在以下缺點(diǎn)存在愈傷組織誘導(dǎo)困難、生根率和生根質(zhì)量不高、馴化移栽困難、褐化、玻璃化等 問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種愈傷組織誘導(dǎo)率高的牡丹花瓣愈傷組織誘導(dǎo)方法。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明的牡丹花瓣愈傷組織誘導(dǎo)方法，包括選取牡丹外植體，采用MS培養(yǎng)基進(jìn)行 愈傷組織的誘導(dǎo)，所述牡丹外植體為花瓣；取材時(shí)期為在花藥的單核中期取材；所述MS 培養(yǎng)基包括MS+2，4-D1. 0mg/L+6-BA2mg/L+NAA0. lmg/L。由上述本發(fā)明提供的技術(shù)方案可以看出，本發(fā)明所述的牡丹花瓣愈傷組織誘導(dǎo)方 法，由于采用MS培養(yǎng)基進(jìn)行牡丹花瓣愈傷組織的誘導(dǎo)，MS培養(yǎng)基中配有6-BA細(xì)胞分裂素、 NAA植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、2，4-D除草劑，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)機(jī)取材，愈傷組織誘導(dǎo)率高。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的牡丹花瓣愈傷組織誘導(dǎo)方法，其較佳的具體實(shí)施方式
是，包括選取牡丹 外植體，采用MS培養(yǎng)基進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，所述MS培養(yǎng)基中配有以下一種或多種物質(zhì)6-BA細(xì)胞分裂素、NAA植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、2，4_D除草劑。在進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)前，可以先進(jìn)行培養(yǎng)前處理首先，對(duì)所選取的牡丹外植體進(jìn)行4°C低溫處理；然后，利用2% NaClO消毒30min，70%酒精消毒30s，無(wú)菌水沖洗3_5次。具體實(shí)施例以不同的外植體為例，采用不同的培養(yǎng)基和不同的培養(yǎng)條件達(dá)到了最佳的誘導(dǎo)效 果。下面以不同外植體為對(duì)象分別進(jìn)行闡述胚愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)期每年的9月份，種子形成后；培養(yǎng)前處理利用低溫)處理和赤霉素處理相結(jié)合的方法，利用常規(guī)的消毒 方法NaClO消毒30min，70%酒精消毒30s，無(wú)菌水沖洗3_5次)消毒后接種；最佳的培養(yǎng)基:MS+NAA0.lmg/L+6-BAl· Omg/L ；愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到100 %。莖段愈傷組織誘導(dǎo)取材時(shí)期取幼嫩的莖段，春季3月底4月初，或者由種子發(fā)芽形成的幼嫩的莖 段；培養(yǎng)前處理利用常規(guī)的滅菌方法NaClO消毒30min，70%酒精消毒30s，無(wú) 菌水沖洗3-5次)進(jìn)行消毒；最佳的培養(yǎng)基:MS+NAA0.05mg/L+6_BA2. Omg/L+2，4-D1. Omg/L ；愈傷組織誘導(dǎo)率80%以上。葉片愈傷組織誘導(dǎo)取材時(shí)期取幼嫩的葉片，春季3月底4月初，或者由種子發(fā)芽形成的幼嫩的葉 片；培養(yǎng)前處理利用常規(guī)的滅菌方法NaClO消毒30min，70%酒精消毒30s，無(wú) 菌水沖洗3-5次)進(jìn)行消毒；最佳培養(yǎng)基:MS+6-BA0.lmg/L+2，4-DO. 5mg/L ；
愈傷組織誘導(dǎo)率80 %左右。花瓣愈傷組織誘導(dǎo)取材時(shí)期在花藥的單核中期；培養(yǎng)前處理4°C條件下處理8d后，利用常規(guī)的滅菌方法NaClO消毒30min， 70%酒精消毒30s，無(wú)菌水沖洗3-5次)進(jìn)行消毒接種至培養(yǎng)基；最佳培養(yǎng)基:MS+2,4-Dl.0mg/L+6-BA2mg/L+NAA0. lmg/L ；
愈傷組織誘導(dǎo)率60 %左右?；ㄋ幱鷤M織誘導(dǎo)取材時(shí)期在花藥的單核中期取材；培養(yǎng)前處理4°C條件下處理8d后，利用常規(guī)的滅菌方法NaClO消毒30min，70%酒精消毒30s，無(wú)菌水沖洗3-5次)進(jìn)行消毒接種至培養(yǎng)基；最佳培養(yǎng)基MS+2，4-D2.Omg/L+6-BAl. 5mg/L+NAM. Omg/L,蔗糖濃度為 6% ；愈傷組織的誘導(dǎo)率50 %左右。本發(fā)明中，針對(duì)不同的外植體，都有明確的培養(yǎng)基方案和激素組合。并對(duì)愈傷組織 的最佳的取材時(shí)期進(jìn)行了全面的闡述。牡丹愈傷組織的誘導(dǎo)率均在80%以上，達(dá)到了較好 的誘導(dǎo)效果；花瓣和花藥愈傷組織誘導(dǎo)也達(dá)到了 50%以上。以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式
，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此， 任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換， 都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種牡丹花瓣愈傷組織誘導(dǎo)方法，其特征在于，包括選取牡丹外植體，采用MS培養(yǎng) 基進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，所述牡丹外植體為花瓣；取材時(shí)期為在花藥的單核中期取材；所述 MS 培養(yǎng)基包括MS+2，4-Dl. 0mg/L+6-BA2mg/L+NAA0. lmg/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牡丹花瓣愈傷組織誘導(dǎo)方法，其特征在于，包括培養(yǎng)前處理 首先，對(duì)所選取的牡丹外植體進(jìn)行4°C低溫處理；然后，利用2% NaClO消毒30min，70%酒精消毒30s，無(wú)菌水沖洗3_5次。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種牡丹花瓣愈傷組織誘導(dǎo)方法，采用MS培養(yǎng)基進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，MS培養(yǎng)基中配有6-BA細(xì)胞分裂素、NAA植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、2，4-D除草劑等物質(zhì)。針對(duì)牡丹花瓣外植體，有明確的培養(yǎng)基方案和激素組合。并對(duì)愈傷組織的最佳的取材時(shí)期進(jìn)行了闡述。牡丹愈傷組織的誘導(dǎo)率均在80％以上，達(dá)到了較好的誘導(dǎo)效果，花瓣愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到了50％以上。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102144564SQ20111004678
公開(kāi)日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2009年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月11日
發(fā)明者朱向濤, 王雁 申請(qǐng)人:中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所