專利名稱：一種大型溞儲備保種培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于浮游動物培養(yǎng)領(lǐng)域，涉及一種生態(tài)型大型潘儲備保種培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
大型潘OfeMflia ffl^TKO生活于自然水域，屬于浮游甲殼類動物，是世界種。它具 有生活周期短、繁殖快、經(jīng)濟(jì)、對毒物敏感等優(yōu)點，在水域生態(tài)系統(tǒng)中具有重要的作用，可以 用于綜合評價工業(yè)廢水的毒性、農(nóng)藥毒性及新化學(xué)物質(zhì)毒性等。大型潘是國際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn) 試驗生物，被廣泛應(yīng)用于水生生物毒理試驗。隨著大型潘毒理試驗研究的發(fā)展，各國相繼建立了大型潘毒性測定的標(biāo)準(zhǔn)方法， 對試驗型大型潘的培養(yǎng)條件做了相關(guān)的規(guī)定，而針對于大型潘的保種培養(yǎng)卻未有提及。試 驗潘的來源可以從實驗室已有的純培養(yǎng)中挑選、引種，也可以從野外采集。野外采集的潘要 經(jīng)分離、鑒定、純化，耗時費力。如何簡便地在實驗室進(jìn)行保種培養(yǎng)，免去野外采集的煩瑣工 作，是亟待解決的問題。大型潘的適宜繁殖的條件為溫度22°C左右、pH = 6. 5 8. 5、培養(yǎng)用水可選用經(jīng) 自然曝氣三天以上的自來水或人工配置的稀釋水。在該條件下，大型潘能健康快速繁殖，因 此需頻繁投喂餌料，更換水源，定期移除過量的大型潘，另外，也長期占用培養(yǎng)箱的空間資 源。通常情況下大型潘采用單性孤雌生殖方式，在適宜條件下培養(yǎng)的大型潘會大量繁殖，造 成培養(yǎng)液中密度太大，導(dǎo)致孤雌生殖停止而進(jìn)行有性生殖。根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)組織ISO規(guī)定，進(jìn) 行毒性實驗的大型潘必需是敏感純種的生物株，因此大型潘的繁殖需約束在孤雌生殖的狀 態(tài)下。大型潘的實驗室保種若采用試驗培養(yǎng)的方法，操作繁瑣，工作量較大，且不利于純種 的保存。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供了一種操作簡單，費用少，水質(zhì)穩(wěn)定的生態(tài)型 大型潘儲備保種培養(yǎng)方法。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)
一種大型潘儲備保種培養(yǎng)方法，其特征在于建立潘一藻一螺一魚水生生態(tài)系統(tǒng)。上述水生生態(tài)系統(tǒng)中的藻為斜生柵藻Ji為環(huán)棱螺；魚為青苔鼠。水生生態(tài)系統(tǒng)中斜生柵藻的密度為4X IO3飛X IO3個/L ；幼潘、環(huán)棱螺、青苔鼠在 系統(tǒng)中的數(shù)量關(guān)系為150150 :2 3:1 2 :1。上述水生生態(tài)系統(tǒng)的建立包括以下步驟①在裝有清水的容器中按照 4 X 1(T4. 5 X IO3個/L的密度接種柵藻；②接種幼潘40-50個；③放入1-2個環(huán)棱螺和1_2 條青苔鼠魚；④將容器置于無陽光直射的環(huán)境；溫度保持在10-35°C之間；水體pH保持在 6. 5-8. 5之間；每隔7-10天更換8-10%容器體積的曝氣后自來水；⑤每周投喂餌料1_2次。步驟①所述容器為圓形容器，便于攪動水體，將殘雜集中于容器中央，用吸管將雜 質(zhì)吸走；容器為玻璃質(zhì)地，便于觀察；容器大小為5L。
步驟①所述清水是自來水放于陽光下曝氣三天以上，除去水中殘余氯氣。步驟⑤所述餌料為斜生柵藻，其投喂量為每周投喂2(T30ml的1 X IO6個/L柵藻1次。上述水生生態(tài)系統(tǒng)建立方法的優(yōu)選方案如下
(1)在5L圓形玻璃缸中加入自來水，自來水曝氣三天以上，除去水中殘余氯氣。(2)在玻璃缸中接種IX IO6個/L左右的柵藻。(3)接種幼潘50個。(4)放入1 2枚環(huán)棱螺(徹和1-2條清潔玻璃缸底部和四壁的青苔鼠 (Acantopsis choirorhynchos).青苔鼠是水草缸及小型魚缸最常配養(yǎng)的食藻魚，價格便 宜，能清除玻璃缸底部和四壁貼壁生長的藻類，使水缸保持光亮。青苔鼠還能攪動玻璃缸中 水體，促進(jìn)水體中柵藻的繁殖。(5)將玻璃缸至于室內(nèi)，無陽光直射。溫度在10_35°C范圍內(nèi)即可。每隔7-10天 換水10%。(6)除偶爾添加大型潘的餌料斜生柵藻外，不再添加任何營養(yǎng)鹽或其他餌料。潘一藻一螺一魚水生生態(tài)系統(tǒng)的建立為大型潘的長期穩(wěn)定保種提供了可能性。原 因如下
1.斜生柵藻作為餌料，被大型潘、環(huán)棱螺以及青苔鼠所食，大型潘褪下的殼以及環(huán)棱 螺、青苔鼠的排泄物又可以為柵藻繁殖提供N、P等營養(yǎng)物質(zhì)，因此可以減少餌料柵藻的投
喂數(shù)量。2.大型潘與環(huán)棱螺、青苔鼠不構(gòu)成捕食關(guān)系，大型潘的數(shù)量不會因被捕食而銳減。 在混養(yǎng)系統(tǒng)中，通過與其他物種共用資源且受混養(yǎng)系統(tǒng)的綜合性影響，從而保證了大型潘 的孤雌生殖。3.該水生生態(tài)系統(tǒng)的建立，使柵藻和大型潘生長穩(wěn)定，水質(zhì)良好，無需頻繁換水。 系統(tǒng)能夠自給自足、廢物再利用，不用經(jīng)常性照料，充分利用了自然生態(tài)系統(tǒng)的循環(huán)性和穩(wěn) 定性。本發(fā)明的有益效果為
1、生態(tài)型大型潘儲備保種培養(yǎng)方法能在室內(nèi)條件下長年保種大型潘，為實驗室提供充 足的健康純種大型潘。2、操作簡單，費用少。材料來源廣，無需特殊技術(shù)和設(shè)備。一個生態(tài)型大型潘保種 培養(yǎng)系統(tǒng)的建立約需20元左右(玻璃缸15元，青苔鼠3元/條)。3、持續(xù)時間長，南方地區(qū)可實現(xiàn)室內(nèi)常溫(10_35°C)狀態(tài)下長年保種培養(yǎng)。隨時 提供實驗材料。4、成功解決了傳統(tǒng)培養(yǎng)中大型潘大量繁殖導(dǎo)致孤雌生殖停止而進(jìn)行有性生殖、需 頻繁換水、需頻繁清理培養(yǎng)系統(tǒng)雜質(zhì)、占用培養(yǎng)箱空間難題。傳統(tǒng)培養(yǎng)中每周需換3次水， 要經(jīng)常性移除過量的大型潘，防止密度過高。生態(tài)型培養(yǎng)方法中換水周期為7-10天，換水 量為10%，大型潘的密度保持穩(wěn)定，無需經(jīng)常性清除數(shù)量過多的大型潘及培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的 廢物，大大減少了工作量。5、系統(tǒng)穩(wěn)定，大型潘、柵藻、環(huán)棱螺以及青苔鼠能共存。5L的玻璃缸能提供250個 左右的大型潘。PH維持在6. 5 8之間。氧溶量可維持在:3mg/L以上。
6、在該保種生態(tài)系統(tǒng)中，大型潘以柵藻為食，青苔鼠和環(huán)棱螺攝食貼壁生長的 藻類以及沉淀于玻璃缸底部的碎屑和大型潘褪皮遺下的甲殼。青苔鼠、環(huán)棱螺和大型潘不 構(gòu)成捕食關(guān)系，對水體可以起到一定的攪拌作用，其排泄物有利于柵藻的生長，從而可以相 輔相成，保持該水生生態(tài)系統(tǒng)水質(zhì)的穩(wěn)定性。生態(tài)型大型潘儲備保種培養(yǎng)方法采用簡單的生態(tài)系統(tǒng)構(gòu)造，操作簡單，費用少，水 質(zhì)穩(wěn)定，節(jié)省換水時間，無需恒溫培養(yǎng)箱，能在室內(nèi)長期保證大型潘的生長和繁殖。目前，大 型潘已被眾多實驗室廣泛利用，生態(tài)型大型潘保種培養(yǎng)方法能為實驗室提供隨取隨用的試 驗材料，免去前期煩瑣的選育工作，節(jié)約時間，減少工作量，保證試驗順利進(jìn)行。大型潘的毒理試驗廣泛應(yīng)用，需隨時提供大型潘作為試驗材料。采用構(gòu)建簡單的 水生生態(tài)系統(tǒng)的方法，操作簡單，費用少，大型潘能穩(wěn)定生長和繁殖，無需經(jīng)常性的野外采 種，免去一般培養(yǎng)中頻繁的人工換水、投喂餌料、清除雜質(zhì)廢物的麻煩，達(dá)到簡便的實驗室 長期保種的目的。


圖1是潘類一藻類一螺一魚水生生態(tài)系統(tǒng)，其中1是青苔鼠，2是環(huán)棱螺，3是大 型潘，4是斜生柵藻。
具體實施例方式
實例1 1、試驗材料
1條青苔鼠、2個環(huán)棱螺、5L圓形玻璃缸、50個左右大型潘、1 X IO6個左右柵藻、4L曝氣 3天的自來水、70cm虹吸管、1個玻璃棒、1個吸管。2、試驗過程
時間:2010. 01 — 2010. 12. 溫度10-；35 °C
(1)曝氣后的自來水倒入5L的圓形玻璃缸中，依次接種1 X IO6個/L左右的柵藻、大型 潘幼潘50個、放入2枚環(huán)棱螺和1條青苔鼠。放置于試驗臺上，無陽光直射，室溫培養(yǎng)。觀 察系統(tǒng)無異?，F(xiàn)象。(2)每周投喂20ml的1 X IO6個/L柵藻1次，以補充大型潘對柵藻的消耗。使該 生態(tài)系統(tǒng)中各種生物保持在以下關(guān)系柵藻的密度為4X IO3飛X IO3個/L左右。(3)每7-10天換水一次，換水量為8-10%。(4)當(dāng)玻璃缸水體雜質(zhì)殘余稍多時，可用玻璃棒攪動水體，使玻璃缸水體環(huán)流起 來，此時，殘余雜質(zhì)等將集中于玻璃缸底中央，待水體靜止時，用吸管吸走這些殘余雜質(zhì)，以 減輕水體的負(fù)荷。(5)柵藻和大型潘生長情況記錄。3、試驗結(jié)果
(1)隨著室溫的變化，大型潘的數(shù)量也會消長起伏，但總個體數(shù)基本能穩(wěn)定在120-300 個左右，無需移除大型潘。(2)換水周期為7-10天，水質(zhì)良好。柵藻、環(huán)棱螺和青苔鼠生長情況良好，培養(yǎng)系 統(tǒng)穩(wěn)定。
(3)在為期一年的實驗中，大型潘能保持孤雌生殖，無水質(zhì)惡化現(xiàn)象，可達(dá)到為實 驗室長期提供優(yōu)良純種的目的。
權(quán)利要求
1.一種大型潘儲備保種培養(yǎng)方法，其特征在于建立潘一藻一螺一魚水生生態(tài)系統(tǒng)。
2.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述水生生態(tài)系統(tǒng)中的藻為斜生柵藻， 螺為環(huán)棱螺，魚為青苔鼠。
3.如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述斜生柵藻的密度為4X103飛X IO3個 /L ；大型潘、環(huán)棱螺、青苔鼠在系統(tǒng)中的數(shù)量關(guān)系為15(Γ250:2 3:廣2。
4.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述水生生態(tài)系統(tǒng)的建立包括以下步 驟①在裝有清水的容器中按照4X10，4.5X IO3個/L的密度接種柵藻；②接種幼潘 40-50個；③放入1-2個環(huán)棱螺和1-2條青苔鼠魚；④將容器置于無陽光直射的環(huán)境；溫度 保持在10-35°C之間；水體pH保持在6. 5-8. 5之間；每隔7_10天更換8-10%容器體積的曝 氣后自來水；⑤每周投喂餌料1-2次。
5.如權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟①所述容器為圓形容器。
6.如權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟①所述容器為玻璃質(zhì)地。
7.如權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟①所述清水是自來水放于陽光下曝 氣三天以上，除去水中殘余氯氣。
8.如權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟④所述環(huán)境為室內(nèi)環(huán)境。
9.如權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟⑤所述餌料為斜生柵藻，其投喂量 為每周投喂2(T30ml的1 X IO6個/L斜生柵藻1次。
全文摘要
本發(fā)明屬于浮游動物培養(yǎng)領(lǐng)域，涉及一種生態(tài)型大型溞儲備保種培養(yǎng)方法。生態(tài)型大型溞儲備保種方法需建立簡單的溞－藻－螺－魚水生生態(tài)系統(tǒng)，讓大型溞在生態(tài)系統(tǒng)中穩(wěn)定生長和繁殖，定期更換少量培養(yǎng)用水和添加少量餌料，保證大型溞長年穩(wěn)定在系統(tǒng)中。大型溞的毒理試驗廣泛應(yīng)用，需隨時提供大型溞作為試驗材料。采用構(gòu)建簡單的水生生態(tài)系統(tǒng)的方法，操作簡單，費用少，大型溞能穩(wěn)定生長和繁殖，無需經(jīng)常性的野外采種，免去一般培養(yǎng)中頻繁的人工換水、投喂餌料、清除雜質(zhì)廢物的麻煩，達(dá)到簡便的實驗室長期保種的目的。
文檔編號A01K61/00GK102138542SQ20111004730
公開日2011年8月3日 申請日期2011年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月28日
發(fā)明者竇碧霞, 黃建榮 申請人:中山大學(xué)