專利名稱：利用油茶枝粉液體培養(yǎng)制備茶薪菇營養(yǎng)菌粉的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及了一種利用油茶枝粉液體培養(yǎng)茶薪菇營養(yǎng)菌絲的方法。
背景技術(shù)：
H (Xamellia oleifera Abel)為山茶科(Theaceae)山茶屬多年生植物，英文名Oil Camellia，是中國特有的食用油料樹種，已有兩千多年的栽培歷史，現(xiàn)有油茶林面積約3. 99X1015m2，主要分布在湖南、江西、廣西、廣東、福建、浙江、安徽、貴州等省(區(qū))，也是世界四大木本食用油料樹種之一。油茶是多年生長木本油料植物，以采收果實為主，陽光充足、可使樹冠擴展，枝葉茂盛，茶多果大。油茶籽含油量一般在30%左右，經(jīng)過加工制成的茶油是一種優(yōu)質(zhì)食用油，其不飽和脂肪酸含量達94%左右，因此，油茶樹的栽培面積和茶油的產(chǎn)量呈較強的發(fā)展趨勢。油茶樹為四季常綠樹種，開花量大，花香，一年到頭花果不離枝，需要大量的營養(yǎng)物質(zhì)和充足的陽光；科學(xué)進行油茶修剪，樹體結(jié)構(gòu)合理，營養(yǎng)集中，通風(fēng)透光， 有利于枝梢健壯，花蕾粗大，結(jié)果均勻，提高產(chǎn)果量和出油率，修剪的油茶樹比不修剪的增產(chǎn)30%到1倍，是促進高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的一項重要措施。我國約有8. 4X IOV茶園，以往茶樹臺刈、品種更新與修剪后的茶樹枝，多數(shù)曬干后用作燃料，部分丟棄腐爛，導(dǎo)致廢茶枝的有效利用率很低，造成資源的極大浪費。在油茶產(chǎn)地，每年有大量油茶樹修剪枝椏，亟待高附加值的開發(fā)利用。茶薪菇C^roak chaxingu Huang)是一種食藥兼用的珍稀蕈菌，最早發(fā)現(xiàn)其自然生長的專性寄主為油茶樹，現(xiàn)已馴化可人工栽培。茶薪菇子實體的酚類成分主要以黃酮醇類物質(zhì)為主，具有較強的抗氧化能力；酚類物含量與其抗氧化能力(FRAP Value)明顯相關(guān)(r2=0.908》。此外，茶薪菇含有豐富的食用菌多糖、氨基酸、維生素類營養(yǎng)成分，以及皂苷、有機酸、萜烯類等其他微量營養(yǎng)物質(zhì)，共同構(gòu)成了茶薪菇在清除游離羥基、陰離子、抑制脂質(zhì)過氧化代謝等多方面的抗氧化功能作用。茶薪菇發(fā)酵菌絲體與子實體的主要營養(yǎng)成分差別不大，受其品種營養(yǎng)代謝特征控制；人工栽培子實體，生產(chǎn)周期長、生長過程中易污染雜菌，受病蟲害侵襲，農(nóng)藥殘留問題嚴(yán)重。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種利用油茶枝粉液體培養(yǎng)制備茶薪菇營養(yǎng)菌粉的方法， 該方法利用廢棄油茶枝作為開發(fā)茶薪菇天然抗氧化物質(zhì)資源的培養(yǎng)原料，達到油茶種植廢棄資源的高附加值開發(fā)利用，該方法制種簡便、營養(yǎng)基質(zhì)可調(diào)控，生產(chǎn)周期短、易于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的技術(shù)方案如下將活化、誘導(dǎo)后的茶薪菇液體菌種接種到油茶枝粉培養(yǎng)基中，培養(yǎng)制備茶薪菇營養(yǎng)菌粉。具體步驟如下
(1)制備茶薪菇液體菌種a、活化按照常規(guī)方法保存菌種；采用PDA活化平板培養(yǎng)基，每IOOmL含馬鈴薯20g、酵母粉0. 15g、葡萄糖2 g、磷酸二氫鉀0. 3 g、硫酸鎂0. 15 g、硫酸銨0. 1 g、VB10. 01 g、瓊脂 2 g ；按照常規(guī)方法活化平板菌種；活化平板培養(yǎng)條件為在溫度25士0. 5°C下避光靜置活化培養(yǎng)5-8天；
b、誘導(dǎo)采用PDB液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每IOOmL含馬鈴薯20g、玉米粉1-3g、麥麩1_3 g、酵母粉 0.1-0. 3 g、蔗糖 2 g、磷酸二氫鉀 0. 1-0. 3 g、硫酸鎂 0.05-0. 15 g、VB10. 01 g， pH值5. 5-6. 5 ；液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的馬鈴薯、玉米粉和麥麩，需經(jīng)煮沸后用四層紗布過濾，濾液與其他培養(yǎng)基質(zhì)混勻、定容、分裝，；在液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基中接入直徑0.5-1. Ocm 的活化平板菌塊5-10塊/IOOmL ；2548°C、旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)4_6天，制得茶薪菇液體菌種；
(2)營養(yǎng)菌絲培養(yǎng)采用油茶枝粉培養(yǎng)基，所述油茶枝粉培養(yǎng)基的制備如下每 IOOmLPDB液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方基礎(chǔ)上添加油茶枝粉2_10g，pH值5. 5-6. 5 ；油茶枝粉培養(yǎng)基中的馬鈴薯、玉米粉、麥麩和油茶枝粉，需經(jīng)煮沸后用四層紗布過濾；將所述茶薪菇液體菌種接種于油茶枝粉培養(yǎng)基，茶薪菇液體菌種接種量為10-20% (V/V)；培養(yǎng)條件為 25-280C、150士2 r/min,旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)5_7天，得到營養(yǎng)菌絲培養(yǎng)液；
(3)菌粉制備將步驟(2)的營養(yǎng)菌絲培養(yǎng)液在4000rpm常溫離心5min，得到的菌絲體用蒸餾水淋洗1-3次，然后進行真空冷凍干燥，制備得到茶薪菇營養(yǎng)菌粉。其中步驟(2)所述油茶枝粉的制備為采用修剪或新鮮的油茶樹枝椏，經(jīng)過曬干、 切段、破碎，烘干、粉碎并過20-40目篩，備用。本發(fā)明的茶薪菇營養(yǎng)菌粉的抗氧化營養(yǎng)成分及其功能如下
以油茶枝粉液體培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)的茶薪菇營養(yǎng)菌粉，其營養(yǎng)菌絲生物產(chǎn)量較未添加油茶枝粉的液體培養(yǎng)菌絲生物產(chǎn)量提高40-67%。與未添加油茶枝粉的菌粉干物質(zhì)相比，菌粉的總酚物質(zhì)從50%提高到2倍之多，總糖含量從m提高到47% ；發(fā)酵液中的總酚含量也分別從10%提高到20%之多，總糖含量從10%提高到61% ；茶薪菇菌絲對油茶枝粉液體培養(yǎng)基的次生代謝產(chǎn)物具有較強抑制脂質(zhì)過氧化能力。本發(fā)明的茶薪菇營養(yǎng)菌粉是以油茶枝粉為營養(yǎng)代謝誘導(dǎo)基質(zhì)，通過液體培養(yǎng)、提高菌絲生物產(chǎn)量與菌絲的總酚類物質(zhì)和總糖成分含量，經(jīng)離心、冷凍真空干燥，制備獲得的具有較強抑制脂質(zhì)過氧化能力的茶薪菇營養(yǎng)菌粉制品。本發(fā)明采用液體培養(yǎng)食用菌營養(yǎng)菌絲體，具備制種簡便、營養(yǎng)基質(zhì)可調(diào)控，生產(chǎn)周期短、菌齡整齊、菌絲生長旺盛、產(chǎn)品品質(zhì)可控制、工藝流程可標(biāo)準(zhǔn)化、易于工業(yè)化生產(chǎn)等諸多優(yōu)點。因此，發(fā)揮液體深層培養(yǎng)技術(shù)優(yōu)勢，將油茶枝的營養(yǎng)因子科學(xué)的用于培養(yǎng)基質(zhì)，可達到強化茶薪菇菌絲體的特征營養(yǎng)成分，為食用菌精深加工提供高附加值的生產(chǎn)原料。本發(fā)明具有以下優(yōu)點
1、利用油茶枝作為茶薪菇培養(yǎng)基質(zhì)，開發(fā)廢棄油茶枝資源的利用新途徑。本發(fā)明利用油茶枝粉作為液體培養(yǎng)的主要原料，快速高效地制備茶薪菇營養(yǎng)菌粉，進一步地也可用于指導(dǎo)利用茶樹枝椏作為茶薪菇固體栽培，提高茶薪菇抗氧化黃酮醇類活性成分的富集轉(zhuǎn)化應(yīng)用，變廢為寶。2、 本發(fā)明既可利用油茶枝營養(yǎng)成分，提高茶薪菇營養(yǎng)菌粉的生物產(chǎn)量；又可通過誘導(dǎo)茶薪菇胞外酚類代謝產(chǎn)物的積累，進而開發(fā)制備含有富集代謝產(chǎn)物的抗氧化培養(yǎng)液的新產(chǎn)品資源，提高油茶枝資源的利用效率與價值。
3、 茶薪菇營養(yǎng)菌粉和茶薪菇培養(yǎng)液富集產(chǎn)物的資源應(yīng)用前景較寬，可以用作膳食營養(yǎng)補充劑、食品天然抗氧化添加劑等功能營養(yǎng)食品資源的開發(fā)；還可用于生產(chǎn)具有抗氧化特性的天然抗氧化保健輕工產(chǎn)品原料等，極大地提高其資源利用的經(jīng)濟價值。
具體實施例方式本發(fā)明的技術(shù)方案包括油茶枝粉制備、茶薪菇營養(yǎng)菌絲培養(yǎng)與茶薪菇營養(yǎng)菌粉制備。1.油茶枝粉的制備采用修剪(或新鮮)的油茶樹枝椏，經(jīng)曬干、切段、破碎，烘干、 粉碎并過20-40目篩，儲存?zhèn)溆谩?.茶薪菇營養(yǎng)菌絲的培養(yǎng)與菌粉制備方法是
(1)活化按照常規(guī)方法保存茶薪菇菌種；采用PDA活化平板培養(yǎng)基，每IOOmL含馬鈴薯20g、酵母粉0. 15g、葡萄糖2 g、磷酸二氫鉀0.3 g、硫酸鎂0.15 g、硫酸銨0.1 g、VB10. 01 g、瓊脂2 g ；按照常規(guī)方法活化平板菌種；活化平板培養(yǎng)條件是溫度為25士0. 5°C，避光靜置活化培養(yǎng)5-8天；
(2)誘導(dǎo)采用PDB液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每IOOmL含馬鈴薯20g、玉米粉1_3g、麥麩
1-3g、酵母粉 0.1-0. 3 g、蔗糖 2 g、磷酸二氫鉀 0.1 -0.3g、硫酸鎂 0.05-0. 15 g、VB10. 01 g，pH值5. 5-6. 5 ；誘導(dǎo)液體母種培養(yǎng)基中的馬鈴薯、玉米粉和麥麩，需經(jīng)煮沸后四層紗布過濾，濾液與其他培養(yǎng)基質(zhì)混勻、定容、分裝，培養(yǎng)基量為培養(yǎng)容器容積的1/3-2/5，接入直徑 0. 5-1. Ocm的活化平板菌塊5-10塊/IOOmL ；2548°C、旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)4-6天；
(3)營養(yǎng)菌絲培養(yǎng)采用油茶枝粉培養(yǎng)基，所述油茶枝粉培養(yǎng)基的制備如下每 IOOmLPDB液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方基礎(chǔ)上添加油茶枝粉2_10g，pH值5. 5-6. 5 ；油茶枝粉培養(yǎng)基中的馬鈴薯、玉米粉、麥麩和油茶枝粉，經(jīng)煮沸后四層紗布過濾，其他培養(yǎng)基制備操作與2 (2)中完全相同；液體母種接種量為10-20% (V/V)；培養(yǎng)條件為2548°C、150士2 r/min，旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)5_7天；
(4)菌粉制備將步驟(4)的培養(yǎng)液4000rpm常溫離心5min，菌絲體用蒸餾水淋洗1_3 次，得到菌絲，_40°C預(yù)凍24h后，溫度-49士 1°C、真空度<10Pa，冷凍真空干燥(至恒重)，制備獲得油茶枝培養(yǎng)茶薪菇抗氧化營養(yǎng)菌粉。以下是本發(fā)明的幾個具體實施范例，進一步說明本發(fā)明，但是本發(fā)明不僅限于此。實施例1油茶枝粉用于提高液體培養(yǎng)茶薪菇營養(yǎng)菌粉生物量
油茶枝粉的制備采用廢棄的的油茶樹枝椏，經(jīng)曬干、切段、破碎，烘干、粉碎并過觀目篩，儲存?zhèn)溆?。保存菌種、活化平板菌種和誘導(dǎo)液體母種，采用的茶薪菇菌種為普通栽培品種，菌種保存于福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究所。在每IOOmL PDB液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，分別添加2g、4g、8g油茶枝粉，以不添加油茶枝粉的PDB液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基為對照，分別制備茶薪菇營養(yǎng)菌粉制品。結(jié)果顯示與不添加油茶枝粉的液體培養(yǎng)基比較，添加
2-4%油茶枝粉可提高菌絲生物量平均約43.8% (p<0. 05)，而添加8%油茶枝粉可明顯提高菌絲生物量約67. 8% (ρ<0· 05)，最高達1. 93g/100mL。實施例2油茶枝粉液體培養(yǎng)基誘導(dǎo)茶薪菇營養(yǎng)菌絲對活性成分的轉(zhuǎn)化代謝與富集以每IOOmLPDB液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，分別添加2g、4g、8g油茶枝粉，以不添加油茶枝粉的PDB液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基為對照。隨著液體培養(yǎng)基中油茶枝粉添加水平的逐漸遞增，提供給液體培養(yǎng)基中的可利用水溶性多糖與酚類營養(yǎng)物含量增加；雖然茶薪菇營養(yǎng)菌絲生物量呈現(xiàn)增長趨勢，隨菌絲轉(zhuǎn)化代謝和消耗液體培養(yǎng)基中的可溶性多糖與酚類化合物的能力也會因此發(fā)生改變。結(jié)果顯示，當(dāng)培養(yǎng)基中添加一定水平的油茶枝，在促進茶薪菇菌絲生物量的同時，每培養(yǎng)單位內(nèi)的營養(yǎng)菌絲酚類物轉(zhuǎn)化富集的程度明顯提高。其中， 添加8%油茶粉培養(yǎng)組的單位營養(yǎng)菌絲總酚含量最高達1. 90mg/g,比對照組提高82. 7% ；而發(fā)酵液中總酚最高達2. 40 mg/100mL、總糖達2. 09g/100mL,也分別比對照組提高98. 35%、 42. 18% ο 實施例3油茶枝粉培養(yǎng)的茶薪菇營養(yǎng)菌粉與富集代謝培養(yǎng)液的抗氧化功能評價培養(yǎng)基中添加一定水平的油茶枝粉，不僅可誘導(dǎo)茶薪菇菌絲中酚類物質(zhì)、多糖類物質(zhì)的轉(zhuǎn)化富集積累，在液體培養(yǎng)結(jié)束時，也相應(yīng)影響茶薪菇培養(yǎng)液中的殘留總酚和總糖含量， 改善茶薪菇營養(yǎng)菌粉和富集代謝培養(yǎng)液的抗氧化特性。茶薪菇營養(yǎng)菌粉和培養(yǎng)液均具有清除游離羥基、陰離子、抑制脂質(zhì)過氧化代謝等多方面的抗氧化功能作用，其抗氧化特性分別以清除游離羥基和抑制脂質(zhì)過氧化作用為主，在培養(yǎng)基中添加2-8%的油茶枝粉，茶薪菇營養(yǎng)菌粉對羥自由基清除率達55. 84%，培養(yǎng)液對脂質(zhì)過氧化的抑制率達53. 04% ；且兩者的抑制脂質(zhì)過氧化能力隨著油茶枝粉添加水平逐步提高而增加。實施例2的結(jié)果和茶薪菇營養(yǎng)菌粉的抗氧化功能結(jié)果表明，與不添加油茶枝粉液體培養(yǎng)的茶薪菇菌絲相比，添加油茶枝粉可明顯提高菌絲中的酚類活性物質(zhì)的積累，進而改善茶薪菇營養(yǎng)菌粉的抑制脂質(zhì)過氧化能力；茶薪菇液體培養(yǎng)結(jié)束時，廢棄培養(yǎng)液中仍然殘留豐富的茶薪菇胞外多糖與酚類物中間代謝產(chǎn)物，其富集結(jié)果明顯提高茶薪菇培養(yǎng)液的抗氧化功能。
權(quán)利要求
1.一種利用油茶枝粉液體培養(yǎng)制備茶薪菇營養(yǎng)菌粉的方法，其特征在于將活化、誘導(dǎo)后的茶薪菇液體菌種接種到油茶枝粉培養(yǎng)基中，培養(yǎng)制備茶薪菇營養(yǎng)菌粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用油茶枝粉液體培養(yǎng)制備茶薪菇營養(yǎng)菌粉的方法，其特征在于所述方法的具體步驟如下(1)制備茶薪菇液體菌種a、活化按照常規(guī)方法保存菌種；采用PDA活化平板培養(yǎng)基，每IOOmL含馬鈴薯20g、酵母粉0. 15g、葡萄糖2 g、磷酸二氫鉀0. 3 g、硫酸鎂0. 15 g、硫酸銨0. 1 g、VB10. 01 g、瓊脂 2 g ；按照常規(guī)方法活化平板菌種；活化平板培養(yǎng)條件為在溫度25士0. 5°C下避光靜置活化培養(yǎng)5-8天；b、誘導(dǎo)采用PDB液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每IOOmL含馬鈴薯20g、玉米粉1-3g、麥麩1_3 g、酵母粉 0.1-0. 3 g、蔗糖 2 g、磷酸二氫鉀 0. 1-0. 3 g、硫酸鎂 0.05-0. 15 g、VB10. 01 g， pH值5. 5-6. 5 ；液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的馬鈴薯、玉米粉和麥麩，需經(jīng)煮沸后用四層紗布過濾，濾液與其他培養(yǎng)基質(zhì)混勻、定容、分裝，；在液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基中接入直徑0.5-1. Ocm 的活化平板菌塊5-10塊/IOOmL ；2548°C、旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)4_6天，制得茶薪菇液體菌種；(2)營養(yǎng)菌絲培養(yǎng)采用油茶枝粉培養(yǎng)基，所述油茶枝粉培養(yǎng)基的制備如下每 IOOmLPDB液體母種誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方基礎(chǔ)上添加油茶枝粉2_10g，pH值5. 5-6. 5 ；油茶枝粉培養(yǎng)基中的馬鈴薯、玉米粉、麥麩和油茶枝粉，需經(jīng)煮沸后用四層紗布過濾；將所述茶薪菇液體菌種接種于油茶枝粉培養(yǎng)基，茶薪菇液體菌種接種量為10-20% (V/V)；培養(yǎng)條件為 25-28°C、150士2 r/min，旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)5_7天，得到營養(yǎng)菌絲培養(yǎng)液；(3)菌粉制備將步驟(2)的營養(yǎng)菌絲培養(yǎng)液在4000rpm常溫離心5min，得到的菌絲體用蒸餾水淋洗1-3次，然后進行真空冷凍干燥，制備得到茶薪菇營養(yǎng)菌粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用油茶枝粉液體培養(yǎng)制備茶薪菇營養(yǎng)菌粉的方法，其特征在于步驟(2)所述油茶枝粉的制備為采用修剪或新鮮的油茶樹枝椏，經(jīng)過曬干、切段、破碎，烘干、粉碎并過20-40目篩，備用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種利用油茶枝粉液體培養(yǎng)茶薪菇營養(yǎng)菌絲的方法。該方法是將活化、誘導(dǎo)后的茶薪菇液體菌種接種到油茶枝粉培養(yǎng)基中，培養(yǎng)制備茶薪菇營養(yǎng)菌粉。本發(fā)明采用液體培養(yǎng)食用菌營養(yǎng)菌絲體，具備制種簡便、營養(yǎng)基質(zhì)可調(diào)控，生產(chǎn)周期短、菌齡整齊、菌絲生長旺盛、產(chǎn)品品質(zhì)可控制、工藝流程可標(biāo)準(zhǔn)化、易于工業(yè)化生產(chǎn)等諸多優(yōu)點。因此，發(fā)揮液體深層培養(yǎng)技術(shù)優(yōu)勢，將油茶枝的營養(yǎng)因子科學(xué)的用于培養(yǎng)基質(zhì)，可達到強化茶薪菇菌絲體的特征營養(yǎng)成分，為食用菌精深加工提供高附加值的生產(chǎn)原料。
文檔編號A01G1/04GK102172175SQ20111005426
公開日2011年9月7日 申請日期2011年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月8日
發(fā)明者吳俐, 李怡彬, 湯葆莎, 沈恒勝, 陳君琛 申請人:福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究所