專利名稱：海藻酸復(fù)合微生物菌劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的海藻酸制劑及其制造方法。
背景技術(shù)：
海藻酸是一種海洋藻類中提取的物質(zhì)，用于農(nóng)業(yè)用生產(chǎn)過程中可有效起到促進(jìn)作物生長，改善作物品質(zhì)；同時(shí)可達(dá)到改良土壤作用。目前國內(nèi)都是單一利用海藻酸生產(chǎn)農(nóng)業(yè)用葉面肥、有機(jī)肥等或?qū)⒑Ｔ逅峒尤氲⒘?、鉀及一些微量元素制成農(nóng)業(yè)用肥，起到促進(jìn)作物生長的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是提供一種海藻酸復(fù)合微生物菌劑，其能起到促進(jìn)作物生長， 改良土壤和修復(fù)植物受損細(xì)胞，起到防治農(nóng)作物病害的作用。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種海藻酸復(fù)合微生物菌劑，由每公斤海藻酸配(0. 3 幻*102單位活菌數(shù)的菌體制成；所述的菌體包括熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌，兩種菌體的活菌數(shù)比為1 0.5 2。在農(nóng)作物生產(chǎn)上，許多植物的不良癥狀是因缺素而引起的，海藻酸富含大量氨基酸、細(xì)胞分裝素及微量元素，能有效補(bǔ)充植株因缺素而引起的不良癥狀，內(nèi)含的細(xì)胞分裂素等可促進(jìn)扎根、促進(jìn)生長、促進(jìn)開花、促進(jìn)結(jié)果；并且海藻酸也能從一定程度上改良土壤。熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌具有生物抗菌作用，能防治作物病害。并且，復(fù)配制劑具有意料不到的技術(shù)效果就是能夠修復(fù)植物受損細(xì)胞。換句話說就是利用本發(fā)明的復(fù)配制劑，能夠在農(nóng)作物發(fā)生病害后快速地控制作物病害并且修復(fù)植物受損細(xì)胞，使得農(nóng)作物遇到病害的情況下也不會(huì)減產(chǎn)。海藻酸與兩種菌的復(fù)合制劑在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上有著廣泛的用途，對(duì)保護(hù)環(huán)境，減少化學(xué)農(nóng)藥的使用量，促進(jìn)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展有著重要的技術(shù)價(jià)值和社會(huì)價(jià)值。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種海藻酸復(fù)合微生物菌劑的制備方法。技術(shù)方案為包括取熒光假單胞菌與枯草芽孢桿菌，菌株在瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，再經(jīng)發(fā)酵后分離出菌體，菌體與脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精混合后乳化，凍干磨粉后與海藻酸混合均勻。上述技術(shù)方案中的制備方法工藝簡單，都是常規(guī)操作工藝，使用的原材料也常見易得，因此制備工藝簡單，成本低廉，所制備的海藻酸復(fù)合微生物菌劑穩(wěn)定性和均勻大大提高，性能優(yōu)異；也便于運(yùn)輸和儲(chǔ)存，更適宜產(chǎn)業(yè)化推廣。
具體實(shí)施例方式一種海藻酸復(fù)合微生物菌劑，由每公斤海藻酸配(0.3 幻*102單位活菌數(shù)的菌體制成；所述的菌體包括熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌，其中兩種菌的活菌數(shù)比為 1 0. 5 2。
最好是每公斤海藻酸配(0. 8 1. 5)*102單位活菌數(shù)的菌體，所述的熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)比為1 0. 9 1. 2。進(jìn)一步的，所述的每公斤海藻酸配1*102單位活菌數(shù)的菌體，所述的熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)比為1 1。上述海藻酸復(fù)合微生物菌劑的制備方法是將海藻酸與兩種菌體按比例混合即可， 即配即用就能起到很好的作用和效果。更好的是包括取熒光假單胞菌與枯草芽孢桿菌，菌株在瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)， 再經(jīng)發(fā)酵后分離出菌體，菌體與脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精混合后乳化、凍干磨粉后與海藻酸混合均勻。利用瓊脂培養(yǎng)基平板培養(yǎng)和發(fā)酵等工藝處理主要是為了將菌體與海藻酸更好地分散、融合，提高兩者混合后復(fù)配物的穩(wěn)定性和均勻性，便于運(yùn)輸和儲(chǔ)存，便于在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中推廣和實(shí)用。更好的熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌在瓊脂培養(yǎng)基平板上，在室溫下生長，用懸浮培養(yǎng)基收集菌體，再加營養(yǎng)發(fā)酵液配置成菌懸液后移入瓊脂平板培養(yǎng)基中，涂抹均勻后，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；將蛋白營養(yǎng)液裝入搖瓶中，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養(yǎng)；按8 15%的接種量從搖瓶中接種菌體到種子罐，發(fā)酵后收集菌體；菌體與分散載體混合乳化，然后凍干、粉碎成粉末，與海藻酸混合均勻。分散載體例如脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精等，主要是起到分散菌體的作用，因其并不是有效成份，所以其量并沒有什么要求，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和成本控制情況選擇。本發(fā)明還摸索發(fā)明了一種優(yōu)選的瓊脂平板培養(yǎng)基配方，具體就是大豆分離蛋白 8. 0g、氯化鈉0. 6g、瓊脂粉1. 5g、脫脂乳粉6. 0g、葡萄糖3. 0g，加入3%的溴甲酚氯乙醇溶液 0. 5ml、PH值7. 5、110°C滅菌30分鐘獲得。實(shí)施例一按熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)1 0.5的比例取兩種菌體，菌株在瓊脂培養(yǎng)基平板上，在設(shè)定的25°C環(huán)境下生長，用懸浮培養(yǎng)基收集菌體，按每個(gè)安瓿瓶中加入 0. 5ml菌液，用酒精燈燒灼口塞棉花塞，真空干燥，火灼封口，在_50°C冰箱中保存。每安瓿瓶打開后，加入0. 2ml營養(yǎng)發(fā)酵液配置菌懸液，再移入瓊脂平板培養(yǎng)基中， 用無菌三角刮棒涂抹均勻，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。稱取20g豆粕粉，加水200ml裝入500ml搖瓶中，使之徹底溶解，PH值自然，110°C 滅菌30分鐘，冷卻至30°C，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養(yǎng)。按照8%接種量，從搖瓶接種到20L種子罐，保持25°C生產(chǎn)溫度，培養(yǎng)使之發(fā)酵48 小時(shí)。發(fā)酵后用壓力壓送發(fā)酵液從發(fā)酵罐轉(zhuǎn)到轉(zhuǎn)筒式離心機(jī)收集菌體。利用脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精與菌體混合后乳化。乳化后放入凍干機(jī)，在-40°C下速凍，后干燥。干燥后取出，置于粉碎機(jī)打成粉末。利用系列稀釋法涂布平板，計(jì)算活菌數(shù)。按每公斤海藻酸配0. 3*102活菌數(shù)菌粉混合均勻制得品。
保存六個(gè)月后活菌數(shù)、菌體分布均勻性無變化。實(shí)施例二按熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)1 0.9的比例取兩種菌體，菌株在瓊脂培養(yǎng)基平板上，在設(shè)定的32°C環(huán)境下生長，用懸浮培養(yǎng)基收集菌體，按每0. 5ml加入 0. 25ml營養(yǎng)發(fā)酵液配置菌懸液，再移入瓊脂平板培養(yǎng)基中，涂抹均勻后，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。稱取20g豆粕粉，加水300ml裝入500ml搖瓶中，使之徹底溶解，PH值自然，110°C 滅菌25分鐘，冷卻至室溫，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養(yǎng)。按照10%接種量，從搖瓶接種到20L種子罐，保持30°C生產(chǎn)溫度，培養(yǎng)使之發(fā)酵48 小時(shí)。發(fā)酵后用離心過濾收集菌體。利用脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精與菌體混合后乳化，凍干、粉碎成粉末，計(jì)算活菌數(shù)后，按每公斤海藻酸配0. 8*102活菌數(shù)菌粉混合均勻得的成品。保存六個(gè)月后活菌數(shù)、菌體分布均勻程度無變化。實(shí)施例三按熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)1 1的比例取兩種菌體，菌株在瓊脂培養(yǎng)基平板上，在設(shè)定的30°C環(huán)境下生長，用懸浮培養(yǎng)基收集菌體，按每0. 5ml加入0. 3ml 營養(yǎng)發(fā)酵液配置菌懸液，再移入瓊脂平板培養(yǎng)基中，涂抹均勻后，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。稱取20g豆粕粉，加水150ml裝入500ml搖瓶中，使之徹底溶解，PH值自然，105°C 滅菌30分鐘，冷卻至32°C，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養(yǎng)。按照10%接種量，從搖瓶接種到20L種子罐，保持生產(chǎn)溫度，培養(yǎng)使之發(fā)酵45 小時(shí)。發(fā)酵后用離心收集菌體。利用脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精與菌體混合后乳化，凍干、粉碎成粉末，計(jì)算活菌數(shù)后，按每公斤海藻酸配1*102活菌數(shù)菌粉混合均勻得的成品。保存六個(gè)月后活菌數(shù)、菌體分布均勻程度無變化。實(shí)施例四按熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)1 1.2的比例取兩種菌體，菌株在瓊脂培養(yǎng)基平板上，在設(shè)定的30°C環(huán)境下生長，用懸浮培養(yǎng)基收集菌體，按每0. 5ml加入 0. 25ml營養(yǎng)發(fā)酵液配置菌懸液，再移入瓊脂平板培養(yǎng)基中，涂抹均勻后，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。稱取20g豆粕粉，加水300ml裝入500ml搖瓶中，使之徹底溶解，PH值自然，110°C 滅菌25分鐘，冷卻至室溫，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養(yǎng)。按照12%接種量，從搖瓶接種到20L種子罐，保持30°C生產(chǎn)溫度，培養(yǎng)使之發(fā)酵48 小時(shí)。發(fā)酵后用離心過濾收集菌體。利用脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精與菌體混合后乳化，凍干、粉碎成粉末，計(jì)算活菌數(shù)后，按每公斤海藻酸配1. 5*102活菌數(shù)菌粉混合均勻得的成品。保存六個(gè)月后活菌數(shù)、菌體分布均勻程度無變化。實(shí)施例五按熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)1 2的比例取兩種菌體，菌株在瓊脂培養(yǎng)基平板上，在設(shè)定的環(huán)境下生長，用懸浮培養(yǎng)基收集菌體，按每0. 5ml加入0. 35ml 營養(yǎng)發(fā)酵液配置菌懸液，再移入瓊脂平板培養(yǎng)基中，涂抹均勻后，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。稱取20g豆粕粉，加水250ml裝入500ml搖瓶中，使之徹底溶解，PH值自然，115°C 滅菌20分鐘，冷卻至室溫，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養(yǎng)。按照15%接種量，從搖瓶接種到20L種子罐，保持生產(chǎn)溫度，培養(yǎng)使之發(fā)酵50 小時(shí)。發(fā)酵后用離心過濾收集菌體。利用脫脂奶粉、磷酸二氫鉀、蔗糖、味精與菌體混合后乳化，凍干、粉碎成粉末，計(jì)算活菌數(shù)后，按每公斤海藻酸配5*102活菌數(shù)菌粉混合均勻得的成品。保存六個(gè)月后活菌數(shù)、菌體分布均勻程度無變化。產(chǎn)品的大田試驗(yàn)效果2008年江蘇興化河道內(nèi)一裝載重金屬油的船發(fā)生事故，致使河道污染，當(dāng)?shù)剞r(nóng)民誤將河道中的水打入水稻地澆灌，致使大面積水稻發(fā)黃、中毒，分別使用本發(fā)明的實(shí)施例一到五所述的制劑后使中毒發(fā)黃的水稻恢復(fù)生長，后期又二次使用該制劑噴施，效果明顯；最終該地受害水稻測(cè)產(chǎn)，產(chǎn)量分別下降lg^us^d^j^ue^，對(duì)照地、也就是未采取措施處理的地塊減產(chǎn)30%，單純使用海藻酸的減產(chǎn)27%，單純使用熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌復(fù)配劑的減產(chǎn)30%，該地新聞及農(nóng)技推廣部門都做了大量報(bào)道。這就充分證明了本發(fā)明的制劑對(duì)作物受損細(xì)胞的修復(fù)能力。以下三組實(shí)驗(yàn)則是僅采用實(shí)施例三的制劑的情況。2008年，江蘇省淮陰市，由于連續(xù)載作甜椒，各種土傳病害引起的根腐病及莖基腐病發(fā)病嚴(yán)重，一般田塊為20-30%，嚴(yán)重田塊達(dá)到40%以上，2008年的秋季，對(duì)蘇椒5號(hào)的根腐病及莖基腐病進(jìn)行了大棚試驗(yàn)，對(duì)照地發(fā)病達(dá)70%以上，單純使用海藻酸的發(fā)病率為 67%，單純使用熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌復(fù)配劑的發(fā)病率68%，而用本發(fā)明制劑處理的2500株甜椒的發(fā)病率僅為10%左右，防治效果極為明顯。2008年廣西著名的芋頭之鄉(xiāng)荔浦，幾戶農(nóng)民在芋頭種植過程中發(fā)生芋頭根莖腐爛，且地上部分葉片發(fā)黃萎蔫，極有可能造成減產(chǎn)甚至絕收，用該制劑溶于水后澆灌根部， 一周后再澆灌一次，癥狀得到控制并沒有蔓延情況發(fā)生，芋頭沒有造成減產(chǎn)，而最初沒有發(fā)病的田塊用了本制劑澆灌后產(chǎn)量增加10% -15%左右，增產(chǎn)效果明顯。發(fā)病田塊單純使用海藻酸的減產(chǎn)13%，單純使用熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌復(fù)配劑的減產(chǎn)12%。2009年江蘇阜寧水稻大面積發(fā)生“黑條矮縮病”用本品進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)，噴施本品田塊該病發(fā)病率僅為5%左右，對(duì)照田塊和單純使用海藻酸、單純使用熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌復(fù)配劑的發(fā)病率都在20%以上。
權(quán)利要求
1.一種海藻酸復(fù)合微生物菌劑，由每公斤海藻酸配(0. 3 幻*102單位活菌數(shù)的菌體制成；所述的菌體包括熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌，兩種菌的活菌數(shù)比為1 0.5 2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海藻酸復(fù)合微生物菌劑，其特征在于所述的每公斤海藻酸配(0. 8 1. 5)*102單位活菌數(shù)的菌體，所述的熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)比為1 0. 9 1. 2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種海藻酸復(fù)合微生物菌劑，其特征在于所述的每公斤海藻酸配1*102單位活菌數(shù)的菌體，所述的熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)比為1 Io
4.一種根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的海藻酸復(fù)合微生物菌劑的制備方法，包括取熒光假單胞菌與枯草芽孢桿菌，菌株在瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，再經(jīng)發(fā)酵后分離出菌體，菌體與分散載體混合后乳化、凍干磨粉后與海藻酸混合均勻。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的海藻酸復(fù)合微生物菌劑的制備方法，其特征在于熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌在瓊脂培養(yǎng)基平板上，在室溫下生長，用懸浮培養(yǎng)基收集菌體，再加營養(yǎng)發(fā)酵液配置成菌懸液后移入瓊脂平板培養(yǎng)基中，涂抹均勻后，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；將蛋白營養(yǎng)液裝入搖瓶中，從平板中接種單菌落，在搖床中震蕩培養(yǎng)； 按8 15%的接種量從搖瓶中接種菌體到種子罐，發(fā)酵后收集菌體； 菌體與分散載體混合乳化，然后凍干、粉碎成粉末，與海藻酸混合均勻。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的海藻酸制劑及其制造方法；本發(fā)明的海藻酸復(fù)合微生物菌劑，能起到促進(jìn)作物生長，改良土壤和修復(fù)植物受損細(xì)胞，起到防治農(nóng)作物病害的作用；由每公斤海藻酸配(0.3～5)*102單位活菌數(shù)的菌體制成；所述的菌體包括熒光假單胞菌和枯草芽孢桿菌，兩種菌體的活菌數(shù)比為1∶0.5～2；這樣海藻酸與兩種菌體的復(fù)合制劑在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上有著廣泛的用途，對(duì)保護(hù)環(huán)境，減少化學(xué)農(nóng)藥的使用量，促進(jìn)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展有著重要的技術(shù)價(jià)值和社會(huì)價(jià)值；尤其是其意料不到的技術(shù)效果就是能夠修復(fù)植物受損細(xì)胞，也就是能夠在農(nóng)作物發(fā)生病害后快速地控制作物病害并且修復(fù)植物受損細(xì)胞，使得農(nóng)作物遇到病害的情況下也不會(huì)減產(chǎn)。
文檔編號(hào)C05F11/08GK102225877SQ20111008563
公開日2011年10月26日 申請(qǐng)日期2011年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月6日
發(fā)明者宋珂 申請(qǐng)人:上海農(nóng)安生物科技發(fā)展有限公司