專利名稱：一種棕色固氮菌微生物菌肥的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物菌肥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種棕色固氮菌微生物菌肥的制備方法。
背景技術(shù)：
棕色固氮菌易于培養(yǎng)，在實驗室內(nèi)可固定大量的氮素，所以對固氮的研究多使用此屬細菌。在自然界中，棕色固氮菌廣泛分布于土壤和水中，能固定游離氮素而具有重要作用，一般在偏酸性環(huán)境中生長發(fā)育不良。棕色固氮菌作為有益固氮菌，離體條件下能自身固氮，固氮能力強(菌種保藏制手冊，中國科學(xué)院微生物研究所，科學(xué)出版社，1980)，如果將其制成菌肥，不僅能在土壤和多種作物根際中固定空氣中的氮氣以提供作物的氮素營養(yǎng)需求，又能分泌激素刺激作物生長。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種微生物菌肥，該菌肥中含有大量棕色固氮菌及有益菌，可固定大量空氣中的氮素，供作物生長。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案 本發(fā)明棕色固氮菌微生物菌肥的制備方法，包括如下步驟
(1)菌懸液的制備將棕色固氮菌配制成60 80億個/ml的菌懸液；
(2)發(fā)酵腐熟按照重量份計算，取固體農(nóng)家肥60 70份，加入秸稈粉20 30份、吸附劑4 6份、過磷酸鈣2 3份或磷酸二氫鉀1. 5 2. 5份、水1 2份，拌勻，60 70°C 發(fā)酵3 4天，即得腐熟料；
(3)配制菌肥按照重量份計算，取腐熟料90 95份、糖0.5 1. 5份、滅菌水5 7 份、菌懸液0. 3 1-2份，混勻，在25 30°C發(fā)酵5 6天，干燥，即得。進一步的，上述制備方法為
(1)菌懸液的制備將棕色固氮菌配制成68億個/ml的菌懸液；
(2)發(fā)酵腐熟按照重量份計算，取固體農(nóng)家肥65份，加入稻草或秸稈粉25份、風(fēng)化煤或草碳5份、過磷酸鈣2. 5份或磷酸二氫鉀2份、水1. 5份，拌勻，60 70°C發(fā)酵3 4天， 即得腐熟料；
(3)配制菌肥按照重量份計算，取腐熟料92.6份、糖1份、滅菌水6份、菌懸液0. 4份， 混勻，在25 30°C發(fā)酵5 6天，干燥，即得。優(yōu)選的，前述制備方法中所用的菌懸液按如下方法制備
(1)富集培養(yǎng)液配制蔗糖15g、磷酸二氫鉀0.Sg、硫酸鎂0. 2g、氯化鈉0. 2g、碳酸鈣 lg、鉬酸鈉0. 05g、硫酸亞鐵0. lg、蛋白胨5g、水1000ml, pH為6. 5 7. 0 ；
(2)富集培養(yǎng)方法取3 5g肥沃土壤土樣用50ml水制成混濁液，吸取5ml懸浮液裝入盛有30ml富集培養(yǎng)液的250ml三角瓶中，150rpm，25 30°C，培養(yǎng)3 5天；
(3)平板分離培養(yǎng)基的制備在富集培養(yǎng)液中加入瓊脂制成平板分離培養(yǎng)基，滅菌，(4)平板分離培養(yǎng)取富集培養(yǎng)后的培養(yǎng)液，10倍稀釋后涂布于平板分離培養(yǎng)基，28°C 培養(yǎng)2天；
(5)增菌培養(yǎng)取(4)所得的平板菌落，移入富集培養(yǎng)液，28°C培養(yǎng)2天，得菌液；
(6)發(fā)酵按富集培養(yǎng)液100菌液3 7的重量份比例混合，置于發(fā)酵罐中，即搖床發(fā)酵培養(yǎng)，攪拌速度200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度27士 1°C，培養(yǎng)M小時，然后在罐溫四士 1°C、罐壓 0. 4 0. ^g/cm3、攪拌速度180轉(zhuǎn)/分的條件下培養(yǎng)48小時，收集發(fā)酵液體，調(diào)節(jié)pH 6. 8 7. 2，攪拌均勻，即可。采用上述技術(shù)方案制備的微生物菌肥，具有很好的增產(chǎn)效果 (1)使用地點
貴州省畜牧獸醫(yī)研究所試驗地和龍里縣為主要觀測地點，設(shè)三個處理棕色固氮菌微生物菌肥、農(nóng)家肥和未施肥。推廣應(yīng)用地點主要為龍里、天柱、丹寨和畢節(jié)等縣市。(2)播種施肥
2010年3月和2011年3月，田間試驗總面積1200 m2，推廣試驗面積1000畝。棕色固氮菌微生物菌肥按40 60 kg /667 m2用量施入，農(nóng)家肥(基肥)540 kg /667 m2，先后兩次等量施入，其它常規(guī)管理一致?；蛘甙捶N子微生物菌肥為10:1的重量比接種。接種微生物菌肥時應(yīng)避免陽光直射，接種了微生物菌肥的種子應(yīng)當(dāng)日播完。通過采用科學(xué)的種植和施肥方法，牧草和農(nóng)作物產(chǎn)量得到提高，水稻、黑麥草、玉米、蔬菜農(nóng)作物產(chǎn)量比對照單施農(nóng)家肥分別提高了 4. 2%、6. 0%、4. 9%、4. 0%。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明以農(nóng)作物秸稈、稻殼或草炭為載體，將棕色固氮菌接種于農(nóng)家肥制備成微生物菌肥，解決了農(nóng)畜糞便對環(huán)境的污染和農(nóng)作物秸稈高效利用的問題， 并且棕色固氮菌與料堆發(fā)酵中產(chǎn)生的乳酸桿菌、酵母菌、木霉菌、曲霉的相互作用不但可使畜禽糞便迅速降解、轉(zhuǎn)化、腐熟，還可使物料形成適宜有益微生物菌群生長的微生態(tài)環(huán)境， 有益微生物可迅速繁殖，能夠產(chǎn)生各類生物活性物質(zhì)，有效地抑制有害菌的生長，促進作物旺盛生長，提高農(nóng)作物產(chǎn)量，增強農(nóng)作物的抗病能力，改善土壤肥力，本發(fā)明菌肥肥效高，有益菌數(shù)高達151億個/g，其中棕色固氮菌可達7X IO8個/g，能有效增產(chǎn)農(nóng)作物，并且方便施用，特別適用于禾本科牧草，如黑麥草年產(chǎn)達到5000 5500 kg /667 m2。
具體實施例方式實施例1 首先按如下方法配制菌懸液
(1)富集培養(yǎng)液配制蔗糖15g、磷酸二氫鉀0.Sg、硫酸鎂0. 2g、氯化鈉0. 2g、碳酸鈣 lg、鉬酸鈉0. 05g、硫酸亞鐵0. lg、蛋白胨5g、水1000ml, pH為6. 5 7. 0 ；
(2)富集培養(yǎng)方法取3 5g肥沃土壤土樣用50ml水制成混濁液，吸取5ml懸浮液裝入盛有30ml富集培養(yǎng)液的250ml三角瓶中，150rpm，25 30°C，培養(yǎng)3 5天；
(3)平板分離培養(yǎng)基的制備在富集培養(yǎng)液中加入瓊脂制成平板分離培養(yǎng)基，滅菌，
(4)平板分離培養(yǎng)取富集培養(yǎng)后的培養(yǎng)液，10倍稀釋后涂布于平板分離培養(yǎng)基，28°C 培養(yǎng)2天；
(5)增菌培養(yǎng)取(4)所得的平板菌落，移入富集培養(yǎng)液，28°C培養(yǎng)2天，得菌液；(6)發(fā)酵按富集培養(yǎng)液100 菌液3 7的重量份比例混合，置于發(fā)酵罐中，即搖床發(fā)酵培養(yǎng)，攪拌速度200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度27士 1°C，培養(yǎng)M小時，然后在罐溫^±1°C、罐壓
0.4 0. ^g/cm3、攪拌速度180轉(zhuǎn)/分的條件下培養(yǎng)48小時，收集發(fā)酵液體，調(diào)節(jié)pH 6. 8 7. 2，攪拌均勻，即可。菌懸液的制備將上述棕色固氮菌配制成68億個/ml的菌懸液；
發(fā)酵腐熟取固體農(nóng)家肥65kg，加入秸稈粉25kg、風(fēng)化煤(吸附劑)^g、過磷酸鈣 2. 5kg"jC 1. 5kg，拌勻，60 70°C發(fā)酵3 4天，即得腐熟料；
配制菌肥取腐熟料92. 6kg、糖漿1kg、滅菌水6kg、菌懸液0. 4kg，混勻，在25 30°C 發(fā)酵5 6天，干燥，即得。該棕色固氮菌有效菌數(shù)高達151億個/g，其中棕色固氮菌7X IO8個/g。實施例2:
菌懸液的制備取實施例1所制備的棕色固氮菌制成60億個/ml的菌懸液； 發(fā)酵腐熟取固體農(nóng)家肥70kg，加入稻草粉30kg、草炭(吸附劑)4kg、磷酸二氫鉀
1.^g、水^ig,拌勻，60 70°C發(fā)酵3 4天，即得腐熟料；
配制菌肥取腐熟料90kg、蔗糖1. 5kg、滅菌水5kg、菌懸液0. 3kg，混勻，在25 30°C 發(fā)酵5 6天，干燥，即得。實施例3:
菌懸液的制備取市場上購買的棕色固氮菌制成70億個/ml的菌懸液； 發(fā)酵腐熟取固體農(nóng)家肥60kg，加入秸稈粉20kg、風(fēng)化煤(吸附劑)meg、過磷酸鈣3kg、 水1kg，拌勻，60 70°C發(fā)酵3 4天，即得腐熟料；
配制菌肥取腐熟料95kg、甘露醇(糖)0. ^g、滅菌水Ag、菌懸液0. ^g，混勻，在25 30°C發(fā)酵5 6天，干燥，即得。
權(quán)利要求
1.一種棕色固氮菌微生物菌肥的制備方法，包括如下步驟(1)菌懸液的制備將棕色固氮菌配制成60 80億個/ml的菌懸液；(2)發(fā)酵腐熟按照重量份計算，取固體農(nóng)家肥60 70份，加入秸稈粉20 30份、吸附劑4 6份、過磷酸鈣2 3份或磷酸二氫鉀1. 5 2. 5份、水1 2份，拌勻，60 70°C 發(fā)酵3 4天，即得腐熟料；(3)配制菌肥按照重量份計算，取腐熟料90 95份、糖0.5 1. 5份、滅菌水5 7 份、菌懸液0. 3 1-2份，混勻，在25 30°C發(fā)酵5 6天，干燥，即得。
2.按照權(quán)利要求1所述棕色固氮菌微生物菌肥的制備方法，其特征在于(1)菌懸液的制備將棕色固氮菌配制成68億個/ml的菌懸液；(2)發(fā)酵腐熟按照重量份計算，取固體農(nóng)家肥65份，加入稻草或秸稈粉25份、風(fēng)化煤或草碳5份、過磷酸鈣2. 5份或磷酸二氫鉀2份、水1. 5份，拌勻，60 70°C發(fā)酵3 4天， 即得腐熟料；(3)配制菌肥按照重量份計算，取腐熟料92.6份、糖1份、滅菌水6份、菌懸液0. 4份， 混勻，在25 30°C發(fā)酵5 6天，干燥，即得。
3.按照權(quán)利要求1或2所述棕色固氮菌微生物菌肥的制備方法，其特征在于菌懸液按如下方法制備(1)富集培養(yǎng)液配制蔗糖15g、磷酸二氫鉀0.Sg、硫酸鎂0. 2g、氯化鈉0. 2g、碳酸鈣 lg、鉬酸鈉0. 05g、硫酸亞鐵0. lg、蛋白胨5g、水1000ml, pH為6. 5 7. 0 ；(2)富集培養(yǎng)方法取3 5g肥沃土壤土樣用50ml水制成混濁液，吸取5ml懸浮液裝入盛有30ml富集培養(yǎng)液的250ml三角瓶中，150rpm，25 30°C，培養(yǎng)3 5天；(3)平板分離培養(yǎng)基的制備在富集培養(yǎng)液中加入^)瓊脂制成平板分離培養(yǎng)基，滅菌，(4)平板分離培養(yǎng)取富集培養(yǎng)后的培養(yǎng)液，10倍稀釋后涂布于平板分離培養(yǎng)基培養(yǎng)2天；(5)增菌培養(yǎng)取(4)所得的平板菌落，移入富集培養(yǎng)液，28°C培養(yǎng)2天，得菌液；(6)發(fā)酵按富集培養(yǎng)液100菌液3 7的重量份比例混合，置于發(fā)酵罐中，即搖床發(fā)酵培養(yǎng)，攪拌速度200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度27士 1°C，培養(yǎng)M小時，然后在罐溫^±1°C、罐壓 0. 4 0. ^g/cm3、攪拌速度180轉(zhuǎn)/分的條件下培養(yǎng)48小時，收集發(fā)酵液體，調(diào)節(jié)pH 6. 8 7. 2，攪拌均勻，即可。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種棕色固氮菌微生物菌肥的制備方法，首先將棕色固氮菌配制成60～80億個/ml的菌懸液；然后將固體農(nóng)家肥、秸稈粉、吸附劑、過磷酸鈣或磷酸二氫鉀混合，加水發(fā)酵得腐熟料；最后將腐熟料、糖、滅菌水和菌懸液混勻，發(fā)酵，干燥，即得，本發(fā)明菌肥肥效高，有益菌數(shù)高達151億個/g，其中棕色固氮菌書可達7×108個/g，能有效增產(chǎn)農(nóng)作物，并且方便施用，特別適用于禾本科牧草，如黑麥草年產(chǎn)達到5000～5500kg/667㎡。
文檔編號C05F11/08GK102153387SQ20111012290
公開日2011年8月17日 申請日期2011年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月13日
發(fā)明者吳位珩, 孫淑琴, 朱冠群, 李紅曙, 楊茂生, 梁應(yīng)林, 裴曉紅 申請人:貴州省畜牧獸醫(yī)研究所