專利名稱：中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前我國脫毒馬鈴薯原原種產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)是通過組培快繁技術(shù)生產(chǎn)馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗，再將其進(jìn)行移栽煉苗生產(chǎn)微型薯。而MS培養(yǎng)基是目前馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗工業(yè)化擴(kuò)繁廣泛采用的培養(yǎng)基，其瓊脂用量過高，有的甚至到1. 7%，且瓊脂成本較高，基礎(chǔ)苗生長(zhǎng)在過硬的基質(zhì)環(huán)境下，莖脆根柔性較差，造成基礎(chǔ)苗長(zhǎng)勢(shì)差，基礎(chǔ)苗擴(kuò)繁一代需要25天左右，移栽煉苗前，從瓶中取出基礎(chǔ)苗，倒入溫水中，將根部周圍的瓊脂洗掉，瓊脂較硬洗根時(shí)根易損傷，影響移栽成活率。未按品種成熟期選用培養(yǎng)基，加大了工業(yè)化生產(chǎn)成本，使基礎(chǔ)苗生長(zhǎng)勢(shì)較差。在培養(yǎng)期間增加了藥品成本及用電損耗，且基礎(chǔ)苗生長(zhǎng)勢(shì)較差，質(zhì)量不好，對(duì)工業(yè)化生產(chǎn)不利。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一種中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基，采用該培養(yǎng)基的脫毒基礎(chǔ)苗生產(chǎn)周期短、生長(zhǎng)旺盛、生產(chǎn)成本低。本發(fā)明的目的之二是提供一種上述中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基的制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是。一種中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基，其特征在于，以IL培養(yǎng)基計(jì)算含有1890 1910mg 的 KNO3>169 17Img 的 KH2PO4,369 371mg 的 MgSO4 · 7H20、439 44Img 的 CaCl2 · 2Η20、22· 27 22. 23mg 的 MnSO4 · 4Η20、0· 827 0. 833mg 的 KI,6. 17 6. 23mg 的 H3BO3>8. 57 8. 63mg 的 ZnSO4 ·7Η20、0· 247 0. 253mg 的 Na2MoO4 ·Η20、0· 0247 0. 0253mg 的 CuSO4 · 5Η20、0· 0247 0. 0253mg 的 CoCl2 · 6H20、37. 0 37. 3mg 的 Na2 · EDTA 和 26 28mg 的 FeSO4 ·7Η20、1· 99 2. Olmg 甘氨酸、0. 09 0. Ilmg 的 VB1^O. 49 0. 5Img 的 VB6, 以及0. 49 0. 5Img的或VPP ；余量為水。其中還含有402. 5 422. 5mg 的 NH4NO ；其中還含有24900 25100mg的C源蔗糖。一種中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基的制備方法，其特別之處在于，包括如下步驟(1)培養(yǎng)基基本母液的配制a、制備大量元素母液取18900 19100mg 的 KN03、1690 1710mg 的 KH2P04、3690 3710mg 的 MgSO4 · 7H20和4390 4410mg的CaCl2 · 2H20,以上各類物質(zhì)分別用蒸餾水充分溶解，按其排列順序依次倒入IL容量瓶中定容，再裝入貼好濃度標(biāo)簽的試劑瓶中4°C保存?zhèn)溆?；b、制備微量元素母液取2227 2223mg 的 MnSO4 · 4Η20、82· 7 83. 3mg 的 KI,617 623mg 的 Η3Β03、857 863mg 的 ZnSO4 ·7Η20、24· 7 25. 3mg 的 Na2MoO4 ·Η20、2· 47 2. 53mg 的 CuSO4 ·5Η20、 和2. 47 2. 53mg的CoCl2 · 6H20,以上各類物質(zhì)分別用蒸餾水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再裝入貼好濃度標(biāo)簽的試劑瓶中4°C保存?zhèn)溆?；C、制備鐵鹽母液取370 373mg的Na2 · EDTA和260 280mg的FeSO4 · 7H20,以上各類物質(zhì)分別用蒸餾水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再裝入貼好濃度標(biāo)簽的試劑瓶中4°C保存?zhèn)溆?；d、制備1號(hào)有機(jī)物母液取199 20Img 甘氨酸、9 Ilmg 的 VB”49 5Img 的 VB6JP 49 5Img 的 VB5 或 VPP,以上各類物質(zhì)分別用蒸餾水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再裝入貼好濃度標(biāo)簽的試劑瓶中4°C保存?zhèn)溆?；按每升培養(yǎng)基分別量取IOOmL大量元素母液、鐵鹽母液，以及IOmL微量元素母液和1號(hào)有機(jī)物母液，放入燒杯中備用；(2)按每L培養(yǎng)基加5g稱取卡拉膠，按每g卡拉膠加入200ml蒸餾水，加入煮沸至清澈透明，然后停止加熱；(3)將燒杯中的混合母液、C源加入已煮好的卡拉膠中，再加水使培養(yǎng)基C源質(zhì)量濃度達(dá)到2. 49 2. 51%，卡拉膠質(zhì)量濃度達(dá)到0. 5%，加熱80-121°C攪拌均勻；(4)用氫氧化鈉或鹽酸將pH值調(diào)到5. 8 6. 0，即完成固體培養(yǎng)基的制備；(5)裝瓶后高壓滅菌即可。其中C源為蔗糖，加入量為24900 25100mg。其中在大量元素母液中還加入4025 4225mg的ΝΗ4Ν03。其中調(diào)節(jié)pH值是用lmol/L的氫氧化鈉或鹽酸，滴入上一步驟配制好的培養(yǎng)基中， 滴后攪拌均勻，重復(fù)該過程直至PH值調(diào)到5. 8 6. 0，即完成固體培養(yǎng)基的制備。其中裝瓶后高壓滅菌是將配好的固體培養(yǎng)基，每瓶裝30 40mL，封緊瓶口，放入高壓滅菌筐內(nèi)，121°C滅菌15 19. 5分鐘后取出即可。與背景技術(shù)相比，本發(fā)明的培養(yǎng)基中不僅營(yíng)養(yǎng)組分和成分減少，而且用低成本的卡拉膠代替瓊脂作為凝固劑后，試管苗生長(zhǎng)旺盛且周期縮短，從而有效減少了育苗中的能耗和成本。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 脫毒中熟馬鈴薯試管苗培養(yǎng)基重量組分原料制取如下a、大量元素母液(母液1)組成18900 19IOOmg硝酸鉀(KNO3) >4025 4225mg 硝酸銨(NH4NO3)、1690 17IOmg 磷酸二氫鉀(KH2PO4) ,3690 37IOmg硫酸鎂(MgSO4 ·7Η20)、 4390 4410mg氯化鈣(CaCl2 ·2Η20)，以上各類物質(zhì)分別用蒸餾水充分溶解，按其排列順序依次倒入IL容量瓶中定容，再裝入貼好濃度標(biāo)簽的試劑瓶中4°C保存?zhèn)溆茫籦、微量元素母液(母液 2)組成2227 2223mg 的 MnSO4 · 4Η20、82· 7 83. 3mg 的 KI,617 623mg 的 H3BO3>857 863mg 的 ZnSO4 · 7Η20、24· 7 25. 3mg 的 Na2MoO4 · H2O, 2. 47 2. 53mg的CuSO4 · 5H20、和2. 47 2. 53mg的CoCl2 · 6H20,以上各類物質(zhì)分別用蒸餾水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再裝入貼好濃度標(biāo)簽的試劑瓶中4°C保存?zhèn)溆茫?br> C、鐵鹽母液組成(母液3) 370 37!3mg乙二胺四乙酸二鈉(Na2 · EDTA)、260 ^Omg硫酸亞鐵(FeSO4 ·7Η20)，以上各類物質(zhì)分別用蒸餾水充分溶解，定容于IL容量瓶中， 再裝入貼好濃度標(biāo)簽的試劑瓶中4°C保存、備用；d、l號(hào)有機(jī)物母液組成(母液4) :199 201mg甘氨酸、9 Ilmg的VB1Jg-Slmg 的VB6、和49 51mg的VB5或VPP，以上各類物質(zhì)分別用蒸餾水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再裝入貼好濃度標(biāo)簽的試劑瓶中4°C保存、備用；分別按照每升培養(yǎng)基量取IOOmL母液1、母液3，量取IOmL母液2、母液4，放入燒杯中備用(2)按每L培養(yǎng)基共加5g卡拉膠，用天平稱取卡拉膠，按每g卡拉膠加入200ml蒸餾水，加入煮沸至清澈透明，然后停止加熱；(3)將燒杯中的混合母液、C源加入已煮好的卡拉膠中，再加水使培養(yǎng)基C源質(zhì)量濃度達(dá)到2. 49 2. 51%，卡拉膠質(zhì)量濃度達(dá)到0. 5%，加熱80-121°C攪拌均勻；(4)用lmol/L的氫氧化鈉或鹽酸，滴入上一步驟配制好的培養(yǎng)基中，滴后攪拌均勻，重復(fù)該過程直至PH值調(diào)到5. 8 6. 0，即完成固體培養(yǎng)基的制備；(5)將配好的培養(yǎng)基，每瓶裝30 40mL，封緊瓶口，放入高壓滅菌筐內(nèi)，121°C滅菌 15 19. 5分鐘，可完成培養(yǎng)基的制備。在此母液制備的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12d時(shí)，測(cè)定馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗各農(nóng)藝性狀指標(biāo) 單株苗鮮重^ang、干重12. ^ig、株高6. 77cm、莖粗1. 03mm、葉片數(shù)5. 5、根條數(shù)8. 4條、根長(zhǎng) 5. 41cm。實(shí)施例2:本實(shí)施例與實(shí)施例1的區(qū)別在于每升母液1中硝酸鉀(KN03)含量為4750mg、硝酸銨(NH4N03)為Omg，蔗糖含量為1. 5%.在此母液制備的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12d時(shí)，測(cè)定馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗各農(nóng)藝性狀指標(biāo)分別為單株苗鮮重62mg、干重3. 5mg、株高4. 69cm、莖粗1.09mm、葉片數(shù)5. 1、根條數(shù)5.0 條、根長(zhǎng)3. 68cm。實(shí)施例3 本實(shí)施例與實(shí)施例1的區(qū)別在于每升母液1中硝酸鉀(KN03)含量為4750mg，母液4中肌醇含量為2500mg，蔗糖含量為2%。在此母液制備的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12d時(shí)，測(cè)定馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗各農(nóng)藝性狀指標(biāo)分別為單株苗鮮重135mg、干重6. 4mg、株高5. 59cm、莖粗0. 90mm、葉片數(shù)6. 4、根條數(shù)5. 4 條、根長(zhǎng)5. 29cm。實(shí)施例4 本實(shí)施例與實(shí)施例1的區(qū)別在于每升母液1中硝酸鉀(KN03)含量為4750mg、硝酸銨(NH4N03)為8250mg，母液4中肌醇含量為5000mg。在此母液制備的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12d時(shí)，測(cè)定馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗各農(nóng)藝性狀指標(biāo)分別為單株苗鮮重2(Mmg、干重9. 6mg、株高6. 41cm、莖粗1. 26mm,葉片數(shù)6. 9、根條數(shù)6. 8 條、根長(zhǎng)5. 55cm。實(shí)施例5 本實(shí)施例與實(shí)施例1的區(qū)別在于每升母液1中硝酸鉀(KN03)含量為9500mg、硝酸銨(NH4N03)為Omg，母液4中肌醇含量為2500mg。在此母液制備的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12d時(shí)，測(cè)定馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗各農(nóng)藝性狀指標(biāo)分別為單株苗鮮重129mg、干重6. 9mg、株高4. 92cm、莖粗0. 92mm、葉片數(shù)5. 3、根條數(shù)6. O 條、根長(zhǎng)4. 42cm。實(shí)施例6 本實(shí)施例與實(shí)施例1的區(qū)別在于每升母液1中硝酸鉀(KN03)含量為9500mg，母液4中肌醇含量為5000mg，蔗糖含量為1. 5%。在此母液制備的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12d時(shí)，測(cè)定馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗各農(nóng)藝性狀指標(biāo)分別為單株苗鮮重45mg、干重3. Omg、株高3. 81cm、莖粗0. 95mm、葉片數(shù)5. 6、根條數(shù)3. 5 條、根長(zhǎng)3. 27cm。實(shí)施例7 本實(shí)施例與實(shí)施例1的區(qū)別在于每升母液1中硝酸鉀(KN03)含量為9500mg、硝酸銨(NH4NCX3)為8250mg，蔗糖含量為2. 0%。在此母液制備的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12d時(shí)，測(cè)定馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗各農(nóng)藝性狀指標(biāo)分別為單株苗鮮重80mg、干重4. 7mg、株高4. 43cm、莖粗1. 17mm、葉片數(shù)4. 8、根條數(shù)4.4 條、根長(zhǎng)3. 12cm。實(shí)施例8 本實(shí)施例與實(shí)施例1的區(qū)別在于每升母液1中硝酸銨(NH4N03)為Omg，母液4中肌醇含量為5000mg，蔗糖含量為2. 0%。在此母液制備的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12d時(shí)，測(cè)定馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗各農(nóng)藝性狀指標(biāo)分別為單株苗鮮重7;3mg、干重4. 8mg、株高4. 21cm、莖粗0. 79mm、葉片數(shù)4. 7、根條數(shù)3. 6 條、根長(zhǎng)3. 85cm。實(shí)施例9 本實(shí)施例與實(shí)施例1的區(qū)別在于每升母液1中硝酸銨(NH4N03)為8250mg，母液 4中肌醇含量為2500mg，蔗糖含量為1. 5%。在此母液制備的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12d時(shí)，測(cè)定馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗各農(nóng)藝性狀指標(biāo)分別為單株苗鮮重13;3mg、干重6. 8mg、株高7. 68cm、莖粗1. 12mm、葉片數(shù)6. 3、根條數(shù)7. 3 條、根長(zhǎng)3. 71cm。實(shí)施例10 本實(shí)施例(MS培養(yǎng)基)與實(shí)施例1的區(qū)別在于每升母液1中硝酸銨(NH4N03)為 16500mg，母液4中肌醇含量為lOOOOmg。在此母液制備的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12d時(shí)，測(cè)定馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗各農(nóng)藝性狀指標(biāo)分別為單株苗鮮重83mg、干重8. ;3mg、株高4. 6cm、莖粗1. 07mm、葉片數(shù)4. 2、根條數(shù)4. 6條、 根長(zhǎng)4. 7cm。經(jīng)試驗(yàn)證明，本發(fā)明的培養(yǎng)基成本低于目前生產(chǎn)上廣泛使用的MS (CK) 21.7%。
權(quán)利要求
1.一種中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基，其特征在于，以IL培養(yǎng)基計(jì)算含有1890 1910mg 的 KNO3>169 17Img 的 KH2PO4,369 371mg 的 MgSO4 · 7H20、439 44Img 的 CaCl2 · 2Η20、22· 27 22. 23mg 的 MnSO4 · 4Η20、0· 827 0. 833mg 的 KI,6. 17 6. 23mg 的 H3BO3>8. 57 8. 63mg 的 ZnSO4 ·7Η20、0· 247 0. 253mg 的 Na2MoO4 ·Η20、0· 0247 0. 0253mg 的 CuSO4 · 5Η20、0· 0247 0. 0253mg 的 CoCl2 · 6H20、37. 0 37. 3mg 的 Na2 · EDTA 和 26 28mg 的 FeSO4 ·7Η20、1· 99 2. Olmg 甘氨酸、0. 09 0. Ilmg 的 VB1^O. 49 0. 5Img 的 VB6, 以及0. 49 0. 5Img的或VPP ；余量為水。
2.如權(quán)利要求1所述的中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基，其特征在于其中還含有 402. 5 422. 5mg 的 NH4NO。
3.如權(quán)利要求1或2所述的中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基，其特征在于其中還含有 24900 25IOOmg的C源蔗糖。
4.一種中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)培養(yǎng)基基本母液的配制a、制備大量元素母液取 18900 19100mg 的 KNO3>1690 1710mg 的 KH2PO4,3690 3710mg 的 MgSO4 · 7H20 和4390 4410mg的CaCl2 · 2H20,以上各類物質(zhì)分別用蒸餾水充分溶解，按其排列順序依次倒入IL容量瓶中定容，再裝入貼好濃度標(biāo)簽的試劑瓶中4°C保存?zhèn)溆茫籦、制備微量元素母液取 2227 2223mg 的 MnSO4 · 4Η20、82· 7 83. 3mg 的 KI,617 623mg 的 H3B03、857 863mg 的 ZnSO4 · 7Η20、24· 7 25. 3mg 的 Na2MoO4 · H2O, 2. 47 2. 53mg 的 CuSO4 · 5H20、禾口 2. 47 2. 53mg的CoCl2 ·6Η20，以上各類物質(zhì)分別用蒸餾水充分溶解，定容于IL容量瓶中， 再裝入貼好濃度標(biāo)簽的試劑瓶中4°C保存?zhèn)溆?；C、制備鐵鹽母液取370 37;3mg的Na2 · EDTA和洸0 ^Omg的FeSO4 · 7H20,以上各類物質(zhì)分別用蒸餾水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再裝入貼好濃度標(biāo)簽的試劑瓶中4°C保存?zhèn)溆?；d、制備1號(hào)有機(jī)物母液取199 20Img甘氨酸、9 Ilmg的VB”49 5Img的VB6JP 49 5Img的卯5或乂卩卩， 以上各類物質(zhì)分別用蒸餾水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再裝入貼好濃度標(biāo)簽的試劑瓶中4°C保存?zhèn)溆茫话疵可囵B(yǎng)基分別量取IOOmL大量元素母液、鐵鹽母液，以及IOmL微量元素母液和1 號(hào)有機(jī)物母液，放入燒杯中備用；(2)按每L培養(yǎng)基加5g稱取卡拉膠，按每g卡拉膠加入200ml蒸餾水，加入煮沸至清澈透明，然后停止加熱；(3)將燒杯中的混合母液、C源加入已煮好的卡拉膠中，再加水使培養(yǎng)基C源質(zhì)量濃度達(dá)到2. 49 2. 51%，卡拉膠質(zhì)量濃度達(dá)到0. 5%，加熱80-121°C攪拌均勻；(4)用氫氧化鈉或鹽酸將PH值調(diào)到5.8 6. 0，即完成固體培養(yǎng)基的制備；(5)裝瓶后高壓滅菌即可。
5.如權(quán)利要求4所述的中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于其中C 源為蔗糖，加入量為24900 25100mg。
6.如權(quán)利要求4所述的中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于其中在大量元素母液中還加入4025 4225mg的NH4NO3。
7.如權(quán)利要求4所述的中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于其中調(diào)節(jié)PH值是用lmol/L的氫氧化鈉或鹽酸，滴入上一步驟配制好的培養(yǎng)基中，滴后攪拌均勻，重復(fù)該過程直至PH值調(diào)到5. 8 6. 0，即完成固體培養(yǎng)基的制備。
8.如權(quán)利要求4所述的中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于其中裝瓶后高壓滅菌是將配好的固體培養(yǎng)基，每瓶裝30 40mL，封緊瓶口，放入高壓滅菌筐內(nèi)， 121°C滅菌15 19. 5分鐘后取出即可。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基及其制備方法，一種中熟馬鈴薯脫毒基礎(chǔ)苗培養(yǎng)基的制備方法，其特別之處在于，包括如下步驟(1)培養(yǎng)基基本母液的配制，制備大量元素母液，制備微量元素母液，制備鐵鹽母液，制備1號(hào)有機(jī)物母液；(2)按每L培養(yǎng)基加5g稱取卡拉膠，按每g卡拉膠加入200ml蒸餾水，加入煮沸至清澈透明，然后停止加熱；(3)將燒杯中的混合母液、C源加入已煮好的卡拉膠中；(4)用氫氧化鈉或鹽酸將pH值調(diào)到5.8～6.0；(5)裝瓶后高壓滅菌即可。本發(fā)明的培養(yǎng)基中不僅營(yíng)養(yǎng)組分和成分減少，而且用低成本的卡拉膠代替瓊脂作為凝固劑后，試管苗生長(zhǎng)旺盛且周期縮短，從而有效減少育苗中的能耗和成本。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102257958SQ20111012582
公開日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2011年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月17日
發(fā)明者曹君邁, 焦向煒, 祁金濤 申請(qǐng)人:北方民族大學(xué)