專利名稱：一種愈傷組織培養(yǎng)使用的玻璃培養(yǎng)皿封口方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及玻璃培養(yǎng)皿的封口方法，尤其涉及一種愈傷組織培養(yǎng)使用的60mm 90mm玻璃培養(yǎng)皿封口方法。
背景技術(shù)：
植物組織培養(yǎng)技術(shù)是指在無菌條件下，將離體的植物器官、組織、細胞以及原生質(zhì)體，在人工配制的環(huán)境里培養(yǎng)成完整的植株。利用組織培養(yǎng)，不僅可以大量生產(chǎn)優(yōu)良無性系，獲得人類需要的多種代謝物質(zhì)，還可獲得單倍體、三倍體、多倍體及非整倍體，也是轉(zhuǎn)基因技術(shù)及細胞融合技術(shù)發(fā)展的基礎(chǔ)。采用玻璃培養(yǎng)皿進行愈傷組織培養(yǎng)過程中，玻璃培養(yǎng)皿的封口是影響愈傷組織良好生長及污染率降低的關(guān)鍵因素之一。現(xiàn)使用的封口方法——
封口膜(膠)封口法，雖然在一定程度上可以降低污染率，提高愈傷組織培養(yǎng)效率， Upamfihn封口膜價格昂貴，培養(yǎng)成本高，_mrafilm封口膜粘性大，操作時易粘貼工作臺面、培養(yǎng)箱體及塵埃等，粘在被封口的玻璃培養(yǎng)皿上也不易被剝離清除，因此不能有效降低污染率和提高玻璃培養(yǎng)皿的再利用率。/^ra/ih封口膜遇高溫極易破損，封口操作比較麻煩，增大操作難度。在大批量愈傷組織培養(yǎng)中，這種封口方法的不便性顯得尤為突出。因此研究開發(fā)愈傷組織使用的玻璃培養(yǎng)皿快速有效的封口方法，降低愈傷組織培養(yǎng)污染率，促進愈傷組織生長，是愈傷組織培養(yǎng)過程中一直以來有待解決的方法之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在克服以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作方便，能有效降低愈傷組織的褐化率及污染率的愈傷組織培養(yǎng)使用的玻璃培養(yǎng)皿封口方法。本發(fā)明解決技術(shù)問題采用如下技術(shù)方案
一種愈傷組織培養(yǎng)使用的玻璃培養(yǎng)皿封口方法，用普通保鮮膜對60mm 90mm玻璃培養(yǎng)皿進行封口，操作步驟如下
(a)用手術(shù)刀垂直于普通保鮮膜卷的長度方向?qū)⑵淝懈畛蓪挾? 3 cm的環(huán)狀圈，置于超凈工作臺面上消毒滅菌；
(b)取愈傷組織培養(yǎng)使用的60mm 90mm玻璃培養(yǎng)皿，用步驟(a)中消毒滅菌后的普通保鮮膜密封蓋口，密封時，將保鮮膜緊貼壓玻璃培養(yǎng)皿底部需密封的蓋口，旋轉(zhuǎn)玻璃培養(yǎng)皿2圈后，輕拽保鮮膜將其扯斷即可完成玻璃培養(yǎng)皿的封口。其中，優(yōu)選步驟(a)中將普通保鮮膜切割成寬度2 cm的環(huán)狀圈密封60mm玻璃培養(yǎng)皿效果較好。將普通保鮮膜切割成寬度3 cm的環(huán)狀圈密封90mm玻璃培養(yǎng)皿效果較好
本發(fā)明的有益效果如下 1、材料成本低、易獲得
由于普通保鮮膜在日常生活中經(jīng)常用到，非常普遍，不會出現(xiàn)因材料來源單一，不易獲得而影響組培工作。且普通保鮮膜價格便宜，60mm 90mm玻璃培養(yǎng)皿封口用量少，一卷普通保鮮膜可封350 400個60mm 90mm玻璃培養(yǎng)皿，在很大程度上降低了組培成本。
2、有效降低愈傷組織的褐化率及污染率
由于普通保鮮膜沒有粘性，在封口時，不會粘結(jié)操作工作臺面、實驗室及培養(yǎng)箱的塵埃；封口后，也不會由于封口膜的粘性而粘結(jié)于其它實驗器材上，在觀察實驗結(jié)果或挪動玻璃培養(yǎng)皿時造成封口膜的破損，從而降低了污染的可能性及愈傷組織的褐化率，有效保證愈傷組織的良好生長。3、操作簡便、便于觀察組培結(jié)果和提高玻璃培養(yǎng)皿的再利用率
用手術(shù)刀可以很容易將普通保鮮膜卷裁成所需寬度圈剝離作為封口膜帶，操作時膜帶緊貼壓玻璃培養(yǎng)皿底部邊緣，將玻璃培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)動兩圈即可封口，此時封口成功的玻璃培養(yǎng)皿不但外觀整潔干凈，更不會因為挪動玻璃培養(yǎng)皿時造成培養(yǎng)皿封口的破損，因此非常便于觀察組培結(jié)果。培養(yǎng)結(jié)束后，也很容易從玻璃培養(yǎng)皿底部剝離封口的普通保鮮膜，不會因粘在玻璃培養(yǎng)皿上清洗不掉而降低培養(yǎng)皿的再利用率。4、促進愈傷組織生長
用普通保鮮膜封口的90mm玻璃培養(yǎng)皿，其培養(yǎng)的愈傷組織生長速度較快。實驗發(fā)現(xiàn)， 第12 d時，愈傷組織直徑比開始繼代時增大近2倍。愈傷組織的褐化率和污染率均比較低， 多數(shù)呈淺黃綠色、顆粒明顯、較疏松。因此用普通保鮮膜封口可有效促進愈傷組織生長，有利于以愈傷組織為基礎(chǔ)材料的玻璃培養(yǎng)皿組織培養(yǎng)。本方法與傳統(tǒng)的不封口和用mrafilm封口膜(膠)封口方法相比較，在促進愈傷組織生長、降低愈傷組織褐化率及污染率的基礎(chǔ)上，不但操作簡便，便于觀察組培結(jié)果，還可提高玻璃培養(yǎng)皿的再利用率，并能節(jié)省組培成本。不封口法，植物愈傷組織接入玻璃培養(yǎng)皿培養(yǎng)基后蓋上培養(yǎng)皿蓋，直接放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，雖然不需要任何封口膜，能節(jié)約操作時間和培養(yǎng)成本，操作也便利，但會造成大量愈傷組織褐化、被污染，使愈傷組織難以正常生長，導致愈傷組織的嚴重損失。用parafilm封口膜(膠)封口，雖然愈傷組織也可以正常生長，但和普通保鮮膜封口相比，由于粘性較大，操作時易粘操作臺面以及培養(yǎng)箱和實驗室的塵埃；實驗觀察時由于挪動玻璃培養(yǎng)皿時易造成培養(yǎng)皿封口處破損；實驗結(jié)束時不易從玻璃培養(yǎng)皿底部剝離干凈，高溫條件下該現(xiàn)象更為明顯，遇高溫極易破損等因素，提高了愈傷組織培養(yǎng)操作的難度及污染的可能性。而且由于其為進口膜，價格是普通保鮮膜的上百倍，增加了組培成本；來源渠道單一，不易獲得，易影響到實驗進度。而用普通保鮮膜進行愈傷組織培養(yǎng)使用的培養(yǎng)皿封口，以上的不利因素基本都可以解決。用普通保鮮膜封口的玻璃培養(yǎng)皿，明顯降低了愈傷組織培養(yǎng)中普遍存在的愈傷組織褐化、污染問題，從而保證愈傷組織的正常生長。以生長2 3個月的隴東苜蓿(Medicago sativa L. cv. Longdong)優(yōu)質(zhì)愈傷組織為實驗材料，通過用parafilm封口膜(膠)(處理A) 和普通保鮮膜(處理B)兩種方法封口培養(yǎng)皿，以不封口為對照的實驗結(jié)果(表1)可知用普通保鮮膜封口培養(yǎng)的愈傷組織，培養(yǎng)12 d后，污染率為11%，比對照低67 %;褐化率為15 %， 比對照低48 %;與parafilm封口膜(膠)處理相比，褐化率和污染率分別降低了 12.7 %和 11 %，并且污染率與培養(yǎng)8 d時的一致，可見用普通保鮮膜封口方法封口基本不會因觀察組培結(jié)果挪動玻璃培養(yǎng)皿而造成封口處破損，增大污染率。也不易粘在玻璃培養(yǎng)皿上，易從培養(yǎng)皿上一次完全剝離，使操作簡便化，培養(yǎng)結(jié)束后的玻璃培養(yǎng)皿易清洗，增加了培養(yǎng)皿的再利用率。很大程度上節(jié)省了培養(yǎng)成本。
表 權(quán)利要求
1.一種愈傷組織培養(yǎng)使用的玻璃培養(yǎng)皿封口方法，其特征在于，用普通保鮮膜對 60mm 90mm玻璃培養(yǎng)皿進行封口，操作步驟如下(a)用手術(shù)刀垂直于普通保鮮膜卷的長度方向?qū)⑵淝懈畛蓪挾? 3 cm的環(huán)狀圈，置于超凈工作臺面上消毒滅菌；(b)取愈傷組織培養(yǎng)使用的60mm 90mm玻璃培養(yǎng)皿，用步驟(a)中消毒滅菌后的普通保鮮膜密封蓋口，密封時，將保鮮膜緊貼壓玻璃培養(yǎng)皿底部需密封的蓋口，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿2 圈后，輕拽保鮮膜將其扯斷即可完成培養(yǎng)皿的封口。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的愈傷組織培養(yǎng)使用的玻璃培養(yǎng)皿封口方法，其特征在于，用于密封60mm玻璃培養(yǎng)皿時，將普通保鮮膜卷的長度方向?qū)⑵淝懈畛蓪挾? cm的環(huán)狀圈；用于密封90mm玻璃培養(yǎng)皿時，將普通保鮮膜卷的長度方向?qū)⑵淝懈畛蓪挾?cm的環(huán)狀圈。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種愈傷組織培養(yǎng)使用的玻璃培養(yǎng)皿封口方法，用保鮮膜對60mm～90mm玻璃培養(yǎng)皿進行封口，操作步驟如下(a)用手術(shù)刀垂直于普通保鮮膜卷的長度方向?qū)⑵淝懈畛蓪挾?～3cm的環(huán)狀圈，置于超凈工作臺面上消毒滅菌；(b)取愈傷組織培養(yǎng)使用的60mm～90mm玻璃培養(yǎng)皿，用步驟(a)中消毒滅菌后的普通保鮮膜密封蓋口，密封時，將保鮮膜緊貼壓玻璃培養(yǎng)皿底部需密封的蓋口，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿2圈后，輕拽保鮮膜將其扯斷即可完成封口。本發(fā)明的愈傷組織培養(yǎng)使用的60mm～90mm玻璃培養(yǎng)皿封口方法不僅操作方便，而且材料成本低，易獲得，能有效降低愈傷組織的褐化率及污染率，便于觀察組培結(jié)果和提高培養(yǎng)皿的再利用率。
文檔編號A01H4/00GK102217547SQ20111014716
公開日2011年10月19日 申請日期2011年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月1日
發(fā)明者師尚禮, 曹文俠, 李玉珠, 白小明, 祁娟, 趙桂琴, 陶茸 申請人:甘肅農(nóng)業(yè)大學