專利名稱：一種鳶尾的組培快繁方法
技術領域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術領域，尤其涉及一種路易斯安娜鳶尾的組培方法。
背景技術：
路易斯安娜鳶尾系鳶尾科鳶尾屬的水生花卉植物，原產(chǎn)美國路易斯安娜州。該植物在北美和歐洲一些國家早已被廣泛應用，花期4-5月，花色豐富，不僅具有花大、色艷、 葉花并觀等優(yōu)良觀賞性狀，而且還有較強的適應性，抗寒、耐旱性強、耐管理粗放等特征， 同時，在我國長江以南地區(qū)更具有常綠等優(yōu)勢特性。目前市場形勢看好，但優(yōu)質(zhì)苗木供不應求。該系列花卉以往主要以分株、種子進行繁殖，不僅繁殖速度慢，費工費時，滿足不了市場的需求；同時，該類植物種子發(fā)芽率低，且其種子繁殖后代分離嚴重，很多品種不能再現(xiàn)原有優(yōu)良品種的特性，且其分株繁殖又受季節(jié)的限制。雖然在現(xiàn)有的組培技術中已有關于路易斯安娜鳶尾組培方法的報導，例如，朱旭東，水生常綠雜種鳶尾組培育苗，中國花卉園藝，2007，10 :23-25 ；路易斯安娜鳶尾組培和苗期生長規(guī)律初步研究，福建林業(yè)科技， 2009,36(3) :175-179)；吳月燕，路易斯安娜鳶尾組織培養(yǎng)過程中愈傷組織誘導和芽的分化，浙江農(nóng)業(yè)科學，2009，1 :86-89 ；賈明良，路易斯安娜鳶尾快繁體系的建立，科技通報， 201026(4) =518-522 ；但上述技術中主要還存在著以下問題因滅菌技術不當造成污染率較高，導致外植體接種成活率較低——基本上都在60-70% ；因激素濃度不當導致芽誘導率較低——70-80% ；因此，生產(chǎn)上急需尋找一種能解決以上的技術不足，速度快、繁殖系數(shù)高的鳶尾組培快繁的方法，來解決路易斯安娜鳶尾生產(chǎn)實踐中種苗供不應求的難題，以加快路易斯安娜鳶尾的推廣應用工作。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是，針對已有鳶尾組培技術所存在的外植體污染率高和芽誘導率低的缺陷，提供一種操作簡單、污染率低、植株再生成功率高，種苗品質(zhì)優(yōu)的鳶尾組培快繁方法。一種鳶尾的組培快繁方法，該方法按如下步驟進行(1)培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量與體積為1)基本培養(yǎng)基采用LS基本培養(yǎng)基，其中，白糖15_30g/L，瓊脂5_8g/L， ρΗ5· 6-5. 8 ；2)芽誘導培養(yǎng)基:LS+ 山農(nóng)一號 5-10ml/L+6-BA 0. 3-1. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L ；3)繼代增殖培養(yǎng)基:LS+6-BA 0. 5-1. 5mg/L+NAA 0. 2-0. 5mg/L ；4)壯苗培養(yǎng)基:LS+6-BA 0. 3-0. 5mg/L 和 NAA 0. 5-0. 8mg/L ；5)生根培養(yǎng)基:LS+NAA0. 5-1. 5mg/L+GA0. 3-0. 5mg/L ；(2)鳶尾脫毒組培苗的培養(yǎng)1)外植體的選擇與滅菌取健壯鳶尾植株的幼嫩地下芽，剪除基部以上葉片及根系，用10%洗潔精液浸泡8-lOmin，流水沖洗1- ；于超凈工作臺上用無菌水沖洗，用70%酒精消毒30-60s，0. 升汞水溶液浸泡8-15min滅菌后用無菌水沖洗5_6次；將其莖尖組織塊撥出，切成0. 3-0. 5cm3的小塊作為外植體，備用；2)芽誘導培養(yǎng)將莖尖外植體接種到芽誘導培養(yǎng)基上，在25 士 2°C，光強 1500-2500LX，光照Uh/d條件下誘導培養(yǎng)15-20天至形成叢生芽；3)芽增殖培養(yǎng)將叢生芽轉接到繼代增殖培養(yǎng)基上，在25 士 2°C，光強 1500-2500LX，光照Uh/d條件下培養(yǎng)15-25天至形成繼代叢生芽；根據(jù)對叢生芽數(shù)量的需求，每隔10-20天按同樣方法進行一次再增殖；4)壯苗培養(yǎng)將繼代叢生芽轉接到壯苗培養(yǎng)基上，在25士2°C，光強1500-2500LX， 光照iai/d條件下培養(yǎng)20-30天至苗高6-8cm ；5)生根培養(yǎng)將上述壯苗轉接到生根培養(yǎng)基中，在25士2°C，光強1500-2500LX，光照Uh/d條件下培養(yǎng)15-30天，至基部長出1-5根根系即成鳶尾脫毒組培苗；(3)組培苗的煉苗與移栽1)煉苗將長高至10-15cm、長根> 5根的組培苗帶瓶移至普通大棚內(nèi)，放置1_3 天后打開瓶蓋，在25-28°C，濕度70-80%，光強7000-80001X條件下煉苗3_5天；2)移栽與培養(yǎng)將煉苗后的組培苗洗凈根部培養(yǎng)基，用0. 多菌靈溶液浸泡根部30-60秒后，移栽至沙壤土 泥炭黃壤土按體積6 3 1的混合基質(zhì)中，用塑料薄膜覆蓋并蓋上遮陰網(wǎng)，在，濕度80-95%，光強宜先弱后強，在< ΙΟΟΟΟΙχ條件下培育 1周，后逐漸打開薄膜；2周后進入常規(guī)管理，其組培苗移栽成活率達95%以上；培養(yǎng)1-2個月后，即成鳶尾種苗。所述培養(yǎng)基的配方，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量與體積為1)基本培養(yǎng)基LS培養(yǎng)基，其中，白糖20g/L，瓊脂5. 5g/L，pH5. 8 ；2)芽誘導培養(yǎng)基:LS+ 山農(nóng)一號 7ml/L+6-BA 0. 5mg/L+NAA 0. 2mg/L ；3)繼代增殖培養(yǎng)基LS+6-BA 1. Omg/L+NAA 0. 3mg/L ；4)壯苗培養(yǎng)基:LS+6-BA0. 3mg/L+NAA 0. 5mg/L ；5)生根培養(yǎng)基:LS+NAA1. 0mg/L+GA0. 3mg/L。本發(fā)明的有益效果是1)本發(fā)明選擇冬末初春時機取剛萌發(fā)的地下嫩芽，獲得相對潔凈的外植體，結合恰當?shù)臏缇夹g，并在初代培養(yǎng)基里加入合適劑量(5-10ml/L)的廣譜性生物殺菌劑山農(nóng)一號，使外植體接種成活率由常規(guī)的60-70%提高到90%以上，在短期內(nèi)獲得了大量的無菌材料；2)本發(fā)明通過合適的6-BA濃度(0. 3-1. 0mg/L)加速了外植體的誘導分化，使芽誘導率達到了 99%的效果，較文獻資料中普遍報道的70-80%有了明顯的提高；通過恰當?shù)?-BA(0. 3-1. 5mg/L)和NAA濃度(0. 2-0. 5mg/L)組合還提高了叢生芽的增殖系數(shù)及壯苗率，以及篩選最佳生根劑等綜合技術的應用，使鳶尾組培苗的繁殖量每年達到了 20萬株以上，實現(xiàn)了鳶尾種苗的規(guī)模化生產(chǎn)。
具體實施例方式通過以下實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。其中，6-BA :6-芐氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine)，Sigma進口國內(nèi)分裝，分析純，純度 99. 9%。NAA: α-萘乙酸(1-Naphthylacetic acid)，Sigma 進口國內(nèi)分裝，分析純，純度 99. 5%。GA3 赤霉素(Gibberellin A3)，sigma進口國內(nèi)分裝，分析純，純度90%。山農(nóng)一號廣譜性生物殺菌劑，普朗特生物技術有限公司提供。洗潔精立白洗潔精，普通清洗劑，廣州立白企業(yè)集團有限公司。實施例1 ( 一種鳶尾的組培方法1)按以下步驟進行(1)培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量為1)基本培養(yǎng)基LS培養(yǎng)基，其中，白糖20g/L，瓊脂5. 5g/L，pH5. 8 ；2)芽誘導培養(yǎng)基:LS+ 山農(nóng)一號 7ml/L+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 2mg/L ；3)繼代增殖培養(yǎng)基LS+6-BAl. 0mg/L+NAA0. 3mg/L ；4)壯苗培養(yǎng)基:LS+6-BA0. 3mg/L 和 NAAO. 5mg/L ；5)生根培養(yǎng)基:LS+NAA1. 0mg/L+GA0. 3mg/L ；其中LS基本培養(yǎng)基的配方為；
權利要求
1.一種鳶尾的組培快繁方法，其特征在于按如下步驟進行(1)培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量與體積為1)基本培養(yǎng)基采用LS基本培養(yǎng)基，其中，白糖15-30g/L，瓊脂5-8g/L，pH5.6-5. 8 ；2)芽誘導培養(yǎng)基:LS+山農(nóng)一號 5-10ml/L+6-BA 0. 3-1. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L ；3)繼代增殖培養(yǎng)基:LS+6-BA0. 5-1. 5mg/L+NAA 0. 2-0. 5mg/L ；4)壯苗培養(yǎng)基:LS+6-BA0. 3-0. 5mg/L 和 NAA 0. 5-0. 8mg/L ；5)生根培養(yǎng)基:LS+NAA0.5-1. 5mg/L+GA0. 3-0. 5mg/L ；(2)鳶尾脫毒組培苗的培養(yǎng)1)外植體的選擇與滅菌取健壯鳶尾植株的幼嫩地下芽，剪除基部以上葉片及根系， 用10%洗潔精液浸泡8-lOmin，流水沖洗1- ；于超凈工作臺上用無菌水沖洗，用70%酒精消毒30-60s，0. 升汞水溶液浸泡8-15min滅菌后用無菌水沖洗5_6次；將其莖尖組織塊撥出，切成0. 3-0. 5cm3的小塊作為外植體，備用；2)芽誘導培養(yǎng)將莖尖外植體接種到芽誘導培養(yǎng)基上，在25士2°C，光強1500-2500LX， 光照iai/d條件下誘導培養(yǎng)15-20天至形成叢生芽；3)芽增殖培養(yǎng)將叢生芽轉接到繼代增殖培養(yǎng)基上，在25士2°C，光強1500-2500LX，光照Uh/d條件下培養(yǎng)15-25天至形成繼代叢生芽；根據(jù)對叢生芽數(shù)量的需求，每隔10-20天按同樣方法進行一次再增殖；4)壯苗培養(yǎng)將繼代叢生芽轉接到壯苗培養(yǎng)基上，在25士2°C，光強1500-2500LX，光照 12h/d條件下培養(yǎng)20-30天至苗高6-8cm ；5)生根培養(yǎng)將上述壯苗轉接到生根培養(yǎng)基中，在25士 2°C，光強1500-2500LX，光照 Uh/d條件下培養(yǎng)15-30天，至基部長出1-5根根系即成鳶尾脫毒組培苗；(3)組培苗的煉苗與移栽1)煉苗將長高至10-15cm、長根>5根的組培苗帶瓶移至普通大棚內(nèi)，放置1_3天后打開瓶蓋，在25-28°C，濕度70-80%，光強7000-80001X條件下煉苗3_5天；2)移栽與培養(yǎng)將煉苗后的組培苗洗凈根部培養(yǎng)基，用0.多菌靈溶液浸泡根部 30-60秒后，移栽至沙壤土 泥炭黃壤土按體積6 3 1的混合基質(zhì)中，用塑料薄膜覆蓋并蓋上遮陰網(wǎng)，在^-30°C，濕度80-95%，光強宜先弱后強，在< ΙΟΟΟΟΙχ條件下培育1 周，后逐漸打開薄膜；2周后進入常規(guī)管理，其組培苗移栽成活率達95%以上；培養(yǎng)1-2個月后，即成鳶尾種苗。
2.按權利要求1所述的方法，其特征在于所述培養(yǎng)基的配方，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量與體積為1)基本培養(yǎng)基LS培養(yǎng)基，其中，白糖20g/L，瓊脂5.5g/L，pH5. 8 ；2)芽誘導培養(yǎng)基:LS+山農(nóng)一號 7ml/L+6-BA 0. 5mg/L+NAA 0. 2mg/L ；3)繼代增殖培養(yǎng)基LS+6-BA1. 0mg/L+NAA 0. 3mg/L ；4)壯苗培養(yǎng)基:LS+6-BA0.3mg/L+NAA 0. 5mg/L ；5)生根培養(yǎng)基:LS+NAA1.0mg/L+GA0. 3mg/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鳶尾的組培快繁方法，屬于植物組織培養(yǎng)技術領域。方法包括(1)培養(yǎng)基的配制；(2)鳶尾脫毒組培苗的培養(yǎng)；(3)組培苗的煉苗與移栽等步驟工藝。該方法通過對培養(yǎng)基激素種類、含量的調(diào)整與添加抗生素等技術手段，顯著降低了鳶尾外植體的污染率，使接種成活率達到90％以上；也明顯提高了外植體的誘導分化率，由已有技術的70-80％上升到99％，且提高了鳶尾組培的壯苗率。本發(fā)明可在園林綠化與組培企業(yè)中推廣應用。
文檔編號A01H4/00GK102239805SQ201110177549
公開日2011年11月16日 申請日期2011年6月28日 優(yōu)先權日2011年6月28日
發(fā)明者劉慧春, 周江華, 朱開元, 鄒清成, 馬廣瑩 申請人:浙江省蕭山棉麻研究所