專利名稱：一種布朗靈芝子實(shí)體的人工栽培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種靈芝子實(shí)體的人工栽培方法，具體來(lái)說(shuō)涉及一種布朗靈芝 (Ganodermabrownii (Murri 11) Gilb.)子實(shí)體的人工栽培方法。
背景技術(shù)：
中國(guó)靈芝資源十分豐富，已知的種類就超過(guò)100種，民間或文獻(xiàn)中記述能利用的靈芝不少于 20 種，其中以靈芝(Ganoderma Iucidum(Curtis)P. Karst.)、紫芝(Ganoderma sinensej. D. Zhao, L. W. Hsu&X. Q. Zhang)禾口松杉靈芝(Ganoderma tsugae Murri 11)為代表。由于這些靈芝含有豐富的藥理成分如靈芝多糖、靈芝多肽、三萜類、氨基酸、蛋白質(zhì)、甾類、甘露醇、香豆精苷、生物堿、有機(jī)酸以及微量元素Ge、P、Fe、Ca、Mn、Zn等，因而具有抑制腫瘤、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、抗放射、保肝解毒、抗過(guò)敏、調(diào)節(jié)血壓、降血脂和降血糖、鎮(zhèn)咳祛痰平喘、抗缺氧抗衰老等功效，藥食兼用且無(wú)毒副作用，從而受到廣大消費(fèi)者的青瞇，市場(chǎng)需求旺盛，且被國(guó)家藥典收載，是國(guó)家批準(zhǔn)的新資源食品。布朗靈芝(Ganoderma brownii (Murrill) Gilb.)又稱褐靈芝，在分類上隸屬于真菌界(Fungi)、擔(dān)子菌門(mén)(Basidiomycota)、傘菌綱(Agaricomycetes)、多孔菌目 (Polyporales)、靈芝科(Ganodermatacea)、靈芝屬(Ganoderma)，在美洲及其世界熱帶地區(qū)均有分布。野生布朗靈芝的主要特征是菌蓋表面無(wú)似漆樣光澤，菌肉較厚，無(wú)黑色殼質(zhì)層，擔(dān)孢子較大，與長(zhǎng)管靈芝(G. annulare)的區(qū)別是布朗靈芝的菌肉發(fā)達(dá)，菌管分層，擔(dān)孢子較大，皮殼不堅(jiān)硬，與樹(shù)舌靈芝(G. applanatum)的區(qū)別在于它具有黃色孔面和較大的擔(dān)孢子。民間常用布朗靈芝作為靈芝的替代品使用，但其野生資源十分有限，而至今又還沒(méi)有成功的人工栽培方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于開(kāi)發(fā)出一種布朗靈芝子實(shí)體的人工栽培方法。我們通過(guò)將野生或栽培成功后獲得的布朗靈芝新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離或孢子分離，然后在PDA斜面培養(yǎng)基和斜面綜合PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到斜面母種，再接種到原種培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到原種，再經(jīng)過(guò)生產(chǎn)種培養(yǎng)基的培養(yǎng)得到生產(chǎn)種，將生產(chǎn)種接種到生產(chǎn)用栽培基中，培養(yǎng)至長(zhǎng)出成熟的子實(shí)體，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。本發(fā)明的布朗靈芝子實(shí)體的人工栽培方法，其特征包括以下的步驟(1)將布朗靈芝(Ganoderma brownii (Murrill)Gilb.)的新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離，然后按培養(yǎng)基質(zhì)量2% 5%接種量接種到斜面PDA培養(yǎng)基，于22 35°C、濕度50% 75%時(shí)培養(yǎng)10 30d，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，挑取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的作為母種于4°C保藏備用或進(jìn)一步培養(yǎng)，所述的斜面PDA培養(yǎng)基的pH是6 8，其原料組成按質(zhì)量份計(jì)，為已去皮去芽眼的馬鈴薯75 85份，蔗糖6 10份，瓊脂6 10份和松針3 5份，并通過(guò)下述方法制得原料按所述組成分別稱重后，先將馬鈴薯切成小條再與松針?lè)湃脲佒校尤朐辖M成總質(zhì)量3. 5 4. 5倍的水，煮沸20 30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6 8層紗布過(guò)濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到45 50°C倒成斜面?zhèn)溆茫?2)將步驟(1)得到的母種按培養(yǎng)基質(zhì)量2% 10%的接種量接種至斜面綜合 PDA培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)或復(fù)壯，于22 35°C，濕度50% 75%時(shí)培養(yǎng)10 30d，直至菌絲長(zhǎng)滿斜面，選取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的作為生產(chǎn)用母種，所述的斜面綜合PDA培養(yǎng)基的pH是 6 8，其原料組成按質(zhì)量份計(jì)，為已去皮去芽眼的馬鈴薯75 85份，蔗糖6 10份，瓊脂 6 10份，磷酸二氫鉀0. 2 1. 5份，硫酸鎂0. 2 1. 5份和VB1O. 002 0. 006份，并通過(guò)下述方法制得原料按所述組成分別稱重后，先將馬鈴薯切成小條放入鍋中，加入原料組成總質(zhì)量3. 5 4. 5倍的水，煮沸20 30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6 8層紗布過(guò)濾， 取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和VB1攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到45 50°C倒成斜面?zhèn)溆茫?3)步驟( 得到的生產(chǎn)用母種按培養(yǎng)基質(zhì)量3% 10%的接種量接種至原種培養(yǎng)基中，于22 35°C，濕度50% 75%時(shí)，培養(yǎng)20 50d，直至菌絲長(zhǎng)滿原種培養(yǎng)基， 選取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的作為生產(chǎn)原種，所述的原種培養(yǎng)基由栽培基料和水按質(zhì)量比 1 1. 1 1.4組成，所述的栽培基料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)，由玉米芯30% 50%，木屑 20% 40%，麩皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%組成；(4)將步驟C3)得到的生產(chǎn)原種按培養(yǎng)基質(zhì)量3% 10%的接種量接種至生產(chǎn)種培養(yǎng)基中，于22 35°C，濕度50% 75%時(shí)，培養(yǎng)20 50d，直至菌絲長(zhǎng)滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基， 得到布朗靈芝生產(chǎn)種，所述的生產(chǎn)種培養(yǎng)基由栽培基料和水按質(zhì)量比1 1.1 1.4組成， 所述的栽培基料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 %計(jì)，由玉米芯30 % 50 %，木屑20 % 40 %，麩皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%組成；(5)將步驟(4)得到的生產(chǎn)種按培養(yǎng)基質(zhì)量5% 15%的接種量接種至生產(chǎn)用栽培基中，于溫度22 35°C，相對(duì)濕度50% 85%的培菌房中，黑培養(yǎng)40 60d，至菌絲充滿生產(chǎn)用栽培基料，則可移入栽培房，所述的生產(chǎn)用栽培基由栽培基料和水按質(zhì)量比 1 1.1 1.4組成，所述的栽培基料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)，由玉米芯30% 50%，木屑 20% 40%，麩皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%組成；(6)將步驟(5)獲得的長(zhǎng)滿菌絲的栽培基料，在10 15°C培養(yǎng)3 5d直至出現(xiàn)白色狀高Icm的原基，原基在溫度20 35°C，相對(duì)濕度75% 90%，散射光光照強(qiáng)度100 ΙΟΟΟΙχ，每天通風(fēng)1 2次，每次0. 5 1小時(shí)的條件下培育至長(zhǎng)出菌柄，然后保持濕度 85% 98%，每天通風(fēng)2 3次，每次0. 5 1小時(shí)的條件下菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到1000 20001x，溫度20 35°C，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長(zhǎng)線消失，開(kāi)始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到2000 50001x，繼續(xù)培養(yǎng)5 10天，菌蓋顏色進(jìn)一步加深，則得到布朗靈芝子實(shí)體。步驟(1)所述的新鮮子實(shí)體可以從野生子實(shí)體或其后人工栽培中得到，所述的接種量最好是培養(yǎng)基質(zhì)量3 %，培養(yǎng)條件最好是溫度25 觀°C，濕度65 % 70 %，培養(yǎng)18 21d。步驟C3)所述的接種量最好是培養(yǎng)基質(zhì)量5%，培養(yǎng)條件最好是溫度25 ^°C， 濕度60% 70%，培養(yǎng)觀 39d，所述原種培養(yǎng)基的制備方法是將各栽培基料組分分別稱重后與水并均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，所述的栽培基料的組成最好是玉米芯45%，木屑30%，麩皮或米糠20 %，蔗糖3%和石膏粉2%。步驟(4)所述的接種量最好是培養(yǎng)基質(zhì)量10%，培養(yǎng)條件最好是溫度25 ^TC, 濕度70% 75%，培養(yǎng)36 42d，所述的生產(chǎn)種培養(yǎng)基的制備方法是各組分分別稱重并與水均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，所述的栽培基料的組成最好是玉米芯45%， 木屑30 %，麩皮或米糠20%，蔗糖3%和石膏粉2%。至菌蓋顏色逐步加深至米黃褐色至菌蓋顏色逐步加深至米黃褐色步驟( 所述的生產(chǎn)用栽培基的制備方法是將組分分別稱重并與水均勻攪拌在一起，栽培基料和水按質(zhì)量比最好是1 1.3，裝入高密度聚乙烯袋或聚丙烯袋，常規(guī) 1. 5kg/cm2壓力，60分鐘滅菌，冷卻備用。步驟(6)所述的布朗靈芝子實(shí)體在采收時(shí)可以用鋒利刀片或剪刀從菌柄基部處割下或剪下，注意不要掰傷菌皮，以利再出第二茬菇，采下的子實(shí)體于陽(yáng)光下曬干脫水，則得到成熟、干燥的布朗靈芝子實(shí)體，可包裝或于室溫保藏或用于研究等用途。本發(fā)明的人工栽培方法可以使布朗靈芝子實(shí)體的生物效率達(dá)到30% 90%，即每IOOg生產(chǎn)用培養(yǎng)料可得30g 90g新鮮的布朗靈芝子實(shí)體，可作原料或作研究材料使用。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，不是對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1 稱取已去皮去芽眼的馬鈴薯75g，蔗糖6g，瓊脂6g，松針3g，將馬鈴薯切成小條再與松針?lè)湃脲佒?，加?05g水，煮沸20分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6層紗布過(guò)濾，取濾汁于鍋中，加水補(bǔ)至原水量，加入瓊脂熔化，再加蔗糖攪拌均勻，調(diào)節(jié)PH至6，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到45°C倒成斜面，得到斜面PDA培養(yǎng)基；稱取已去皮去芽眼的馬鈴薯75g，蔗糖6g，瓊脂6g，磷酸二氫鉀0. 2g，硫酸鎂0. 2g 和VB1O. 002g，將馬鈴薯切成小條放入鍋中，加入306g水，煮沸20分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6層紗布過(guò)濾，取濾汁于鍋中，加水補(bǔ)至原水量后，加瓊脂熔化，再加蔗糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和VB1攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH至6，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到45°C倒成斜面，得到斜面綜合PDA培養(yǎng)基。稱取玉米芯150g，木屑200g，麩皮110g，蔗糖25g，石膏粉15g混合得到500g栽培基料，加入600g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到原種培養(yǎng)基。稱取玉米芯1. 5kg，木屑2kg，麩皮1. Ikg,蔗糖0. 25kg，石膏粉0. 15kg混合得到 5kg栽培基料，加入6kg水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)種培養(yǎng)基。稱取玉米芯15kg，木屑20kg，麩皮11kg，蔗糖2. 5kg，石膏粉1. 5kg混合得到50kg 栽培基料，加入60kg水，均勻攪拌在一起，裝入高密度聚乙烯袋，常規(guī)1. 5kg/cm2壓力，60分鐘滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)用栽培基。將野生布朗靈芝新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離，取約3g接種于150g斜面PDA培養(yǎng)基， 于22°C濕度50%時(shí)培養(yǎng)30d，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，選取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌塊。將IOg布朗菌塊接種至500g斜面綜合PDA培養(yǎng)基中，22°C，濕度50%時(shí)培養(yǎng)30d， 直至菌絲長(zhǎng)滿斜面，選取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌種作為布朗靈芝母種。
將50g母種接種至1 IOOg原種培養(yǎng)基中，于22°C，濕度50%時(shí)，培養(yǎng)50d，直至菌絲長(zhǎng)滿原種培養(yǎng)基，得到布朗靈芝原種。將500g布朗靈芝原種接種至12kg生產(chǎn)種培養(yǎng)基中，于22°C，濕度50%時(shí)，培養(yǎng) 50d，直至菌絲長(zhǎng)滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基，得到布朗靈芝生產(chǎn)種。將Ilkg布朗靈芝生產(chǎn)種接種于IlOkg生產(chǎn)用栽培基中，于溫度22°C，相對(duì)濕度 50%的培菌房中，黑培養(yǎng)60d，至菌絲充滿培養(yǎng)基，則移入栽培房，在10°C培養(yǎng)5d直至出現(xiàn)白色狀高Icm的原基，原基在溫度20°C，相對(duì)濕度75%，散射光光照強(qiáng)度ΙΟΟΙχ，每天通風(fēng)1 次，每次1小時(shí)的條件下培育至長(zhǎng)出菌柄，然后保持濕度85%，每天通風(fēng)2次，每次1小時(shí)的條件下菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到ΙΟΟΟΙχ，溫度20°C，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長(zhǎng)線消失，開(kāi)始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到20001χ，繼續(xù)培養(yǎng) 10天，菌蓋顏色進(jìn)一步加深而成熟，此時(shí)用鋒利刀片將子實(shí)體沿菌柄基部處割下，其生物轉(zhuǎn)化率可達(dá)到30%，采下的子實(shí)體要及時(shí)于陽(yáng)光下曬干或干燥脫水以及分裝。實(shí)施例2:稱取已去皮去芽眼的馬鈴薯850g，蔗糖100g，瓊脂100g，松針50g，將馬鈴薯切成小條再與松針?lè)湃脲佒校尤?850g水，煮沸30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用8層紗布過(guò)濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖攪拌均勻，調(diào)節(jié)PH至8，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到50°C倒成斜面，得到斜面PDA培養(yǎng)基。稱取已去皮去芽眼的馬鈴薯850g，蔗糖100g，瓊脂100g，磷酸二氫鉀15g，硫酸鎂 15g和VB1O. 06g，將馬鈴薯切成小條放入鍋中，加入4905g水，煮沸30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用8層紗布過(guò)濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和VB1攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH至8，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到50°C倒成斜面， 得到斜面綜合PDA培養(yǎng)基。稱取玉米芯250g，木屑140g，米糠100g，蔗糖5g，石膏粉5g混合得到500g栽培基料，加入550g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到原種培養(yǎng)基。稱取玉米芯2500g，木屑1400g，米糠lOOOg，蔗糖50g，石膏粉50g混合得到5000g 栽培基料，加入6000g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)種培養(yǎng)基。稱取玉米芯lOOOOg，木屑5600g，米糠4000g，蔗糖200g，石膏粉200g混合得到 20000g栽培基料，加入^OOOg水，均勻攪拌在一起，裝入聚丙烯袋，常規(guī)1. 5kg/cm2壓力，60 分鐘滅菌，冷卻后備用，得到生產(chǎn)用栽培基。將IOg野生的布朗靈芝新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離，接種于200g斜面PDA培養(yǎng)基， 于35°C濕度75%時(shí)培養(yǎng)10d，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，選取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌塊。將40g布朗菌塊接種至400g斜面綜合PDA培養(yǎng)基中，35°C，濕度75%時(shí)培養(yǎng)10d， 直至菌絲長(zhǎng)滿斜面，選取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌種作為布朗靈芝母種。將IOOg母種接種至IOOOg原種培養(yǎng)基中，于35°C，濕度75%時(shí)，培養(yǎng)20d，直至菌絲長(zhǎng)滿原種培養(yǎng)基，得到布朗靈芝原種。將IOOOg布朗靈芝原種接種至IOOOOg生產(chǎn)種培養(yǎng)基中，于35°C，濕度75%時(shí)，培養(yǎng)20d，直至菌絲長(zhǎng)滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基，得到布朗靈芝生產(chǎn)種。將7200g布朗靈芝生產(chǎn)種接種于48000g生產(chǎn)用栽培基中，于溫度35°C，相對(duì)濕度 85%的培菌房中，黑培養(yǎng)40d，至菌絲充滿培養(yǎng)基，則移入栽培房，在15°C培養(yǎng)3d直至出現(xiàn)白色狀高Icm的原基，原基在溫度35°C，相對(duì)濕度90%，散射光光照強(qiáng)度ΙΟΟΟΙχ，每天通風(fēng) 2次，每次0. 5小時(shí)的條件下培育至長(zhǎng)出菌柄，然后保持濕度98%，每天通風(fēng)3次，每次0. 5 小時(shí)的條件下菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到20001x，溫度35°C，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長(zhǎng)線消失，開(kāi)始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到50001χ，繼續(xù)培養(yǎng)5天，菌蓋顏色進(jìn)一步加深而成熟，此時(shí)用剪刀將子實(shí)體沿菌柄基部處剪下，其生物轉(zhuǎn)化率可達(dá)到90%，采下的子實(shí)體要及時(shí)于陽(yáng)光下曬干或干燥脫水以及分裝。實(shí)施例3 稱取已去皮去芽眼的馬鈴薯800g，蔗糖80g，瓊脂80g，松針40g，將馬鈴薯切成小條再與松針?lè)湃脲佒校尤?000g水，煮沸25分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用7層紗布過(guò)濾， 取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖攪拌均勻，調(diào)節(jié)PH至7，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到48°C倒成斜面，得到斜面PDA培養(yǎng)基。稱取已去皮去芽眼的馬鈴薯800g，蔗糖80g，瓊脂80g，磷酸二氫鉀10g，硫酸鎂IOg 和VB1O. 04g，，將馬鈴薯切成小條放入鍋中，加入3920g水，煮沸25分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用7層紗布過(guò)濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和VB1攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH至7，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到48 °C倒成斜面，得到斜面綜合PDA培養(yǎng)基。稱取玉米芯240g，木屑100g，米糠150g，蔗糖5g，石膏粉5g混合得到500g栽培基料，加入650g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到原種培養(yǎng)基。稱取玉米芯M00g，木屑lOOOg，米糠1500g，蔗糖50g，石膏粉50g混合得到5000g 栽培基料，加入7000g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)種培養(yǎng)基。稱取玉米芯9600g，木屑4000g，米糠6000g，蔗糖200g，石膏粉200g混合得到 20000g栽培基料，加入27000g水，均勻攪拌在一起，裝入高密度聚乙烯袋，常規(guī)1. 5kg/cm2 壓力，60分鐘滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)用栽培基。將9g野生的布朗靈芝新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離，接種于300g斜面PDA培養(yǎng)基，于 25°C濕度65%時(shí)培養(yǎng)21d，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，選取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌塊。將40g布朗菌塊接種至800g斜面綜合PDA培養(yǎng)基中，25°C，濕度60 %時(shí)培養(yǎng)25d， 直至菌絲長(zhǎng)滿斜面，選取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌種作為布朗靈芝母種。將50g母種接種至IOOOg原種培養(yǎng)基中，于25°C，濕度60%時(shí)，培養(yǎng)39d，直至菌絲長(zhǎng)滿原種培養(yǎng)基，得到布朗靈芝原種。將900g布朗靈芝原種接種至9000g生產(chǎn)種培養(yǎng)基中，于25°C，濕度70%時(shí)，培養(yǎng) 42d，直至菌絲長(zhǎng)滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基，得到布朗靈芝生產(chǎn)種。將4500g布朗靈芝生產(chǎn)種接種于45000g生產(chǎn)用栽培基中，于溫度^°C，相對(duì)濕度 60%的培菌房中，黑培養(yǎng)50d，至菌絲充滿培養(yǎng)基，則移入栽培房，在12°C培養(yǎng)4d直至出現(xiàn)白色狀高Icm的原基，原基在溫度25°C，相對(duì)濕度80%，散射光光照強(qiáng)度5001x，每天通風(fēng)1 次，每次1小時(shí)的條件下培育至長(zhǎng)出菌柄，然后保持濕度90%，每天通風(fēng)2次，每次1小時(shí)的條件下菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到15001x，溫度30°C，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長(zhǎng)線消失，開(kāi)始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到30001χ，繼續(xù)培養(yǎng)6天，菌蓋顏色進(jìn)一步加深而成熟，此時(shí)用鋒利刀片將子實(shí)體沿菌柄基部處割下，其生物轉(zhuǎn)化率可達(dá)到60%，采下的子實(shí)體要及時(shí)于陽(yáng)光下曬干或干燥脫水以及分裝。
實(shí)施例4 按實(shí)施例1的方法制備斜面PDA培養(yǎng)基和斜面綜合PDA培養(yǎng)基。稱取玉米芯225g，木屑150g，米糠100g，蔗糖15g，石膏粉IOg混合得到500g栽培基料，加入819g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到原種培養(yǎng)基。稱取玉米芯2250g，木屑1500g，米糠lOOOg，蔗糖150g，石膏粉IOOg混合得到 5000g栽培基料，加入8190g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)種培養(yǎng)基。稱取玉米芯9000g，木屑6000g，米糠4000g，蔗糖600g，石膏粉400g混合得到 20000g栽培基料，加入^OOOg水，均勻攪拌在一起，裝入聚丙烯袋，常規(guī)1. 5kg/cm2壓力，60 分鐘滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)用栽培基。將9g實(shí)施例2得到的布朗靈芝新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離，接種于300g斜面PDA 培養(yǎng)基，于濕度70%時(shí)培養(yǎng)18d，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，選取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌塊。將80g布朗菌塊接種至IOOOg斜面綜合PDA培養(yǎng)基中，30°C，濕度70 %時(shí)培養(yǎng)15d， 直至菌絲長(zhǎng)滿斜面，選取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌種作為布朗靈芝母種。將55g母種接種至1 IOOg原種培養(yǎng)基中，于，濕度70%時(shí)，培養(yǎng)觀山直至菌絲長(zhǎng)滿原種培養(yǎng)基，得到布朗靈芝原種。將IOOOg布朗靈芝原種接種至IOOOOg生產(chǎn)種培養(yǎng)基中，于^°C，濕度75%時(shí)，培養(yǎng)36d，直至菌絲長(zhǎng)滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基，得到布朗靈芝生產(chǎn)種。將4500g布朗靈芝生產(chǎn)種接種于45000g生產(chǎn)用栽培基中，于溫度32°C，相對(duì)濕度 70%的培菌房中，黑培養(yǎng)55d，至菌絲充滿培養(yǎng)基，則移入栽培房，在14°C培養(yǎng)4d直至出現(xiàn)白色狀高Icm的原基，原基在溫度30°C，相對(duì)濕度85%，散射光光照強(qiáng)度8001x，每天通風(fēng)1 次，每次1小時(shí)的條件下培育至長(zhǎng)出菌柄，然后保持濕度95%，每天通風(fēng)2次，每次1小時(shí)的條件下菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到18001x，溫度^°C，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長(zhǎng)線消失，開(kāi)始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到40001χ，繼續(xù)培養(yǎng)8天，菌蓋顏色進(jìn)一步加深而成熟，此時(shí)用鋒利刀片將子實(shí)體沿菌柄基部處割下，其生物轉(zhuǎn)化率可達(dá)到50%，采下的子實(shí)體要及時(shí)于陽(yáng)光下曬干或干燥脫水以及分裝。
權(quán)利要求
1. 一種布朗靈芝子實(shí)體的人工栽培方法，其特征包括以下的步驟(1)將布朗靈芝(Ganodermabrownii (Murrill)Gilb.)的新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離， 然后按培養(yǎng)基質(zhì)量2 % 5 %接種量接種到斜面PDA培養(yǎng)基，于22 35 °C、濕度50 % 75 % 時(shí)培養(yǎng)10 30d，至菌絲長(zhǎng)滿斜面，挑取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的作為母種于4°C保藏備用或進(jìn)一步培養(yǎng)，所述的斜面PDA培養(yǎng)基的pH是6 8，其原料組成按質(zhì)量份計(jì)，為已去皮去芽眼的馬鈴薯75 85份，蔗糖6 10份，瓊脂6 10份和松針3 5份，并通過(guò)下述方法制得原料按所述組成分別稱重后，先將馬鈴薯切成小條再與松針?lè)湃脲佒?，加入原料組成總質(zhì)量3. 5 4. 5倍的水，煮沸20 30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6 8層紗布過(guò)濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后， 冷卻到45 50°C倒成斜面?zhèn)溆茫?2)將步驟(1)得到的母種按培養(yǎng)基質(zhì)量2% 10%的接種量接種至斜面綜合PDA培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)或復(fù)壯，于22 35°C，濕度50% 75%時(shí)培養(yǎng)10 30d，直至菌絲長(zhǎng)滿斜面，選取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的作為生產(chǎn)用母種，所述的斜面綜合PDA培養(yǎng)基的pH是6 8， 其原料組成按質(zhì)量份計(jì)，為已去皮去芽眼的馬鈴薯75 85份，蔗糖6 10份，瓊脂6 10 份，磷酸二氫鉀0. 2 1. 5份，硫酸鎂0. 2 1. 5份和VB1O. 002 0. 006份，并通過(guò)下述方法制得原料按所述組成分別稱重后，先將馬鈴薯切成小條放入鍋中，加入原料組成總質(zhì)量 3. 5 4. 5倍的水，煮沸20 30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6 8層紗布過(guò)濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和VB1攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到45 50°C倒成斜面?zhèn)溆茫?3)步驟( 得到的生產(chǎn)用母種按培養(yǎng)基質(zhì)量3% 10%的接種量接種至原種培養(yǎng)基中，于22 35°C，濕度50% 75%時(shí)，培養(yǎng)20 50d，直至菌絲長(zhǎng)滿原種培養(yǎng)基，選取長(zhǎng)勢(shì)旺盛、粗壯均一的作為生產(chǎn)原種，所述的原種培養(yǎng)基由栽培基料和水按質(zhì)量比1 1. 1 1.4組成，所述的栽培基料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)，由玉米芯30% 50%，木屑20% 40%，麩皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%組成；(4)將步驟C3)得到的生產(chǎn)原種按培養(yǎng)基質(zhì)量3% 10%的接種量接種至生產(chǎn)種培養(yǎng)基中，于22 35°C，濕度50% 75%時(shí)，培養(yǎng)20 50d，直至菌絲長(zhǎng)滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基，得到布朗靈芝生產(chǎn)種，所述的生產(chǎn)種培養(yǎng)基由栽培基料和水按質(zhì)量比1 1.1 1.4組成，所述的栽培基料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 %計(jì)，由玉米芯30 % 50 %，木屑20 % 40 %，麩皮或米糠 20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%組成；(5)將步驟(4)得到的生產(chǎn)種按培養(yǎng)基質(zhì)量5% 15%的接種量接種至生產(chǎn)用栽培基中，于溫度22 ;35°C，相對(duì)濕度50 % 85 %的培菌房中，黑培養(yǎng)40 60d，至菌絲充滿生產(chǎn)用栽培基料，則可移入栽培房，所述的生產(chǎn)用栽培基由栽培基料和水按質(zhì)量比1 1. 1 1.4組成，所述的栽培基料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)，由玉米芯30% 50%，木屑20% 40%，麩皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%組成；(6)將步驟(5)獲得的長(zhǎng)滿菌絲的栽培基料，在10 15°C培養(yǎng)3 5d直至出現(xiàn)白色狀高Icm的原基，原基在溫度20 35°C，相對(duì)濕度75 % 90 %，散射光光照強(qiáng)度100 ΙΟΟΟΙχ，每天通風(fēng)1 2次，每次0. 5 1小時(shí)的條件下培育至長(zhǎng)出菌柄，然后保持濕度 85% 98%，每天通風(fēng)2 3次，每次0. 5 1小時(shí)的條件下菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到1000 20001x，溫度20 35°C，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長(zhǎng)線消失，開(kāi)始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到2000 50001x，繼續(xù)培養(yǎng)5 10天，菌蓋顏色進(jìn)一步加深，則得到布朗靈芝子實(shí)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種布朗靈芝子實(shí)體的人工栽培方法，其特征是步驟(1)中所述的新鮮子實(shí)體從野生子實(shí)體或其后人工栽培中得到，所述的接種量是培養(yǎng)基質(zhì)量3%， 于25 ^°C，濕度65% 70%，培養(yǎng)18 21d，步驟(3)中所述的接種量是培養(yǎng)基質(zhì)量 5 %，于25 沘°C，濕度60 % 70 %，培養(yǎng)28 39d，所述的栽培基料的組成是玉米芯45 %， 木屑30 %，麩皮或米糠20%，蔗糖3%，石膏粉2%，步驟中所述的接種量是培養(yǎng)基質(zhì)量10%，于25 ^°C，濕度70% 75%，培養(yǎng)36 42d，所述的栽培基料的組成是玉米芯 45%，木屑30%，麩皮或米糠20%，蔗糖3%，石膏粉2% ；步驟(5)中所述的生產(chǎn)用栽培基由栽培基料和水按質(zhì)量比1 1.3組成。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種布朗靈芝子實(shí)體的人工栽培方法，其特征是通過(guò)將新鮮布朗靈芝(Ganoderma brownii(Murrill)Gilb.)子實(shí)體進(jìn)行組織分離或孢子分離，然后在PDA斜面培養(yǎng)基和斜面綜合PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到生產(chǎn)用母種，再接種到原種培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到原種，其后經(jīng)過(guò)生產(chǎn)種培養(yǎng)基的培養(yǎng)得到生產(chǎn)種，最后將生產(chǎn)種接種到生產(chǎn)用栽培基中，培養(yǎng)至長(zhǎng)出成熟的子實(shí)體。本發(fā)明的人工栽培方法可以使布朗靈芝子實(shí)體的生物效率達(dá)到30％～90％，即每100g生產(chǎn)用培養(yǎng)料可得30g～90g新鮮的布朗靈芝子實(shí)體，可作原料或作研究材料使用。
文檔編號(hào)A01G1/04GK102283020SQ201110193120
公開(kāi)日2011年12月21日 申請(qǐng)日期2011年7月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月11日
發(fā)明者吳興亮, 宋斌, 李泰輝, 鄒方倫 申請(qǐng)人:廣東省微生物研究所