專利名稱：繡線菊抗寒種類的篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及繡線菊抗寒種類的篩選方法。
背景技術(shù)：
繡線菊屬(Spiraea L.)是薔薇科原始的屬，其資源豐富，我國分布約有70余種， 繡線菊屬植物花期持久，花色純艷，葉型多樣，集觀花、觀彩色葉于一身，園林觀賞價值高， 具有理想的園林應(yīng)用前景。我國北方園林綠化資源匱乏，綠化樹種單調(diào)，園林植物景觀不夠豐富，繡線菊是良好的綠化素材。但由于北方氣候寒冷，并不適宜所有種類繡線菊生長，因此對繡線菊資源進(jìn)行抗寒能力的研究及其抗寒資源的篩選是其在高寒地區(qū)科學(xué)應(yīng)用的關(guān)鍵。嚴(yán)寒是限制園林綠化素材廣泛應(yīng)用的主要因素，抗寒力強是我國北方地區(qū)引進(jìn)綠化資源的首要要求。為探討植物的抗寒能力已開展了很多相關(guān)研究，大量研究發(fā)現(xiàn)多數(shù)植物與低溫相互作用過程中，逐漸形成了一系列低溫適應(yīng)機制，以增強自身的抗寒力，許多植物經(jīng)一定時間低溫適應(yīng)后，抗寒能力提高，但抗寒力強弱因植物種類而異。植物的半致死溫度(LT50)具有遺傳特征，能準(zhǔn)確反映其抗寒能力，是衡量植物抗寒力的穩(wěn)定指標(biāo)。植物的抗寒性是多種因素共同作用構(gòu)成的較復(fù)雜的綜合性狀，目前應(yīng)用最普遍的抗性綜合評價方法是隸屬函數(shù)法，這種方法采用模糊數(shù)學(xué)中隸屬函數(shù)法對植物各抗性指標(biāo)的隸屬函數(shù)值累加，求取平均數(shù)以評價其抗性，這種方法能克服單一指標(biāo)的片面性，使評價結(jié)果全面反映植物的抗寒力。但目前仍然沒有將半致死溫度與抗寒隸屬函數(shù)結(jié)合的篩選評價植物抗寒力的方法，更沒有對豐富的繡線菊資源進(jìn)行抗寒鑒定與篩選。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供繡線菊抗寒種類的篩選方法，通過確定各繡線菊抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值和半致死溫度，首次建立繡線菊抗寒篩選技術(shù)體系與方法，并篩選抗寒繡線菊資源，其研究結(jié)果有科學(xué)依據(jù)，具一定的領(lǐng)先性與創(chuàng)新突破，并填補國內(nèi)外關(guān)于繡線菊抗寒篩選技術(shù)研究的空白。本發(fā)明繡線菊抗寒種類的篩選方法，按以下步驟進(jìn)行一、繡線菊露地自然零上低溫處理秋季露地自然晝夜平均氣溫達(dá)15 5°C， 將待測試?yán)C線菊缽苗置于露地中處理3周，之后在露地自然晝夜平均氣溫達(dá)15°C、10°C 和5°C時分別取葉片，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)，然后將每種繡線菊缽苗繼續(xù)置于零上溫度的露地中自然生長；繡線菊缽苗置于露地中處理期間露地自然晝夜平均光照為860 IlOOymol · m_2 · s—1，每種繡線菊缽苗處理200株；二、繡線菊持續(xù)恒低溫處理另取待測試的繡線菊缽苗，將每種繡線菊缽苗置于光照培養(yǎng)箱中，于15°C恒溫條件下處理3周， 然后取葉片，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)，然后將每種繡線菊缽苗置于零上溫度的露地中自然生長；15°C恒溫條件處理期間培養(yǎng)箱內(nèi)晝夜平均光照為860 ΙΙΟΟμπιοΙ · m_2 · s—1， 夜間進(jìn)行黑暗處理，每種繡線菊缽苗處理200株；三、繡線菊露地自然冰凍處理將經(jīng)步CN 102415253 A
說明書
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驟一處理后的置于露地中自然生長的繡線菊缽苗平均分為A、B兩組，當(dāng)露地自然最低溫度達(dá)-15°C -20°C，7 10d后對于A組的繡線菊和經(jīng)步驟二處理后的置于露地中自然生長的繡線菊取枝條，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)；當(dāng)露地自然最低溫度達(dá)-20 -25°C， 7 IOd后對于A組的繡線菊和經(jīng)步驟二處理后的置于露地中自然生長的繡線菊取枝條，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)；四、根據(jù)步驟一、步驟二和步驟三測得的各項抗寒生理指標(biāo)的值計算每種繡線菊抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值，再將各個抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值累加，計算平均值，即得到每種繡線菊抗寒生理指標(biāo)平均隸屬值，根據(jù)平均隸屬函數(shù)值對各繡線菊進(jìn)行由高到低排序；五、繡線菊人工模擬露地低溫梯度冰凍處理當(dāng)露地自然最低溫度達(dá)-15°C時，在冰箱內(nèi)分別設(shè)定-15°C、-19°C、-23°C、_27°C、-31°C和_:35°C的低溫，將B組的繡線菊轉(zhuǎn)入冰箱中進(jìn)行冰凍處理，每級溫度處理3d后分別取樣，測定枝條在-15°C、-19°C、-23°C、-27°C、-31°C和_:35°C低溫下的相對電導(dǎo)率，將相對電導(dǎo)率擬合 Logistic方程計算每種繡線菊半致死溫度，根據(jù)半致死溫度對各種繡線菊進(jìn)行由低到高排序；六、由各繡線菊平均隸屬函數(shù)值和半致死溫度的高低確定各繡線菊的抗寒能力，平均隸屬值越大繡線菊的抗寒力越強，半致死溫度越低繡線菊的抗寒力越強，當(dāng)繡線菊的平均隸屬函數(shù)值和半致死溫度排序不一致時，再結(jié)合各繡線菊露地越冬田間表現(xiàn)，確定各繡線菊的抗寒力，即完成繡線菊抗寒種類的篩選。目前國內(nèi)外對繡線菊資源抗寒篩選技術(shù)研究尚屬空白，本發(fā)明是繡線菊抗寒篩選技術(shù)研究中的首次嘗試，其研究結(jié)果具一定的領(lǐng)先性與創(chuàng)新突破，能填補國內(nèi)外關(guān)于繡線菊抗寒篩選技術(shù)研究的空白；本發(fā)明的繡線菊抗寒篩選技術(shù)與方法，從繡線菊資源的收集、 抗寒篩選技術(shù)流程設(shè)計、抗寒篩選方法與手段，到學(xué)科交叉等側(cè)面均未見研究報道；本發(fā)明篩選的抗寒繡線菊資源為提高繡線菊抗寒能力和培育抗寒繡線菊新品種奠定基礎(chǔ)，為實施繡線菊抗寒基因工程和開展繡線菊抗寒分子育種提供實踐依據(jù)；目前還沒有文獻(xiàn)報道對豐富的繡線菊資源做系統(tǒng)的抗寒篩選研究。本發(fā)明通過科學(xué)嚴(yán)密的低溫處理技術(shù)，對各繡線菊做低溫處理，并據(jù)各繡線菊抗寒生理指標(biāo)和低溫處理后的電導(dǎo)率，模擬隸屬函數(shù)和擬合Logistic方程等數(shù)學(xué)模型，計算各繡線菊抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值和半致死溫度，據(jù)此建立繡線菊抗寒篩選技術(shù)體系與方法，并篩選抗寒繡線菊資源，其研究結(jié)果有科學(xué)依據(jù)，并與各繡線菊露地越冬表現(xiàn)高度一致；本發(fā)明提供繡線菊抗寒種類的篩選技術(shù)與方法，為北方園林篩選抗寒繡線菊資源提供技術(shù)支撐。
具體實施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的任意組合。
具體實施方式
一本實施方式繡線菊抗寒種類的篩選方法，按以下步驟進(jìn)行一、 繡線菊露地自然零上低溫處理秋季露地自然晝夜平均氣溫達(dá)15 5°C，將待測試?yán)C線菊缽苗置于露地中處理3周，之后在露地自然晝夜平均氣溫達(dá)15°C、10°C和5°C時分別取葉片，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)，然后將每種繡線菊缽苗繼續(xù)置于零上溫度的露地中自然生長； 繡線菊缽苗置于露地中處理期間露地自然晝夜平均光照為860 1100 μ mol ·πΓ2· s—1， 每種繡線菊缽苗處理200株；二、繡線菊持續(xù)恒低溫處理另取待測試的繡線菊缽苗，將每種繡線菊缽苗置于光照培養(yǎng)箱中，于15°C恒溫條件下處理3周，然后取葉片，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)，然后將每種繡線菊缽苗置于零上溫度的露地中自然生長；15°C恒溫條件處理期間培養(yǎng)箱內(nèi)晝夜平均光照為860 1100 μ mol · m_2 · s—1，夜間進(jìn)行黑暗處理，每種繡線菊缽苗處理200株；三、繡線菊露地自然冰凍處理將經(jīng)步驟一處理后的置于露地中自然生長的繡線菊缽苗平均分為A、B兩組，當(dāng)露地自然最低溫度達(dá)-15°C -20°C，7 IOd后對于A組的繡線菊和經(jīng)步驟二處理后的置于露地中自然生長的繡線菊取枝條，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)；當(dāng)露地自然最低溫度達(dá)-20 -25°C，7 IOd后對于A組的繡線菊和經(jīng)步驟二處理后的置于露地中自然生長的繡線菊取枝條，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)；四、 根據(jù)步驟一、步驟二和步驟三測得的各項抗寒生理指標(biāo)的值計算每種繡線菊抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值，再將各個抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值累加，計算平均值，即得到每種繡線菊抗寒生理指標(biāo)平均隸屬值，根據(jù)平均隸屬函數(shù)值對各繡線菊進(jìn)行由高到低排序；五、繡線菊人工模擬露地低溫梯度冰凍處理當(dāng)露地自然最低溫度達(dá)_15°C時，在冰箱內(nèi)分別設(shè)定-15°C、_19°C、_23°C、_27°C、_31°C和_:35°C的低溫，將B組的繡線菊轉(zhuǎn)入冰箱中進(jìn)行冰凍處理，每級溫度處理3d后分別取樣，測定枝條在-15°C、-19°C、-23°C、-27°C、-31V和_；35°C 低溫下的相對電導(dǎo)率，將相對電導(dǎo)率擬合Logistic方程計算每種繡線菊半致死溫度，根據(jù)半致死溫度對各種繡線菊進(jìn)行由低到高排序；六、由各繡線菊平均隸屬函數(shù)值和半致死溫度的高低確定各繡線菊的抗寒能力，平均隸屬值越大繡線菊的抗寒力越強，半致死溫度越低繡線菊的抗寒力越強，當(dāng)繡線菊的平均隸屬函數(shù)值和半致死溫度排序不一致時，再結(jié)合各繡線菊露地越冬田間表現(xiàn)，確定各繡線菊的抗寒力，即完成繡線菊抗寒種類的篩選。本實施方式所述的處理即指將繡線菊置于所規(guī)定的環(huán)境中生長。本實施方式步驟三所述將經(jīng)步驟一處理后的置于露地中自然生長的繡線菊缽苗平均分為A、B兩組，是將每種繡線菊缽苗都平均分配到A、B兩組。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟一和步驟二中所述繡線菊缽苗的高度為15 20cm，分枝數(shù)量為6 8條，葉片數(shù)量為20 30枚。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟一、步驟二和步驟三中所述抗寒生理指標(biāo)為供試枝條或葉片的可溶性糖含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、SOD酶活性、ABA含量和膜脂肪酸含量和光合生理指標(biāo)。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟一和步驟二中所述取葉片，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)的方法為采集每種繡線菊位于中上部的當(dāng)年生枝條，取枝條形態(tài)學(xué)上端的第3 8片中長勢最佳的葉片，3次重復(fù)隨機取樣，進(jìn)行平行樣測定，將每一抗寒生理指標(biāo)的測定結(jié)果取平均值。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟三所述取枝條， 測定抗寒生理指標(biāo)的方法為采集每種繡線菊位于中上部的當(dāng)年生枝條，3次重復(fù)隨機取樣，進(jìn)行平行樣測定，將每一抗寒生理指標(biāo)的測定結(jié)果取平均值。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟四所述根據(jù)步驟一、步驟二和步驟三測得的各項抗寒生理指標(biāo)的值計算每種繡線菊抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值的方法為采用隸屬函數(shù)值計算公式R(Xi) = (Xi-Xmin)/(Xmax-Xmin)，式中Xi為繡線菊某一抗寒生理指標(biāo)的測定值，Xmin為該抗寒生理指標(biāo)的最小值，Xmax為該抗寒生理指標(biāo)的最大值；如果某一抗寒生理指標(biāo)與其抗寒力呈負(fù)相關(guān)，則用反隸屬函數(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換，計算公式為R(Xi) = I-(Xi-Xmin)/(Xmax-Xmin) ο其它與具體實施方式
一相同。在繡線菊抗寒篩選中，采用模糊數(shù)學(xué)中的隸屬函數(shù)法，對繡線菊的各個抗寒生理指標(biāo)的隸屬函數(shù)值進(jìn)行累加，求取平均值以評定其抗寒力，這樣可以克服單個指標(biāo)的片面性，使評定結(jié)果更全面的反映各繡線菊的實際抗寒能力。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟五所述將相對電導(dǎo)率擬合Logistic方程計算每種繡線菊半致死溫度的方法為采用Logistic方程回歸模型y = k/(l+ae_bt)，其中y代表各繡線菊相對電解質(zhì)透出率，t代表處理溫度，k為細(xì)胞傷害率的飽和容量，a和b為方程參數(shù)；通過直線回歸的方法求得a，b值及相關(guān)系數(shù)r，曲線的拐點χ = Lna/b,即為半致死溫度(LT5tl)。其它與具體實施方式
一相同。本實施方式采用改進(jìn)的數(shù)學(xué)分析方法(k = 100)求得拐點溫度，在此點，低溫對電解質(zhì)的遞增效應(yīng)最大。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟六所述結(jié)合各繡線菊露地越冬田間表現(xiàn)，確定各繡線菊的抗寒力的方法為各繡線菊露地越冬后，隨機選擇田間越冬的每種待測繡線菊各50株，調(diào)查每種待測繡線菊的枯枝數(shù)量、枯枝長度、發(fā)芽時間、展葉時間、發(fā)芽量、展葉量、全葉期以及從發(fā)芽展葉到全葉期所歷經(jīng)的時間，記錄各項數(shù)據(jù)，每項數(shù)據(jù)取平均值，根據(jù)各項平均值進(jìn)行抗寒力由高到低排序，枯枝數(shù)量越少、枯枝長度越短的繡線菊抗寒力越強，發(fā)芽展葉時間越早繡線菊抗寒力越強，發(fā)芽展葉量越多繡線菊抗寒力越強，全葉期越早繡線菊抗寒力越強，從發(fā)芽展葉到全葉期所歷經(jīng)的時間越短繡線菊抗寒力越強，確定每種待測繡線菊的抗寒力。其它與具體實施方式
一相同。當(dāng)按照各繡線菊的平均隸屬函數(shù)值和半致死溫度排序不一致時，根據(jù)各繡線菊露地越冬田間表現(xiàn)，確定各繡線菊抗寒力的強弱。
具體實施方式
九本實施方式對18種繡線菊進(jìn)行抗寒種類的篩選，繡線菊抗寒種類的篩選方法，按以下步驟進(jìn)行一、繡線菊露地自然零上低溫處理秋季露地自然晝夜平均氣溫達(dá)15 5°C時，將待測試的18種繡線菊缽苗置于露地中處理3周，之后在露地自然晝夜平均氣溫達(dá)15°C、10°C和5°C時分別取葉片，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)，然后將每種繡線菊缽苗繼續(xù)置于零上溫度的露地中自然生長；繡線菊缽苗置于露地中生長期間露地自然晝夜平均光照為860 IlOOymol · m_2 · s—1，每種繡線菊缽苗處理200株；二、繡線菊持續(xù)恒低溫處理另取待測試的18種繡線菊缽苗，將18種繡線菊缽苗置于光照培養(yǎng)箱中，于15°C恒溫條件下生長3周，然后取葉片，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)，然后將每種繡線菊缽苗置于零上溫度的露地中自然生長；15°C恒溫條件處理期間培養(yǎng)箱內(nèi)晝夜平均光照為860 1100 μ mol · πΓ2 · s—1，夜間進(jìn)行黑暗處理，每種繡線菊缽苗處理200株；三、繡線菊露地自然冰凍處理將經(jīng)步驟一處理后的置于露地中自然生長的繡線菊缽苗平均分為 A、B兩組，當(dāng)露地自然最低溫度達(dá)-15°C _20°C，IOd后對于A組的繡線菊和經(jīng)步驟二處理后的置于露地中自然生長的繡線菊取枝條，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)；當(dāng)露地自然最低溫度達(dá)-20 -25°C，IOd后對于A組的繡線菊和經(jīng)步驟二處理后的置于露地中自然生長的繡線菊取枝條，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)；四、根據(jù)步驟一、步驟二和步驟三測得的各項抗寒生理指標(biāo)的值計算每種繡線菊抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值，再將各個抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值累加，計算平均值，即得到每種繡線菊抗寒生理指標(biāo)平均隸屬值，根據(jù)平均隸屬函數(shù)值對各繡線菊進(jìn)行由高到低排序；五、繡線菊人工模擬露地低溫梯度冰凍處理當(dāng)露地自然最低溫度達(dá)-15°C時，在冰箱內(nèi)分別設(shè)定-15°C、-19°C、-23_27°C、-31°C和_:35°C的低溫，將B組的繡線菊轉(zhuǎn)入冰箱中進(jìn)行冰凍處理，每級溫度處理3d后分別取樣，測定枝條在-15°C、-19°C、-23°C、-27°C、-31°C和_:35°C低溫下的相對電導(dǎo)率，將相對電導(dǎo)率擬合 Logistic方程計算每種繡線菊半致死溫度，根據(jù)半致死溫度對各繡線菊進(jìn)行由低到高排序；六、由各繡線菊平均隸屬函數(shù)值和半致死溫度的高低確定各繡線菊的抗寒能力，平均隸屬值越大繡線菊的抗寒力越強，半致死溫度越低繡線菊的抗寒力越強，當(dāng)繡線菊的平均隸屬函數(shù)值和半致死溫度排序不一致時，再結(jié)合各繡線菊露地越冬田間表現(xiàn)，確定各繡線菊的抗寒力，即完成繡線菊抗寒種類的篩選。本實施方式步驟三所述將經(jīng)步驟一處理后的置于露地中自然生長的繡線菊缽苗平均分為A、B兩組，是將18種繡線菊中的每種繡線菊缽苗都平均分配到A、B兩組。步驟一和步驟二中所述繡線菊缽苗的高度為15 20cm，分枝數(shù)量為6 8條，葉片數(shù)量為20 30枚。步驟一、步驟二和步驟三中所述相關(guān)抗寒生理指標(biāo)為供試枝條或葉片的可溶性糖含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、SOD酶活性、ABA含量和膜脂肪酸含量和光合生理指標(biāo)。步驟一和步驟二中所述取葉片，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)的方法為采集每種繡線菊位于中上部的當(dāng)年生枝條，取枝條形態(tài)學(xué)上端的第3 8片中長勢最佳的葉片，3次重復(fù)隨機取樣，進(jìn)行平行樣測定，將每一抗寒生理指標(biāo)的測定結(jié)果取平均值。步驟三所述取枝條，測定抗寒生理指標(biāo)的方法為采集每種繡線菊位于中上部的當(dāng)年生枝條，3次重復(fù)隨機取樣，進(jìn)行平行樣測定，將每一抗寒生理指標(biāo)的測定結(jié)果取平均值。步驟四所述根據(jù)步驟一、步驟二和步驟三測得的各項抗寒生理指標(biāo)的值計算每種繡線菊抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值的方法為采用隸屬函數(shù)值計算公式R(Xi)= (Xi-Xmin)/(Xmax-Xmin)，式中Xi為繡線菊某一抗寒生理指標(biāo)的測定值，Xmin為該抗寒生理指標(biāo)的最小值，Xmax為該抗寒生理指標(biāo)的最大值；如果某一抗寒生理指標(biāo)與其抗寒力呈負(fù)相關(guān)，則用反隸屬函數(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換，計算公式為R(Xi) = I-(Xi-Xmin)/(Xmax-Xmin)。步驟五所述將相對電導(dǎo)率擬合Logistic方程計算每種繡線菊半致死溫度的方法為采用Logistic方程回歸模型y = k/(l+ae_bt)，其中y代表各繡線菊相對電解質(zhì)透出率， t代表處理溫度，k為細(xì)胞傷害率的飽和容量，a和b為方程參數(shù)；通過直線回歸的方法求得 a, b值及相關(guān)系數(shù)r，曲線的拐點χ = Lna/b,即為半致死溫度(LT5tl)。平均隸屬值越大繡線菊的抗寒力越強，半致死溫度越低繡線菊的抗寒力越強，根據(jù)18種繡線菊抗寒生理指標(biāo)的平均隸屬函數(shù)值和半致死溫度，結(jié)合各繡線菊露地越冬田間表現(xiàn)，確定各繡線菊的抗寒力，篩選抗寒繡線菊種類。本實施方式供試的18種繡線菊的平均隸屬值排列順序如表1所示
權(quán)利要求
1.繡線菊抗寒種類的篩選方法，其特征在于繡線菊抗寒種類的篩選方法，按以下步驟進(jìn)行一、繡線菊露地自然零上低溫處理秋季露地自然晝夜平均氣溫達(dá)15 5°C， 將待測試?yán)C線菊缽苗置于露地中處理3周，之后在露地自然晝夜平均氣溫達(dá)15°C、10°C 和5°C時分別取葉片，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)，然后將每種繡線菊缽苗繼續(xù)置于零上溫度的露地中自然生長；繡線菊缽苗置于露地中處理期間露地自然晝夜平均光照為860 1100 μ mol · m_2 · s—1，每種繡線菊缽苗處理200株；二、繡線菊持續(xù)恒低溫處理另取待測試的繡線菊缽苗，將每種繡線菊缽苗置于光照培養(yǎng)箱中，于15°C恒溫條件下處理3周， 然后取葉片，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)，然后將每種繡線菊缽苗置于零上溫度的露地中自然生長；15°C恒溫條件處理期間培養(yǎng)箱內(nèi)晝夜平均光照為860 ΙΙΟΟμπιοΙ · m_2 · s—1， 夜間進(jìn)行黑暗處理，每種繡線菊缽苗處理200株；三、繡線菊露地自然冰凍處理將經(jīng)步驟一處理后的置于露地中自然生長的繡線菊缽苗平均分為A、B兩組，當(dāng)露地自然最低溫度達(dá)-15°C -20°C，7 10d后對于A組的繡線菊和經(jīng)步驟二處理后的置于露地中自然生長的繡線菊取枝條，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)；當(dāng)露地自然最低溫度達(dá)-20 -25°C， 7 IOd后對于A組的繡線菊和經(jīng)步驟二處理后的置于露地中自然生長的繡線菊取枝條，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)；四、根據(jù)步驟一、步驟二和步驟三測得的各項抗寒生理指標(biāo)的值計算每種繡線菊抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值，再將各個抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值累加，計算平均值，即得到每種繡線菊抗寒生理指標(biāo)平均隸屬值，根據(jù)平均隸屬函數(shù)值對各繡線菊進(jìn)行由高到低排序；五、繡線菊人工模擬露地低溫梯度冰凍處理當(dāng)露地自然最低溫度達(dá)-15°C時，在冰箱內(nèi)分別設(shè)定-15°C、-19 V, -23°C、-27 V, -31°C和_:35°C的低溫，將B組的繡線菊轉(zhuǎn)入冰箱中進(jìn)行冰凍處理，每級溫度處理3d后分別取樣，測定枝條在-15°C、-19°C、-23°C、-27°C、-31°C和_:35°C低溫下的相對電導(dǎo)率，將相對電導(dǎo)率擬合 Logistic方程計算每種繡線菊半致死溫度，根據(jù)半致死溫度對各種繡線菊進(jìn)行由低到高排序；六、由各繡線菊平均隸屬函數(shù)值和半致死溫度的高低確定各繡線菊的抗寒能力，平均隸屬值越大繡線菊的抗寒力越強，半致死溫度越低繡線菊的抗寒力越強，當(dāng)繡線菊的平均隸屬函數(shù)值和半致死溫度排序不一致時，再結(jié)合各繡線菊露地越冬田間表現(xiàn)，確定各繡線菊的抗寒力，即完成繡線菊抗寒種類的篩選。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的繡線菊抗寒種類的篩選方法，其特征在于步驟一和步驟二中所述繡線菊缽苗的高度為15 20cm，分枝數(shù)量為6 8條，葉片數(shù)量為20 30枚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的繡線菊抗寒種類的篩選方法，其特征在于步驟一、步驟二和步驟三中所述抗寒生理指標(biāo)為供試枝條或葉片的可溶性糖含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、SOD酶活性、ABA含量和膜脂肪酸含量和光合生理指標(biāo)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的繡線菊抗寒種類的篩選方法，其特征在于步驟一和步驟二中所述取葉片，測定相關(guān)抗寒生理指標(biāo)的方法為采集每種繡線菊位于中上部的當(dāng)年生枝條， 取枝條形態(tài)學(xué)上端的第3 8片中長勢最佳的葉片，3次重復(fù)隨機取樣，進(jìn)行平行樣測定，將每一抗寒生理指標(biāo)的測定結(jié)果取平均值。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的繡線菊抗寒種類的篩選方法，其特征在于步驟三所述取枝條，測定抗寒生理指標(biāo)的方法為采集每種繡線菊位于中上部的當(dāng)年生枝條，3次重復(fù)隨機取樣，進(jìn)行平行樣測定，將每一抗寒生理指標(biāo)的測定結(jié)果取平均值。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的繡線菊抗寒種類的篩選方法，其特征在于步驟四所述根據(jù)步驟一、步驟二和步驟三測得的各項抗寒生理指標(biāo)的值計算每種繡線菊抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值的方法為采用隸屬函數(shù)值計算公式R(Xi) = (Xi-XminV(Xmax-Xmin)，式中Xi為繡線菊某一抗寒生理指標(biāo)的測定值，Xmin為該抗寒生理指標(biāo)的最小值，Xmax為該抗寒生理指標(biāo)的最大值；如果某一抗寒生理指標(biāo)與其抗寒力呈負(fù)相關(guān)，則用反隸屬函數(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換，計算公式為R(Xi) = 1-(Xi-Xmin)/(Xmax-Xmin)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的繡線菊抗寒種類的篩選方法，其特征在于步驟五所述將相對電導(dǎo)率擬合Logistic方程計算每種繡線菊半致死溫度的方法為采用Logistic方程回歸模型y = k/(l+ae_bt)，其中y代表各繡線菊相對電解質(zhì)透出率，t代表處理溫度，k為細(xì)胞傷害率的飽和容量，a和b為方程參數(shù)；通過直線回歸的方法求得a，b值及相關(guān)系數(shù)r，曲線的拐點χ = Lna/b,即為半致死溫度。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的繡線菊抗寒種類的篩選方法，其特征在于步驟六所述結(jié)合各繡線菊露地越冬田間表現(xiàn)，確定各繡線菊的抗寒力的方法為各繡線菊露地越冬后，隨機選擇田間越冬的每種待測繡線菊各50株，調(diào)查每種待測繡線菊的枯枝數(shù)量、枯枝長度、發(fā)芽時間、展葉時間、發(fā)芽量、展葉量、全葉期以及從發(fā)芽展葉到全葉期所歷經(jīng)的時間，記錄各項數(shù)據(jù)，每項數(shù)據(jù)取平均值，根據(jù)各項平均值進(jìn)行抗寒力由高到低排序，枯枝數(shù)量越少、枯枝長度越短的繡線菊抗寒力越強，發(fā)芽展葉時間越早繡線菊抗寒力越強，發(fā)芽展葉量越多繡線菊抗寒力越強，全葉期越早繡線菊抗寒力越強，從發(fā)芽展葉到全葉期所歷經(jīng)的時間越短繡線菊抗寒力越強，確定每種待測繡線菊的抗寒力。
全文摘要
繡線菊抗寒種類的篩選方法，涉及園林樹木繡線菊抗寒種類篩選方法。本發(fā)明提供繡線菊抗寒種類篩選方法，首次領(lǐng)先建立繡線菊抗寒篩選技術(shù)體系與方法，填補國內(nèi)外關(guān)于繡線菊抗寒篩選技術(shù)空白。方法一、繡線菊露地自然低溫處理；二、繡線菊持續(xù)恒低溫處理；三、繡線菊露地自然冰凍處理；四、計算抗寒生理指標(biāo)隸屬函數(shù)值；五、繡線菊模擬露地低溫梯度冰凍處理，計算各繡線菊半致死溫度；六、由各繡線菊平均隸屬函數(shù)值和半致死溫度確定各繡線菊的抗寒能力，即完成抗寒種類篩選。本發(fā)明方法結(jié)合抗寒隸屬值與半致死溫度雙結(jié)果，克服抗寒篩選單一性，與其越冬表現(xiàn)高度一致。本發(fā)明為北方園林篩選抗寒繡線菊提供技術(shù)支撐，應(yīng)用于繡線菊抗寒篩選領(lǐng)域。
文檔編號A01G1/00GK102415253SQ201110244349
公開日2012年4月18日 申請日期2011年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月25日
發(fā)明者劉慧民, 房莉, 王大慶, 車代弟, 馬艷麗 申請人:劉慧民