專利名稱：一種側(cè)孢芽孢桿菌及利用該細(xì)菌制備的微生物菌種劑、微生物肥料以及它們的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的側(cè)孢芽孢桿菌及由該菌株制備的微生物菌種劑和微生物肥料以及它們的制備方法。
背景技術(shù)：
我國(guó)人口多、耕地少，且隨著人口增長(zhǎng)、工業(yè)和城市的發(fā)展耕地逐年遞減。據(jù)有關(guān)部門統(tǒng)計(jì)，我國(guó)人口平均每年增加1600萬(wàn)，而耕地每年減少400萬(wàn)畝。1950年人口 5. 5億， 耕地16. 5億畝，人均耕地2. 99畝，1980年人均耕地1. 51畝，1990年人均耕地降到1. 1 畝，大大低于世界人均耕地4. 03畝的水平，也低于亞洲人均耕地2.1畝的水平。為此，我國(guó)增加農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量的唯一可行途徑是提高單位面積產(chǎn)量。才能滿足工業(yè)發(fā)展和人口增加對(duì)農(nóng)產(chǎn)品的需求，化肥也就順理成章的得到了廣泛應(yīng)用。長(zhǎng)期以來(lái)不合理使用化學(xué)肥料帶來(lái)的土壤板結(jié)、地力下降、生態(tài)破壞、環(huán)境污染以及農(nóng)副產(chǎn)品品質(zhì)下降問(wèn)題，已經(jīng)受到國(guó)家有關(guān)部門和農(nóng)業(yè)科技界的高度重視?；实拇罅渴┯茫斐闪送寥婪柿ο陆?，土壤板結(jié)和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本不斷提高的弊病。近幾十年來(lái)，我國(guó)一直努力探索合理施肥、克服化肥的弊端及提高化肥利用率的有效途徑。農(nóng)業(yè)肥料包括化學(xué)肥料和生物肥料，是我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)不可替代的重要生產(chǎn)資料。 其中，生物肥料作為農(nóng)業(yè)生物工程學(xué)科的重要分支和土壤肥料學(xué)的重要組成部分，近十年無(wú)論在基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究方面都得到了迅速發(fā)展。而農(nóng)業(yè)肥料中的微生物肥料(屬于生物肥料的一種)作為一種重要的農(nóng)業(yè)技術(shù)措施在發(fā)展高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、高效農(nóng)業(yè)中的作用越來(lái)越被人們所認(rèn)識(shí)，這給它的開(kāi)發(fā)、推廣、應(yīng)用提供了相當(dāng)大的發(fā)展空間，特別是在發(fā)展有機(jī)農(nóng)業(yè)、生產(chǎn)A級(jí)、AA級(jí)綠色食品中的不可替代性，充分體現(xiàn)了它潛在的魅力。近幾年來(lái)我國(guó)微生物肥料發(fā)展很快，有多家企業(yè)從事生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)，品種不斷增加，同時(shí)也有一些國(guó)外產(chǎn)品打入國(guó)內(nèi)市場(chǎng)。由于菌種等原因，目前市場(chǎng)的產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，生產(chǎn)應(yīng)用上出現(xiàn)了一些問(wèn)題。據(jù)最近幾年農(nóng)業(yè)部監(jiān)督抽查、跟蹤抽查，國(guó)家統(tǒng)檢的情況看，抽查合格率不到60%，產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題主要是有效菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，保質(zhì)期過(guò)短。微生物肥料中有效活菌數(shù)是產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)，有效活菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，產(chǎn)品質(zhì)量就得不到保證，反映出來(lái)的是應(yīng)用效果不穩(wěn)定，其中原因主要是菌種問(wèn)題，菌種在制備為微生物菌種劑后，在保藏過(guò)程中的存活能力下降，存活時(shí)間變短。這個(gè)問(wèn)題實(shí)際上是由于這些微生物菌種劑所使用的菌種要么不能產(chǎn)生芽孢，要么產(chǎn)生芽孢的能力比較弱，或者產(chǎn)生的芽孢萌發(fā)能力差，不能很好渡過(guò)微生物菌種劑生產(chǎn)過(guò)程中的脅迫條件和庫(kù)存、保藏過(guò)程，在生產(chǎn)使用過(guò)程中表現(xiàn)為菌種活性下降，生產(chǎn)性能減弱，繁殖速度變慢，抗逆性差。因此，菌種問(wèn)題一直困擾我國(guó)微生物肥料的生產(chǎn)和發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中菌種存活能力低、有效活菌數(shù)不達(dá)標(biāo)、保質(zhì)期過(guò)短，從而產(chǎn)品質(zhì)量較差、應(yīng)用效果不穩(wěn)定等問(wèn)題，本發(fā)明的目的之一是提供一種新的側(cè)孢芽孢桿菌。本發(fā)明的目的之二是提供一種由該側(cè)孢芽孢桿菌制備的微生物菌種劑及其制備方法。本發(fā)明的目的之三是提供一種由該微生物菌種劑制備而成的微生物肥料及其制備方法。本發(fā)明提供的新菌種和利用該菌種生產(chǎn)的微生物菌種劑可以非常好地解決菌種數(shù)達(dá)標(biāo)和保質(zhì)期延長(zhǎng)的問(wèn)題，這使得本發(fā)明顯得十分重要和有意義。本發(fā)明中提到的百分比和比例均是指重量百分比和重量比例。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案
一種新的側(cè)孢芽孢桿菌(Bacillus Iaterosporus)，保藏號(hào)為CGMCC No. 5090。具體的， 該菌種被命名為“新側(cè)芽孢桿菌1號(hào)”，該菌種分離自高產(chǎn)農(nóng)田，并經(jīng)馴化，長(zhǎng)期以來(lái)性狀穩(wěn)定。該菌種的生物學(xué)特性為菌體桿狀，屬于芽孢桿菌屬，其細(xì)胞大小為0. 15 0. 18 X215 510um，革蘭氏染色陽(yáng)性，可變?yōu)殛幮?，芽孢為橢圓形，側(cè)生、中生或近中生，孢囊膨大，游離芽孢一邊比另一邊厚(獨(dú)木舟形)。能利用多種氮源、碳源，生長(zhǎng)溫度20-55°C，最佳生長(zhǎng)溫度37 °C，最適PH7. 2。在不良條件下，菌體轉(zhuǎn)化產(chǎn)生芽孢，芽孢對(duì)不良環(huán)境抗逆性強(qiáng)， 可耐受100°C高溫20分鐘和干燥等惡劣條件。新側(cè)芽孢桿菌1號(hào)菌株在2010年7月22日提交中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏編號(hào)為CGMCC No. 5090，生物學(xué)命名Bacillus laterosporus，保藏單位地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。本發(fā)明還要求保護(hù)一種由該菌種制備的微生物菌種劑以及其制備方法。具體如下
本發(fā)明中所使用到的培養(yǎng)基有
新1號(hào)培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基):蛋白胨5g/L，氯化鈉5g/L，牛肉膏5g/L，瓊脂1. 5%_2. 0%， PH 調(diào)至 6. 5-7. 8。新1號(hào)液體培養(yǎng)基該培養(yǎng)基不含瓊脂，其他成分和含量與新1培養(yǎng)基相同，PH 調(diào)至 6. 5-7. 8。新2號(hào)培養(yǎng)基淀粉5g/L，蔗糖lg/L，酵母浸出汁0. 2g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/ L，硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 2g/L,化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8。新3號(hào)培養(yǎng)基淀粉10g/L，蔗糖5g/L，酵母浸出汁0. lg/L,蛋白胨0. 5g/L，豆餅粉 10g/L，硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8。新4號(hào)培養(yǎng)基淀粉10g/L，蔗糖2. 5g/L，酵母浸出汁0. lg/L,蛋白胨0. 5g/L，豆餅粉5g/L，硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8。以上所有培養(yǎng)基均在使用前經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121°C，1. lkg/cm3，30分鐘)，冷卻。本發(fā)明還可采用傳統(tǒng)的微生物菌種劑生產(chǎn)中用到的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法制備微生物菌種劑。傳統(tǒng)的微生物菌種劑生產(chǎn)中用到的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的菌種目錄中有詳細(xì)的描述。微生物菌種劑的具體生產(chǎn)方法
5一、菌種保藏及活化培養(yǎng)
菌種以劃線培養(yǎng)的方式在新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)上保藏，短期保藏條件為4°C，每2 月活化1次；長(zhǎng)期保藏條件為-20°C，每6個(gè)月活化1次。二、微生物培養(yǎng)
1、采用本發(fā)明提供的方法進(jìn)行微生物培養(yǎng)
1)自保存斜面取種后，劃線接入斜面培養(yǎng)基(新1培養(yǎng)基)，30—38°C培養(yǎng)箱靜置黑暗條件下培養(yǎng)36小時(shí)；
2)用無(wú)菌水沖洗斜面，形成菌懸液；
3)將1體積菌懸液接入約20體積的新1液體培養(yǎng)基中，30—38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；
4)將步驟3)得到的菌懸液加入到約5-10倍體積的新2培養(yǎng)基中，30—38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；
5)將步驟4)得到的菌懸液加入到約50-100倍體積的新3培養(yǎng)基中，35-38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；
6)將步驟5)得到的菌懸液加入到約5-10倍體積的新4培養(yǎng)基中，35-38°C培養(yǎng)有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO9個(gè)/ml數(shù)量級(jí)。2、采用傳統(tǒng)微生物發(fā)酵生產(chǎn)方法進(jìn)行微生物培養(yǎng)
培養(yǎng)基淀粉10%，豆餅粉10%，磷酸氫二鉀0. 2%，硫酸銨0. 1%，硫酸鎂0. 05%,氯化鐵 0. 001%，碳酸鈣 0. 01%，酵母膏 0. 01%, PH7. 2-7. 4。將菌種活化后接入IOOOml上述培養(yǎng)基中，三角瓶搖瓶160RPM，30—38°C培養(yǎng)16小時(shí)，然后按1%接種量接種到200L種子發(fā)酵罐中(仍為同種培養(yǎng)基)，通氣，30—38°C培養(yǎng)16 小時(shí)，再按10%接種量接到2000L發(fā)酵罐中(仍為同種培養(yǎng)基)，30— 38°C培養(yǎng)20小時(shí)后升溫至40—45°C在培養(yǎng)10小時(shí)，待80%菌體產(chǎn)生芽孢后停止發(fā)酵。三、微生物菌種劑的生產(chǎn)
將優(yōu)質(zhì)草炭粉(市售)進(jìn)行干熱滅菌后冷卻，根據(jù)想要得到微生物菌種劑中微生物的含量加入到發(fā)酵結(jié)束(傳統(tǒng)微生物發(fā)酵生產(chǎn)方法的或本發(fā)明提供的生產(chǎn)方法的)得到的發(fā)酵液中，進(jìn)行充分?jǐn)嚢瑁迷炝C(jī)造粒，低溫烘干，包裝入庫(kù)成為微生物菌種劑產(chǎn)品，使用時(shí)根據(jù)需要與普通化肥或有機(jī)載體混合即可成為微生物肥料。具體地，草炭粉與發(fā)酵液的混合重量比例為2 - 10 :1，優(yōu)選的，混合比例為3 — 5 1，更優(yōu)選的，混合比例為4:1。具體地，所采用的普通化肥為常規(guī)氮、磷、鉀肥料，微生物菌種劑與普通化肥的混合重量比例為1 :5 - 15，優(yōu)選的，混合比例為1 :8 - 10。所采用的有機(jī)載體可以是本領(lǐng)域常用的有機(jī)肥，可采用雞糞、粉碎玉米芯、粉碎秸稈、煤渣等。具體可采用雞糞、粉碎玉米芯、 煤渣，三者混合比例為1 :1 一 5 :1 — 6，優(yōu)選三者混合比例為1 :2 :3。微生物菌種劑與有機(jī)載體的混合重量比例為1 :5 - 15，優(yōu)選的，混合比例為1 :7 - 10，更優(yōu)選的1 :9。有益的效果
使用本發(fā)明所提供的菌種生產(chǎn)的微生物菌種劑有較高的有效菌數(shù)和較長(zhǎng)的保質(zhì)期。在本菌種使用傳統(tǒng)發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的菌種劑，入庫(kù)時(shí)進(jìn)行有效菌數(shù)檢測(cè)， 其結(jié)果明顯優(yōu)于市售其他微生物菌種劑中的有效菌數(shù)，有效菌數(shù)是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的3. 3倍。解決了菌種數(shù)不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題。在本菌種使用本發(fā)明提供的發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的菌種劑入庫(kù)時(shí)進(jìn)行有效菌數(shù)檢測(cè)，其結(jié)果明顯優(yōu)于市售其他微生物菌種劑中的有效菌數(shù)，有效菌數(shù)是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的4 倍。也解決了菌種數(shù)不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題。本菌種使用傳統(tǒng)發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的菌種劑在倉(cāng)庫(kù)中保存2年后，進(jìn)行有效菌數(shù)檢測(cè)，其結(jié)果明顯優(yōu)于市售其他微生物菌種劑中的有效菌數(shù)，有效菌數(shù)是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的3 倍。解決了保質(zhì)期短的問(wèn)題。本菌種使用本發(fā)明提供的發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的菌種劑在倉(cāng)庫(kù)中保存2年后， 進(jìn)行有效菌數(shù)檢測(cè)，其結(jié)果明顯優(yōu)于市售其他微生物菌種劑中的有效菌數(shù)，有效菌數(shù)是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的3. 6倍。解決了保質(zhì)期短的問(wèn)題。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1利用傳統(tǒng)方法對(duì)新側(cè)1號(hào)進(jìn)行發(fā)酵制備微生物菌種劑
培養(yǎng)基淀粉3%，豆餅粉1%，蛋白胨0. 1%，硫酸銨0. 2%，磷酸氫二鉀0. 2%，酵母粉0. 1%， 碳酸鈣 0. 01%, PH7. 2-7. 4。將菌種活化后接入IOOOml上述培養(yǎng)基中，三角瓶搖瓶160RPM 37°C培養(yǎng)16小時(shí)， 然后按1%接種量接種到200L種子發(fā)酵罐中(仍為同種培養(yǎng)基)，通氣，37°C培養(yǎng)16小時(shí)，再按10%接種量接到2000L發(fā)酵罐中(仍為同種培養(yǎng)基)，37°C培養(yǎng)20小時(shí)后升溫至42°C在培養(yǎng)10小時(shí)，待80%菌體產(chǎn)生芽孢后停止發(fā)酵。檢測(cè)菌體濃度，達(dá)到109，然后按1 :4的重量百分比與進(jìn)行干熱滅菌后冷卻的優(yōu)質(zhì)草炭粉(市售)混合，再進(jìn)行造粒，低溫烘干成為微生物菌種劑。實(shí)施例2利用本發(fā)明提供的方法對(duì)新側(cè)1號(hào)進(jìn)行發(fā)酵制備微生物菌種劑先對(duì)菌種進(jìn)行活化，再用5ml無(wú)菌水沖洗斜面，形成菌懸液，菌懸液接入500ml三角瓶，
該三角瓶含IOOml新1液體培養(yǎng)基，使用搖床培養(yǎng)18小時(shí)，培養(yǎng)條件為37°C，180-200rpm， 檢測(cè)菌體濃度，在濃度達(dá)到IO8數(shù)量級(jí)，進(jìn)行下一步；
將500ml三角瓶中的IOOml菌液轉(zhuǎn)接入2000ml三角瓶中，該三角瓶含700ml新2培養(yǎng)基，使用搖床培養(yǎng)20小時(shí)，培養(yǎng)條件為37°C，180-200rpm ；檢測(cè)菌體濃度，在濃度達(dá)到IO8數(shù)量級(jí)，進(jìn)行下一步；
將2000ml三角瓶中的菌液接入Im3發(fā)酵罐中，接入量為6升，該發(fā)酵罐中含有500L新 3培養(yǎng)基，發(fā)酵條件為溫度36-38°C，罐壓0. 5kg/cm,通氣量20m3/h，培養(yǎng)8小時(shí)；檢測(cè)菌體濃度，在濃度達(dá)到IO8數(shù)量級(jí)，進(jìn)行下一步；
將Im3發(fā)酵罐中的菌液接入5m3發(fā)酵罐，接入量為500升，該發(fā)酵罐含有3m3新4培養(yǎng)基，發(fā)酵條件為溫度36-38°C，罐壓0. 5kg/cm，通氣量120m3/h，培養(yǎng)15小時(shí)。檢測(cè)菌體濃度，在濃度達(dá)到IO9數(shù)量級(jí)，停止發(fā)酵。然后按1 :4的比例與進(jìn)行干熱滅菌后冷卻的優(yōu)質(zhì)草炭粉(市售)混合，再進(jìn)行造粒，低溫烘干成為微生物菌種劑。實(shí)施例3對(duì)利用傳統(tǒng)方法制備的微生物菌種劑在未長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)
按照常規(guī)的稀釋平板記數(shù)法檢測(cè)微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克 (庫(kù)存半個(gè)月)，用無(wú)菌水溶解，用無(wú)菌水稀釋至菌體數(shù)為20—100個(gè)/ml，然后移取Iml稀釋液到無(wú)菌培養(yǎng)皿中，加入適量新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)，充分混合后凝固，在37°C保溫箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，重復(fù)三次以上，以平均值乘以該一克微生物菌種劑稀釋為菌體濃度為20—100個(gè)/ml時(shí)的毫升數(shù)即為每克微生物菌種劑的菌種數(shù)。我們對(duì)利用傳統(tǒng)方法制備的微生物菌種劑在未長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為 6. 6*108個(gè)/克，為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的3. 3倍(國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為2. 0*108個(gè)/克)。解決了菌種劑微生物數(shù)目不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題。實(shí)施例4對(duì)利用本發(fā)明提供的方法制備的微生物菌種劑在未長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)
按照常規(guī)的稀釋平板記數(shù)法檢測(cè)微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克 (庫(kù)存半個(gè)月)，用無(wú)菌水溶解，用無(wú)菌水稀釋至菌體數(shù)為20—100個(gè)/ml，然后移取Iml稀釋液到無(wú)菌培養(yǎng)皿中，加入適量新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)，充分混合后凝固，在37°C保溫箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，重復(fù)三次以上，以平均值乘以該一克微生物菌種劑稀釋為菌體濃度為20—100個(gè)/ml時(shí)的毫升數(shù)即為每克微生物菌種劑的菌種數(shù)。我們對(duì)利用本發(fā)明提供的方法制備的微生物菌種劑在未長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為8*108個(gè)/克，為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的4倍。解決了菌種劑微生物數(shù)目不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題。實(shí)施例5對(duì)利用傳統(tǒng)方法制備的微生物菌種劑在長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)
按照常規(guī)的稀釋平板記數(shù)法檢測(cè)微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克 (庫(kù)存兩年)，用無(wú)菌水溶解，用無(wú)菌水稀釋至菌體數(shù)為20—100個(gè)/ml，然后移取Iml稀釋液到無(wú)菌培養(yǎng)皿中，加入適量新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)，充分混合后凝固，在37°C保溫箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，重復(fù)三次以上，以平均值乘以該一克微生物菌種劑稀釋為菌體濃度為20—100個(gè)/ml時(shí)的毫升數(shù)即為每克微生物菌種劑的菌種數(shù)。我們對(duì)利用傳統(tǒng)方法制備的微生物菌種劑在長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存(兩年)的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為 6*108個(gè)/克，為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的3倍。解決了菌種劑微生物數(shù)目不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題和保藏期太短的問(wèn)題。實(shí)施例6對(duì)利用本發(fā)明提供的方法制備的微生物菌種劑在長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)
按照常規(guī)的稀釋平板記數(shù)法檢測(cè)微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克 (庫(kù)存兩年)，用無(wú)菌水溶解，用無(wú)菌水稀釋至菌體數(shù)為20—100個(gè)/ml，然后移取Iml稀釋液到無(wú)菌培養(yǎng)皿中，加入適量新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)，充分混合后凝固，在37°C保溫箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，重復(fù)三次以上，以平均值乘以該一克微生物菌種劑稀釋為菌體濃度為20—100個(gè)/ml時(shí)的毫升數(shù)即為每克微生物菌種劑的菌種數(shù)。我們對(duì)利用本發(fā)明提供的方法制備的微生物菌種劑在長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存(兩年)的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為7. 2*108個(gè)/克，為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的3. 6倍。解決了菌種劑微生物數(shù)目不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題和保藏期太短的問(wèn)題。實(shí)施例7 未長(zhǎng)期庫(kù)存的微生物菌種劑與肥料混合后使用的效果
將雞糞、粉碎玉米芯、煤渣以1 :2 3重量比混合均勻，調(diào)整含水量為30%，在溫度大于 300C的條件下堆積7—10天，把庫(kù)存半個(gè)月的微生物菌種劑與之以1 :9的重量比混合，制成微生物肥料。
將制成的微生物肥料在不同作物上進(jìn)行與基質(zhì)肥以及等價(jià)常規(guī)肥比較的小區(qū)肥效實(shí)驗(yàn)，每個(gè)小區(qū)面積0. 16畝，實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)。實(shí)驗(yàn)時(shí)每畝施微生物肥料25公斤；基質(zhì)肥(經(jīng)由雞糞、粉碎玉米芯、煤渣以1 :2 3重量百分比混合均勻，調(diào)整含水量為30%后，在溫度大于30°C的條件下堆積7—10天制成)每畝施25公斤；等價(jià)常規(guī)肥(磷酸二氨尿素氯化鉀為3:3:2混合)每畝施25公斤。均作為基肥，一次施完，不追加?？瞻讓?duì)照不施肥。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下(數(shù)據(jù)均為各肥料相對(duì)于空白對(duì)照的增產(chǎn)百分比)
權(quán)利要求
1.一種側(cè)孢芽孢桿菌(Bacillus laterosporus)，其特征在于它在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏號(hào)為CGMCC No. 5090。
2.一種側(cè)孢芽孢桿菌微生物菌種劑，其特征在于該菌種劑由側(cè)孢芽孢桿菌經(jīng)培養(yǎng)發(fā)酵然后與草炭土混合造粒而得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的側(cè)孢芽孢桿菌微生物菌種劑，其特征在于該微生物菌種劑由如下方法制備而成1)將CGMCCNo. 5090菌株劃線接入斜面培養(yǎng)基(新1培養(yǎng)基)，30— 38°C培養(yǎng)箱靜置黑暗條件下培養(yǎng)36小時(shí)；2)用無(wú)菌水沖洗斜面，形成菌懸液；3)將1體積菌懸液接入20體積的新1液體培養(yǎng)基中，30—38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；4)將步驟3)得到的菌懸液加入到5-10倍體積的新2培養(yǎng)基中，30—38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；5)將步驟4)得到的菌懸液加入到50-100倍體積的新3培養(yǎng)基中，35-38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；6)將步驟5)得到的菌懸液加入到5-10倍體積的新4培養(yǎng)基中，35-38°C培養(yǎng)有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO9個(gè)/ml數(shù)量級(jí)，停止發(fā)酵；然后按1 :2 — 10的比例與草炭土混合，造粒， 低溫烘干獲得微生物菌種劑；其中上述培養(yǎng)基為新1號(hào)培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基):蛋白胨5g/L，氯化鈉5g/L，牛肉膏5g/ L,瓊脂 1. 5%-2. 0%, PH 調(diào)至 6. 5-7. 8，新1號(hào)液體培養(yǎng)基該培養(yǎng)基不含瓊脂，其他成分和含量與新1培養(yǎng)基相同，PH調(diào)至 6. 5-7. 8，新2號(hào)培養(yǎng)基淀粉5g/L，蔗糖lg/L，酵母浸出汁0. 2g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/L， 硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 2g/L,氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8，新3號(hào)培養(yǎng)基淀粉10g/L，蔗糖5g/L，酵母浸出汁0. lg/L,蛋白胨0. 5g/L，豆餅粉IOg/ L，硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8，新4號(hào)培養(yǎng)基淀粉10g/L,蔗糖2. 5g/L，酵母浸出汁0. lg/L,蛋白胨0. 5g/L，豆餅粉 5g/L，硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的側(cè)孢芽孢桿菌微生物菌種劑，其特征在于該微生物菌種劑由如下方法制備而成將CGMCC No. 5090菌株活化后接入IOOOml培養(yǎng)基淀粉10%，豆餅粉10%，磷酸氫二鉀 0. 2%，硫酸銨0. 1%，硫酸鎂0. 05%,氯化鐵0. 001%,碳酸鈣0. 01%,酵母膏0. 01%, PH7. 2-7. 4 中，三角瓶搖瓶160RPM，30— 38°C培養(yǎng)16小時(shí)，然后按1%接種量接種到200L種子發(fā)酵罐中(仍為上述同種培養(yǎng)基)，通氣，30—38°C培養(yǎng)16小時(shí)，再按10%接種量接到2000L發(fā)酵罐中(仍為上述同種培養(yǎng)基)，30—38°C培養(yǎng)20小時(shí)后升溫至40—45°C在培養(yǎng)10小時(shí)，待80% 菌體產(chǎn)生芽孢后停止發(fā)酵；然后按1 :2 — 10的比例與草炭土混合，造粒，低溫烘干獲得微生物菌種劑。
5.一種微生物肥料，其特征在于該肥料由權(quán)利要求2 - 4之一所述的側(cè)孢芽孢桿菌微生物菌種劑與常規(guī)化肥和/或有機(jī)載體混合而成。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的微生物肥料，其中所述的常規(guī)化肥為氮肥、磷肥和/或鉀肥， 所述的有機(jī)載體為雞糞、粉碎玉米芯和/或煤渣。
7.—種生產(chǎn)微生物菌種劑的方法，其特征在于具體步驟如下1)將CGMCCNo. 5090菌株劃線接入斜面培養(yǎng)基(新1培養(yǎng)基)，30— 38°C培養(yǎng)箱靜置黑暗條件下培養(yǎng)36小時(shí)；2)用無(wú)菌水沖洗斜面，形成菌懸液；3)將1體積菌懸液接入20體積的新1液體培養(yǎng)基中，30—38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；4)將步驟3)得到的菌懸液加入到5-10倍體積的新2培養(yǎng)基中，30—38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；5)將步驟4)得到的菌懸液加入到50-100倍體積的新3培養(yǎng)基中，35-38°C有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO8個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；6)將步驟5)得到的菌懸液加入到5-10倍體積的新4培養(yǎng)基中，35-38°C培養(yǎng)有氧培養(yǎng)至菌體濃度為IO9個(gè)/ml數(shù)量級(jí)，停止發(fā)酵；然后按1 :2 — 10的比例與草炭土混合，造粒， 低溫烘干獲得微生物菌種劑；其中上述培養(yǎng)基為新1號(hào)培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基):蛋白胨5g/L，氯化鈉5g/L，牛肉膏5g/ L,瓊脂 1. 5%-2. 0%, PH 調(diào)至 6. 5-7. 8，新1號(hào)液體培養(yǎng)基該培養(yǎng)基不含瓊脂，其他成分和含量與新1培養(yǎng)基相同，PH調(diào)至 6. 5-7. 8，新2號(hào)培養(yǎng)基淀粉5g/L，蔗糖lg/L，酵母浸出汁0. 2g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/L， 硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 2g/L,氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8，新3號(hào)培養(yǎng)基淀粉10g/L，蔗糖5g/L，酵母浸出汁0. lg/L,蛋白胨0. 5g/L，豆餅粉IOg/ L，硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8，新4號(hào)培養(yǎng)基淀粉10g/L，蔗糖2. 5g/L，酵母浸出汁0. lg/L，蛋白胨0. 5g/L，豆餅粉 5g/L，硫酸銨lg/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，氯化鈉5g/L，PH調(diào)至6. 5-7. 8，以上所有培養(yǎng)基均在使用前經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121°C，1. lkg/cm3, 30分鐘)，冷卻。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的微生物菌種劑的方法，其特征在于發(fā)酵液與草炭土的混合比例為1 :4。
9.一種生產(chǎn)微生物菌種劑的方法，其特征在于具體步驟如下將CGMCC No. 5090菌株活化后接入IOOOml培養(yǎng)基淀粉10%，豆餅粉10%，磷酸氫二鉀0. 2%，硫酸銨0. 1%，硫酸鎂 0. 05%，氯化鐵0. 001%，碳酸鈣0. 01%，酵母膏0. 01%，PH7. 2-7. 4中，三角瓶搖瓶160RPM，30— 38°C培養(yǎng)16小時(shí)，然后按1%接種量接種到200L種子發(fā)酵罐中(仍為上述同種培養(yǎng)基)，通氣，30— 38°C培養(yǎng)16小時(shí)，再按10%接種量接到2000L發(fā)酵罐中(仍為上述同種培養(yǎng)基)， 30—380C培養(yǎng)20小時(shí)后升溫至40—45°C在培養(yǎng)10小時(shí)，待80%菌體產(chǎn)生芽孢后停止發(fā)酵； 然后按1 :2 — 10的重量比例與草炭土混合，造粒，低溫烘干獲得微生物菌種劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的微生物菌種劑的方法，其特征在于發(fā)酵液與草炭土的混合比例為1 :4。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新的側(cè)孢芽孢桿菌(Bacilluslaterosporus)，保藏號(hào)為CGMCC No.5090及由該菌株制備的微生物菌種劑和微生物肥料以及它們的制備方法。使用本發(fā)明所提供的菌種生產(chǎn)的微生物菌種劑有較高的有效菌數(shù)和較長(zhǎng)的保質(zhì)期。
文檔編號(hào)C05G1/00GK102399710SQ20111026043
公開(kāi)日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2011年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月5日
發(fā)明者王莉, 麻林濤 申請(qǐng)人:王莉, 麻林濤