專利名稱：小鼠創(chuàng)傷失血性休克模型的建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動物實驗?zāi)Ｐ图夹g(shù)領(lǐng)域，主要是一種小鼠創(chuàng)傷失血性休克模型的建立方法。
背景技術(shù)：
無論和平或戰(zhàn)爭年代，創(chuàng)傷失血性休克都是一種常見的臨床重癥。在臨床實踐中， 創(chuàng)傷死亡中1/3由創(chuàng)傷性休克引起。創(chuàng)傷失血性休克后，機(jī)體免疫功能紊亂引起的膿毒血癥及多臟器功能衰竭越來越成為其導(dǎo)致死亡的最主要的原因。為了開展創(chuàng)傷失血性休克引起的一系列病理生理改變的相關(guān)研究，比如炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、微循環(huán)灌注、器官損傷等問題，建立一個穩(wěn)定的創(chuàng)傷失血性休克模型顯得至關(guān)重要。目前，創(chuàng)傷失血性休克模型大致可以分為大動物模型和小動物模型。然而，大動物模型(豬、狗、牛、羊等)具有很多缺點，比如個體差異大、資金花費高、難于飼養(yǎng)繁殖等。相反，小動物模型(大鼠、小鼠等)具有明顯的優(yōu)點，比如品種多、個體差異小、花費低、易于飼養(yǎng)繁殖等。因此，越來越多的關(guān)于創(chuàng)傷失血性休克的科研建立在大鼠或小鼠的模型上。在過去的幾年中，我們的科研團(tuán)隊已經(jīng)建立了大鼠的創(chuàng)傷失血性休克模型，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了一定的研究，相關(guān)的論文已經(jīng)發(fā)表在Critical Care Medicine,Shock.The Journal of Trauma等雜志上。相對于大鼠模型，小鼠模型又有其獨特的優(yōu)勢，比如小鼠的試劑較多、基因敲出小鼠和轉(zhuǎn)基因小鼠的應(yīng)用等等。因此，建立小鼠的創(chuàng)傷失血性休克模型對創(chuàng)傷研究來說具有必要性。雖然，前人嘗試了一些方法去建立小鼠的創(chuàng)傷失血性休克模型，但是因為這些方法各有缺點，所以至今尚未建立一個標(biāo)準(zhǔn)的小鼠創(chuàng)傷失血性休克模型。 由于以上原因，促使我們?nèi)ソ⒁粋€既能模擬臨床實際、又能便以操作的小鼠創(chuàng)傷失血性休克模型。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的正是要克服上述技術(shù)的不足，而提供一種小鼠創(chuàng)傷失血性休克模型的建立方法，監(jiān)測小鼠的各項病理生理指標(biāo)，為科研和臨床提供應(yīng)用的平臺。本發(fā)明解決其技術(shù)問題采用的技術(shù)方案這種小鼠創(chuàng)傷失血性休克模型的建立方法，步驟如下(1)鼠尾無創(chuàng)測壓選取8-12周的體重20 25g左右的雄性C57BL/6小鼠，水合氯醛作為麻醉劑，以300mg/kg向腹膜內(nèi)注射；麻醉后仰臥位綁定小鼠四肢，并用無創(chuàng)鼠尾測壓儀將小鼠尾巴固定，以此來檢測小鼠的平均動脈壓(MAP)、心率等生理指標(biāo)；(2)股骨離斷創(chuàng)傷固定小鼠后，沿小鼠左側(cè)髕骨處做一長約0. 5cm縱行切口，暴露肌腱，剪斷肌腱與股骨，無菌棉花填塞骨髓腔，縫合肌腱和切口 ；(3)頸動脈置管，放血、補(bǔ)液沿小鼠頸正中線做一長約Icm的縱行切口，分離后充分暴露頸內(nèi)結(jié)構(gòu)，于遠(yuǎn)心端結(jié)扎右側(cè)頸動脈，經(jīng)右側(cè)頸動脈插管并固定，在無創(chuàng)鼠尾測壓儀的監(jiān)測下逐漸放血至休克(平均動脈壓為35士5mmHg)，記錄放血量，并且維持休克狀態(tài)90min ；然后經(jīng)右頸動脈的導(dǎo)管補(bǔ)乳酸林格氏液，補(bǔ)液量為失血量2倍，用微量注射泵15分鐘左右完成補(bǔ)液。補(bǔ)液完畢后拔出導(dǎo)管并結(jié)扎右頸動脈，縫合頸部切口 ；(4)激光多普勒監(jiān)測微循環(huán)灌注在整個創(chuàng)傷失血性休克及復(fù)蘇過程中，對小鼠的平均動脈壓(MAP)、心率等生理指標(biāo)進(jìn)行檢測，并用激光多普勒監(jiān)測在小腸、肝臟、腎臟等重要器官上的微循環(huán)灌注情況。本發(fā)明有益的效果是1、該模型能夠模擬臨床實踐。2、該創(chuàng)傷休克打擊能夠引起微循環(huán)改變，器官組織及功能的損傷。3、該模型具有可操作性，且能夠加載多種干預(yù)。4、相對于大鼠，雖然小鼠的操作難度增加，但是能夠增加應(yīng)用面，比如免疫學(xué)研究以及轉(zhuǎn)基因小鼠的應(yīng)用。


圖1是本發(fā)明在失血結(jié)束時，與對照組(Sham)相比的示意圖；圖2是本發(fā)明在補(bǔ)液后M小時，與對照組(Sham)相比的示意圖。
具體實施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，下面結(jié)合舉例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的舉例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。如圖所示，這種小鼠創(chuàng)傷失血性休克模型的建立方法，步驟如下(1)鼠尾無創(chuàng)測壓選取8-12周的體重20 25g左右的雄性C57BL/6小鼠，水合氯醛作為麻醉劑，以300mg/kg向腹膜內(nèi)注射；麻醉后仰臥位綁定小鼠四肢，并用無創(chuàng)鼠尾測壓儀將小鼠尾巴固定，以此來檢測小鼠的平均動脈壓(MAP)、心率等生理指標(biāo)；(2)股骨離斷創(chuàng)傷固定小鼠后，沿小鼠左側(cè)髕骨處做一長約0. 5cm縱行切口，暴露肌腱，剪斷肌腱與股骨，無菌棉花填塞骨髓腔，縫合肌腱和切口 ；(3)頸動脈置管，放血、補(bǔ)液沿小鼠頸正中線做一長約Icm的縱行切口，分離后充分暴露頸內(nèi)結(jié)構(gòu)，于遠(yuǎn)心端結(jié)扎右側(cè)頸動脈，經(jīng)右側(cè)頸動脈插管并固定，在無創(chuàng)鼠尾測壓儀的監(jiān)測下逐漸放血至休克(平均動脈壓為35士5mmHg)，記錄放血量，并且維持休克狀態(tài) 90min ；然后經(jīng)右頸動脈的導(dǎo)管補(bǔ)乳酸林格氏液，補(bǔ)液量為失血量2倍，用微量注射泵15分鐘左右完成補(bǔ)液。補(bǔ)液完畢后拔出導(dǎo)管并結(jié)扎右頸動脈，縫合頸部切口 ；(4)激光多普勒監(jiān)測微循環(huán)灌注在整個創(chuàng)傷失血性休克及復(fù)蘇過程中，對小鼠的平均動脈壓(MAP)、心率等生理指標(biāo)進(jìn)行檢測，并用激光多普勒監(jiān)測在小腸、肝臟、腎臟等重要器官上的微循環(huán)灌注情況。結(jié)果如圖6所示，與對照組(Sham)相比，在失血結(jié)束時，創(chuàng)傷失血性休克組(TH/ S)的平均動脈壓明顯降低，在小腸(Intestine)、肝臟(Liver)、腎臟(Kidney)等重要器官上的微循環(huán)灌注(Perfusion)明顯降低；但是在補(bǔ)液結(jié)束時，對照組(Sham)與創(chuàng)傷失血性休克組(TH/S)無明顯差異。*p < 0. 05，#p < 0. 01。如圖7所示，在補(bǔ)液后M小時，與對照組(Sham)相比，創(chuàng)傷失血性休克組(TH/S)在小腸(Intestine)、肝臟(Liver)、腎臟
4(Kidney)等重要器官上的組織損傷明顯增加(箭頭所示)，在小腸、肝臟、腎臟等重要器官上的組織損傷評分(histological injury scores)明顯增加。*p < 0. 05，#p < 0· 01。本技術(shù)經(jīng)過大量動物實驗證明，嚴(yán)重的創(chuàng)傷失血性休克能夠引起明顯的病理生理改變。雖然通過液體復(fù)蘇能夠迅速恢復(fù)血流動力學(xué)的穩(wěn)定，但是在小腸、肝臟、腎臟等重要器官上的組織損傷仍然明顯增加?？傊?，小鼠的創(chuàng)傷失血性休克模型作為一個動物實驗?zāi)Ｐ停梢詾榭蒲泻团R床提供一個應(yīng)用平臺，以便在此基礎(chǔ)上進(jìn)行更加深入的研究。同時，小鼠的創(chuàng)傷失血性休克模型可以為創(chuàng)傷免疫的研究提供理論基礎(chǔ)，為臨床救治并發(fā)嚴(yán)重感染的創(chuàng)傷性休克患者提供新的思路。可以理解的是，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，對本發(fā)明的技術(shù)方案及發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變都應(yīng)屬于本發(fā)明所附的權(quán)利要求的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1. 一種小鼠創(chuàng)傷失血性休克模型的建立方法，其特征在于步驟如下(1)鼠尾無創(chuàng)測壓選取8-12周的體重20 25g的雄性C57BL/6小鼠，水合氯醛作為麻醉劑，以300mg/kg向腹膜內(nèi)注射；麻醉后仰臥位綁定小鼠四肢，并用無創(chuàng)鼠尾測壓儀將小鼠尾巴固定，來檢測小鼠的平均動脈壓、心率生理指標(biāo)；(2)股骨離斷創(chuàng)傷固定小鼠后，沿小鼠左側(cè)髕骨處做一長0.5cm縱行切口，暴露肌腱， 剪斷肌腱與股骨，無菌棉花填塞骨髓腔，縫合肌腱和切口 ；(3)頸動脈置管，放血、補(bǔ)液沿小鼠頸正中線做一長Icm的縱行切口，分離后充分暴露頸內(nèi)結(jié)構(gòu)，于遠(yuǎn)心端結(jié)扎右側(cè)頸動脈，經(jīng)右側(cè)頸動脈插管并固定，在無創(chuàng)鼠尾測壓儀的監(jiān)測下逐漸放血至休克，平均動脈壓為35士5mmHg，記錄放血量，并且維持休克狀態(tài)90min ；然后經(jīng)右頸動脈的導(dǎo)管補(bǔ)乳酸林格氏液，補(bǔ)液量為失血量2倍，用微量注射泵15分鐘完成補(bǔ)液， 補(bǔ)液完畢后拔出導(dǎo)管并結(jié)扎右頸動脈，縫合頸部切口 ；(4)激光多普勒監(jiān)測微循環(huán)灌注在整個創(chuàng)傷失血性休克及復(fù)蘇過程中，對小鼠的平均動脈壓、心率生理指標(biāo)進(jìn)行檢測，并用激光多普勒監(jiān)測在小腸、肝臟、腎臟重要器官上的微循環(huán)灌注情況。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種小鼠創(chuàng)傷失血性休克模型的建立方法，步驟如下(1)鼠尾無創(chuàng)測壓(2)股骨離斷創(chuàng)傷固定小鼠后，沿小鼠左側(cè)髕骨處做一長0.5cm縱行切口；(3)頸動脈置管，放血、補(bǔ)液沿小鼠頸正中線做一長1cm的縱行切口，于遠(yuǎn)心端結(jié)扎右側(cè)頸動脈，經(jīng)右側(cè)頸動脈插管并固定，在無創(chuàng)鼠尾測壓儀的監(jiān)測下逐漸放血至休克，并且維持休克狀態(tài)90min；補(bǔ)液完畢后縫合頸部切口；(4)激光多普勒監(jiān)測微循環(huán)灌注。本發(fā)明有益的效果是1、該模型能夠模擬臨床實踐。2、該創(chuàng)傷休克打擊能夠引起微循環(huán)改變，器官組織及功能的損傷。3、該模型具有可操作性，且能夠加載多種干預(yù)。
文檔編號A61D1/00GK102379754SQ20111031874
公開日2012年3月21日 申請日期2011年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月19日
發(fā)明者唐寅, 張勻, 梁廷波, 白雪莉, 陳偉, 陳靈曉 申請人:梁廷波