專利名稱：一種黃連木種子內(nèi)生菌去除及快速萌發(fā)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)與現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種黃連木種子內(nèi)生菌去除及快速萌發(fā)的方法。
背景技術(shù)：
黃連木C^i1Siacia chinensis Bunge)是一種重要的多年生木本油料植物，分布范圍廣，可在荒山荒地和沙地種植，適宜大面積造林，而且種子含油率高達(dá)40%以上，用黃連木種子生產(chǎn)的生物柴油是清潔的可再生能源，是優(yōu)質(zhì)的石油柴油代替品，已經(jīng)被確定為未來生態(tài)能源林建設(shè)和生物質(zhì)柴油產(chǎn)業(yè)優(yōu)先發(fā)展樹種。由于其被作為生物質(zhì)能源樹種的前景看好，目前針對(duì)黃連木的研究越來越多，但基本都是集中在栽培技術(shù)等方面，而對(duì)于其組織培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化方面的研究較少；目前，國(guó)家對(duì)于發(fā)展生物能源林建設(shè)愈來愈重視，通過分子手段來進(jìn)行遺傳改良是一種較快的方式。然而，黃連木存在種子消毒不易徹底、萌芽緩慢、發(fā)芽率低等問題，因此需要一種既能較好的去除其污染又能提高發(fā)芽率的方法。通過使用一般的消毒方式效果很是不理想，因此開發(fā)一種低污染、高發(fā)芽率的方法更加顯得迫在眉睫。

發(fā)明內(nèi)容
黃連木無菌外植體的獲得是進(jìn)行組織培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化研究的基礎(chǔ)。然而，由于黃連木種子消毒不易徹底，特別是儲(chǔ)存時(shí)間長(zhǎng)或梅雨季節(jié)更是甚難，嚴(yán)重影響了其研究進(jìn)度。 因此，發(fā)明一種不僅消毒效果好而且發(fā)芽率高，獲得的無菌苗比較健壯的方法是本發(fā)明的重要特征。本發(fā)明的目的在于針對(duì)黃連木普通消毒效果不理想的問題，設(shè)計(jì)一種不但消毒效果好而且獲得的無菌苗發(fā)芽率高、生長(zhǎng)健壯的方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
一種黃連木種子內(nèi)生菌去除及快速萌發(fā)的方法，其特征在于將去除外殼的黃連木種子經(jīng)乙醇和次氯酸鈉消毒處理，然后將種子浸泡在水中進(jìn)行超聲處理，沖洗干凈后接種在種子萌發(fā)培養(yǎng)基上，獲得無菌健壯的實(shí)生苗。所述的黃連木內(nèi)生菌去除及快速萌發(fā)的方法，其特征在于所述的乙醇和次氯酸鈉消毒處理是指將種子先用65-75%的乙醇處理1分鐘，無菌水沖洗一次，然后用15-25%的次氯酸鈉處理10分鐘。所述的黃連木內(nèi)生菌去除及快速萌發(fā)的方法，其特征在于所述的超聲處理是指將種子浸泡在無菌水中，然后放在溫度設(shè)置在18-22°C的超聲儀器中處理8-12分鐘，之后無菌水清洗干凈。所述的黃連木內(nèi)生菌去除及快速萌發(fā)的方法，其特征在于所述的萌發(fā)培養(yǎng)基是指:l/2MS+6-BA2. 0 mg/L+SNP15 mg/L+ 葡萄糖 20g/L+ 瓊脂 8 g/L, pH 調(diào)至 5. 8-6. 0。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明巧妙的將普通消毒與超聲波處理相結(jié)合，通過他們之間的協(xié)同作用，顯著降低了種子內(nèi)生菌的污染率，同時(shí)提高了種子的發(fā)芽率；將消毒干凈的種子接種在特定培養(yǎng)基上，獲得了生長(zhǎng)健壯的無菌苗。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 黃連木種子內(nèi)生菌去除及快速萌發(fā)的具體操作方法如下
1、將去除外殼的黃連木種子首先用純水清洗幾次，然后用70%的乙醇處理1分鐘，無菌水沖洗一次，接著用20%的次氯酸鈉處理10分鐘，期間不停地?fù)u動(dòng)，無菌水沖洗3-4次；
2、經(jīng)沖洗干凈的種子浸泡在無菌三角燒瓶中，放入超聲儀器20°C超聲處理10分鐘，之后無菌水沖洗至干凈；
3、將消毒干凈的種子接種在萌發(fā)培養(yǎng)基1/2MS+6-BA2.0mg/L+SNP15 mg/L+葡萄糖 20g/L+瓊脂8 g/L，一周左右即可獲得無內(nèi)生菌污染、發(fā)芽率高且生長(zhǎng)粗壯的無菌實(shí)生苗。
權(quán)利要求
1.一種黃連木種子內(nèi)生菌去除及快速萌發(fā)的方法，其特征在于將去除外殼的黃連木種子經(jīng)乙醇和次氯酸鈉消毒處理，然后將種子浸泡在水中進(jìn)行超聲處理，沖洗干凈后接種在種子萌發(fā)培養(yǎng)基上，獲得無菌健壯的實(shí)生苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃連木內(nèi)生菌去除及快速萌發(fā)的方法，其特征在于所述的乙醇和次氯酸鈉消毒處理是指將種子先用65-75%的乙醇處理1分鐘，無菌水沖洗一次，然后用15-25%的次氯酸鈉處理10分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃連木內(nèi)生菌去除及快速萌發(fā)的方法，其特征在于所述的超聲處理是指將種子浸泡在無菌水中，然后放在溫度設(shè)置在18-22°C的超聲儀器中處理 8-12分鐘，之后無菌水清洗干凈。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃連木內(nèi)生菌去除及快速萌發(fā)的方法，其特征在于所述的萌發(fā)培養(yǎng)基是指l/2MS+6-BA2. 0 mg/L+SNP15 mg/L+葡萄糖20g/L+瓊脂8 g/L，pH調(diào)至 5. 8-6. O0
全文摘要
本發(fā)明公開了一種黃連木種子內(nèi)生菌去除及快速萌發(fā)的方法，其主要是將去除外殼的黃連木種子經(jīng)乙醇和次氯酸鈉消毒處理，然后將種子浸泡在水中進(jìn)行超聲處理，沖洗干凈后接種在種子萌發(fā)培養(yǎng)上，獲得無菌健壯的實(shí)生苗。本發(fā)明不僅解決了種子由于消毒不徹底而造成的污染及消毒時(shí)間過長(zhǎng)而影響其發(fā)芽率的難點(diǎn)，更為重要的是同時(shí)提高了種子的發(fā)芽率，且實(shí)生苗生長(zhǎng)健壯，為黃連木組織培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化提供基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)A01C1/02GK102498793SQ201110323130
公開日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月22日
發(fā)明者侯金艷, 吳麗芳, 李明浩 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院