專利名稱：一種可直接移栽的鐵皮石斛育苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種組培方法，尤其是針對(duì)鐵皮石斛的組培方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
石斛屬植物中有不少是名貴中藥，在《本草綱目》中石斛被列為上品。我國(guó)76種石斛屬植物中有近40種作藥用，著名的有金釵石斛、鐵皮石斛、霍山石斛等，具有強(qiáng)陰益精、 補(bǔ)腎益力、輕生延年等作用，其藥用與保健功能日益被挖掘，其應(yīng)用范圍正迅速擴(kuò)大。同時(shí)， 石斛屬植物約有四分之一可供觀賞，以花艷麗而著稱，近年作為觀賞植物發(fā)展迅速，已形成獨(dú)立產(chǎn)業(yè)。鑒于集藥用和觀賞于一體的價(jià)值，使之過(guò)度的采伐利用，加之其本體自然繁殖率低，造成了石斛供需之間的緊張狀況，我國(guó)已將其列為瀕于絕滅的受保護(hù)的中藥品種之一。自1960年法國(guó)人Gmorel利用石斛基尖組織培養(yǎng)無(wú)病毒植株的無(wú)性繁殖技術(shù)創(chuàng)立以來(lái)，石斛組織培養(yǎng)技術(shù)逐步深化，尤其近年來(lái)石斛組織培養(yǎng)育苗逐步趨向產(chǎn)業(yè)化，石斛組織培養(yǎng)的最佳條件，包括適宜的光照、溫度、濕度、PH以及如何選用外植體，如何配置營(yíng)養(yǎng)適宜的培養(yǎng)液等都取得長(zhǎng)足進(jìn)展。但是通過(guò)傳統(tǒng)的石斛組培方法，特別是鐵皮石斛組培方法培育出來(lái)的苗種由于還不夠壯實(shí)，生命力較弱，因此在移栽到自然環(huán)境中前都需要在大棚內(nèi)進(jìn)行3-5個(gè)月的訓(xùn)化(煉苗)，而且其移栽后的生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)，造成育苗成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種組培苗無(wú)需訓(xùn)化，而可直接移栽的鐵皮石斛組培方法，提高了鐵皮石斛組培苗的擴(kuò)繁速度、生產(chǎn)質(zhì)量、移栽成活率，并縮短了移栽后鐵皮石斛的生長(zhǎng)周期，提升了成年石斛的質(zhì)量。為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的鐵皮石斛育苗方法包括下列步驟
1)將鐵皮石斛的蒴果種子經(jīng)消毒后，播入專用培養(yǎng)基I+專用組培杯+專用培養(yǎng)室里， 進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為M-26°C，濕度為65-75%，光照度為1000-20001X，光照時(shí)間為 10-12小時(shí)/日，培養(yǎng)45-60天，外植體萌芽形成綠色的原球莖；
2)將原球莖轉(zhuǎn)入專用培養(yǎng)基II+專用組培杯+專用培養(yǎng)室里，進(jìn)行原球莖增殖、分化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為2248°C，濕度為65-75%，光照度為1500_25001x，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/ 日，培養(yǎng)60天，由原球莖培育成1-2CM小苗，同時(shí)伴隨著有部分新原球莖產(chǎn)生，再將小苗轉(zhuǎn)入同樣的組培杯、培養(yǎng)基和環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)1個(gè)月，將小苗培養(yǎng)成中苗，苗高為34cm ；
3)將中苗轉(zhuǎn)入專用培養(yǎng)基III+專用組培杯+專用培養(yǎng)室里，培養(yǎng)溫度為20-30°C，濕度為65-75%，光照度為2000-40001x，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/日，培養(yǎng)60天，由小苗培育成高為5-9CM，莖粗為0. 4-0. 5CM的壯苗；
所述專用培養(yǎng)基I包括1/2MS基本培養(yǎng)基+芋頭汁15-25% (V/V)+瓊脂4_6g/L，PH值為 5. 2-5. 8 ；
所述專用培養(yǎng)基II包括MS基本培養(yǎng)基+ BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. 1-0. 2mg/L+瓊脂 4-6g/L+ 土豆汁 6-10% (V/V) + 香蕉汁 10-14% (V/V)，PH 值為 5. 4-5. 8 ；所述專用培養(yǎng)基III包括MS基本培養(yǎng)基+ NAA (α-萘乙酸)0. l-0.2mg/L+香蕉汁
8-10%(V/V) + 土豆汁 5-7% (V/V) + 芋頭汁 8-12% (V/V) + 瓊脂 4_6g/L，PH 值為 5. 4-5. 8 ； 所述專用組培杯為具有適度空間容積的透明的塑料杯體，所述塑料杯體杯口通過(guò)透明
的塑料膜塑封，所述塑料膜上設(shè)置濾膜；
所述專用培養(yǎng)室為滅菌培養(yǎng)室，所述滅菌室采用自然光照，其頂端設(shè)置采光瓦和遮陽(yáng)網(wǎng)，并設(shè)有溫度濕度調(diào)節(jié)設(shè)備。本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)化方案，其特征在于所述塑料杯體為圓柱形，杯口直徑為
9-10cm,杯底直徑為5-6cm,杯高為 9-lOcm，壁厚 0. 15-0. 25mm。所述的組培苗可直接移栽的鐵皮石斛組培方法，其特征在于所述專用培養(yǎng)基I包括1/2MS基本培養(yǎng)基+芋頭汁20%(V/V) +瓊脂5g/L，PH值為5. 5。所述的組培苗可直接移栽的鐵皮石斛組培方法，其特征在于所述專用培養(yǎng)基II包括MS基本培養(yǎng)基+ BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. 15mg/L+瓊脂5g/L+ 土豆汁8% (V/V) +香蕉汁 12%(V/V), PH 值為 5.5。所述的組培苗可直接移栽的鐵皮石斛組培方法，其特征在于所述專用培養(yǎng)基III包括MS基本培養(yǎng)基+NAA ( α -萘乙酸)0. 15mg/L+香蕉汁9% (V/V) + 土豆汁6% (V/V) +芋頭汁 10%(V/V) + 瓊脂 5g/L，PH 值為 5. 5。本發(fā)明改進(jìn)了現(xiàn)有的培養(yǎng)基配方，滿足了組培苗在各個(gè)生長(zhǎng)階段對(duì)各種營(yíng)養(yǎng)成份的需要與均衡，獨(dú)創(chuàng)了具有透光性能好，感染率低空氣充足的專用組培杯，并提供清潔適宜的自然光環(huán)境，在三者的共同作用下，可以由一棵鐵皮石斛的蒴果種子通過(guò)7-8個(gè)月的組織培養(yǎng)，培育出20萬(wàn)株的石斛組培苗，該組培苗無(wú)需傳統(tǒng)的3-5個(gè)月的訓(xùn)化過(guò)程，可直接移栽到室外，移栽成活率在98%上以。本發(fā)明方法不僅提高了鐵皮石斛組培苗的擴(kuò)繁速度、生產(chǎn)質(zhì)量、移栽成活率，而且有效地縮短了鐵皮石斛大棚培育時(shí)間，提升成年鐵皮石斛的品質(zhì)，這對(duì)瀕危緊缺藥用植物資源再生和持續(xù)利用有著十分積極的意義。


下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。圖1為本發(fā)明專用組培杯的結(jié)構(gòu)示意圖。圖中1-透明塑料杯、2-塑料膜塑封、3-濾膜。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1。第1階段，將成熟壯實(shí)的鐵皮石斛的蒴果種子經(jīng)消毒后，在一個(gè)無(wú)菌的環(huán)境中，將其播入內(nèi)裝有1/2MS基本培養(yǎng)基+芋頭汁15%(V/V) +瓊脂4g/L的培養(yǎng)基的透明塑料杯體 1里進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，塑料杯體1杯口通過(guò)透明的塑料膜2塑封，塑料膜2上設(shè)置濾膜3。最后送入滅菌培養(yǎng)室里培養(yǎng)，滅菌室屋采用自然光照，其頂設(shè)置采光瓦和遮陽(yáng)網(wǎng)層，內(nèi)部設(shè)有溫度濕度調(diào)節(jié)設(shè)備。培養(yǎng)溫度為M_26°C，濕度為65-75%，光照度為1000-20001χ，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/日，培養(yǎng)45-60天，外植體萌芽形成綠色的原球莖。第2階段，將原球莖在一個(gè)無(wú)菌的環(huán)境中，將其轉(zhuǎn)入內(nèi)裝有MS基本培養(yǎng)基+
4BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. lmg/L+瓊脂4g/L+ 土豆汁6% (V/V) +香蕉汁10% (V/V)的培養(yǎng)基的透明塑料杯體1里進(jìn)行原球莖增殖、分化培養(yǎng)，塑料杯體1杯口通過(guò)透明的塑料膜2塑封， 塑料膜2上設(shè)置濾膜3。最后送入無(wú)菌培養(yǎng)室里培養(yǎng)，無(wú)菌室屋頂設(shè)置采光瓦和遮陽(yáng)網(wǎng)層， 培養(yǎng)溫度為2248°C，濕度為65-75%，光照度為1500_25001x，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/日， 培養(yǎng)60天，由原球莖培育成1-2CM小苗，同時(shí)伴隨著有部分新原球莖產(chǎn)生，再將小苗轉(zhuǎn)入同樣的組培杯、培養(yǎng)基和環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)1個(gè)月，將小苗培養(yǎng)成中苗，苗高為34cm。第3階段，將中苗在一個(gè)無(wú)菌的環(huán)境中，將其轉(zhuǎn)入內(nèi)裝有轉(zhuǎn)入MS基本培養(yǎng)基+ NAA ( α -萘乙酸)0. lmg/L+ 香蕉汁 8% (V/V) + 土豆汁 6% (V/V) + 芋頭汁 8% (V/V) + 瓊脂 4g/ L的培養(yǎng)基的透明塑料杯體1里進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，塑料杯體1杯口通過(guò)透明的塑料膜2塑封， 塑料膜2上設(shè)置濾膜3。最后送入無(wú)菌培養(yǎng)室里培養(yǎng)，無(wú)菌室屋采用自然光照，其頂設(shè)置采光瓦和遮陽(yáng)網(wǎng)層，培養(yǎng)溫度為20-30°C，濕度為65-75%，光照度為2000-40001x，光照時(shí)間為 10-12小時(shí)/日，培養(yǎng)60天，由小苗培育成高為5-9CM，莖粗為0. 4-0. 5CM的壯苗。進(jìn)一步優(yōu)化方法，上述步驟中，培養(yǎng)基的PH值在5. 4，塑料杯體1為柱形，杯口直徑為9-10cm，杯底直徑為5-6cm，杯高為9-lOcm，壁厚0. 15-0. 25mm時(shí)，最為適宜。實(shí)施例2
在實(shí)施例1中，當(dāng)專用培養(yǎng)基I配方體積比為1/2MS基本培養(yǎng)基+芋頭汁25%(V/V) +瓊脂6g/L，PH值為5. 8或?yàn)?/2MS基本培養(yǎng)基+芋頭汁20% (V/V) +瓊脂5g/L，PH值為5. 5 ； 或?qū)Ｓ门囵B(yǎng)基II配方體積比為MS基本培養(yǎng)基+ BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. 2mg/L+瓊脂 6g/L+ 土豆汁10% (V/V) +香蕉汁14% (V/V)，PH值為5. 8或?yàn)镸S基本培養(yǎng)基+ BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. 15mg/L+瓊脂5g/L+ 土豆汁8%(V/V) +香蕉汁12%(V/V)，PH值為5. 5 ；
或?qū)Ｓ门囵B(yǎng)基III配方體積比為MS基本培養(yǎng)基+ NAA (α-萘乙酸)0.2mg/L+香蕉汁 10% (V/V) + 土豆汁7% (V/V) +芋頭汁12% (V/V) +瓊脂6g/L，PH值為5. 8或?yàn)镸S基本培養(yǎng)基 + NAA (α -萘乙酸)0. 15mg/L+ 香蕉汁 9% (V/V) + 土豆汁 6% (V/V) + 芋頭汁 10% (V/V) + 瓊脂5g/L，PH值為5. 5時(shí)，也能達(dá)到實(shí)施例1的效果。 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種可直接移栽的鐵皮石斛育苗方法，其特征在于該育苗方法包括下列步驟1)將鐵皮石斛的蒴果種子經(jīng)消毒后，播入專用培養(yǎng)基I+專用組培杯+專用培養(yǎng)室里， 進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為M-26°C，濕度為65-75%，光照度為1000-20001X，光照時(shí)間為 10-12小時(shí)/日，培養(yǎng)45-60天，外植體萌芽形成綠色的原球莖；2)將原球莖轉(zhuǎn)入專用培養(yǎng)基II+專用組培杯+專用培養(yǎng)室里，進(jìn)行原球莖增殖、分化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為2248°C，濕度為65-75%，光照度為1500_25001x，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/ 日，培養(yǎng)60天，由原球莖培育成1-2CM小苗，同時(shí)伴隨著有部分新原球莖產(chǎn)生，再將小苗轉(zhuǎn)入同樣的組培杯、培養(yǎng)基和環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)1個(gè)月，將小苗培養(yǎng)成中苗，苗高為34cm ；3)將中苗轉(zhuǎn)入專用培養(yǎng)基III+專用組培杯+專用培養(yǎng)室里，培養(yǎng)溫度為20-30°C，濕度為65-75%，光照度為2000-40001x，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/日，培養(yǎng)60天，由小苗培育成高為5-9CM，莖粗為0. 4-0. 5CM的壯苗；所述專用培養(yǎng)基I包括1/2MS基本培養(yǎng)基+芋頭汁15-25% (V/V)+瓊脂4-6g/L，PH值為 5. 2-5. 8 ；所述專用培養(yǎng)基II包括MS基本培養(yǎng)基+ BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. 1-0. 2mg/L+瓊脂 4-6g/L+ 土豆汁 6-10% (V/V) + 香蕉汁 10-14% (V/V)，PH 值為 5. 4-5. 8 ；所述專用培養(yǎng)基III包括MS基本培養(yǎng)基+ NAA (α-萘乙酸)0. l-0.2mg/L+香蕉汁 8-10% (V/V) + 土豆汁 5-7% (V/V) + 芋頭汁 8-12% (V/V) + 瓊脂 4_6g/L，PH 值為 5. 4-5. 8 ；所述專用組培杯為具有適度容積的透明的塑料杯體(1)，所述塑料杯體(1)杯口通過(guò)透明的塑料膜(2 )塑封，所述塑料膜(2 )上設(shè)置濾膜(3 )；所述專用培養(yǎng)室為滅菌培養(yǎng)室，所述滅菌室采用自然光照，其頂端設(shè)置采光瓦和遮陽(yáng)網(wǎng)，內(nèi)部設(shè)有溫度濕度調(diào)節(jié)設(shè)備。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可直接移栽的鐵皮石斛育苗方法，其特征在于所述塑料杯體 (1)為柱形，杯口直徑為9-10cm,杯底直徑為5-6cm,杯高為9-lOcm，壁厚0. 15-0. 25mm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可直接移栽的鐵皮石斛育苗方法，其特征在于所述專用培養(yǎng)基I包括1/2MS基本培養(yǎng)基+芋頭汁20%(V/V) +瓊脂5g/L，PH值為5. 5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可直接移栽的鐵皮石斛育苗方法，其特征在于所述專用培養(yǎng)基II包括MS基本培養(yǎng)基+ BA (6-卞氨基腺嘌呤)0. 15mg/L+瓊脂5g/L+ 土豆汁8% (V/V) + 香蕉汁12%(V/V)，PH值為5. 5。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可直接移栽的鐵皮石斛育苗方法，其特征在于所述專用培養(yǎng)基III包括MS基本培養(yǎng)基+NAA ( α -萘乙酸)0. 15mg/L+香蕉汁9% (V/V) + 土豆汁6% (V/V) +芋頭汁10%(v/v) +瓊脂5g/L，PH值為5. 5。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種組培方法，尤其是針對(duì)鐵皮石斛的組培方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種組培苗可直接移栽的鐵皮石斛組培方法。為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明改進(jìn)了現(xiàn)有的培養(yǎng)基配方，獨(dú)創(chuàng)了具有透光性能好，感染率低空氣充足的專用組培杯，并提供清潔適宜的自然光環(huán)境，在三者的共同作用下，可以由一棵鐵皮石斛的蒴果種子通過(guò)7-8個(gè)月的組織培養(yǎng)，培育出20萬(wàn)株的石斛組培苗，該組培苗無(wú)需傳統(tǒng)的3-5個(gè)月的訓(xùn)化(煉苗)過(guò)程，可直接移栽到室外，移栽成活率在98%上以。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102499085SQ20111033281
公開(kāi)日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月28日
發(fā)明者章亞輝, 章紀(jì)海 申請(qǐng)人:樂(lè)清市鼎元生物科技有限公司