專利名稱：十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種百合科十二卷屬性植物的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
十二卷屬植物(學(xué)名HaworthiafasciataHaw)又名錦雞尾，為百合科十二卷屬，原產(chǎn)非洲南部地區(qū)，世界各地廣泛栽培，在我國干燥的沙漠地帶亦有野生種類(耐寒性)分布。 喜溫暖干燥和陽光充足的環(huán)境，怕低溫和陰暗潮濕，生長適期3-10月，最適溫度15-25度， 最高可忍受35-40度的高溫。對土壤要求不嚴(yán)，但以疏松肥沃的沙壤土為宜。該類植物在世界上有150個種，多年生肉質(zhì)草本，無莖，葉片肉質(zhì)厚實(shí)，其葉片上有條紋，名貴品種上分布有紅色、白色、金黃色條紋，非常美麗，是不可多得的觀賞植物，作盆栽觀賞，在居室、陽臺、辦公桌上擺放呈現(xiàn)清新高雅之態(tài)。目前在日本、美國、以色列等非常盛行，我國上海、北京、廣州等大城市從國外進(jìn)口種苗或直接進(jìn)口商品盆花，價格昂貴，售價從數(shù)十元至上萬元不等。但此植物繁殖主要靠分株，每年繁殖量僅3-5株，名貴品種更少，故制約了應(yīng)用推廣，造成種苗奇缺，供不應(yīng)求，名貴種苗或商品盆花價格高昂，普通百姓很難消費(fèi)。有關(guān)十二卷屬植物的生產(chǎn)國內(nèi)有些零星報道，但未見利用花枝嫩莖段離體培養(yǎng)及規(guī)?；a(chǎn)的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種十二卷屬植物的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，以花枝嫩莖段為外植體，直接誘導(dǎo)無菌芽培育成試管苗。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟為
第一步外植體的選擇與消毒
在春夏季節(jié)，選取十二卷多肉植物剛抽生的呈半木質(zhì)化的花枝，自基部整枝剪下，清洗干凈后，消毒；
第二步無菌系的建立
將消毒過的花枝切成0. 5-1. 5厘米的莖段，接種于發(fā)生培養(yǎng)基上，進(jìn)行初始誘導(dǎo)培養(yǎng)； 第三步無菌系叢生芽的繼代增殖
將初始培養(yǎng)獲得的無菌芽切下，接種于第二培養(yǎng)基進(jìn)行增殖，待在基部葉腋間分化出腋芽后，該腋芽即為叢生芽，繼續(xù)切割后不斷增殖； 第四步生根培養(yǎng)
將叢生芽切成單芽，接種于第三培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，在基部分分化出不定根后，試管苗培育成功；
第五步試管苗煉苗培養(yǎng)
將生根的十二卷試管苗在苗床上作煉苗培養(yǎng)。優(yōu)選地，第一步中所述清洗的步驟為用洗潔精將剪下的花枝清洗兩遍，用紗布包
4裹后用水沖洗3小時后浙干。優(yōu)選地，第一步中所述消毒在無菌室超凈臺上進(jìn)行，其步驟為先用質(zhì)量百分比濃度為75%乙醇的對清洗后的花枝處理60秒，然后用與水的質(zhì)量比為1:50的潔爾敏溶液處理15分鐘，最后用質(zhì)量百分比濃度為0. 1%的氯化汞溶液處理15分鐘，用無菌水沖洗三遍。優(yōu)選地，第二步中所述發(fā)生培養(yǎng)基及第三步中所述第二培養(yǎng)基的成份相同，為加入了 0. 5-2. Omg/L的6-氨基腺嘌呤、0. 005-0. 2mg/L的荼乙酸、0. 05-0. lmg/L的赤霉素、質(zhì)量百分比為3%的蔗糖及5. 5g/L瓊脂粉的MS培養(yǎng)基。優(yōu)選地，第二步中所述初始誘導(dǎo)培養(yǎng)、第三步中所述增殖及第四步中所述生根培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為25度，光照強(qiáng)度為3000LX，光照時間為12小時/天。優(yōu)選地，第三步中所述第三培養(yǎng)為加入了 0. 1-0. 2mg/L的荼乙酸、0. 05-0. lmg/L 的吲哚丁酸、質(zhì)量百分比為1的蔗糖及5. 5g/L瓊脂粉的1/2MS培養(yǎng)基。優(yōu)選地，第五步中所述煉苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基質(zhì)為泥炭和珍珠巖，泥炭與珍珠巖之間的質(zhì)量比為1:1，其具體步驟為將幼苗載入培養(yǎng)基質(zhì)后澆足活棵水，用尼龍薄膜覆蓋防止幼苗失水萎焉，3天后揭去尼龍薄膜逐步煉苗。優(yōu)選地，所述逐步煉苗的步驟為在前7天內(nèi)，每天葉面噴水2-3次，7天后早晚各噴一次，15天后用質(zhì)量百分比濃度為0. 1%的硝酸銨加質(zhì)量百分比濃度為0. 1%的磷酸二氫鉀追肥，葉面及根際施肥同時進(jìn)行，15天后根據(jù)基枝含水量適當(dāng)澆水，保持不干不澆，澆則澆透，3個月后，試管苗可以移栽至各種容器內(nèi)作盆栽培育。本發(fā)明利用組織培養(yǎng)技術(shù)對十二卷屬植物進(jìn)行工廠化快速繁殖，具有用料少，繁殖快以及提純復(fù)壯脫病毒等優(yōu)點(diǎn)，可加快繁殖種苗速度，周年生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)種苗，對該品名花卉的開發(fā)生產(chǎn)具有積極意義。
具體實(shí)施例方式為使本發(fā)明更明顯易懂，茲以優(yōu)選實(shí)施例作詳細(xì)說明如下。實(shí)施例1
本發(fā)明提供了一種十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法，其步驟為 第一步外植體的選擇與消毒
在春夏季節(jié)，選取十二卷多肉植物剛抽生的呈半木質(zhì)化的花枝，自基部整枝剪下，用洗潔精清洗兩遍，用紗布包裹后置于自來水龍頭下沖洗3小時后浙干。在無菌室超凈臺上消毒，先用質(zhì)量百分比濃度為75%的乙醇處理60秒，然后用與水的質(zhì)量比為1 50的潔爾敏溶液處理15分鐘，最后用質(zhì)量百分比濃度為0. 1%的氯化汞處理15分鐘，用無菌水沖洗三遍。第二步無菌系的建立
在超凈臺上將消毒過的花枝切成1厘米左右的莖段，接種于發(fā)生培養(yǎng)基上，進(jìn)行初始誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)基為加入了 0. 5mg/L的6-氨基腺嘌呤(英文簡稱為6-BA)、0. 005mg/L荼乙酸(英文簡稱為NAA)、0. 05mg/L的赤霉素(英文簡稱為GA)、質(zhì)量百分比為3%的蔗糖及 5. 5g/L瓊脂粉的MS培養(yǎng)基，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度為25度(M小時恒溫)，光照強(qiáng)度為 3000LX，光照時間為12小時/天； 第三步無菌系叢生芽的繼代增殖
將初始培養(yǎng)獲得的無菌芽切下，接種于第二培養(yǎng)基，30天后在基部葉腋間分化出腋芽(叢生芽)，繼續(xù)切割后不斷增殖，以后每30天增殖一次，增值率為1:2. 5-3。第二培養(yǎng)基為加入了 0. 5mg/L 的 6-BA、0. 05mg/L 的 GA、0. 005mg/L 的 NAA、質(zhì)量百分比為 3% 的蔗糖及 5. 5g/ L的瓊脂粉的MS培養(yǎng)基，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度為25度，光照強(qiáng)度為3000LX，光照時間為12
小時/天。第四步生根培養(yǎng)
將叢生芽切成單芽，接種于第三培養(yǎng)基，越3-4周后在基部分分化出不定根，試管苗培育成功。第三培養(yǎng)基為加入了 0. lmg/L的NAA、0. 05mg/L的吲哚丁酸(英文簡稱為IBA)、質(zhì)量百分比為21的蔗糖、5. 5g/L的瓊脂粉的1/2MS培養(yǎng)基，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度為25度， 光照強(qiáng)度為3000LX，光照時間為12小時/天。第五步試管苗煉苗培養(yǎng)
將生根的十二卷試管苗在苗床上作煉苗培養(yǎng)。培養(yǎng)基質(zhì)為泥炭和珍珠巖，泥炭和珍珠巖之間的質(zhì)量比為1:1，將幼苗載入后澆足活棵水，用尼龍薄膜覆蓋防止幼苗失水萎焉，3 天后揭去尼龍薄膜逐步煉苗。前7天內(nèi)，每天葉面噴水2-3次，7天后早晚各噴一次，15天后用質(zhì)量百分比濃度為0. 1%的硝酸銨加質(zhì)量百分比濃度為0. 1%的磷酸二氫鉀追肥(葉面及根際施肥同時進(jìn)行)。15天后可根據(jù)基枝含水量適當(dāng)澆水，保持不干不澆，澆則澆透。3 個月后，試管苗可以移栽至各種容器內(nèi)作盆栽培育。實(shí)施例2
本發(fā)明提供了一種十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法，其步驟為 第一步外植體的選擇與消毒
在春夏季節(jié)，選取十二卷多肉植物剛抽生的呈半木質(zhì)化的花枝，自基部整枝剪下，用洗潔精清洗兩遍，用紗布包裹后置于自來水龍頭下沖洗3小時后浙干。在無菌室超凈臺上消毒，先用質(zhì)量百分比濃度為75%的乙醇處理60秒，然后用與水的質(zhì)量比為1 50的潔爾敏溶液處理15分鐘，最后用質(zhì)量百分比濃度為0. 1%的氯化汞處理15分鐘，用無菌水沖洗三遍。第二步無菌系的建立
在超凈臺上將消毒過的花枝切成1厘米左右的莖段，接種于發(fā)生培養(yǎng)基上，進(jìn)行初始誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)基為加入了 2. Omg/L的6-BA、0. 2mg/L的NAA、0. 05-0. lmg/L的GA、質(zhì)量百分比為3%的蔗糖及5. 5g/L瓊脂粉的MS培養(yǎng)基，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度為25度( 小時恒溫)，光照強(qiáng)度為3000LX，光照時間為12小時/天； 第三步無菌系叢生芽的繼代增殖
將初始培養(yǎng)獲得的無菌芽切下，接種于第二培養(yǎng)基，30天后在基部葉腋間分化出腋芽 (叢生芽)，繼續(xù)切割后不斷增殖，以后每30天增殖一次，增值率為1:2.5-3。第二培養(yǎng)基為加入了 2. Omg/L的6-BA、0. lmg/L的GA、0. 2mg/L的NAA、質(zhì)量百分比為3%的蔗糖及5. 5g/L 的瓊脂粉的MS培養(yǎng)基，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度為25度，光照強(qiáng)度為3000LX，光照時間為12
小時/天。第四步生根培養(yǎng)
將叢生芽切成單芽，接種于第三培養(yǎng)基，越3-4周后在基部分分化出不定根，試管苗培育成功。第三培養(yǎng)基為加入了 0. 2mg/L的NAA、0. lmg/L的IBA、質(zhì)量百分比為21的蔗糖、 5. 5g/L的瓊脂粉的1/2MS培養(yǎng)基，PH值為5. 8，培養(yǎng)溫度為25度，光照強(qiáng)度為3000LX，光照時間為12小時/天。
第五步試管苗煉苗培養(yǎng)
將生根的十二卷試管苗在苗床上作煉苗培養(yǎng)。培養(yǎng)基質(zhì)為泥炭和珍珠巖，泥炭和珍珠巖之間的質(zhì)量比為1:1，將幼苗載入后澆足活棵水，用尼龍薄膜覆蓋防止幼苗失水萎焉，3 天后揭去尼龍薄膜逐步煉苗。前7天內(nèi)，每天葉面噴水2-3次，7天后早晚各噴一次，15天后用質(zhì)量百分比濃度為0. 1%的硝酸銨加質(zhì)量百分比濃度為0. 1%的磷酸二氫鉀追肥(葉面及根際施肥同時進(jìn)行)。15天后可根據(jù)基枝含水量適當(dāng)澆水，保持不干不澆，澆則澆透。3 個月后，試管苗可以移栽至各種容器內(nèi)作盆栽培育。
權(quán)利要求
1.一種十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟為第一步外植體的選擇與消毒在春夏季節(jié)，選取十二卷多肉植物剛抽生的呈半木質(zhì)化的花枝，自基部整枝剪下，清洗干凈后，消毒；第二步無菌系的建立將消毒過的花枝切成0. 5-1. 5厘米的莖段，接種于發(fā)生培養(yǎng)基上，進(jìn)行初始誘導(dǎo)培養(yǎng)；第三步無菌系叢生芽的繼代增殖將初始培養(yǎng)獲得的無菌芽切下，接種于第二培養(yǎng)基進(jìn)行增殖，待在基部葉腋間分化出腋芽后，該腋芽即為叢生芽，繼續(xù)切割后不斷增殖；第四步生根培養(yǎng)將叢生芽切成單芽，接種于第三培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，在基部分分化出不定根后，試管苗培育成功；第五步試管苗煉苗培養(yǎng)將生根的十二卷試管苗在苗床上作煉苗培養(yǎng)。
2.如權(quán)利要求1所述的一種十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，第一步中所述清洗的步驟為用洗潔精將剪下的花枝清洗兩遍，用紗布包裹后用水沖洗3小時后浙干。
3.如權(quán)利要求1所述的一種十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，第一步中所述消毒在無菌室超凈臺上進(jìn)行，其步驟為先用質(zhì)量百分比濃度為75%乙醇的對清洗后的花枝處理60秒，然后用與水的質(zhì)量比為1:50的潔爾敏溶液處理15分鐘，最后用質(zhì)量百分比濃度為0. 1%的氯化汞溶液處理15分鐘，用無菌水沖洗三遍。
4.如權(quán)利要求1所述的一種十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，第二步中所述發(fā)生培養(yǎng)基及第三步中所述第二培養(yǎng)基的成份相同，為加入了 0. 5-2. Omg/L的6-氨基腺嘌呤、0. 005-0. 2mg/L的荼乙酸、0. 05-0. lmg/L的赤霉素、質(zhì)量百分比為3%的蔗糖及 5. 5g/L瓊脂粉的MS培養(yǎng)基。
5.如權(quán)利要求1所述的一種十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，第二步中所述初始誘導(dǎo)培養(yǎng)、第三步中所述增殖及第四步中所述生根培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為25度，光照強(qiáng)度為3000LX，光照時間為12小時/天。
6.如權(quán)利要求1所述的一種十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，第三步中所述第三培養(yǎng)為加入了 0. 1-0. 2mg/L的荼乙酸、0. 05-0. lmg/L的吲哚丁酸、質(zhì)量百分比為21的蔗糖及5. 5g/L瓊脂粉的1/2MS培養(yǎng)基。
7.如權(quán)利要求1所述的一種十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，第五步中所述煉苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基質(zhì)為泥炭和珍珠巖，泥炭與珍珠巖之間的質(zhì)量比為1:1，其具體步驟為將幼苗載入培養(yǎng)基質(zhì)后澆足活棵水，用尼龍薄膜覆蓋防止幼苗失水萎焉，3天后揭去尼龍薄膜逐步煉苗。
8.如權(quán)利要求7所述的一種十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，所述逐步煉苗的步驟為在前7天內(nèi)，每天葉面噴水2-3次，7天后早晚各噴一次，15天后用質(zhì)量百分比濃度為0. 1%的硝酸銨加質(zhì)量百分比濃度為0. 1%的磷酸二氫鉀追肥，葉面及根際施肥同時進(jìn)行，15天后根據(jù)基枝含水量適當(dāng)澆水，保持不干不澆，澆則澆透，3個月后，試管苗可以移栽至各種容器內(nèi)作盆栽培育。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種十二卷類多肉植物的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟為第一步外植體的選擇與消毒；第二步無菌系的建立；第三步無菌系叢生芽的繼代增殖；第四步生根培養(yǎng)；第五步試管苗煉苗培養(yǎng)。本發(fā)明利用組織培養(yǎng)技術(shù)對十二卷屬植物進(jìn)行工廠化快速繁殖，具有用料少，繁殖快以及提純復(fù)壯脫病毒等優(yōu)點(diǎn)，可加快繁殖種苗速度，周年生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)種苗，對該品名花卉的開發(fā)生產(chǎn)具有積極意義。
文檔編號A01G31/00GK102499090SQ201110346720
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月7日
發(fā)明者姚德彪, 顧建平 申請人:上海旭東園藝有限公司