專利名稱：一種苦碟子注射液用抱莖苦荬菜的栽培與質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中草藥種植技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種苦碟子注射液用抱莖苦荬菜的栽培與質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
抱莖苦賣菜[Ixeris sonchifolia(Bge. )Hance]，為菊科苦荬菜屬植物，主產(chǎn)于我國(guó)東北、華北等地。有記載，抱莖苦荬菜具有清熱解毒、排毒、止痛之功效。民間主要用于治療闌尾炎、扁桃體炎、無(wú)名腫痛等癥。近年來(lái)，隨著現(xiàn)代提取分離和波譜學(xué)技術(shù)以及現(xiàn)代藥理學(xué)的飛速發(fā)展，對(duì)其化學(xué)成分和生物活性的研究越來(lái)越深入。
抱莖苦荬菜中的化學(xué)成分比較復(fù)雜，主要含黃酮、有機(jī)酸、酚酸、倍半萜內(nèi)酯、三萜皂苷和腺苷化合物，除此之外還含有留醇、香豆素、木脂素、維生素、氨基酸、糖和無(wú)機(jī)鹽等類化合物。
抱莖苦荬菜目前完全依靠野生資源供應(yīng)市場(chǎng)。野生資源分布地區(qū)分散，氣候差異大，生態(tài)環(huán)境脆弱，主要分布區(qū)在我國(guó)海拔100 300m范圍內(nèi)。抱莖苦荬菜野生為二年生草本植物，生長(zhǎng)于草地、果園及林下，生長(zhǎng)速度比較慢。由于抱莖苦荬菜種子萌發(fā)和在土層深度不同，導(dǎo)致抱莖苦荬菜花期5 9月，果期7 10月，種子成熟期在6月中旬一直延續(xù)到10月下旬，不利于集中采集和加工。
由于抱莖苦荬菜種子直徑約0. 1毫米左右，種子發(fā)芽率低，在野生條件下抱莖苦荬菜的自然繁殖率很低，生長(zhǎng)緩慢，難以恢復(fù)藥源。抱莖苦荬菜分布地區(qū)大多為草地和林區(qū)，采收過(guò)程中，形成很重要的風(fēng)蝕和水蝕的點(diǎn)源。因此人工栽培技術(shù)的研究開(kāi)發(fā)，即是保護(hù)抱莖苦荬菜野生資源的主要途徑；也是消除草被破壞隱患，保護(hù)草地生態(tài)環(huán)境的需要； 更是提供苦碟子注射液生產(chǎn)用藥材的需要。但是目前尚無(wú)一種理想的人工栽培苦碟子注射液用抱莖苦荬菜的技術(shù)。
遼寧省中東部，東經(jīng)120. 10 123. 13，北緯38. 2 42. 2，全境南北最長(zhǎng)350km，東西最寬180km。地勢(shì)東南高西北低，自東南向西北傾斜。地表徑流比較豐富，境內(nèi)河道總長(zhǎng) 5421. 6km，其中大河長(zhǎng)度648. 7km，中、小河流長(zhǎng)度為7172. 9km。地處中緯度的松遼平原的東南部邊緣，屬暖溫帶大陸性季風(fēng)氣候區(qū)，夏季雨水豐沛，氣溫較高，冬季降水較少，氣溫較低。主要?dú)夂蛱攸c(diǎn)是四季分明，雨熱同期，干冷同季，降水充沛，溫度適宜，光照豐富，歷史上極端最低氣溫為-30. 40C，極端最高氣溫為36. 90C。年平均降水量為700mm。以鞍山市為例，日照充足，年平均日照時(shí)數(shù)為M43h，無(wú)霜期為180d左右。土地資源經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的土地開(kāi)發(fā)利用，形成了西北平原農(nóng)林漁土地利用區(qū)、西部沖積平原農(nóng)漁土地利用區(qū)、城市土地利用區(qū)，中部波狀平原農(nóng)林果土地利用區(qū)，東南低山丘陵林果農(nóng)土地利用區(qū)、南部低山林農(nóng)土地利用區(qū)?？傮w來(lái)說(shuō)，遼東半島土質(zhì)肥沃，是抱莖苦荬菜道地藥材的主產(chǎn)地。
因此，根據(jù)抱莖苦荬菜的野生習(xí)性，結(jié)合遼東半島的氣候和土壤特點(diǎn)，積極科學(xué)地采用現(xiàn)代農(nóng)作物栽培技術(shù)，研究抱莖苦荬菜的人工栽培技術(shù)，實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)和優(yōu)質(zhì)，以滿足苦碟子注射液生產(chǎn)的需要，同時(shí)節(jié)約土地資源，由二年生植物，經(jīng)過(guò)科學(xué)管理和培植，實(shí)現(xiàn)一年二茬栽植和收獲。 發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種苦碟子注射液用中藥材抱莖苦荬菜人工栽培方法，通過(guò)這種方法，實(shí)現(xiàn)了一年2茬種植和采收，節(jié)約了土地資源，且單位畝產(chǎn)提高了 100%-150%， 藥材質(zhì)量符合中藥注射劑用藥材要求。
一種苦碟子注射液用中藥材抱莖苦荬菜人工栽培方法，包括下述工藝步驟
1、溫室育苗
1)種子處理
①種子采收采收種子選健壯的植株，大部分瘦果變黑時(shí)，其中的種子成黑褐色或棕色時(shí)收獲種子。將植株拔出，放通風(fēng)陰涼處，后熟3 5天，脫粒，晾曬，除雜，包裝；
②種子儲(chǔ)藏抱莖苦荬菜種子采收后，待種子含水量10 13%時(shí)，裝在布袋中，內(nèi)放細(xì)辛20 40g/kg/包，儲(chǔ)藏庫(kù)要求陰涼干燥；抱莖苦荬菜種子儲(chǔ)藏期不超過(guò)3年；
③種子處理儲(chǔ)藏期間變溫處理；
a.種子的變溫處理在播種前第二個(gè)月份，儲(chǔ)藏溫度為15 20°C ；播種前第一月份，儲(chǔ)藏溫度為0 6°C儲(chǔ)藏15天，15 20°C儲(chǔ)藏15天；
b.種子的赤霉素處理播種前赤霉素處理，用4%的赤霉素乳油800倍液，浸泡20 小時(shí)，出苗率可達(dá)90% ；
2)溫室育苗
①土壤處理土壤處理配方每平方米中藥渣腐熟肥15kg，熟石灰0. 2kg，磷酸氫銨鉀復(fù)合肥10g，細(xì)沙IOkg ；與原土壤25cm表土通過(guò)深翻混合均勻，耙細(xì)整平；播前烤棚 封閉溫室使棚內(nèi)溫度達(dá)到至少50°C持續(xù)5小時(shí)，灌透底墑水，待入滲后播種；
②播種期溫室地溫高，處理好的種子分別在2月初和6月初播種；
③播種播種密度5000 8000粒/m2，播種量^g/畝，播種方法用細(xì)干土拌種子，用手均勻撒播在畦面；種子播下后，篩土 0. 5 1厘米，立即覆蓋遮塑料透水膜
④淋噴灌2 3天噴灌一次，灌水量3 ^g/m2，以保持土壤表面濕潤(rùn)；
⑤苗床管理播后苗床保持濕潤(rùn)；苗出齊后開(kāi)始第一次除草；以后視雜草生長(zhǎng)情況及時(shí)除草；苗高3厘米時(shí)間苗，最小苗間距1. 0cm，平均苗間距2. Ocm ；用4%的赤霉素乳油3000倍液葉面噴霧2次，中間間隔7-10天。
⑥幼苗適應(yīng)性鍛煉移栽前20天逐步揭去覆蓋膜或打開(kāi)通風(fēng)口，逐漸加大通風(fēng)量，降低濕度和溫度，增強(qiáng)光照；同時(shí)掐尖，植株高度約8-lOcm，促使植株矮化和健壯，利于栽植后形成大量分枝，以提高地上部分的產(chǎn)量。
⑦起苗抱莖苦荬菜2月初育苗，當(dāng)年4月初起苗移栽；6月初播種，當(dāng)年8月起苗移栽；起苗苗齡達(dá)到莖生葉片3個(gè)；起苗方法是將挖起的苗子按10%少量帶土，扎成100 200g小把，裝入保濕的麻袋，運(yùn)到移栽地；
2、移栽
1)選地
①選擇栽培地環(huán)境排水良好，土質(zhì)疏松，有機(jī)質(zhì)含量至少10g/kg，全氮0. 2 2. Og/kg，全磷1. 0 1. 5g/kg，全鉀10 15g/kg ；公路兩旁栽培地塊必需距離公路600m以外；海拔200 500m ；年平均氣溫8°C 9°C，一月平均氣溫_11°C，七月平均氣溫;5無(wú)霜期165 185d ；年平均降水量600 800mm ；
②整地施肥收獲后，用2%石灰水溶液灌溉IOm3/畝’，再深翻20cm，施入中藥渣腐熟肥IOOOkg/畝，磷酸氫銨鉀復(fù)合肥50kg/畝；整地壟50cm，壟面寬40cm、壟溝寬20cm， 壟高8cm，整地后立即覆膜，地膜選用60 80cm寬、厚度5 10 μ m的薄膜；
2)苗子篩選將腐爛、發(fā)霉、苗體有病斑蟲(chóng)傷、割傷、擦傷、折斷的傷病苗除去；優(yōu)質(zhì)種苗的外觀特征是健壯、無(wú)病蟲(chóng)感染、無(wú)機(jī)械損傷、表面光滑、苗長(zhǎng)至少IOcm ；
幻移栽春季4月上旬進(jìn)行，夏季移栽于7月中旬進(jìn)行；每壟種二行，平均行距 15cm，株距15cm，二行間單株位置交叉錯(cuò)開(kāi)；栽植時(shí)用小木棒，按株行距開(kāi)穴，每穴栽植一苗；
4)栽植密度保苗密度為20 30萬(wàn)株/畝；
3、田間管理
1)中耕除草春季移栽后20天第一次除草，苗高30cm時(shí)第二次除草，之后根據(jù)田間雜草生長(zhǎng)情況隨時(shí)除草；
2)追肥抱莖苦荬菜移栽后花前期出現(xiàn)缺肥癥狀，按0. 的濃度噴施磷酸氫銨鉀復(fù)合肥5. Okg/畝;
3)水分管理移栽地0 15cm 土層重量含水量低于80g/kg就需要灌水；灌水量 IOm3/ 畝；
4)病蟲(chóng)鼠害防治抱莖苦荬菜病蟲(chóng)害較少，銹病用多菌靈100mg/l濃度噴霧防治， 根腐病注意排積水，發(fā)現(xiàn)病株連根拔除用石灰水消毒病穴；
5)收獲前15天，用4%的赤霉素乳油4000倍液葉面噴霧，隔5天再噴1次。植株盛花期可維持7-15天。
4、采收
1)收割時(shí)期抱莖苦荬菜在移栽大田后生長(zhǎng)2個(gè)月，盛花期收割；
2)晾曬水泥地面晾曬場(chǎng)，要求光照足，排水設(shè)施齊全，每天翻曬2-4次，待水分低于15%時(shí)，打包，50kg/包，貼簽，入庫(kù)。
5、質(zhì)量評(píng)價(jià)和產(chǎn)量比較研究
根據(jù)中藥材種植管理規(guī)范的要求，隨機(jī)選取10塊IOm2的面積，間隔距離不少于200m，采收，曬干，稱重，按照苦碟子注射液用藥材抱莖苦荬菜的質(zhì)量控制方法檢測(cè)， 結(jié)果均達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，且有效成分總黃酮、總酚酸、腺苷、菊苣酸、咖啡酰酒石酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷得含量均高于野生品，尤其腺苷、菊苣酸和木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷的平均含量超過(guò)50%以上，且重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘留和雜質(zhì)，均低于野生品，指紋圖譜檢測(cè)，栽培品與野生品相似度大于0. 9。
本發(fā)明現(xiàn)已在遼東半島研究基地推廣種植6000余畝，抱莖苦荬菜干產(chǎn)量1500kg/ 畝以上，可以滿足全國(guó)抱莖苦荬菜藥材的市場(chǎng)需求。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于
(1)在于提供苦碟子注射液用抱莖苦荬菜的人工栽培方法，以便于大規(guī)模人工培植這種中草藥，其野生資源可以得到有效保護(hù)，進(jìn)而保護(hù)生態(tài)環(huán)境，同時(shí)草地或林下由于采藥引起的破壞得到有效抑制，為苦碟子注射液生產(chǎn)提供符合中藥注射劑要求的合格中藥材原料。
(2)由于采用了先進(jìn)的育苗和移栽技術(shù)，縮短了生長(zhǎng)周期，減少了氣候變化的影響，因此提高了苦碟子注射液用藥材的質(zhì)量和批間穩(wěn)定性，克服了野生藥材質(zhì)量差異大，批間穩(wěn)定差，重金屬、農(nóng)藥等有害物質(zhì)含量超標(biāo)等，從而確保苦碟子注射液安全有效。
(3)由于采用了育苗栽培法，縮短了田間管理時(shí)間和生長(zhǎng)周期，提高了土地利用率。
(4)建立完善的抱莖苦荬菜質(zhì)量控制方法，采用新的比色法測(cè)定了總黃酮、總酚酸，采用液相梯度洗脫法測(cè)定菊苣酸和木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷，達(dá)到一測(cè)多評(píng)的目的。
(5)赤霉素的科學(xué)使用，加速抱莖苦荬菜種子發(fā)芽、出薹和開(kāi)花，實(shí)現(xiàn)一年2茬栽種和收獲，打破了野生狀態(tài)下的二年生植物生長(zhǎng)和繁殖規(guī)律，單位畝產(chǎn)量顯著提高，超過(guò)普通模擬野生環(huán)境栽培的100% -150%，且藥材的花葉比例明顯提高，為野生品比例的 1. 5-2. 0倍，保證了有效成分的含量。
(6)本發(fā)明的社會(huì)效益和生態(tài)效益顯著，有較明顯的經(jīng)濟(jì)效益，大面積推廣后產(chǎn)區(qū)農(nóng)民可以通過(guò)種植抱莖苦荬菜致富。


圖1是以木犀草素-7_0-i3-D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)， 繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。圖2是以菊苣酸對(duì)照品量為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)，繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。 圖3是以咖啡酰酒石酸對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。圖4是以木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。圖5是以菊苣酸對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
一種苦碟子注射液用中藥材抱莖苦荬菜人工栽培方法，包括下述工藝步驟
1、溫室育苗
1)、種子處理
①種子采收選擇健壯的植株，大部分瘦果變黑時(shí)，其中的種子成黑褐色或棕色時(shí)收獲種子；將植株拔出，放通風(fēng)陰涼處，后熟3 5天，脫粒，晾曬，除雜，包裝；
②種子儲(chǔ)藏抱莖苦荬菜種子采收后，待種子含水量10 13%時(shí)，裝在布袋中，內(nèi)放細(xì)辛20g/kg/包，儲(chǔ)藏庫(kù)要求陰涼干燥；抱莖苦荬菜種子儲(chǔ)藏期一般不超過(guò)3年；
③種子處理儲(chǔ)藏期間變溫處理；
a.種子的變溫處理在播種前第二個(gè)月份，儲(chǔ)藏溫度為15°C ；播種前第一月份進(jìn)行溫度調(diào)整，0°C儲(chǔ)藏15天，15°C儲(chǔ)藏15天；
b.種子的赤霉素處理播種前赤霉素處理，用4%的赤霉素乳油800倍液，浸泡20 小時(shí)，出苗率可達(dá)90% ；
2)、溫室育苗
①土壤處理每平方米中藥渣腐熟肥Mkg，熟石灰0. ^ig,磷酸氫銨鉀復(fù)合肥10g， 細(xì)沙IOkg ；與原土壤25cm表土通過(guò)深翻混合均勻，耙細(xì)整平；播前烤棚封閉溫室使棚內(nèi)溫度達(dá)到至少50°C持續(xù)5小時(shí)，灌透底墑水，待入滲后播種；
②播期溫室地溫高，處理好的種子分別在2月初和6月初播種；
③播種播種密度5000 8000粒/m2，播種量^g/畝，播種方法用細(xì)干土拌種子，用手均勻撒播在畦面；種子播下后，篩土 0. 5厘米，立即覆蓋遮塑料透水膜
④淋噴灌2天噴灌一次，灌水量3kg/m2，以保持土壤表面濕潤(rùn)；
⑤苗床管理播后苗床保持濕潤(rùn)；苗出齊后開(kāi)始第一次除草；以后視雜草生長(zhǎng)情況及時(shí)除草；苗高3厘米時(shí)間苗，最小苗間距1. 0cm，平均苗間距2. Ocm ；用4%的赤霉素乳油3000倍液葉面噴霧2次，中間間隔10天。
⑥幼苗適應(yīng)性鍛煉移栽前20天逐步揭去覆蓋膜或打開(kāi)通風(fēng)口，逐漸加大通風(fēng)量，降低濕度和溫度，增強(qiáng)光照；同時(shí)掐尖，植株高度約10cm，促使植株矮化和健壯，利于栽植后形成大量分枝，以提高地上部分的產(chǎn)量。
⑦起苗抱莖苦荬菜2月初育苗，當(dāng)年4月初起苗移栽，6月初播種當(dāng)年8月起苗移栽；起苗苗齡達(dá)到莖生葉片3個(gè)；起苗方法是將挖起的苗子按10%少量帶土，扎成200g小把，裝入保濕的麻袋，運(yùn)到移栽地；
2、移栽
1)選地
①選地栽培地環(huán)境排水良好，土質(zhì)疏松，有機(jī)質(zhì)含量至少10g/kg，全氮0. 2g/kg， 全磷1. Og/kg，全鉀10g/kg ；公路兩旁栽培地塊必需距離公路600m以外；海拔200 500m ； 年平均氣溫8°C 9°C，一月平均氣溫-irC，七月平均氣溫；5無(wú)霜期165 185d ；年平均降水量600 800mm ；
②整地施肥收獲后，用2%石灰水溶液灌溉IOm3/畝’，再深翻20cm，施入中藥渣腐熟肥IOOOkg/畝，磷酸氫銨鉀復(fù)合肥50kg/畝；整地壟50cm，壟面寬40cm、壟溝寬20cm， 壟高8cm，整地后立即覆膜，地膜選用70cm寬、厚度5μπι的薄膜；
2)苗子篩選將腐爛、發(fā)霉、苗體有病斑蟲(chóng)傷、割傷、擦傷、折斷的傷病苗除去；優(yōu)質(zhì)種苗的外觀特征是健壯、無(wú)病蟲(chóng)感染、無(wú)機(jī)械損傷、表面光滑、苗長(zhǎng)至少IOcm ；
幻移栽春季4月上旬進(jìn)行，夏季移栽于7月中旬進(jìn)行；每壟種二行，平均行距 15cm，株距15cm，二行間單株位置交叉錯(cuò)開(kāi)；栽植時(shí)用小木棒，按株行距開(kāi)穴，每穴栽植一苗；
4)栽植密度保苗密度為20 30萬(wàn)株/畝；
3、田間管理
1)中耕除草春季移栽后20天第一次除草，苗高30cm時(shí)第二次除草，之后根據(jù)田間雜草生長(zhǎng)情況隨時(shí)除草；
2)追肥抱莖苦荬菜移栽后花前期出現(xiàn)缺肥癥狀，按0. 的濃度噴施磷酸氫銨鉀復(fù)合肥5. Okg/畝;
3)水分管理移栽地0 15cm 土層重量含水量低于80g/kg就需要灌水；灌水量 IOm3/ 畝；
4)、病蟲(chóng)鼠害防治抱莖苦荬菜病蟲(chóng)害較少，銹病用多菌靈100mg/l濃度噴霧防治，根腐病注意排積水，發(fā)現(xiàn)病株連根拔除用石灰水消毒病穴；
5)、收獲前15天，用4%的赤霉素乳油4000倍液葉面噴霧，隔5天再噴1次。植株盛花期可維持7-15天。
4、采收
1)、收割時(shí)期抱莖苦荬菜在移栽大田后生長(zhǎng)2個(gè)月，盛花期收割；
2)、晾曬水泥地面晾曬場(chǎng)，要求光照足，排水設(shè)施齊全，每天翻曬2-4次，待水分低于15%時(shí)，打包，50kg/包，貼簽，入庫(kù)。
實(shí)驗(yàn)例1
抱莖苦荬菜藥材總黃酮含量測(cè)定方法
1.儀器與所用試劑
儀器SHIMADZU UV-1800紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)及工作站。
試劑試劑為分析純，水為注射用水。木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷，自制， 經(jīng)HPLC歸一化法檢測(cè)含量大于98%。
2.測(cè)定波長(zhǎng)的確立
經(jīng)繪制按方法制備的對(duì)照品溶液紫外吸收?qǐng)D譜，對(duì)照品溶液在506nm處有最大吸收，故506nm為樣品中總黃酮含量測(cè)定的波長(zhǎng)。
3.木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品線性范圍考察
精密稱取木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品10.2%ig，置25ml量瓶中， 加60%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，制成每Iml含0. 4096mg的溶液，分別精密吸取0. 5ml、 1. 5ml、2. 5ml、3. 5ml,4. 5ml分別置于IOml量瓶中，加60%乙醇溶液至刻度，分別制成每Iml 含 0. 04096mg、0. 06144mg、0. 1024mg、0. 14336mg、0. 18432mg 的溶液。
分別精密吸取上述5種濃度的溶液各5ml，其他按對(duì)照品溶液制備方法操作，測(cè)定吸收度，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1
表1對(duì)照品線性范圍考察結(jié)果
序號(hào)12345對(duì)照品濃度(mg/ml )0.020480.061440.10310.143360.18432吸光度0.1260.3580.6320.8591.123
以木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為
y = 6. 0917x-0. 005 r = 0. 9997
結(jié)論木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品濃度在0. 02048 0. 18432mg/ ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
4.精密度試驗(yàn)CN 102523862 A
精密吸取線性范圍考察項(xiàng)下對(duì)照品溶液(0. 1024mg/ml) 5ml，按方法做6個(gè)平行的溶液，測(cè)定吸收度，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。
表2精密度試驗(yàn)結(jié)果
吸收度0. 6360. 6230. 6310. 6350. 6410. 633X0. 6312RSD (%)0. 95
結(jié)論對(duì)照品溶液精密度試驗(yàn)符合規(guī)定。
5.穩(wěn)定性試驗(yàn)
按方法制備供試品溶液，每間隔30分鐘測(cè)定1次，測(cè)定吸收度，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。
表3穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
吸收度0.587 0.593 0.582 0.595 0.581χ0.5876 RSD (%)1.07
結(jié)論測(cè)定的吸收度值基本一致，RSD為1. 07%。說(shuō)明供試品溶液中的在2小時(shí)內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。
6.重復(fù)性試驗(yàn)
按方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別測(cè)定吸收度，計(jì)算含量，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表 4。
表4重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
(mg/g)11.8211.5911.5411.4911.85 11.71X (_g)11.67RSD (%)1.28
結(jié)論重復(fù)性試驗(yàn)符合規(guī)定。
7.回收率試驗(yàn)考察
取藥材粉末0. 5g，精密加入木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品溶液 (1. 168mg/ml) 5ml，其他操作按含量測(cè)定項(xiàng)下方法進(jìn)行，測(cè)定吸收度，計(jì)算，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表 5。
表5回收率試驗(yàn)結(jié)果
21. 50. 50時(shí)間(小時(shí)
權(quán)利要求
1. 一種苦碟子注射液用抱莖苦荬菜的栽培方法，其特征在于，包括下述步驟1)溫室育苗(1)種子處理①種子采收采收種子選健壯的植株，大部分瘦果變黑時(shí)，其中的種子成黑褐色或棕色時(shí)收獲種子；將植株拔出，放通風(fēng)陰涼處，后熟3 5天，脫粒，晾曬，除雜，包裝；②種子儲(chǔ)藏抱莖苦荬菜種子采收后，待種子含水量10 13%時(shí)，裝在布袋中，內(nèi)放細(xì)辛20 40g/kg/包，儲(chǔ)藏庫(kù)要求陰涼干燥；抱莖苦荬菜種子儲(chǔ)藏期不超過(guò)3年；③種子處理儲(chǔ)藏期間變溫處理；a.種子的變溫處理在播種前第二個(gè)月份，儲(chǔ)藏溫度為15 20°C;播種前第一月份，儲(chǔ)藏溫度為0 6°C儲(chǔ)藏15天，15 20°C儲(chǔ)藏15天；b.種子的赤霉素處理播種前赤霉素處理，用4%的赤霉素乳油800倍液，浸泡20小時(shí)，出苗率可達(dá)至少90% ；(2)溫室育苗①土壤處理土壤處理配方每平方米中藥渣腐熟肥15kg，熟石灰0.2kg，磷酸氫銨鉀復(fù)合肥10g，細(xì)沙IOkg ；與原土壤25cm表土通過(guò)深翻混合均勻，耙細(xì)整平；播前烤棚封閉溫室使棚內(nèi)溫度達(dá)到至少50°C持續(xù)5小時(shí)，灌透底墑水，待入滲后播種；②播期溫室地溫高，處理好的種子分別在2月初和6月初播種；③播種播種密度5000 8000粒/m2，播種量^g/畝，播種方法用細(xì)干土拌種子，用手均勻撒播在畦面；種子播下后，篩土 0. 5 1厘米，立即覆蓋遮塑料透水膜；④淋噴灌2 3天噴灌一次，灌水量3 ^g/m2，以保持土壤表面濕潤(rùn)；⑤苗床管理播后苗床保持濕潤(rùn)；苗出齊后開(kāi)始第一次除草；以后視雜草生長(zhǎng)情況及時(shí)除草；苗高3厘米時(shí)間苗，最小苗間距1. Ocm,平均苗間距2. Ocm ；用4%的赤霉素乳油 3000倍液葉面噴霧2次，中間間隔7-10天；⑥幼苗適應(yīng)性鍛煉移栽前20天逐步揭去覆蓋膜或打開(kāi)通風(fēng)口，逐漸加大通風(fēng)量，降低濕度和溫度，增強(qiáng)光照；同時(shí)掐尖，植株高度約8-lOcm，促使植株矮化和健壯，利于栽植后形成大量分枝，以提高地上部分的產(chǎn)量；⑦起苗抱莖苦荬菜2月初育苗，當(dāng)年4月初起苗移栽，6月初播種當(dāng)年8月起苗移栽； 起苗苗齡達(dá)到莖生葉片3個(gè)；起苗方法是將挖起的苗子按10%少量帶土，扎成100 200g 小把，裝入保濕的麻袋，運(yùn)到移栽地；2)移栽(1)選地①選擇栽培地環(huán)境排水良好，土質(zhì)疏松，有機(jī)質(zhì)含量至少10g/kg，全氮0.2 2. Og/ kg，全磷1. 0 1. 5g/kg，全鉀10 15g/kg ；公路兩旁栽培地塊必需距離公路600m以外；海拔200 500m ；年平均氣溫8°C 9°C，一月平均氣溫_11°C，七月平均氣溫;5無(wú)霜期 165 185d ；年平均降水量600 800mm ；②整地施肥收獲后，用2%石灰水溶液灌溉IOm3/畝’，再深翻20cm，施入中藥渣腐熟肥IOOOkg/畝，磷酸氫銨鉀復(fù)合肥50kg/畝；整地壟50cm，壟面寬40cm、壟溝寬20cm，壟高 8cm，整地后立即覆膜，地膜選用60 80cm寬、厚度5 10 μ m的薄膜；(2)苗子篩選將腐爛、發(fā)霉、苗體有病斑蟲(chóng)傷、割傷、擦傷、折斷的傷病苗除去；優(yōu)質(zhì)種苗的外觀特征是，健壯、無(wú)病蟲(chóng)感染、無(wú)機(jī)械損傷、表面光滑、苗長(zhǎng)至少IOcm ；(3)移栽春季4月上旬進(jìn)行，夏季移栽于7月中旬進(jìn)行；每壟種二行，平均行距15cm， 株距15cm，二行間單株位置交叉錯(cuò)開(kāi)；栽植時(shí)用小木棒，按株行距開(kāi)穴，每穴栽植一苗；(4)栽植密度保苗密度為20 30萬(wàn)株/畝；.3)田間管理(1)中耕除草春季移栽后20天第一次除草，苗高30cm時(shí)第二次除草，之后根據(jù)田間雜草生長(zhǎng)情況隨時(shí)除草；(2)追肥抱莖苦荬菜移栽后花前期出現(xiàn)缺肥癥狀，按0.的濃度噴施磷酸氫銨鉀復(fù)合肥5. Okg/畝；(3)水分管理移栽地0 15cm土層重量含水量低于80g/kg就需要灌水；灌水量50m3/畝；(4)病蟲(chóng)鼠害防治抱莖苦荬菜病蟲(chóng)害較少，銹病用多菌靈100mg/l濃度噴霧防治，根腐病注意排積水，發(fā)現(xiàn)病株連根拔除用石灰水消毒病穴；(5)收獲前15天，用4%的赤霉素乳油4000倍液葉面噴霧，隔5天再噴1次，植株盛花期可維持7天；.4)采收(1)收割時(shí)期抱莖苦荬菜在移栽大田后生長(zhǎng)2個(gè)月，盛花期收割；(2)晾曬水泥地面晾曬場(chǎng)，要求光照足，排水設(shè)施齊全，每天翻曬2-4次，待水分低于 15%時(shí)，打包，50kg/包，貼簽，入庫(kù)。
2. 一種苦碟子注射液用抱莖苦荬菜的質(zhì)量控制方法，其特征在于.1)抱莖苦荬菜中大類活性成分黃酮、總酚酸的比色測(cè)定法；.2)抱莖苦荬菜菊苣酸、木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷和咖啡酰酒石酸的液相一測(cè)多評(píng)方法；抱莖苦荬菜總黃酮和總酚酸的測(cè)定方法，如下所述(1)總黃酮對(duì)照品溶液的制備精密稱木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品適量，加60%乙醇溶液制成每Iml含0. Img的溶液；供試品溶液的制備取本品粉末過(guò)三號(hào)篩，精密稱取l.Og，置具塞錐形瓶中，精密加入 60 %乙醇溶液25ml，超聲提取0. 5小時(shí)，補(bǔ)足重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，精密吸取.5ml，加60 %乙醇溶液定容至25ml量瓶中；測(cè)定法精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5ml，分別置IOml量瓶中，各加入5%亞硝酸鈉溶液0. :3ml，搖勻，放置6分鐘，分別加入10%硝酸鋁溶液0. :3ml，搖勻，放置6分鐘， 再加入lmol/L氫氧化鈉溶液細(xì)1，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置10分鐘；同時(shí)取水溶液5ml，同法制成空白溶液。照中國(guó)藥典2010年版一部附錄V B中的分光光度法，在506nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，減去校正，計(jì)算，即得；(2)總酚酸對(duì)照品溶液的制備精密稱菊苣酸對(duì)照品適量，加60%乙醇制成每Iml含0. 06mg的溶液；供試品溶液的制備取本品粉末過(guò)三號(hào)篩，精密稱取l.Og，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇溶液25ml，密塞稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，濾液精密量取5ml，蒸干，殘?jiān)?% NaHCO3水溶液IOml使溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次10ml，水液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2-3，經(jīng)過(guò)處理好的5g的大孔樹(shù)脂柱，先用20ml水洗脫，再用60%乙醇20ml洗脫，置25ml量瓶中，并加60%乙醇溶液至刻度；標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取濃度為0. 06mg/ml的菊苣酸對(duì)照品溶液Iml，^il，:3ml，細(xì)1， 5ml, 6ml于6只25ml具塞比色管中，加60%乙醇至10ml，加0. 3%十二烷基硫酸鈉2ml及 0.6% FeCl3 ·6Η20 0. 9% K3 [Fe (CN)6]按 1 1 的混合溶液 lml，混勻，在暗處放置 5min， 加0. lmol/1的HCL溶液至刻度，混勻，在暗處放置20min，以顯色劑為空白，在波長(zhǎng)746nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A，以濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測(cè)定法精密吸取供試品溶液5ml，依標(biāo)準(zhǔn)曲線法操作，本品按干燥品計(jì)算即得； 所述的抱莖苦荬菜菊苣酸、木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷和咖啡酰酒石酸的液相一測(cè)多評(píng)方法，包括下述工藝步驟照中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI D中的高效液相色譜法測(cè)定； 色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相A為乙腈，B為0. 4%磷酸溶液 (ml/ml)按下表進(jìn)行洗脫；流速lml/min，柱溫40°C ；檢測(cè)波長(zhǎng)為348nm，理論板數(shù)按木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ；當(dāng)時(shí)間為Omin時(shí)，A的含量為10%，B的含量為90% ； 當(dāng)時(shí)間為35min時(shí)，A的含量為30%，B的含量為70% ； 當(dāng)時(shí)間為45min時(shí)，A的含量為10%，B的含量為90% ；對(duì)照品溶液的配制精密稱取菊苣酸、咖啡酰酒石酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品各5. Omg,5. OmgUO. Omg分別至25ml棕色量瓶中，50 %甲醇溶液充分溶解并定容至刻度，各精密吸取2. Oml置于同-IOml棕色量瓶中，50%甲醇溶液定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液制備取本品中粉約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇溶液50ml，稱定重量，做功率為300W，頻率為40KHz的超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用 50%甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，分別注入液相色譜儀測(cè)定， 即得。
3. 一種苦碟子注射液用抱莖苦荬菜的栽培與質(zhì)量控制方法，其特征在于為苦碟子注射液生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)藥材原料。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種苦碟子注射液用中藥材抱莖苦荬菜的栽培和質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括育苗、移栽、田間管理與采收，同時(shí)研究了抱莖苦荬菜質(zhì)量控制方法，包括抱莖苦荬菜中大類活性成分黃酮、總酚酸的比色法測(cè)定法和菊苣酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和咖啡酰酒石酸的液相梯度洗脫的一測(cè)多評(píng)方法。該發(fā)明的抱莖苦荬菜栽培技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了一年2茬種植和采收，節(jié)約了土地資源，且單位畝產(chǎn)提高了100％-150％，藥材質(zhì)量符合中藥注射劑用藥材要求。
文檔編號(hào)A01G1/00GK102523862SQ20111036449
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2011年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月16日
發(fā)明者于玲玲, 王學(xué)東, 王松林, 生可心, 馬占芝 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)雙鼎制藥有限公司