專利名稱：hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠的制造及其做為腸病毒感染動(dòng)物模式的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于腸病毒感染動(dòng)物模式的制備，更特別地是關(guān)于SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠的制造，以及其做為手足口病的動(dòng)物模式上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腸病毒71型(EV71)已被證實(shí)會(huì)引起手足口病(HFMD)、皰疹性咽峽炎，和神經(jīng)系統(tǒng)的病變?nèi)鐭o菌性腦膜炎、腦炎及類小兒麻痹癥候群，甚至在嬰幼兒造成致死疾病，并且在全世界爆發(fā)嚴(yán)重的疫情(AbuBakar et al., 1999, Virus Res 61(1), 1-9 ；Chang, Huang, andLin,1998,Lancet 352(9125)，367-8 ;Bible et al.,2007, Rev Med Virol 17(6),371-9) 及至今日，透過公共衛(wèi)生對(duì)腸病毒71型疫情的控制與醫(yī)療照護(hù)仍顯不足。目前并沒有疫苗可供臨床適用。因此，研究腸病毒71型感染的機(jī)制，以供開發(fā)有效的治療藥物或預(yù)防性疫苗實(shí)屬重要?，F(xiàn)已知有多種動(dòng)物模式被發(fā)展，欲應(yīng)用于研究EV71感染的致病原因(參見，例如 Chen et al., 2004, J Gen Virol 85 (Pt I), 69-77 ；Nagata et al., 2004, J GenVirol85(Pt 10),2981-9 ;0ng et al.,2008, J Neuropathol Exp Neurol 67 (6),532-42 ；Weng et al.,2010, Infect 12 (7)，505-10)。而目前使用的腸病毒動(dòng)物模式，是利用新生一天大的ICR小鼠，以EV71感染進(jìn)行人為發(fā)展而得，新生的ICR小鼠在EV71感染后會(huì)出現(xiàn)后肢麻痹，并且最后在受感染2周內(nèi)死亡(ffu et al.，2001，Vaccine20 (5-6)，895-904)。然而，由于該ICR小鼠僅適用于，評(píng)估小鼠對(duì)于腸病毒感染或疫苗引起的免疫反應(yīng)，無法真正模擬在人類受到感染后所引發(fā)的免疫反應(yīng)。同時(shí)，由于該小鼠模式并未呈現(xiàn)腸病毒感染后的HFMD癥狀，故利用其所進(jìn)行的研究觀察只局限于，腸病毒感染后小鼠的存活率及神經(jīng)性毒性，無法確實(shí)應(yīng)用在評(píng)估藥物或疫苗，對(duì)于腸病毒感染的治療及/或預(yù)防功效。此外，目前使用的ICR小鼠因?yàn)槊庖呦?統(tǒng)發(fā)育不全，可能無法充分反應(yīng)腸病毒EV71的毒性，及了解其對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)的影響。再者，目前使用的ICR小鼠是利用小鼠適應(yīng)過的腸病毒株(mouse_adaptedEV71strain，參見 Wang et al.,2004, J Virol 78 (15)，7916-24)進(jìn)行感染試驗(yàn)，但由于該病毒并沒有存在于自然界，故無法使受感染的ICR小鼠表現(xiàn)出真正的，天然流行腸病毒株感染后應(yīng)有的 HFMD 癥狀及神經(jīng)性毒性(Perez-Velez et al.,2007, Clin Infect Dis 45(8)，950-7)。且經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，以自然界流行的腸病毒株感染已知的成年ICR、Balb/c、CH3、C57BL/6等實(shí)驗(yàn)用小鼠(這些皆不表現(xiàn)EV71接受體)后，都完全不會(huì)引起HFMD癥狀及神經(jīng)性毒性(Wang，2004，如前述；Chen et al.,2004, J Gen Virol 85 (Pt I)，69-77)。近來研究發(fā)現(xiàn)，人類清道夫接受體B類，膜蛋白質(zhì)2型(human scavengerreceptor class B, member 2 ；hSCARB2)是腸病毒 71 型及克沙其病毒 16 型(CoxsackieA16)進(jìn)入細(xì)胞的接受器(Yamayoshi et al.Nat Med 15(7):798_801，2009)，雖然小鼠SCARB2與人類SCARB2 (hSCARB2)具有85.8%同源性，但顯示其不作為EV71的受體。本發(fā)明遂建立hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠作為腸病毒實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染模式，以期仿真腸病毒的感染途徑，研究其引起手足口病和神經(jīng)系統(tǒng)病變的致病機(jī)轉(zhuǎn)，并藉以評(píng)估腸病毒疫苗在此動(dòng)物模式中的免疫保護(hù)效力，以及候選治療性藥物或疫苗對(duì)于腸病毒感染的防治功效，以增進(jìn)對(duì)腸病毒感染致病機(jī)制的了解，以及應(yīng)用于有效腸病毒疫苗的研發(fā)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是基于發(fā)現(xiàn)，人類清道夫接受體B類，膜蛋白質(zhì)2型(以下簡(jiǎn)稱SCARB2)為腸病毒進(jìn)入細(xì)胞的接受器，遂建立SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠作為腸病毒71型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染模式，應(yīng)用于研究EV71引起的神經(jīng)系統(tǒng)病變機(jī)轉(zhuǎn)，及分析EV71疫苗的保護(hù)作用，以開發(fā)有效的治療藥物或是預(yù)防腸病毒感染相關(guān)疾病的疫苗。于是，本發(fā)明一方面是關(guān)于，一種制造SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠的方法，其包含:將經(jīng)由微注射入受Elongation factor-1啟動(dòng)子(EF-1 a promoter)驅(qū)動(dòng)的人類SCARB2蛋白基因(SEQ ID N0.1)的小鼠胚胎，轉(zhuǎn)殖到同品系母鼠中使其發(fā)育成鼠；利用PCR分析篩檢出帶有SCARB2蛋白基因型的陽性小鼠，與原生型同品系小鼠互相交配，生成H)小鼠；再次以PCR分析篩選出其基因型為異核型(heterozygous)的陽性FO小鼠，并使呈陽性FO小鼠互相交配生成Fl小鼠；利用PCR分析篩選得其基因型為同核型(homozygous)的陽性Fl小鼠，而得SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠；以及利用RT-PCR分析確認(rèn)Fl基因轉(zhuǎn)殖鼠在主要器官表達(dá)SCARB2蛋白。于本發(fā)明的一具體實(shí)施例，用于基因轉(zhuǎn)殖的小鼠是C57BL/6小鼠。于本發(fā)明的另一具體實(shí)施例，用于基因轉(zhuǎn)殖的小鼠是FVB小鼠。本發(fā)明的SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠于自然界流行的腸病毒株感染后，會(huì)呈現(xiàn)手足口病(HFMD)的癥狀和神經(jīng)系統(tǒng)的病變。因此，該SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠可應(yīng)用做為手足口病的動(dòng)物模式。于本發(fā)明的一具體實(shí)施例，其是用做為腸病毒71型的感染動(dòng)物模式。于本發(fā)明的另一具體實(shí)施例，其是用做為克沙奇病毒16型(Coxsackie A16)的感染動(dòng)物模式。于另一方面，本發(fā)明是關(guān)于一種檢測(cè)腸病毒疫苗保護(hù)效力的方法，利用上述制造SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠的方法所制得的hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠為動(dòng)物模式，評(píng)估候選腸病毒疫苗在疫苗接種后施予腸病毒攻毒時(shí)，對(duì)于已受免疫的hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠所產(chǎn)生的抗病毒保護(hù)效力。于另一方面，本發(fā)明是關(guān)于一種篩選出可有效預(yù)防或治療因腸病毒感染所引起的手足口病的疫苗或藥物的方法。于本發(fā)明的一具體實(shí)施例，該藥物為一種預(yù)防性疫苗。于本發(fā)明的另一具體實(shí)施例，該藥物為一種抗-腸病毒71型的中和抗體。


圖1為用于本發(fā)明方法的攜帶有人類基因的表現(xiàn)載體pEF-1 a -hSCARB2的圖譜。圖2顯示藉由使用SCARB2-專一性引子進(jìn)行PCR反應(yīng)，篩選出帶有人類基因的founder小鼠(A)，及所獲得Fl、F2 Tg小鼠⑶的結(jié)果。圖2 (C)顯示人類SCARB2在SCARB2-轉(zhuǎn)殖基因鼠的主要器官中的表現(xiàn)。圖3為藉由使用VPl-專一性引子進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，測(cè)定于腸病毒EV71/E59感染后第I至4天，病毒在SCARB2-Tg B6小鼠中的分布情形。
圖4為于施予接種后4至6天，在僅接種培養(yǎng)基(A)、非轉(zhuǎn)殖基因小鼠(C)及以IO7Pfu EV71/E59感染的hSCARB2-Tg轉(zhuǎn)殖基因鼠(B)所觀察的類手足口病(HFMD)，包括掉毛
與皮屑產(chǎn)生情形。圖5為感染后第8天至12天期間，所觀察到的行動(dòng)困難與后肢麻痹的計(jì)分圖。圖6為以VP-1專一性RT-PCR偵測(cè)病毒感染后期(感染后12天)，于小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)及主要器官的EV-71病毒分布。圖7顯示以同型抗體(□)及以抗EV-71抗體處理(■)的hSCARB2_Tg轉(zhuǎn)殖基因鼠，在對(duì)抗病毒感染EV715746-TW98的存活率。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的其他特色及優(yōu)點(diǎn)將于下列實(shí)施范例中被進(jìn)一步舉例與說明，而該實(shí)施范例僅作為輔助說明，并非用于限制本發(fā)明的范圍。根據(jù)本發(fā)明所呈現(xiàn)的各種實(shí)施例，下述各種儀器、裝置、方法和其相關(guān)結(jié)果者，實(shí)施例中為了方便讀者閱讀所使用的標(biāo)題或副標(biāo)題，并不被限制在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。此外，在此所提出和披露的某些理論，但無論他們是對(duì)還是錯(cuò)，只要該創(chuàng)作是根據(jù)本發(fā)明所實(shí)施的，而不需考慮任何特定的理論或行動(dòng)的計(jì)劃，都應(yīng)被限制在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。實(shí)施例實(shí)施例一:SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠的制備將所合成得具有密碼子最適化的人類SCARB2基因(SEQ ID N0.1)片段使用EcoRI與BamHI限制酶,插入pEF- la質(zhì)體(該質(zhì)體是以pcDNA3.1(-)載體(Invitrogen)為背景經(jīng)修改后而得的載體，其中原有的巨細(xì)胞病毒增效子/啟動(dòng)子以增長(zhǎng)因子I a (EF-1 a )的啟動(dòng)子取代)中，位于啟動(dòng)子與牛生長(zhǎng)激素(BGH)聚A尾端間的多重選殖部位(multiplecloning site)，而得到 pEF-1 a -hSCARB2 構(gòu)體(圖1)?；蜣D(zhuǎn)殖動(dòng)物的產(chǎn)生是依照Brinster等人(Brinster et al., 1985)所述的操作步驟來進(jìn)行。所使用的C57BL/6小鼠購自國家應(yīng)用研究實(shí)驗(yàn)室-實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(NationalApplied Research Laboratories-Laboratory Animal Center,臺(tái)灣)。進(jìn)行顯微注身寸前先將質(zhì)體以限制酵素線形化，并使用凝膠萃取套組(Qiagen，德國)將其從瓊脂糖凝膠(Thermo Fisher Scientific, IL, USA)中回收得。將Ing線形pEF-1 a -hSCARB2構(gòu)體經(jīng)由顯微注射，導(dǎo)入處于單細(xì)胞階段的已受精的C57BL/6小鼠胚胎中，接著將該胚胎植入到同品系假懷孕的母鼠內(nèi)使其發(fā)育成鼠。利用PCR分析篩檢出帶有hSCARB2蛋白基因型的陽性小鼠，與原生型同品系小鼠互相交配，生成FO小鼠。PCR分析方法簡(jiǎn)述如下:使用組織與細(xì)胞基因組DNA萃取套組(Tissue &Cellgenomic DNA extraction kit, Favorgen,臺(tái)灣)從基因轉(zhuǎn)殖鼠尾部萃取出基因組DNA。藉由使用前向引子:5’ -TGGACCAGAGCATCGAGAA-3’ (SEQ ID N0.2)與反向引子:5’ -TAGGTGTAGGGGCCCACTT-3’ (SEQ ID N0.3)于 72°C 下 2 分鐘進(jìn)行的 PCR 反應(yīng)擴(kuò)增一段長(zhǎng)度為175bp的片段(SEQ ID N0.1的98_272bp)，以偵測(cè)hSCARB2基因是否存在基因組DNA中。用于進(jìn)行PCR反應(yīng)的條件設(shè)定如下:于95°C下2分鐘；隨后進(jìn)行40次包括于95°C下30秒、于50°C下30秒與于72°C下10秒的循環(huán)周期；之后再于72°C下反應(yīng)2分鐘。
結(jié)果篩檢出六只帶有轉(zhuǎn)殖基因的小鼠-N0.2 (雄性，m) ,N0.9 (雌性，f) ,N0.18 (m)、N0.27(f)、N0.54 (m)及N0.62(f)(參見圖2A)。再次以PCR分析篩選出其基因型為異核型(heterozygous)的陽性FO小鼠，并使呈陽性FO小鼠互相交配生成Fl小鼠；利用PCR分析篩選得其基因型為同核型(homozygous)的陽性Fl小鼠，而得hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠(結(jié)果參見圖2B)。藉由將所得的hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠個(gè)體彼此進(jìn)行交配，獲得Fl近親交配種小鼠，以維持該基因轉(zhuǎn)殖純系。進(jìn)一步以前述的hSCARB2特異性引子對(duì)及購自Roche Universal ProbeLibrary Assay Design Center(Roche, Switzerland)的探針組，進(jìn)行 RT-PCR 分析(The LightCycler 480 Real-Time PCR system)，來確認(rèn)及定量人類 SCARB2 蛋白在 Fl 基因轉(zhuǎn)殖鼠的主要器官中的表達(dá)。PCR產(chǎn)物大小為97bp。使用不同濃度(5、0.5及0.05pg/ml)的pEF-1 a -hSCARB2質(zhì)體為標(biāo)準(zhǔn)物。比較用以從各器官擴(kuò)增hSCARB2基因所需要的循環(huán)次數(shù)。結(jié)果顯示，在取自基因轉(zhuǎn)殖小鼠的包括腦干、大腦皮質(zhì)、延腦與脊髓等中樞神經(jīng)組織，以及肺、肝、脾、腎、十二指腸、小腸等主要器官及皮膚中，皆發(fā)現(xiàn)有表現(xiàn)hSCARB2轉(zhuǎn)殖基因(圖2C)。實(shí)施例二:SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠受腸病毒感染后的病毒血癥及手足口病(HFMD)和神經(jīng)系統(tǒng)病變的癥狀分析將1-天或4-天大的小鼠經(jīng)皮下注射，接種入腸病毒EV71E59或5746-tw98分離株(每只小鼠施予IxlO6或IxlO7Pfu,存在10 μ L RPMI培養(yǎng)基中)，以模擬觀察新生小鼠受病毒感染后，腸病毒于小鼠主要器官中的分部情形，及外在所發(fā)生的病癥。對(duì)照組施給VP-SFM培養(yǎng)基。對(duì)于腸病毒EV71的偵測(cè)，為將經(jīng)感染的小鼠于特定天數(shù)后將其犧牲，采取血液或器官組織樣本，并針對(duì)VPl基因進(jìn)行專一性的即時(shí)(real-time)RT-PCR。將自血液樣本或組織均質(zhì)化產(chǎn)物萃取得的總體RNA，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)轉(zhuǎn)變成cDNA。再將所得的cDNA使 用EV71 VPl專一性引子對(duì)，前向引子:5’-AGAGAGTCACTTGCTTGGCAGACA-3’ (SEQ ID N0.4)與反向引子:5’-ACGACTAGTGCCGGTCGGITTAAT-3’ (SEQ ID N0.5)，進(jìn)行定量PCR分析來偵測(cè)EV71的存在量。由圖3的結(jié)果顯示，于腸病毒EV71感染后I至6天，在SCARB2_Tg B6轉(zhuǎn)殖基因鼠的中樞神經(jīng)(腦與脊髓)及肝臟、肺臟、小腸、腎臟、脾臟、皮膚等，偵測(cè)到有病毒存在。此外，相對(duì)于SCARB2-轉(zhuǎn)殖基因鼠，于非轉(zhuǎn)殖基因鼠的神經(jīng)器官(腦，脊髓)和主要器官(肝、肺、腎、皮膚等)皆偵測(cè)不到病毒量分布，表示hSCARB2的表現(xiàn)對(duì)于EV71在小鼠中的可感染力而言很重要。除了測(cè)定病毒量分布，亦于施予病毒感染后，每天觀察于對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠產(chǎn)生的手足口病(HFMD)及神經(jīng)性毒性(CNS)癥狀。病理分析發(fā)現(xiàn)，以腸病毒71型E59B型病毒株感染一天大的SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠，會(huì)使受感染小鼠產(chǎn)生類似出現(xiàn)在人類受腸病毒EV71-感染幼兒的紅疹，且有嚴(yán)重毛發(fā)掉落伴隨皮屑(scurf)產(chǎn)生，這些癥狀皆為典型的類手足口病癥狀(HFMD-like syndrome)(參見圖4)。而且，在施予感染的轉(zhuǎn)殖基因鼠亦出現(xiàn)包括前后足麻痹，而導(dǎo)致行走困難的神經(jīng)系統(tǒng)病癥(CNS-like syndrome)。在感染后7天開始，轉(zhuǎn)殖基因鼠即出現(xiàn)后肢麻痹伴隨行動(dòng)困難的現(xiàn)象，而非轉(zhuǎn)殖基因鼠在感染后并未呈現(xiàn)此類似病癥，關(guān)于在感染后第8天至12天期間，所觀察到的行動(dòng)困難與后肢麻痹的計(jì)分結(jié)果列不于圖5。而且由圖6的病毒分布偵測(cè)結(jié)果顯示，在施予病毒感染后第12天，于已發(fā)生后肢麻痹的小鼠的脊髓中可偵測(cè)到，但是在沒有呈現(xiàn)任何行走困難的非轉(zhuǎn)殖基因鼠，則沒有偵測(cè)到病毒，表示所觀察到的CNS病癥，是由于脊隨受到腸病毒感染所致。前述的觀察結(jié)果均顯示，以腸病毒71型感染新生SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠，確實(shí)會(huì)產(chǎn)生類似于腸病毒感染在人類嬰兒所引起的癥狀。亦即，本發(fā)明的SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠可有效做為，天然存在的腸病毒感染的動(dòng)物模式。實(shí)施例三:以SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠檢測(cè)抗EV-71抗體對(duì)于腸病毒感染的防治功效本實(shí)施例藉由將已知具有腸病毒中和活性的抗EV-71單株抗體，投藥予預(yù)先經(jīng)天然EV71 5746-TW98腸病分離毒株感染的SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠，并檢測(cè)該單株抗體對(duì)于保護(hù)小鼠對(duì)抗腸病毒感染的功效，以評(píng)估及證明本發(fā)明的SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠，做為抗腸病毒藥物篩選平臺(tái)的實(shí)用性。實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)述如下:將7天大的SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠以皮下方式，注射入劑量為3xl04 pfu的EV71 5746-TW98腸病毒株進(jìn)行感染。接著在注射病毒4小時(shí)后進(jìn)行投藥，將該經(jīng)過腸病毒株感染的SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠以腹膜內(nèi)注射方式，投藥以200 μ g的同型小鼠IgGl抗體(做為對(duì)照組)，或抗EV-71單株抗體(已被鑒定具有中和活性，參見Chang，HWet al., Journal of Virological Methods7(I):62,2011)。圖7列示于同型抗體處理組(口，對(duì)照組，總數(shù)10只小鼠)，及抗EV-71抗體處理組(■，實(shí)驗(yàn)組，總數(shù)12只小鼠)所得的存活率觀察結(jié)果。于hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠可明顯區(qū)分，EV-71抗體與對(duì)照組抗體在抑制受感染小鼠的致死性上的功效差異，顯示本發(fā)明的hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠可用于評(píng)估已知或研發(fā)中藥物的抗腸病毒感染功效，或用于評(píng)估EV71疫苗在此動(dòng)物模式中的免疫保護(hù)效力。其他具體態(tài)樣本說明書中所揭示的全部特征可以任何組合方式組合。于是，本說明書中所揭示的各別特征可由依相同、相等或類似目的的替代特征取代。因此，除非另行清楚地指示，所揭示的各特征僅為一系列同等物或類似特征的實(shí)例。從前述的說明，習(xí)于該項(xiàng)技藝人士可容易地確定本發(fā)明的基本特征，且在未偏離其范圍下，可進(jìn)行本發(fā)明的各種改變與修飾，以使其適于各種不同用途與狀況。因此，于申請(qǐng)專利范圍內(nèi)亦包含其他具體 態(tài)樣。
權(quán)利要求
1.一種制造hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠的方法，其特征在于，包含下列步驟: a.將經(jīng)由微注射入受Elongationfactor-1啟動(dòng)子(EF-1 a promoter)驅(qū)動(dòng)的人類SCARB2蛋白(hSCARB2)基因(SEQ ID N0.1)的小鼠胚胎，轉(zhuǎn)殖到同品系母鼠中使其發(fā)育成鼠； b.利用PCR分析篩檢出帶有hSCARB2蛋白基因型的陽性小鼠，與原生型同品系小鼠互相交配，生成H)小鼠； c.再次以PCR分析篩選出其基因型為異核型(heterozygous)的陽性FO小鼠，并使呈陽性H)小鼠互相交配生成Fl小鼠； d.利用PCR分析篩選得其基因型為同核型(homozygous)的陽性Fl小鼠，而得hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠；及 e.利用RT-PCR分析確認(rèn)Fl基因轉(zhuǎn)殖鼠在主要器官表達(dá)hSCARB2蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，該基因轉(zhuǎn)殖鼠于自然界流行的腸病毒株感染后，會(huì)呈現(xiàn)手足口病(HFMD)的癥狀和神經(jīng)系統(tǒng)的病變。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，該用于基因轉(zhuǎn)殖的小鼠是C57BL/6小鼠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，該用于基因轉(zhuǎn)殖的小鼠是FVB小鼠。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，該制得的hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠用做為手足口病的動(dòng)物模式。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，該制得的hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠用做為腸病毒71型的感染動(dòng)物模式。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，該制得的hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠用做為克沙奇病毒16型(Coxsackie A16)的感染動(dòng)物模式。
8.一種檢測(cè)腸病毒疫苗保護(hù)效力的方法，其特征在于，利用根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法所制得的hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠為動(dòng)物模式，評(píng)估候選腸病毒疫苗在疫苗接種后施予腸病毒攻毒時(shí)，對(duì)于已受免疫的hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠所產(chǎn)生的抗病毒保護(hù)效力。
9.一種用于篩檢出有效治療腸病毒所引起的手足口病的治療性疫苗或藥物的方法，其特征在于，包含: (1)將根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法所制得的hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠以自然界流行的腸病毒株感染，使其呈現(xiàn)手足口病(HFMD)的癥狀； (2)將呈現(xiàn)病癥的hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠施予候選疫苗或藥物； (3)于一段治療時(shí)間后，與未施予候選疫苗或藥物的動(dòng)物進(jìn)行比較，以評(píng)估該候選疫苗或藥物在療腸病毒所引起的手足口病的功效。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，用于篩選出用于治療腸病毒71型感染的藥物。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，用于篩選出用于治療克沙奇病毒16型感染的藥物。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于EV71接受體SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠的制造，本發(fā)明所制得的SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠可做為手足口病，例如腸病毒71型或克沙奇病毒16型(Coxsackie A16)感染的動(dòng)物模式，以供評(píng)估腸病毒疫苗免疫保護(hù)功效，及腸病毒感染的病理研究上的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61D19/04GK103081868SQ201110397498
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2011年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月3日
發(fā)明者周彥宏, 莊再成, 林怡玟 申請(qǐng)人:財(cái)團(tuán)法人衛(wèi)生研究院