專利名稱：一株?yáng)旁逶逯昙捌鋺?yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物工程領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一株?yáng)旁逶逯?Desmodesmussp.)及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
日益嚴(yán)重的能源短缺與環(huán)境惡化問(wèn)題已成為全世界關(guān)注的熱點(diǎn)。石油、天然氣、煤等化石燃料是當(dāng)今的主要能量來(lái)源，這類能源不可再生，隨著這類能源的不斷消耗，其天然儲(chǔ)備急劇減少，按照全世界對(duì)化石燃料的消耗速度計(jì)算，這些能源可供人類使用的時(shí)間大約還有:石油45-50年，天然氣50-60年，煤炭200-220年?；剂先紵a(chǎn)生大量的水和二氧化碳，二氧化碳又是全球氣候變暖的主要原因。許多科學(xué)家都認(rèn)為，煤、油、天然氣和樹木的燃燒產(chǎn)生大量二氧化碳，二氧化碳進(jìn)入大氣層后使地球升溫，全球性的溫度的升高將產(chǎn)生一系列的臺(tái)風(fēng)、干旱、洪水和冰川加速融化的問(wèn)題，對(duì)于人類的長(zhǎng)期發(fā)展形成巨大的威脅。目前的二氧化碳治理所采用的捕捉掩埋技術(shù)成本較高，不適用于大面積推廣。除廢氣夕卜，化石燃料的燃燒、各種產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的廢棄物導(dǎo)致的水污染也越來(lái)越引起全世界人們的關(guān)注。能源微藻技術(shù)的發(fā)展將為上述問(wèn)題的解決提供了新的方向。微藻是體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、生長(zhǎng)迅速的單細(xì)胞藻類，其分布極其廣泛，從熱帶、溫帶到寒帶直至南北兩極，從淡水湖泊、鹽堿沼澤到海水，從水表到大洋深處幾乎都有微藻存在和繁衍。微藻還具有光能轉(zhuǎn)換率高、對(duì)環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)、易于遺傳改良等特點(diǎn)，可以對(duì)其進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。目前，微藻在大氣污染和水污染治理、生物質(zhì)能源等領(lǐng)域的開發(fā)應(yīng)用價(jià)值得到日益關(guān)注。柵藻是淡水中常見 的浮游藻類，極喜在營(yíng)養(yǎng)豐富的靜水中繁殖。許多種類的柵藻對(duì)有機(jī)污染物具有較強(qiáng)的耐性。柵藻在水體自凈和污水凈化中有一定作用，是有機(jī)污水氧化塘生物相中的優(yōu)勢(shì)種類。它可與細(xì)菌同時(shí)附著在水中有機(jī)物碎片和其他水生植物體上，形成膠質(zhì)層，吸附有機(jī)物。柵藻進(jìn)行光合作用時(shí)，一方面產(chǎn)生氧氣供細(xì)菌分解有機(jī)質(zhì)的需要，另一方面還可直接利用有機(jī)質(zhì)作為碳源和氮源，使水中有機(jī)物迅速降解，從而凈化水體。柵藻細(xì)胞內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)和維生素，是魚類很好的飼料，大量繁殖的藻體也可作為家禽的飼料。柵藻繁殖快，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，可作為人工大量培養(yǎng)的材料。季祥、王金榮等發(fā)表的一株斜生柵藻的篩選及生長(zhǎng)條件的優(yōu)化(水產(chǎn)科技情報(bào)201037 (6))文獻(xiàn)中公開了柵藻的藻株，在分類學(xué)上與本專利的柵藻藻株各屬于不同屬，含油率為31.5%，此文并未研究藻株的特殊環(huán)境條件下生長(zhǎng)和收集特性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一株?yáng)旁逶逯?，可用于上述領(lǐng)域，且具有耐高溫、易收集的特點(diǎn)，環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)，適于高密度養(yǎng)殖，產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用潛力較大，可用于環(huán)境或工業(yè)生產(chǎn)中廢棄二氧化碳的處理、生物能源的生產(chǎn)和廢水處理。本專利中的藻株具有耐高溫、易收集等特點(diǎn)。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下:本發(fā)明提供的柵藻藻株(Desmodesmus sp.)為ENN2203A，于2010年11月11日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏號(hào)為CGMCC N0.4323。該ENN2203A柵藻藻株屬淡水藻，柵藻屬，橢圓形，大小10 μ m左右，兩端及側(cè)面帶刺，常以四聯(lián)體、二聯(lián)體形式存在，也有單體存在，細(xì)胞內(nèi)單個(gè)蛋白核(見圖2);生長(zhǎng)迅速，沉降性好，易收集，含油率高、提取總脂時(shí)較為容易，具有較大的大生產(chǎn)應(yīng)用潛力，最高總脂含量達(dá)到52.168%。所述ENN2203A柵藻藻株的ITS部分序列為: TTTTTCCTCCCCCTTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTAGCCTTGCCTGAGCTCAGGTCGAATACAGAGATACGCGTCAGAGACACGTTTCCTGCTTGGCTCCTAACCAGGTCCTCAGACACAACTTCGTGTAGGCACCCGAGGGTGTTGCTACCTATGCAGTTGAGGGCGAATGGGGTGGCAGTTTAAGCCTCTGTGCTTCAGCCAACCCAATCGGAGGTGAGTCCGATTGGGAGGGCCAGATCCACCCCTGATGCCGGCTTGAGCAAGCACGACAAGCTTCCTGTTGAGGAAGAGGGGTGAGGGTGTAAACCGACGCTGAGGCAGACATGCTCTTCTCCGAGGAGTCGAGCGCAATATGCGTTCAAAGATTCGATGGTTCACGGAATTCTGCAATTCACACTACGTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGTTGCGAGAGCCAAGATATCCGTTGTTGAGAGTTGTTTTCGTTAAAACTGCCGATTAACAGCAGCTGAAACTTCAGAGTTTGGTTTAATCAAATGTTGGTCAATGGTGTGTGTGTAGGTTAGTAGGCAAAACCAGGGTTAGTGGTTCGACCTAACGTCGGTACACAAATAAAAGAGTGCGTGTTGTGGTTTGCATATTCAATGATCCTTCCGCAGGTTCACCTACGGAAACCTTGTTACGACTTTTAGCATCCAAAAA，其如SEQ ID N0.1所示。將獲得的ENN2203A的ITS部分序列及5.8S序列登錄GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST比對(duì)，結(jié)果顯示與ACCESSION號(hào)為DQ417525.1的Desmodesmusmutilvariousi 的 internal transcribed spacer 1,5.8S ribosomalRNA gene andinternal transcribed spacer 2sequence具有較高的相似性達(dá)95 %,覆蓋率只有92 %(圖1);表明ENN2203A與Desmodesmus mutilvariousi的親緣關(guān)系最近,說(shuō)明兩者為同屬藻株。

本發(fā)明通過(guò)自然界藻種分離純化及篩選，獲得一株性能良好的柵藻藻株(Desmodesmus sp.)ENN2203A。由于本發(fā)明提供的柵藻藻株ENN2203A在常溫與高溫下養(yǎng)殖干重全程差異都不大，最終15天時(shí)干重達(dá)7.2g/L左右，在40°C高溫下養(yǎng)殖8-12h對(duì)ENN2203A的生長(zhǎng)幾乎沒有影響，因此具有生物量高、生長(zhǎng)速度快、培養(yǎng)密度高、環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，適合產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。而且本發(fā)明提供的藻株的總油脂含量可達(dá)50%以上，具有油脂含量高的特性，特別適合生物柴油的生產(chǎn)。本發(fā)明提供的柵藻藻株ENN2203A作為生長(zhǎng)迅速，富含蛋白質(zhì)和各種不飽和脂肪酸，可被廣泛用作為許多水產(chǎn)品幼體的開口餌料或輪蟲的餌料，也可用于開發(fā)生產(chǎn)動(dòng)物飼料。本發(fā)明還提供了柵藻藻株ENN2203A的以下用途:其可用于含氮磷污水的污處理；其可用于二氧化碳減排。具體地，本發(fā)明包括以下方面:1、一株?yáng)旁逶逯?Desmodesmus sp.)ENN2203A，其保藏號(hào)為 CGMCCN0.4323。2、按以上I所述的柵藻藻株ENN2203A，其特征在于，所述柵藻藻株如SEQ ID N0.1所示的ITS部分序列。3、按以上1所述的柵藻藻株ENN2203A，其特征在于，所述柵藻藻株具有高溫耐受性；優(yōu)選耐受15-40°C的溫度。4、按以上1所述的柵藻藻株ENN2203A，其特征在于，所述柵藻藻株的12小時(shí)沉降率為95%以上。5、按以上1所述的柵藻藻株ENN2203A的養(yǎng)殖方法，其特征在于，所述柵藻藻株在15-40°C的溫度下養(yǎng)殖。6、按以上1所述的柵藻藻株ENN2203A的收集方法，其特征在于，所述柵藻藻株使用自然沉降法收集。7、一種以上1所述柵藻藻株ENN2203A的用途，其為用于含氮磷污水的污處理。
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8、一種以上1所述柵藻藻株ENN2203A的用途，其為用于二氧化碳減排。9、一種以上1所述柵藻藻株ENN2203A的用途，其為用于生物柴油生產(chǎn)。10、一種以上1所述柵藻藻株ENN2203A的用途，其為用于水產(chǎn)品餌料或動(dòng)物飼料。本發(fā)明的技術(shù)效果如下:1、本發(fā)明的柵藻藻株沉降性能良好，有效降低藻體收集的成本；2、本發(fā)明的柵藻藻株耐高溫性能良好，適于夏季室外養(yǎng)殖；3、本發(fā)明的柵藻藻株生長(zhǎng)速度快，易于實(shí)現(xiàn)高密度養(yǎng)殖，適合于產(chǎn)業(yè)化推廣；4、本發(fā)明的柵藻藻株可用于含氮磷污水的污處理、可用于二氧化碳減排、用于生物柴油生產(chǎn)或用于水產(chǎn)品餌料或動(dòng)物飼料。


圖1為ENN2203A部分ITS序列進(jìn)行Blast的比對(duì)結(jié)果；圖2為本發(fā)明柵藻藻株的形態(tài)；圖3為ENN2203A室內(nèi)養(yǎng)殖生長(zhǎng)曲線；圖4為ENN2203A高溫耐受性生長(zhǎng)曲線；和圖5為ENN2203A廢水廢氣養(yǎng)殖生長(zhǎng)曲線。
具體實(shí)施例方式下面將詳細(xì)描述本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，這僅用于解釋本發(fā)明，而不能解釋為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1篩選產(chǎn)油柵藻藻株取無(wú)菌水稀釋后的從廊坊地區(qū)取回的河水水樣，在400倍顯微鏡觀察后，大約細(xì)胞濃度為800-1200個(gè)/ml，用毛細(xì)管取大約Iul的藻液，接種于48孔裝有BGll培養(yǎng)基(見表I)的培養(yǎng)板中，在25°C、光照強(qiáng)度為50umol/m2.s情況下進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)達(dá)到107/ml細(xì)胞濃度時(shí)，顯微鏡觀察，選擇只有單藻株的孔，稀釋至細(xì)胞濃度為1000-3000個(gè)/ml后鋪平板，得到單藻株并保存于BGll固體平板上，命名為ENN2203A。表IBGll培養(yǎng)基配方
權(quán)利要求
1.一株?yáng)旁逶逯?Desmodesmus sp.) ENN2203A，其保藏號(hào)為 CGMCCN0.4323。
2.按權(quán)利要求1所述的柵藻藻株ENN2203A，其特征在于，所述柵藻藻株如SEQID N0.1所示的ITS部分序列。
3.按權(quán)利要求1所述的柵藻藻株ENN2203A，其特征在于，所述柵藻藻株具有高溫耐受性；優(yōu)選耐受15-40°C的溫度。
4.按權(quán)利要求1所述的柵藻藻株ENN2203A，其特征在于，所述柵藻藻株的12小時(shí)沉降率為95%以上。
5.—種按權(quán)利要求1所述的柵藻藻株ENN2203A的養(yǎng)殖方法,其特征在于,所述柵藻藻株在15-40°C的溫度下養(yǎng)殖。
6.一種按權(quán)利要求1所述的柵藻藻株ENN2203A的收集方法，其特征在于，所述柵藻藻株使用自然沉降法收集。
7.一種權(quán)利要求1所述柵藻藻株ENN2203A的用途，其為用于含氮磷污水的污處理。
8.—種權(quán)利要求1所述柵藻藻株ENN2203A的用途，其為用于二氧化碳減排。
9.一種權(quán)利要求1所述柵藻藻株ENN2203A的用途，其為用于生物柴油生產(chǎn)。
10.一種權(quán)利要求1 所述柵藻藻株ENN2203A的用途，其為用于水產(chǎn)品餌料或動(dòng)物飼料。
全文摘要
本發(fā)明提供一株?yáng)旁逶逯?Desmodesmus sp.)及其應(yīng)用，其為ENN2203A，于2010年11月11日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏號(hào)為CGMCC NO.4323。本發(fā)明的柵藻藻株具有耐高溫、易收集的特點(diǎn)，環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)，適于高密度養(yǎng)殖，可用于含氮磷污水的污處理，可用于二氧化碳減排，用于生物柴油生產(chǎn)或用于水產(chǎn)品餌料或動(dòng)物飼料等，產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用潛力較大。
文檔編號(hào)A23K1/00GK103160440SQ201110427579
公開日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2011年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月19日
發(fā)明者王媛媛, 鄧平, 吳義誠(chéng), 馬建源, 邵元龍, 吳洪 申請(qǐng)人:新奧科技發(fā)展有限公司