專利名稱：一種生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法，屬于農(nóng)業(yè)栽培領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
馬鈴薯既是我國(guó)主要糧食作物之一，又是重要的飼料和工業(yè)原料作物，具有很高的經(jīng)濟(jì)效益。但由于馬鈴薯品種退化、病害嚴(yán)重，導(dǎo)致薯類產(chǎn)業(yè)發(fā)展受限。近年來(lái)，通過培育脫毒種薯，建立良種繁育體系，有效地解決了制約馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個(gè)關(guān)鍵問題。脫毒種薯是剝離馬鈴薯植株0. 3mm莖尖培養(yǎng)成再生植株，經(jīng)病毒血清學(xué)檢測(cè)后的無(wú)毒植株，進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖的生產(chǎn)出試管苗，在非常嚴(yán)格的防蟲、防接觸、防毒源等溫室和網(wǎng)室隔離生產(chǎn)條件下，經(jīng)過基質(zhì)或霧化栽培結(jié)出小薯，這種小薯為原原種，再用原原種在網(wǎng)室或田間隔離生產(chǎn)條件下繁育一季，產(chǎn)出的薯塊為原種，用原種擴(kuò)大繁殖生產(chǎn)出的薯塊為脫毒薯生產(chǎn)種，脫毒種薯是當(dāng)前薯類生產(chǎn)中防治薯類病毒病、提高產(chǎn)量的一種有效途徑。在脫毒種薯的生產(chǎn)過程中，脫毒試管苗的快繁及原原種的生產(chǎn)是一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其快繁的速度和成本對(duì)脫毒原原種薯的成本影響較大，因此降低脫毒試管苗及原原種生產(chǎn)成本對(duì)薯類推廣脫毒種薯具有重要的作用和意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種簡(jiǎn)便、高效、低成本、流水化的生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下一種生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法，包括以下步驟
(一)馬鈴薯試管苗的實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)
(1)制作聚丙烯薄膜袋將聚丙烯薄膜裁減成35CmX10Cm的長(zhǎng)方形，從15cm處折疊兩個(gè)2. 5cm寬后，用塑料封口機(jī)將兩邊粘合在一起，做成高15cm，寬IOcm的開口袋子；
(2)培養(yǎng)基的配制與分裝將配制好的培養(yǎng)基趁熱分裝入聚丙烯薄膜袋中，冷卻凝固后用塑料封口機(jī)進(jìn)行封口待用；
(3)無(wú)菌操作用75%酒精擦拭超凈工作臺(tái)，開超凈工作臺(tái)和室內(nèi)紫外燈，殺菌20 30min;用75%酒精消毒雙手、試驗(yàn)用具以及塑料袋封口機(jī)，打開接種消毒器，溫度達(dá)290°C 300°C時(shí)把切割刀和鑷子等操作工具放入消毒約5分鐘，取出，放在工具架上冷卻；
當(dāng)脫毒馬鈴薯試管苗的基礎(chǔ)苗繁殖到一定數(shù)量后，將要轉(zhuǎn)接的馬鈴薯試管苗瓶用75%酒精噴霧消毒后放入超凈工作臺(tái)內(nèi)，1號(hào)組培技術(shù)工人在超凈工作臺(tái)內(nèi)將基礎(chǔ)苗從培養(yǎng)袋中取出，置無(wú)菌濾紙上，用剪刀剪成Icm左右長(zhǎng)度同時(shí)帶1 2片葉的試管苗；2號(hào)技術(shù)工人剪開已灌裝培養(yǎng)基且培養(yǎng)基已凝固的薄膜袋封口處，用消毒過并冷卻的鑷子將1號(hào)組培技術(shù)工人切割的試管苗夾入薄膜袋內(nèi)；3號(hào)組培技術(shù)工人將2號(hào)組培技術(shù)工人放入的試管苗的莖段插入培養(yǎng)基中0. 3 0. 5cm左右；4號(hào)組培技術(shù)工人將3號(hào)組培技術(shù)工人做好的裝有繁殖的試管苗的薄膜袋用塑料袋封口機(jī)將其薄膜袋封口，寫上培養(yǎng)的試管苗編號(hào)，放置于培養(yǎng)室中的培養(yǎng)架上，培養(yǎng)15 20天；
(4)將待要移栽的試管苗薄膜袋置于溫室或網(wǎng)室中進(jìn)行煉苗5 7天后，用剪刀剪開薄膜袋封口，取出試管苗用清水洗凈根部培養(yǎng)基，保濕待用；
(二)試管苗大棚內(nèi)無(wú)糖培養(yǎng)快速繁殖
(1)將試管苗浸泡在植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑溶液中20分鐘，取出，此時(shí)的試管苗是帶腋芽的1 2節(jié)莖段的扦插苗，準(zhǔn)備具有栽培基質(zhì)的穴盤，將所述扦插苗扦插到穴盤的穴盤孔中，扦插完后澆水至水從穴盤底孔中流出；
(2)將完成的穴盤放入水槽內(nèi)進(jìn)行液體培養(yǎng)，水槽內(nèi)具有營(yíng)養(yǎng)液I，保持營(yíng)養(yǎng)液深度為0. 3cm左右，在穴盤表面覆蓋地膜培養(yǎng)，若晴天太陽(yáng)大時(shí)遮陰；
(3)待扦插苗長(zhǎng)根并長(zhǎng)出新葉，苗高度達(dá)到2 3cm時(shí)，掀開薄膜，往穴盤里添加栽培基質(zhì)至與穴孔口齊平；
(4)若水槽內(nèi)營(yíng)養(yǎng)液I被蒸發(fā)和被根系吸收完畢時(shí)，重新配制營(yíng)養(yǎng)液I倒入水槽，保持營(yíng)養(yǎng)液深度為0. 3cm左右，此過程持續(xù)3周；
(5)待苗長(zhǎng)成8 10片葉左右時(shí)，將離頂部4 6片葉莖段剪下，再將莖段剪成帶腋芽的1 2節(jié)短莖段進(jìn)行扦插繁殖；當(dāng)留下的苗有分枝又長(zhǎng)成8 10片葉左右時(shí)，將離頂部6 8片葉莖段剪下，再將莖段剪成帶腋芽的1 2節(jié)短莖段形成扦插苗，重復(fù)步驟(二)2 3次繼續(xù)扦插繁殖，擴(kuò)大種苗數(shù)量；
(6)當(dāng)扦插苗移栽生長(zhǎng)到第4周時(shí)進(jìn)入步驟(三)；(三)基質(zhì)+液體培養(yǎng)生產(chǎn)原原種
(1)扦插苗生長(zhǎng)在第4周時(shí)，更換水槽內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)液為營(yíng)養(yǎng)液II，深度保持為1 2cm，同時(shí)在穴盤下墊上直徑大約Icm的塑料硬管，使穴盤底部不接觸水槽底部，此過程持續(xù)2周；
(2)扦插苗生長(zhǎng)在第6周時(shí)，更換水槽內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)液為營(yíng)養(yǎng)液III，深度保持1 2cm，同時(shí)在穴盤下墊上直徑大約Icm的塑料硬管，使穴盤底部不接觸水槽底部，此過程持續(xù)2周；
(3)扦插苗生長(zhǎng)在第8周時(shí)，更換水槽內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)液為營(yíng)養(yǎng)液IV，深度保持1 2cm，同時(shí)在穴盤下墊上直徑大約Icm的塑料硬管，使穴盤底部不接觸水槽底部，此過程持續(xù)至原原種收獲期；
(4)在收獲前一周放干水槽內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)液，待植株自然黃化、萎蔫后，收獲原原種，收獲的原原種分級(jí)貯藏。 (一)(2)步驟中所述的培養(yǎng)基按照如下方法配制
①準(zhǔn)確稱取KH2PO4 170mg、NH4NO3 1650mg、KNO3 1900mg、CaCl2 · 2H20 440mg 和MgSO4 · 7H20 370mg，分別置于200ml的燒杯中，加純凈水IOOml分別溶解后，按照所列各藥品先后順序?qū)⑷芤夯旌显?000ml的燒杯中，注意混合時(shí)要慢，不斷攪拌，待用；
②準(zhǔn)確稱取MnSO4·4Η20 22. 3 mg、ZnSO4 ·7Η20 8.6 mg、H3BO3 6.2 mg、KI 0. 83 mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 25 mg、CoCl2 · 6H20 0. 025 mg、CuSO4 · 5H20 0. 025 mg、FeSO4 · 7H20 27. 8mg, Na—EDTA 37.3 mg、煙酸 0.5 mg、維生素 B6 0. 5mg、維生素 B1 0. lmg、甘氨酸 2. 0 mg 以及肌醇100 mg，置于200ml的燒杯中，加純凈水溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；
③準(zhǔn)確稱取瓊脂6g、蔗糖30g、抗生素;3mg、殺菌劑Img以及多效唑5mg，倒入①步驟中的2000ml的燒杯中攪拌，同時(shí)加熱，沸騰后加純凈水至燒杯刻度IOOOmL處，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH值到6. 5。(二)(1)步驟中所述的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑溶液為1升水中同時(shí)含有NAA 25mg、IBA25mg 以及 IAA 40mg。(二)(1)步驟中所述的穴盤為孔數(shù)在72穴以下的穴盤或其他栽培平盤；栽培基質(zhì)配方為沙蛭石珍珠巖=2:2:1。(二)(2)步驟中所述的營(yíng)養(yǎng)液I每一升的配方及配制方法如下
①準(zhǔn)確稱取KH2PO4 34mg、NH4NO3 330mg、KNO3 380mg、MgSO4 · 7H20 74mg、CaCl2 · 2H2088mg，分別置于200 ml的燒杯中，加水100 ml溶解后，按照所列各藥品先后順序?qū)⑷芤夯旌显?000ml的燒杯中，注意混合時(shí)要慢，不斷攪拌，待用；
②準(zhǔn)確稱取MnSO4·4Η20 4. 46 mg、ZnSO4 ·7Η20 1. 72 mg、H3BO3 1. 24 mg、KI 0. 17 mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 05 mg、CoCl2 · 6H20 0. 005 mg、CuSO4 · 5H20 0. 005 mg、FeSO4 · 7H20 5. 56mg, Na—EDTA 7. 46 mg于200ml的燒杯中，加水溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；
③準(zhǔn)確稱取NAAIOmg, IBA IOmg于燒杯中，加少量酒精溶解后加水200ml，再緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，并加水至燒杯刻度IOOOml處，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)PH值到6. 5。(三)(1)步驟中所述的營(yíng)養(yǎng)液II每一升的配方及配制方法如下
①準(zhǔn)確稱取MnSO4 · 4H20 4. 46 mg、ZnSO4 · 7H20 1. 72 mg、H3BO3 1. 24 mg、KI 0. 17mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 05 mg、CoCl2 · 6H20 0. 005 mg、CuSO4 · 5H20 0. 005 mg、FeSO4 · 7H205. 56 mg,Na—EDTA 7. 46 mg于200ml的燒杯中，加水溶解后，緩慢倒入2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；
②準(zhǔn)確稱取N:P205:K20=19:19:19復(fù)合肥Ig于燒杯中，加水400ml溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，加水至燒杯刻度IOOOml處，攪拌混勻后，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)PH值到6. 5。(三)(2)步驟中所述的營(yíng)養(yǎng)液III每一升的配方及配制方法如下
①準(zhǔn)確稱取MnSO4 · 4H20 4. 46 mg、ZnSO4 · 7H20 1. 72 mg、H3BO3 1. 24 mg、KI 0. 17mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 05 mg、CoCl2 · 6H20 0. 005 mg、CuSO4 · 5H20 0. 005 mg、FeSO4 · 7H205. 56 mg、Na2-EDTA 7. 46 mg于200ml的燒杯中，加水溶解后，緩慢倒入中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；
②準(zhǔn)確稱取N:P205:K20=13:34:22復(fù)合肥2g于燒杯中，加水600ml溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，加水至燒杯刻度IOOOmL處，攪拌混勻后，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)PH值到6. 5。(三)(3)步驟中所述的營(yíng)養(yǎng)液IV每一升的配方及配制方法如下
①準(zhǔn)確稱取MnSO4 · 4H20 4. 46 mg、ZnSO4 · 7H20 1. 72 mg、H3BO3 1. 24 mg、KI 0. 17mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 05 mg、CoCl2 · 6H20 0. 005 mg、CuSO4 · 5H20 0. 005 mg、FeSO4 · 7H205. 56 mg、Na2-EDTA 7. 46 mg于200ml的燒杯中，加水溶解后，緩慢倒入中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；
②準(zhǔn)確稱取NP2O5: K2O=H 14:30復(fù)合肥3g于燒杯中，加水600 ml溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，加水至燒杯刻度IOOOmL處，攪拌混勻后，再逐滴滴入氫氧化鉀溶
7液調(diào)節(jié)PH值到6. 5。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是
1、采用聚丙烯薄膜袋作為培養(yǎng)容器，其具較玻璃好的透光透氣性，培養(yǎng)出的作物苗較傳統(tǒng)玻璃容器的青綠、健壯。聚丙烯薄膜傳熱良好，有利于早期將試管苗放置于大棚或網(wǎng)室中煉苗，使之更適應(yīng)自然溫度，移栽成活率提高。占用培養(yǎng)室空間少，并且在培養(yǎng)室中培養(yǎng)時(shí)間降低，可在自然光下繼續(xù)培養(yǎng)，節(jié)約約10天電費(fèi)。2、傳統(tǒng)玻璃容器重量大而有效重量小，空瓶重約200克，而苗及培養(yǎng)基只有30克，有效重量不足15%，玻璃瓶的搬運(yùn)成了一項(xiàng)比較繁重的體力勞動(dòng)，若要將組培苗運(yùn)入溫室移栽，運(yùn)輸成本增加，且玻璃瓶所占體積較大，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)，增加了存放費(fèi)用。而聚丙烯薄膜袋重量輕，不僅降低了運(yùn)輸成本，而且減輕了工人的勞動(dòng)強(qiáng)度，移栽時(shí)也方便。同時(shí)，傳統(tǒng)玻璃容器成本高，一個(gè)350ml的玻璃容器需0.8 1.0元左右，而且容易破損，需要不斷進(jìn)行補(bǔ)充，而薄膜袋成本低，僅約0. 035元/個(gè)。除此之外，省去培養(yǎng)基滅菌步驟，降低了生產(chǎn)成本，滿足了薯類脫毒試管苗移栽前的最后一次繼代培養(yǎng)且培養(yǎng)基需現(xiàn)用現(xiàn)配等要求。薄膜袋也可以減少培養(yǎng)室中的存放費(fèi)用。運(yùn)用本發(fā)明所述的方法生產(chǎn)成本降低1/2、勞動(dòng)強(qiáng)度降低1/3、生產(chǎn)效率提高1/4。3、基質(zhì)+液體培養(yǎng)的模式，實(shí)現(xiàn)了分層繁殖原原種，不僅能有效的控制地上部徒長(zhǎng)、確保了植株匍匐莖的生長(zhǎng)發(fā)育，更有效的促進(jìn)了頂端塊莖的形成膨大，簡(jiǎn)單易操作，一年可多季栽培，單位面積結(jié)薯數(shù)量和產(chǎn)量得到了較大的提高，大幅度地降低成本，提高了繁殖效率。4、本發(fā)明在大棚條件下，采用無(wú)糖培養(yǎng)基質(zhì)進(jìn)行馬鈴薯試管苗擴(kuò)繁，大幅度提高微型種薯的繁育效率、降低繁育成本，是一種解決我國(guó)馬鈴薯種薯產(chǎn)業(yè)優(yōu)質(zhì)高效快速發(fā)展的重要技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了馬鈴薯脫毒微型種薯工廠化規(guī)模生產(chǎn)，為建立以微型種薯為核心的馬鈴薯脫毒種薯微型化繁育推廣體系奠定了基礎(chǔ)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明的上述發(fā)明內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于下述實(shí)施例。在不脫離本發(fā)明上述技術(shù)思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，做出各種替換和變更，均應(yīng)包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實(shí)施例1
本實(shí)施例為馬鈴薯試管苗的實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)
(1)制作聚丙烯薄膜袋將聚丙烯薄膜裁減成35CmX10Cm的長(zhǎng)方形，從15cm處折疊兩個(gè)2. 5cm寬后，用塑料封口機(jī)將兩邊粘合在一起，做成高15cm，寬IOcm的開口袋子。(2)培養(yǎng)基的配制與分裝培養(yǎng)基按照如下方法配制
①準(zhǔn)確稱取KH2PO4 170mg、NH4NO3 1650mg、KNO3 1900mg、CaCl2 · 2H20 440mg 和MgSO4 · 7H20 370mg，分別置于200ml的燒杯中，加純凈水IOOml分別溶解后，按照所列各藥品先后順序?qū)⑷芤夯旌显?000ml的燒杯中，注意混合時(shí)要慢，不斷攪拌，待用；
②準(zhǔn)確稱取MnSO4·4Η20 22. 3 mg、ZnSO4 ·7Η20 8.6 mg、H3BO3 6.2 mg、KI 0. 83 mg、Na2MoO4 · 2Η20 0. 25 mg、CoCl2 · 6H20 0. 025 mg、CuSO4 · 5H20 0. 025 mg、FeSO4 · 7H20 27. 8mg, Na—EDTA 37.3 mg、煙酸 0.5 mg、維生素 B6 0. 5mg、維生素 B1 0. lmg、甘氨酸 2. 0 mg 以及肌醇100 mg，置于200ml的燒杯中，加純凈水溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；
③準(zhǔn)確稱取瓊脂6g、蔗糖30g、抗生素;3mg、殺菌劑Img以及多效唑5mg，倒入①步驟中的2000ml的燒杯中攪拌，同時(shí)加熱，沸騰后加純凈水至燒杯刻度IOOOmL處，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH值到6. 5。將配制好的培養(yǎng)基趁熱分裝入聚丙烯薄膜袋中，冷卻凝固后用塑料封口機(jī)進(jìn)行封口待用。(3)無(wú)菌操作用75%酒精擦拭超凈工作臺(tái)，開超凈工作臺(tái)和室內(nèi)紫外燈，殺菌20 30min ；用75%酒精消毒雙手、試驗(yàn)用具以及塑料袋封口機(jī)，打開接種消毒器，溫度達(dá)290°C 300°C時(shí)把切割刀和鑷子等操作工具放入消毒約5分鐘，取出，放在工具架上冷卻；
當(dāng)脫毒馬鈴薯試管苗的基礎(chǔ)苗繁殖到一定數(shù)量后，將要轉(zhuǎn)接的馬鈴薯試管苗瓶用75%酒精噴霧消毒后放入超凈工作臺(tái)內(nèi)，1號(hào)組培技術(shù)工人在超凈工作臺(tái)內(nèi)將基礎(chǔ)苗從培養(yǎng)袋中取出，置無(wú)菌濾紙上，用剪刀剪成Icm左右長(zhǎng)度同時(shí)帶1 2片葉的試管苗；2號(hào)技術(shù)工人剪開已灌裝培養(yǎng)基且培養(yǎng)基已凝固的薄膜袋封口處，用消毒過并冷卻的鑷子將1號(hào)組培技術(shù)工人切割的試管苗夾入薄膜袋內(nèi)；3號(hào)組培技術(shù)工人將2號(hào)組培技術(shù)工人放入的試管苗的莖段插入培養(yǎng)基中0. 3 0. 5cm左右；4號(hào)組培技術(shù)工人將3號(hào)組培技術(shù)工人做好的裝有繁殖的試管苗的薄膜袋用塑料袋封口機(jī)將其薄膜袋封口，寫上培養(yǎng)的試管苗編號(hào)，放置于培養(yǎng)室中的培養(yǎng)架上，培養(yǎng)15 20天。(4)將待要移栽的試管苗薄膜袋置于溫室或網(wǎng)室中進(jìn)行煉苗5 7天后，用剪刀剪開薄膜袋封口，取出試管苗用清水洗凈根部培養(yǎng)基，保濕待用。實(shí)施例2
本實(shí)施例為試管苗大棚內(nèi)無(wú)糖培養(yǎng)快速繁殖
(1)將試管苗浸泡在植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑溶液中20分鐘，取出，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑溶液為1升水中同時(shí)含有NAA 25mg、IBA 25mg以及IAA 40mg。此時(shí)的試管苗是帶腋芽的1 2節(jié)莖段的扦插苗，準(zhǔn)備具有栽培基質(zhì)的50孔穴盤，將所述扦插苗扦插到穴盤的穴盤孔中，扦插完后澆水至水從穴盤底孔中流出；栽培基質(zhì)配方為沙蛭石珍珠巖=2:2:1。(2)將完成的穴盤放入水槽內(nèi)進(jìn)行液體培養(yǎng)，水槽內(nèi)具有營(yíng)養(yǎng)液I，保持營(yíng)養(yǎng)液深度為0. 3cm左右，在穴盤表面覆蓋地膜培養(yǎng)，若晴天太陽(yáng)大時(shí)遮陰；
營(yíng)養(yǎng)液I每一升的配方及配制方法如下
①準(zhǔn)確稱取KH2PO4 34mg、NH4NO3 330mg、KNO3 380mg、MgSO4 · 7H20 74mg、CaCl2 · 2H2088mg，分別置于200ml的燒杯中，加水100 ml溶解后，按照所列各藥品先后順序?qū)⑷芤夯旌显?000ml的燒杯中，注意混合時(shí)要慢，不斷攪拌，待用；
②準(zhǔn)確稱取MnSO4·4Η20 4. 46 mg、ZnSO4 ·7Η20 1. 72 mg、H3BO3 1. 24 mg、KI 0. 17 mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 05 mg、CoCl2 · 6H20 0. 005 mg、CuSO4 · 5H20 0. 005 mg、FeSO4 · 7H20 5. 56mg, Na—EDTA 7. 46 mg于200ml的燒杯中，加水溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；
③準(zhǔn)確稱取NAAIOmg, IBA IOmg于燒杯中，加少量酒精溶解后加水200ml，再緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，并加水至燒杯刻度IOOOml處，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)PH值到6. 5。(3)待扦插苗長(zhǎng)根并長(zhǎng)出新葉，苗高度達(dá)到2 3cm時(shí)，掀開薄膜，往穴盤里添加栽培基質(zhì)至與穴孔口齊平。(4)若水槽內(nèi)營(yíng)養(yǎng)液I被蒸發(fā)和被根系吸收完畢時(shí)，重新配制營(yíng)養(yǎng)液I倒入水槽，保持營(yíng)養(yǎng)液深度為0. 3cm左右，此過程持續(xù)3周。(5)待苗長(zhǎng)成8 10片葉左右時(shí)，將離頂部4 6片葉莖段剪下，再將莖段剪成帶腋芽的1 2節(jié)短莖段進(jìn)行扦插繁殖；當(dāng)留下的苗有分枝又長(zhǎng)成8 10片葉左右時(shí)，將離頂部6 8片葉莖段剪下，再將莖段剪成帶腋芽的1 2節(jié)短莖段形成扦插苗，重復(fù)步驟(二)3次繼續(xù)扦插繁殖，擴(kuò)大種苗數(shù)量。(6)當(dāng)扦插苗移栽生長(zhǎng)到第4周時(shí)進(jìn)入步驟(三)。實(shí)施例3
本實(shí)施例為基質(zhì)+液體培養(yǎng)生產(chǎn)原原種
(1)扦插苗生長(zhǎng)在第4周時(shí)，更換水槽內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)液為營(yíng)養(yǎng)液II，深度保持為1 2cm，同時(shí)在穴盤下墊上直徑大約Icm的塑料硬管，使穴盤底部不接觸水槽底部，此過程持續(xù)2周；其中，營(yíng)養(yǎng)液II每一升的配方及配制方法如下
①準(zhǔn)確稱取MnSO4 · 4H20 4. 46 mg、ZnSO4 · 7H20 1. 72 mg、H3BO3 1. 24 mg、KI 0. 17mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 05 mg、CoCl2 · 6H20 0. 005 mg、CuSO4 · 5H20 0. 005 mg、FeSO4 · 7H205. 56 mg,Na—EDTA 7. 46 mg于200ml的燒杯中，加水溶解后，緩慢倒入2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；
②準(zhǔn)確稱取N:P205:K20=19:19:19復(fù)合肥Ig于燒杯中，加水400ml溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，加水至燒杯刻度IOOOml處，攪拌混勻后，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)PH值到6. 5。(2)扦插苗生長(zhǎng)在第6周時(shí)，更換水槽內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)液為營(yíng)養(yǎng)液III，深度保持1 2cm，同時(shí)在穴盤下墊上直徑大約Icm的塑料硬管，使穴盤底部不接觸水槽底部，此過程持續(xù)2周；
其中，營(yíng)養(yǎng)液III每一升的配方及配制方法如下
①準(zhǔn)確稱取MnSO4 · 4H20 4. 46 mg、ZnSO4 · 7H20 1. 72 mg、H3BO3 1. 24 mg、KI 0. 17mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 05 mg、CoCl2 · 6H20 0. 005 mg、CuSO4 · 5H20 0. 005 mg、FeSO4 · 7H205. 56 mg、Na2-EDTA 7. 46 mg于200ml的燒杯中，加水溶解后，緩慢倒入中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；
②準(zhǔn)確稱取N:P205:K20=13:34:22復(fù)合肥2g于燒杯中，加水600ml溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，加水至燒杯刻度IOOOmL處，攪拌混勻后，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)PH值到6. 5。(3)扦插苗生長(zhǎng)在第8周時(shí)，更換水槽內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)液為營(yíng)養(yǎng)液IV，深度保持1 2cm，同時(shí)在穴盤下墊上直徑大約Icm的塑料硬管，使穴盤底部不接觸水槽底部，此過程持續(xù)至原原種收獲期；
其中，營(yíng)養(yǎng)液IV每一升的配方及配制方法如下
①準(zhǔn)確稱取 MnSO4 · 4H20 4. 46 mg、ZnSO4 · 7H20 1. 72 mg、H3BO3 1. 24 mg、KI 0. 17mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 05 mg、CoCl2 · 6H20 0. 005 mg、CuSO4 · 5H20 0. 005 mg、FeSO4 · 7H205. 56 mg、Na2-EDTA 7. 46 mg于200ml的燒杯中，加水溶解后，緩慢倒入中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；
②準(zhǔn)確稱取N P2O5: K2O=H 14:30復(fù)合肥3g于燒杯中，加水600 ml溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，加水至燒杯刻度IOOOmL處，攪拌混勻后，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)PH值到6. 5。(4)在收獲前一周放干水槽內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)液，待植株自然黃化、萎蔫后，收獲原原種，收獲的原原種分級(jí)貯藏。每個(gè)穴孔可結(jié)薯1 3粒，重量Ig 5g不等。綜上所述，本發(fā)明采用了聚丙烯薄膜袋代替?zhèn)鹘y(tǒng)玻璃容器，透光透氣性好、成本低、重量輕、有效重量大、搬運(yùn)更簡(jiǎn)單；基質(zhì)+液體培養(yǎng)的模式，實(shí)現(xiàn)了分層繁殖原原種，不僅能有效的控制地上部徒長(zhǎng)、確保了植株匍匐莖的生長(zhǎng)發(fā)育，更有效的促進(jìn)了頂端塊莖的形成膨大，簡(jiǎn)單易操作，一年可多季栽培，單位面積結(jié)薯數(shù)量和產(chǎn)量得到了較大的提高，大幅度地降低成本，提高了繁殖效率，實(shí)現(xiàn)了馬鈴薯脫毒微型種薯工廠化規(guī)模生產(chǎn)。
權(quán)利要求
1. 一種生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法，其特征在于包括以下步驟(一)馬鈴薯試管苗的實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)(1)制作聚丙烯薄膜袋將聚丙烯薄膜裁減成35CmX10Cm的長(zhǎng)方形，從15cm處折疊兩個(gè)2. 5cm寬后，用塑料封ロ機(jī)將兩邊粘合在一起，做成高15cm，寬IOcm的開ロ袋子；(2 )培養(yǎng)基的配制與分裝將配制好的培養(yǎng)基趁熱分裝入聚丙烯薄膜袋中，冷卻凝固后用塑料封ロ機(jī)進(jìn)行封ロ待用；(3)無(wú)菌操作用75%酒精擦拭超凈工作臺(tái)，開超凈工作臺(tái)和室內(nèi)紫外燈，殺菌20 30min;用75%酒精消毒雙手、試驗(yàn)用具以及塑料袋封ロ機(jī)，打開接種消毒器，溫度達(dá) 290°C 300°C時(shí)把切割刀和鑷子等操作工具放入消毒約5分鐘，取出，放在工具架上冷卻；當(dāng)脫毒馬鈴薯試管苗的基礎(chǔ)苗繁殖到一定數(shù)量后，將要轉(zhuǎn)接的馬鈴薯試管苗瓶用75% 酒精噴霧消毒后放入超凈工作臺(tái)內(nèi)，1號(hào)組培技術(shù)工人在超凈工作臺(tái)內(nèi)將基礎(chǔ)苗從培養(yǎng)袋中取出，置于無(wú)菌濾紙上，用剪刀剪成Icm左右長(zhǎng)度同時(shí)帶1 2片葉的試管苗；2號(hào)技術(shù)工人剪開已灌裝培養(yǎng)基且培養(yǎng)基已凝固的薄膜袋封ロ處，用消毒過并冷卻的鑷子將1號(hào)組培技術(shù)工人切割的試管苗夾入薄膜袋內(nèi)；3號(hào)組培技術(shù)工人將2號(hào)組培技術(shù)工人放入的試管苗的莖段插入培養(yǎng)基中0. 3 0. 5cm左右；4號(hào)組培技術(shù)工人將3號(hào)組培技術(shù)工人做好的裝有繁殖的試管苗的薄膜袋用塑料袋封ロ機(jī)將其薄膜袋封ロ，寫上培養(yǎng)的試管苗編號(hào)， 放置于培養(yǎng)室中的培養(yǎng)架上，培養(yǎng)15 20天；(4)將待要移栽的試管苗薄膜袋置于溫室或網(wǎng)室中進(jìn)行煉苗5 7天后，用剪刀剪開薄膜袋封ロ，取出試管苗用清水洗浄根部培養(yǎng)基，保濕待用；(ニ)試管苗大棚內(nèi)無(wú)糖培養(yǎng)快速繁殖(1)將試管苗浸泡在植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑溶液中20分鐘，取出，此時(shí)的試管苗是帶腋芽的 1 2節(jié)莖段的扦插苗，準(zhǔn)備具有栽培基質(zhì)的穴盤，將所述扦插苗扦插到穴盤的穴盤孔中， 扦插完后澆水至水從穴盤底孔中流出；(2)將完成的穴盤放入水槽內(nèi)進(jìn)行液體培養(yǎng)，水槽內(nèi)具有營(yíng)養(yǎng)液I，保持營(yíng)養(yǎng)液深度為 0. 3cm左右，在穴盤表面覆蓋地膜培養(yǎng)，若睛天太陽(yáng)大時(shí)遮陰；(3)待扦插苗長(zhǎng)根并長(zhǎng)出新葉，苗高度達(dá)到2 3cm吋，掀開薄膜，往穴盤里添加栽培基質(zhì)至與穴孔ロ齊平；(4)若水槽內(nèi)營(yíng)養(yǎng)液I被蒸發(fā)和被根系吸收完畢吋，重新配制營(yíng)養(yǎng)液I倒入水槽，保持營(yíng)養(yǎng)液深度為0. 3cm左右，此過程持續(xù)3周；(5)待苗長(zhǎng)成8 10片葉左右吋，將離頂部4 6片葉莖段剪下，再將莖段剪成帶腋芽的1 2節(jié)短莖段進(jìn)行扦插繁殖；當(dāng)留下的苗有分枝又長(zhǎng)成8 10片葉左右吋，將離頂部6 8片葉莖段剪下，再將莖段剪成帶腋芽的1 2節(jié)短莖段形成扦插苗，重復(fù)步驟(ニ) 2 3次繼續(xù)扦插繁殖，擴(kuò)大種苗數(shù)量；(6)當(dāng)扦插苗移栽生長(zhǎng)到第4周時(shí)進(jìn)入步驟(三)； (三)基質(zhì)+液體培養(yǎng)生產(chǎn)原原種(1)扦插苗生長(zhǎng)在第4周吋，更換水槽內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)液為營(yíng)養(yǎng)液II，深度保持為1 2cm，同時(shí)在穴盤下墊上直徑大約Icm的塑料硬管，使穴盤底部不接觸水槽底部，此過程持續(xù)2周；(2)扦插苗生長(zhǎng)在第6周吋，更換水槽內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)液為營(yíng)養(yǎng)液III，深度保持1 2cm，同時(shí)在穴盤下墊上直徑大約Icm的塑料硬管，使穴盤底部不接觸水槽底部，此過程持續(xù)2周；(3)扦插苗生長(zhǎng)在第8周時(shí)，更換水槽內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)液為營(yíng)養(yǎng)液IV，深度保持1 2cm，同時(shí)在穴盤下墊上直徑大約Icm的塑料硬管，使穴盤底部不接觸水槽底部，此過程持續(xù)至原原種收獲期；(4)在收獲前一周放干水槽內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)液，待植株自然黃化、萎蔫后，收獲原原種，收獲的原原種分級(jí)貯藏。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法，其特征在于(一)(2)步驟中所述的培養(yǎng)基按照如下方法配制①準(zhǔn)確稱取KH2PO4 170mg、NH4NO3 1650mg、KNO3 1900mg、CaCl2 · 2H20 440mg 和MgSO4 · 7H20 370mg，分別置于200ml的燒杯中，加純凈水IOOml分別溶解后，按照所列各藥品先后順序?qū)⑷芤夯旌显?000ml的燒杯中，注意混合時(shí)要慢，不斷攪拌，待用；②準(zhǔn)確稱取MnSO4·4Η20 22. 3 mg、ZnSO4 ·7Η20 8.6 mg、H3BO3 6.2 mg、KI 0. 83 mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 25 mg、CoCl2 · 6H20 0. 025 mg、CuSO4 · 5H20 0. 025 mg、FeSO4 · 7H20 27. 8mg, Na2-EDTA 37.3 mg、煙酸 0.5 mg、維生素 B6 0. 5mg、維生素 B1 0. Img,甘氨酸 2. 0 mg以及肌醇100 mg，置于200ml的燒杯中，加純凈水溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；③準(zhǔn)確稱取瓊脂6g、蔗糖30g、抗生素;3mg、殺菌劑Img以及多效唑5mg，倒入①步驟中的2000ml的燒杯中攪拌，同時(shí)加熱，沸騰后加純凈水至燒杯刻度IOOOml處，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH值到6. 5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法，其特征在于(二)(1)步驟中所述的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑溶液為1升水中同時(shí)含有NAA 25mg、IBA 25mg以及IAA 40mg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法，其特征在于(二)(1)步驟中所述的穴盤為孔數(shù)在72穴以下的穴盤或其他栽培平盤；栽培基質(zhì)配方為沙蛭石珍珠_2 · 2 · 1 ο
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法，其特征在于(二)(2)步驟中所述的營(yíng)養(yǎng)液I每一升的配方及配制方法如下①準(zhǔn)確稱取KH2PO4 34mg、NH4NO3 330mg、KNO3 380mg、MgSO4 · 7H20 74mg、CaCl2 · 2H2088mg，分別置于200ml的燒杯中，加水100 ml溶解后，按照所列各藥品先后順序?qū)⑷芤夯旌显?000ml的燒杯中，注意混合時(shí)要慢，不斷攪拌，待用；②準(zhǔn)確稱取MnSO4·4Η20 4. 46 mg、ZnSO4 ·7Η20 1. 72 mg、H3BO3 1. 24 mg、KI 0. 17 mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 05 mg、CoCl2 · 6H20 0. 005 mg、CuSO4 · 5H20 0. 005 mg、FeSO4 · 7H20 5. 56mg, Na—EDTA 7. 46 mg于200ml的燒杯中，加水溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；③準(zhǔn)確稱取NAAIOmg, IBA IOmg于燒杯中，加少量酒精溶解后加水200ml，再緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，并加水至燒杯刻度IOOOml處，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)PH值到6. 5。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法，其特征在于(三)(1)步驟中所述的營(yíng)養(yǎng)液II每一升的配方及配制方法如下①準(zhǔn)確稱取 MnSO4 · 4H20 4. 46 mg、ZnSO4 · 7H20 1. 72 mg、H3BO3 1. 24 mg、KI 0. 17mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 05 mg、CoCl2 · 6H20 0. 005 mg、CuSO4 · 5H20 0. 005 mg、FeSO4 · 7H20·5. 56 mg,Na—EDTA 7. 46 mg于200ml的燒杯中，加水溶解后，緩慢倒入2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；②準(zhǔn)確稱取N:P205:K20=19:19:19復(fù)合肥Ig于燒杯中，加水400 ml溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，加水至燒杯刻度IOOOml處，攪拌混勻后，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)PH值到6. 5。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法，其特征在于(三)(2)步驟中所述的營(yíng)養(yǎng)液III每一升的配方及配制方法如下①準(zhǔn)確稱取MnSO4 · 4H20 4. 46 mg、ZnSO4 · 7H20 1. 72 mg、H3BO3 1. 24 mg、KI 0. 17mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 05 mg、CoCl2 · 6H20 0. 005 mg、CuSO4 · 5H20 0. 005 mg、FeSO4 · 7H205. 56 mg、Na2-EDTA 7. 46 mg于200ml的燒杯中，加水溶解后，緩慢倒入中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；②準(zhǔn)確稱取N:P205:K20=13:34:22復(fù)合肥2g于燒杯中，加水600ml溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，加水至燒杯刻度IOOOml處，攪拌混勻后，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)PH值到6. 5。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法，其特征在于(三)(3)步驟中所述的營(yíng)養(yǎng)液IV每一升的配方及配制方法如下①準(zhǔn)確稱取MnSO4 · 4H20 4. 46 mg、ZnSO4 · 7H20 1. 72 mg、H3BO3 1. 24 mg、KI 0. 17mg、Na2MoO4 · 2H20 0. 05 mg、CoCl2 · 6H20 0. 005 mg、CuSO4 · 5H20 0. 005 mg、FeSO4 · 7H20·5. 56 mg、Na2-EDTA 7. 46 mg于200ml的燒杯中，加水溶解后，緩慢倒入中的2000ml的燒杯中，攪拌混勻后，待用；②準(zhǔn)確稱取NP2O5: K2O=H 14:30復(fù)合肥3g于燒杯中，加水600 ml溶解后，緩慢倒入①中的2000ml的燒杯中，加水至燒杯刻度IOOOml處，攪拌混勻后，再逐滴滴入氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)PH值到6. 5。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種生產(chǎn)馬鈴薯原原種的方法，包括馬鈴薯試管苗的實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)、試管苗大棚內(nèi)無(wú)糖培養(yǎng)快速繁殖及基質(zhì)+液體培養(yǎng)生產(chǎn)馬鈴薯原原種。本發(fā)明采用了聚丙烯薄膜袋代替?zhèn)鹘y(tǒng)玻璃容器，透光透氣性好、成本低、重量輕、搬運(yùn)更簡(jiǎn)單；基質(zhì)+液體培養(yǎng)的模式，實(shí)現(xiàn)了分層繁殖原原種，不僅能有效的控制地上部徒長(zhǎng)、確保了植株匍匐莖的生長(zhǎng)發(fā)育，更有效的促進(jìn)了頂端塊莖的形成膨大，簡(jiǎn)單易操作，一年可多季栽培，單位面積結(jié)薯數(shù)量和產(chǎn)量得到了較大的提高，大幅度地降低成本，提高了繁殖效率，實(shí)現(xiàn)了馬鈴薯脫毒微型種薯工廠化規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102550411SQ20111045762
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2011年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月31日
發(fā)明者何俊蓉, 卓碧萍, 唐麗, 李世元, 沈?qū)W善, 王海娥, 蔣彧, 黃剛 申請(qǐng)人:四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所