專利名稱：白鵑梅的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種白鵑梅的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
(.Exochorda racemosa (LindL ) Rehd )，屬薔薇科白鵑梅屬，落葉灌木，多呈小喬木狀?；▋尚裕咨?。蒴果，倒卵形或球形?；ㄆ?月。果期8 9月。白鵑梅原產(chǎn)中國(guó)浙江、江蘇、江西、湖北等地。萌芽力強(qiáng)，抗寒力亦強(qiáng)。白鵑梅樹型緊湊，姿態(tài)秀美，為優(yōu)美的野生觀賞樹種。開花前，花蕾如串串珍珠掛滿枝頭，開花盛期滿樹白花，潔白如雪似梅，清雅秀麗，光彩照人。葉片光潔，葉色葉形優(yōu)美，清麗動(dòng)人。八九月份眾多銅錘般小果掛于枝端，別有一番情趣。因此，白鵑梅是一種既可觀花又能賞果的優(yōu)良園林植物品種，若在常綠樹叢邊緣群植，開花時(shí)宛若層林點(diǎn)雪，情景十分動(dòng)人，饒有雅趣，如散植林間或庭院建筑物附近，也極適宜。在園林中適于草坪、林緣、路邊及假山巖石間配植，亦可作花籬栽植。又因其萌芽力強(qiáng)，耐修剪，是盆植和切花的好樹種；其老樹古樁，又是制作樹樁盆景的優(yōu)良素材。此外，白鵑梅還是不可多得的野生健康森林蔬菜，盛花前將花蕾連帶嫩梢采下，用開水燙后曬干可作蔬菜，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高。白鵑梅扦插繁殖很難生根，多采用播種繁殖，但種子不易收集。采取組織培養(yǎng)法進(jìn)行白鵑梅的快速繁殖，建立從莖段到叢生芽的無性繁殖體系，有利于快速提供大量種苗且不受季節(jié)限制，對(duì)白鵑梅走向園林應(yīng)用具有較強(qiáng)的生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值。根據(jù)檢索發(fā)現(xiàn)，《安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)》2008年第36卷第19期公開了一種白鵑梅的離體快繁技術(shù)，包括以下步驟1)材料的選取白鵑梅的幼嫩莖段作為外植體，放入0. 升汞溶液中浸泡9min，然后用無菌水沖洗5次后接種；2)芽的誘導(dǎo)與增殖培養(yǎng)將1)中已殺菌消毒的外植體接種，以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同種類、不同濃度細(xì)胞分裂素(6-BA、KT)和生長(zhǎng)素(IBA、NAA)，誘導(dǎo)離體白鵑梅快速繁殖，結(jié)果表明，較低濃度的細(xì)胞分裂素6-BA、KT和生長(zhǎng)素IBA混合使用，有利于誘導(dǎo)芽增殖，尤其以MS +0. 3mg/L IBA+0. 5mg/L 6_BA配方最佳。3)根的誘導(dǎo)將叢生芽切下轉(zhuǎn)接到不同的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，用1/2 MS附加0. 1-0. 3mg/L NAA、IBA均能誘導(dǎo)生根，其中以1/2 Ms+0. 3mg/L NAA配方最佳。4)移栽:打開三角瓶口煉苗3 d，然后將生根的試管苗取出，洗去根部的培養(yǎng)基，進(jìn)行移栽。移栽溫度分為(25 士 2) °C，光照強(qiáng)度為5000-100001x，空氣相對(duì)濕度為60% 70%，移栽成活率最高達(dá)88. 89%。該操作相對(duì)比較繁瑣，操作時(shí)間相對(duì)長(zhǎng)一些，而且該技術(shù)芽增殖培養(yǎng)中使用了植物生長(zhǎng)素類物質(zhì)NAA，成本也相對(duì)較高
發(fā)明內(nèi)容
鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種白鵑梅的組織培養(yǎng)方法。該方法具有繁殖系數(shù)高、繁殖速度快、成活率高、不受季節(jié)影響等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟
1)3-4月間從白鵑梅的地栽苗中選取生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的植株，采集幼嫩的莖段，去除葉片，清水沖洗后作為外植體備用；
2)將清洗干凈的外植體用升汞溶液浸泡消毒，并用無菌水沖洗；
3)將消毒處理好的外植體切成小段接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；
4)培養(yǎng)一段時(shí)間后，腋芽不斷萌發(fā)、生長(zhǎng)，形成不定芽，將不定芽分離切割轉(zhuǎn)接入增殖
培養(yǎng)基中培養(yǎng)；
5)培養(yǎng)一段時(shí)間后，將不定芽生長(zhǎng)形成的叢芽切下，經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)后，形成健壯的組培生根苗。所述的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，其中步驟1)中采集幼嫩的莖段前半個(gè)月保證天氣晴朗，在晴天的上午，采集幼嫩的莖段，去除葉片，保留腋芽，流水沖洗10-30min后作為外植體備用。所述的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，其中步驟1)中采集嫩莖前半個(gè)月如遇雨則對(duì)植株采取避雨措施，然后在晴天的上午，采集幼嫩的莖段，去除葉片，保留腋芽，流水沖洗10-30min作為外植體備用。所述的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，其中步驟2)中在超凈工作臺(tái)上操作，將清洗干凈的外植體用升汞溶液浸泡消毒，其中升汞溶液的濃度為0. 08%-0. 12%，浸泡時(shí)間為8-lOmin，期間不斷搖動(dòng)，倒掉升汞溶液用無菌水沖洗4-6次。所述的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，其中步驟3)中外植體經(jīng)消毒后用無菌濾紙吸干表面水分，用無菌鑷子小心夾住，用無菌刀片切成Icm大小帶節(jié)間的莖段，接入無菌的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加0. 5-1. 5mg · Γ1 6_ΒΑ、3%蔗糖和 0. 54% 瓊脂，ρΗ 5. 2-5. 6。所述的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，其中步驟4)中在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的培養(yǎng)溫度為25士 1°C，光照時(shí)間為ll_13h，光強(qiáng)1800-2200LX，莖段接入培養(yǎng)基22_24d后，腋芽萌發(fā)生長(zhǎng)出叢生芽，并進(jìn)一步生長(zhǎng)成幼嫩植株的上半部分，將1.5cm左右的叢芽采取芽間分離的方式分成單獨(dú)的嫩枝，轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基；所述的增殖培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加0. 5-1. 5mg · L—1 6-BA、3% 蔗糖和 0. 54% 瓊脂配成，ρΗ 為 5. 2-5. 6。所述的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，其中步驟5)中在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)22-24d，基部再生出叢芽，將長(zhǎng)度超過2. 5cm的嫩枝從芽叢上分離，接入生根培養(yǎng)基；所述的生根培養(yǎng)基的配方為=MS培養(yǎng)基中添加0. 2-0. 4mg ·廠1 NAA,3%蔗糖和0. 54%瓊脂，ρΗ5· 2-5. 6。本發(fā)明任何地方所述的培養(yǎng)基中，其中
MS是國(guó)際通用的培養(yǎng)基，其成分和配制方法參見文獻(xiàn)(譚文澄、戴策剛主編，觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)，北京中國(guó)國(guó)林業(yè)出版社，1991)
6-ΒΑ的化學(xué)成分為6-芐氨基嘌呤，使用時(shí)配置成高濃度母液，即0. 5mg/mL。具體配置方法稱取50毫克6-BA，先用少量95%酒精溶解，然后用蒸餾水定容至100毫升，即可使用。NAA的化學(xué)成分為α -萘乙酸，使用時(shí)配置成0. 5mg /mL的母液。具體配置方法稱取50毫克NAA，先用少量95%酒精溶解，然后用蒸餾水定容至100毫升，即可使用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明涉及的白鵑梅組培苗的制作方法具有如下優(yōu)點(diǎn)和顯著的進(jìn)步采用本發(fā)明的組織培養(yǎng)方法得到的白鵑梅組培苗生根率高、成活率高，繁殖速度快，繁殖系數(shù)達(dá)到12. 3以上，生根率達(dá)到90%以上，得到的白鵑梅生長(zhǎng)健壯，具有廣闊的市場(chǎng)前
旦
ο
具體實(shí)施例方式以下是本發(fā)明涉及的具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步作描述，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于這些實(shí)施例。凡是不背離本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。實(shí)施例1
1)3-4月間，在連續(xù)半個(gè)月的晴朗天氣后，從白鵑梅的地栽苗中選取生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的植株，采集幼嫩的莖段，去除葉片，流水沖洗30min備用。2)將清洗干凈的外植體材料置于超凈工作臺(tái)上，剪成34cm，放在燒杯內(nèi)，加入0. 08%的升汞溶液，浸泡8min，期間不斷搖動(dòng)，倒掉升汞溶液后用無菌水沖洗4次。3)外植體消毒后用無菌濾紙吸干表面水分，用無菌鑷子小心夾住，用無菌刀片切成Icm大小帶節(jié)間的莖段，接入無菌的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加0. 5mg · Γ1 6-BA、3%蔗糖和0. 54%瓊脂配成，pH為5. 2。4)培養(yǎng)溫度為M°C，光照時(shí)間為llh，光強(qiáng)1800LX，外植體接入培養(yǎng)基22d左腋芽萌發(fā)生長(zhǎng)出不定芽，并進(jìn)一步生長(zhǎng)成幼嫩植株的上半部分。將1.5cm大小的不定芽叢采取芽間分離的方式分成小的獨(dú)立的嫩枝，轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加0. 5mg · Γ1 6-BA、3%蔗糖和0. 54%瓊脂配成，pH為5. 2。5)不定芽叢在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d，基部再生出芽叢，將長(zhǎng)度超過2. 5cm的芽株從芽叢上分離，接入生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加0. 2mg · Γ1 NAA,3%蔗糖和0. 54%瓊脂配成，pH為5. 2，培養(yǎng)60d后，形成健壯的生根苗。實(shí)施例2
1)3-4月間，在連續(xù)半個(gè)月的晴朗天氣后，從白鵑梅的地栽苗中選取生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的植株，采集幼嫩的莖段，去除葉片，流水沖洗30min備用。2)將清洗干凈的外植體材料置于超凈工作臺(tái)上，剪成34cm，放在燒杯內(nèi)，加入0. 10%的升汞溶液，浸泡9min，期間不斷搖動(dòng)，倒掉升汞溶液后用無菌水沖洗5次。3)外植體消毒后用無菌濾紙吸干表面水分，用無菌鑷子小心夾住，用無菌刀片切成Icm大小帶節(jié)間的莖段，接入無菌的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加1. Omg · Γ1 6-BA、3%蔗糖和0. 54%瓊脂配成，pH為5. 4。4)培養(yǎng)溫度為25°C，光照時(shí)間為12h，光強(qiáng)2000Lx，外植體接入培養(yǎng)基23d左腋芽萌發(fā)生長(zhǎng)出不定芽，并進(jìn)一步生長(zhǎng)成幼嫩植株的上半部分。將1.5cm大小的不定芽叢采取芽間分離的方式分成小的獨(dú)立的嫩枝，轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加1. Omg · Γ1 6-BA、3%蔗糖和0. 54%瓊脂配成，pH為5. 4。
5)不定芽叢在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d，基部再生出芽叢，將長(zhǎng)度超過2. 5cm的芽株從芽叢上分離，接入生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加0. 3mg · Γ1 NAA,3%蔗糖和0. 54%瓊脂配成，pH為5. 4，培養(yǎng)70d后，形成健壯的生根苗。實(shí)施例3
1)3-4月間，在連續(xù)半個(gè)月的晴朗天氣后，從白鵑梅的地栽苗中選取生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的植株，采集幼嫩的莖段，去除葉片，流水沖洗30min備用。2)將清洗干凈的外植體材料置于超凈工作臺(tái)上，剪成34cm，放在燒杯內(nèi)，加入0. 12%的升汞溶液，浸泡lOmin，期間不斷搖動(dòng)，倒掉升汞溶液后用無菌水沖洗6次。3)外植體消毒后用無菌濾紙吸干表面水分，用無菌鑷子小心夾住，用無菌刀片切成Icm大小帶節(jié)間的莖段，接入無菌的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加1. 5mg · Γ1 6-BA、3%蔗糖和0. 54%瓊脂配成，pH為5. 6。4)培養(yǎng)溫度為，光照時(shí)間為13h，光強(qiáng)2200LX，外植體接入培養(yǎng)基24d左腋芽萌發(fā)生長(zhǎng)出不定芽，并進(jìn)一步生長(zhǎng)成幼嫩植株的上半部分。將1.5cm大小的不定芽叢采取芽間分離的方式分成小的獨(dú)立的嫩枝，轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加1. 5mg · Γ1 6-BA、3%蔗糖和0. 54%瓊脂配成，pH為5. 6。5)不定芽叢在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d，基部再生出芽叢，將長(zhǎng)度超過2. 5cm的芽株從芽叢上分離，接入生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加0. 4mg · L—1 NAA,3%蔗糖和0. 54%瓊脂配成，pH為5. 6，培養(yǎng)80d后，形成健壯的生根苗。實(shí)施例4
除步驟1)中采集花芽前半個(gè)月對(duì)植株進(jìn)行避雨處理，其他步驟同實(shí)施例1，培養(yǎng)獲得健壯的生根苗。
采用上述實(shí)施例1-4的組織培養(yǎng)方法得到的白鵑梅組培苗生根率高、成活率高，繁殖速度快，繁殖系數(shù)達(dá)到12. 3以上，生根率達(dá)到90%以上。
以下結(jié)合相應(yīng)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。按照實(shí)施例1的操作步驟，設(shè)置芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中不同的激素配比試驗(yàn)，NAA濃度兩個(gè)梯度0. Img · T1U. O mg · ΙΛ6-ΒΑ濃度兩個(gè)梯度0. 1 mg · T1U. O mg·!/1，并設(shè)立空白對(duì)照，試驗(yàn)結(jié)果見表1。表1芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中不同的激素配比試驗(yàn)結(jié)果表
權(quán)利要求
1.白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟1)3-4月間從白鵑梅的地栽苗中選取生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的植株，采集幼嫩的莖段，去除葉片，清水沖洗后作為外植體備用；2)將清洗干凈的外植體用升汞溶液浸泡消毒，并用無菌水沖洗；3)將消毒處理好的外植體切成小段接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；4)培養(yǎng)一段時(shí)間后，腋芽不斷萌發(fā)、生長(zhǎng)，形成不定芽，將不定芽分離切割轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)；5)培養(yǎng)一段時(shí)間后，將不定芽生長(zhǎng)形成的叢芽切下，經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)后，形成健壯的組培生根苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟1)中采集幼嫩的莖段前半個(gè)月保證天氣晴朗，在晴天的上午，采集幼嫩的莖段，去除葉片，保留腋芽，流水沖洗10-30min后作為外植體備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟1)中采集嫩莖前半個(gè)月如遇雨則對(duì)植株采取避雨措施，然后在晴天的上午，采集幼嫩的莖段，去除葉片，保留腋芽，流水沖洗10-30min作為外植體備用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟2)中在超凈工作臺(tái)上操作，將清洗干凈的外植體用升汞溶液浸泡消毒，其中升汞溶液的濃度為0. 08%-0. 12%，浸泡時(shí)間為8-lOmin，期間不斷搖動(dòng)，倒掉升汞溶液用無菌水沖洗4_6次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟3)中外植體經(jīng)消毒后用無菌濾紙吸干表面水分，用無菌鑷子小心夾住，用無菌刀片切成Icm大小帶節(jié)間的莖段，接入無菌的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加0. 5-1. 5mg · Γ1 6-ΒΑ、3% 蔗糖和 0. 54% 瓊脂，pH 5. 2-5. 6。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟4)中在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的培養(yǎng)溫度為25士 1°C，光照時(shí)間為ll_13h，光強(qiáng)1800-2200LX，莖段接入培養(yǎng)基22-24d后，腋芽萌發(fā)生長(zhǎng)出叢生芽，并進(jìn)一步生長(zhǎng)成幼嫩植株的上半部分，將1. 5cm左右的叢芽采取芽間分離的方式分成單獨(dú)的嫩枝，轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基；所述的增殖培養(yǎng)基的配方為=MS培養(yǎng)基中添加0. 5-1. 5mg · Γ1 6_ΒΑ、3%蔗糖和0. 54%瓊脂配成，pH為5. 2-5. 6。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟5)中在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)22-24d，基部再生出叢芽，將長(zhǎng)度超過2. 5cm的嫩枝從芽叢上分離，接入生根培養(yǎng)基；所述的生根培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加0. 2-0. 4mg化―1 NAA,3%蔗糖和0. 54%瓊脂，pH5. 2-5. 6。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種白鵑梅的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟1)3-4月間采集幼嫩的莖段，去除葉片，清水沖洗后作為外植體備用；2)將清洗干凈的外植體用升汞溶液浸泡消毒，并用無菌水沖洗；3)將消毒處理好的外植體切成小段接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；4)培養(yǎng)一段時(shí)間后，腋芽不斷萌發(fā)、生長(zhǎng)，形成不定芽，將不定芽分離切割轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)；5)培養(yǎng)一段時(shí)間后，將不定芽生長(zhǎng)形成的叢芽切下，經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)后，形成健壯的組培生根苗。該方法具有繁殖系數(shù)高、繁殖速度快、成活率高、不受季節(jié)影響等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102550412SQ20111045827
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2011年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月31日
發(fā)明者周媛, 徐冬云, 戢小梅, 童俊, 童正富, 舒常慶, 董艷芳, 許林, 郭彩霞, 陳法志 申請(qǐng)人:武漢市林業(yè)果樹科學(xué)研究所