專利名稱：產(chǎn)酸克雷伯菌菌株及其應(yīng)用和三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)菌及其應(yīng)用，尤其涉及一種細(xì)菌菌株及其在降解農(nóng)藥殘留中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前，化學(xué)農(nóng)藥已廣泛應(yīng)用于現(xiàn)代農(nóng)藥生產(chǎn)和衛(wèi)生防疫，化學(xué)農(nóng)藥的大量使用，大大促進(jìn)了現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展。然而，化學(xué)農(nóng)藥的不合理使用甚至濫用，導(dǎo)致大量化學(xué)農(nóng)藥流失到生態(tài)環(huán)境中，對(duì)生態(tài)系統(tǒng)造成了嚴(yán)重的危害；而且，化學(xué)農(nóng)藥的大量使用，以及生態(tài)環(huán)境中殘留的化學(xué)農(nóng)藥，容易導(dǎo)致生產(chǎn)的農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的超標(biāo)，影響農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)，并對(duì)人們的身體健康帶來(lái)嚴(yán)重威脅，對(duì)農(nóng)產(chǎn)品的出口產(chǎn)生消極影響。有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑是我國(guó)使用最廣泛、用量最大的一類殺蟲(chóng)劑，其品種繁多。從20世紀(jì)50年代，有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑在我國(guó)開(kāi)始生產(chǎn)使用，此后被廣泛用于糧食、蔬菜和果樹(shù)等多種作物。有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑屬于神經(jīng)毒物，主要抑制血液和組織中乙酰膽堿酯酶的活性，導(dǎo)致神經(jīng)遞質(zhì)、乙酰膽堿的大量蓄積，從而阻斷了神經(jīng)傳導(dǎo)，引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)中毒。大多數(shù)品種對(duì)人、畜毒性偏高，有些品種屬于劇毒，如甲拌磷、甲胺磷、內(nèi)吸磷等。農(nóng)業(yè)部的調(diào)查統(tǒng)計(jì)表明，該類農(nóng)藥是目前我國(guó)出口蔬菜、水果中主要的三類農(nóng)藥殘留之一。歐盟2007/12/EC農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)以及日本2006年出臺(tái)“肯定列表制度”，都對(duì)有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑農(nóng)藥殘留限量作出嚴(yán)格的規(guī)定，其中規(guī)定有機(jī)磷農(nóng)藥的檢出限量小于0. 02mg/ Kg，這些殘留量限定，嚴(yán)重影響了我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品的出口。隨著人們生活水平的提高以及環(huán)境保護(hù)意識(shí)的增強(qiáng)，全社會(huì)對(duì)食品安全以及生態(tài)環(huán)境保護(hù)的關(guān)注度逐步提高。但是，根據(jù)我國(guó)的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)現(xiàn)狀以及人口狀況來(lái)看，停止或大量減少農(nóng)藥的使用，大量生產(chǎn)無(wú)農(nóng)藥殘留的綠色農(nóng)產(chǎn)品，在目前及今后一段時(shí)間是行不通的，農(nóng)藥作為控制病蟲(chóng)草的有效手段還將繼續(xù)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮不可替代的作用。因此，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，如何解決農(nóng)藥使用與殘留這個(gè)兩難問(wèn)題成為研究熱點(diǎn)。大量研究表明，以微生物修復(fù)為理論基礎(chǔ)的農(nóng)藥殘留降解菌技術(shù)為降低農(nóng)產(chǎn)品和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中的農(nóng)藥殘留物提供了可行的途徑。也有研究表明，許多微生物還具有促進(jìn)作物生長(zhǎng)，修復(fù)局部區(qū)域生態(tài)環(huán)境的作用。該技術(shù)不僅高效安全，而且經(jīng)濟(jì)實(shí)用，操作簡(jiǎn)便， 目前已成為去除農(nóng)藥殘留污染的一種重要方法。然而，微生物修復(fù)的前提是篩選高效安全的微生物資源，制備出使用方便的菌劑，并進(jìn)行合理化地應(yīng)用，這都是本領(lǐng)域技術(shù)人員需要面臨的技術(shù)難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種生產(chǎn)成本低、農(nóng)藥去除效果高、無(wú)毒、環(huán)保的產(chǎn)酸克雷伯菌菌株及該菌株的應(yīng)用，具體還提供一種低成本、操作簡(jiǎn)便、效果好的三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑及其制備方法。
為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種產(chǎn)酸克雷伯菌菌株，所述產(chǎn)酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)菌株為保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心、且保藏號(hào)為CCTCC N0:M2011350的菌株。該菌株的保藏單位為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC)，保藏單位地址位于中國(guó)武漢大學(xué)，保藏日期為 2011年10月12日，該菌株被命名為產(chǎn)酸克雷伯菌TDB-I (Klebsiella oxytoca TDB-1) 上述的產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M 2011350通過(guò)以下方法篩選得到將采自農(nóng)田灌溉水渠的水樣2. OmL加入120mL基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基(MM培養(yǎng)基)中，培養(yǎng)24h后，取1 %接種到含三唑磷10mg/L的匪培養(yǎng)基中，30 士 2°C，180rpm,培養(yǎng)24h后，取300 μ L菌液稀釋涂布到以三唑磷50mg/L為唯一碳源的基礎(chǔ)固體培養(yǎng)基(MMS培養(yǎng)基)中，培養(yǎng)至菌落出現(xiàn)，挑取菌落形態(tài)不同的菌，分別接種到含三唑磷50mg/L為唯一碳源的MM培養(yǎng)基中，30士2°C、180rpm， 培養(yǎng)24d后，取分別接種到以三唑磷100mg/L為唯一碳源的MM培養(yǎng)基中。24h后檢測(cè)農(nóng)藥濃度，以含相同濃度的三唑磷，相同培養(yǎng)條件不接種菌的培養(yǎng)基為對(duì)照。選擇降解率最大的菌株進(jìn)行后續(xù)研究。將該菌株接種于IOOmL MM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，30士2°C、180rpm，培養(yǎng)， 梯度稀釋平板培養(yǎng)法測(cè)定菌株生物量，后續(xù)實(shí)驗(yàn)中菌液濃度調(diào)整至約109cfu/mL。上述的產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M 2011350優(yōu)選為具有以下主要特征的菌株球狀，具有莢膜，Ο", V-P反應(yīng)陽(yáng)性，甲基紅反應(yīng)陽(yáng)性，明膠液化陰性，吲哚反應(yīng)陽(yáng)性，最適生長(zhǎng)溫度為25°C 35°C，最適生長(zhǎng)pH值為5 9，16S rDNA序列長(zhǎng)度為1505bp，在 Genbank中的登錄號(hào)為JQ068819。作為一個(gè)總的發(fā)明構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M2011350的
應(yīng)用，將其應(yīng)用于降解三唑磷農(nóng)藥殘留。作為一個(gè)總的發(fā)明構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑，所述菌劑主要是由上述的產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M2011350與基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基配制而成的菌懸液。所述菌劑中產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M2011350的濃度優(yōu)選為彡2X109cfu/mL。作為一個(gè)總的發(fā)明構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述的三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑的制備方法，包括以下步驟(1)活化將所述產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M2011350的保存種按平板培養(yǎng)法進(jìn)行培
養(yǎng)，培養(yǎng)至單菌落出現(xiàn)；(2)種子培養(yǎng)將所述單菌落接入至種子培養(yǎng)瓶(例如三角瓶)中，用產(chǎn)酸克雷伯菌菌株種子培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；(3)生產(chǎn)培養(yǎng)將步驟( 培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液接入至生產(chǎn)瓶中，用產(chǎn)酸克雷伯菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，所述培養(yǎng)液的接入量不少于所述產(chǎn)酸克雷伯菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基總體積的(優(yōu)選為 3% )；(4)出瓶分裝將步驟C3)培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液出瓶分裝得到三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑。上述的制備方法中，優(yōu)選地，所述步驟(1)中，平板培養(yǎng)法是指用基礎(chǔ)固體培養(yǎng)基 (MMS培養(yǎng)基)對(duì)產(chǎn)酸克雷伯菌菌株的保存種進(jìn)行培養(yǎng)。所述匪S培養(yǎng)基的優(yōu)選配方含 (NH4)2S04lg/L、K2HP047g/L、KH2P043g/L、檸檬酸鈉 0. 5g/L、MgS04 · 7H20 0. lg/L、葡萄糖 5g/ L 和瓊脂 1.5g/L，pH7. 0。上述的制備方法中，優(yōu)選地，所述步驟O)中的產(chǎn)酸克雷伯菌菌株種子培養(yǎng)基和所述步驟(3)中的產(chǎn)酸克雷伯菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基均為基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基(MM培養(yǎng)基)。所述 MM 培養(yǎng)基的優(yōu)選配方含(NH4)2SO4 lg/L、K2HPO4 7g/L、KH2PO4 3g/L、檸檬酸鈉 0. 5g/L、 MgSO4 · 7H20 0. lg/L 和葡萄糖 5g/L，ρΗ7· 0。上述的制備方法中，優(yōu)選地，所述步驟(1)、步驟( 和步驟C3)的每一次培養(yǎng)過(guò)程中，pH值均控制為7.0 7.2，培養(yǎng)溫度均控制為301 351；所述步驟O)、步驟(3)的每一次培養(yǎng)均為振蕩培養(yǎng)，振蕩速度為150 200rpm。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為1、本發(fā)明的產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M 2011350，生產(chǎn)成本低、農(nóng)藥去除效果好、高效、 無(wú)毒、環(huán)保，且該菌株可通過(guò)簡(jiǎn)單、快捷、低成本的操作方法制備得到三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑，使用本發(fā)明菌株制備得到的降解菌劑具有生產(chǎn)成本低、使用方便，去除效果好等優(yōu)點(diǎn)，能夠有效用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中無(wú)農(nóng)藥殘留糧食、水果、蔬菜等的生產(chǎn)。2、本發(fā)明的產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M 2011350不僅可耐受高濃度的三唑磷，可用于實(shí)驗(yàn)室條件下培養(yǎng)基中高濃度三唑磷農(nóng)藥的降解，還可在耐受較寬的PH范圍0 10)和溫度范圍(25°C 35°C )降解三唑磷。3、本發(fā)明的產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M 2011350的應(yīng)用可以在對(duì)農(nóng)作物正常施用化學(xué)農(nóng)藥、消滅蟲(chóng)害進(jìn)而保證作物產(chǎn)量的前提下，又能使糧食、水果、蔬菜等農(nóng)作物中的農(nóng)藥殘留降至很低或沒(méi)有；而且，菌株本身具有多種營(yíng)養(yǎng)成分及活性物質(zhì)，能夠有效促進(jìn)作物生長(zhǎng)，兼具防治作物病害的作用，具有安全、無(wú)毒、環(huán)保的特點(diǎn)；此外，由于本發(fā)明的菌株可以應(yīng)用于降解高濃度三唑磷農(nóng)藥，因此亦可用于農(nóng)藥生產(chǎn)廢水的處理。一種產(chǎn)酸克雷伯菌菌株(Klebsiella oxytoca TDB_1)，其保藏單位為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC)，保藏單位地址位于中國(guó)武漢大學(xué)，保藏號(hào)為CCTCC M 2011；350，保藏日期為2011年10月12日。


圖1是實(shí)施例1中的產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M 2011350的掃描電鏡圖。圖2是實(shí)施例1中的產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M 2011350耐受溫度試驗(yàn)的測(cè)試結(jié)果圖。圖3是實(shí)施例1中的產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M 2011350耐受pH試驗(yàn)的測(cè)試結(jié)果圖。
圖4是實(shí)施例1中的三唑磷濃度測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。實(shí)施例1 一種如圖1所示的本發(fā)明的產(chǎn)酸克雷伯菌菌株，該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC，保藏號(hào)為CCTCC M 2011350。該菌株具有以下主要特征球狀，具有莢膜，G_，V-P反應(yīng)陽(yáng)性，甲基紅反應(yīng)陽(yáng)性，明膠液化陰性，吲哚反應(yīng)陽(yáng)性，最適生長(zhǎng)溫度為25°C 35°C，最適生長(zhǎng)pH值為5 9，16S rDNA序列長(zhǎng)度為1505bp，在 Genbank中的登錄號(hào)為JQ068819。本實(shí)施例的產(chǎn)酸克雷伯菌菌株可用于降解三唑磷農(nóng)藥殘留。例如一種本發(fā)明的包含本實(shí)施例產(chǎn)酸克雷伯菌菌株的三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑，該菌劑是由本實(shí)施例菌株與MM培養(yǎng)基配制成的濃度為2 X IO9CfuAiL的菌懸液。本實(shí)施例的三唑磷農(nóng)藥降解菌劑的制備方法具體包括以下步驟(1)活化將產(chǎn)酸克雷伯菌CCTCC M 2011350的保存種按平板培養(yǎng)法(使用MMS固體培養(yǎng)基)進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)至單菌落出現(xiàn)；(2)種子培養(yǎng)將單菌落接入至250mL三角瓶中，用MM液體培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；(3)生產(chǎn)培養(yǎng)將步驟( 培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液接入至生產(chǎn)瓶中，用MM液體培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，培養(yǎng)液的接入量不少于MM液體培養(yǎng)基總體積的；(4)出瓶分裝將步驟C3)培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液出瓶分裝得到三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑。本實(shí)施例方法的全流程培養(yǎng)時(shí)間為4天，培養(yǎng)結(jié)束后，菌體數(shù)量達(dá)到2 X IO9CfuAiL以上。菌株耐受三唑磷濃度、pH和溫度范圍的測(cè)試用丙酮溶解三唑磷，然后添加到實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基中至三唑磷的終濃度為30mg/L， 所用的實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基為(NH4) 2S04 lg/L、K2HPO4 7g/L、KH2PO4 3g/L、檸檬酸鈉 0. 5g/L、 MgSO4 · 7Η200· lg/L和葡萄糖5g/L ；pH耐受試驗(yàn)培養(yǎng)基的pH值為4 10，溫度為35°C ；溫度耐受試驗(yàn)的培養(yǎng)基PH值為7. 0 7. 2，溫度為5°C 45°C ；將實(shí)施例1中制備的菌劑按 1% (ν/ν)接種到實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。定時(shí)取樣，分光光度計(jì)(Tu-1901)測(cè)定菌株的生物量 (生物量以0D_表示)，測(cè)定結(jié)果如圖2、圖3所示。由圖2可知，菌株在含30mg/L三唑磷的匪培養(yǎng)基中，在25°C 35 °C快速生長(zhǎng)，低于25°C或高于45°C，則菌株的生長(zhǎng)受到明顯的抑制。由圖3可知，菌株在pH值為4 10的范圍內(nèi)，均能良好生長(zhǎng)，表明菌株具有良好的耐受PH的能力；pH值為4和10時(shí)，菌株的生長(zhǎng)具有一定抑制，表現(xiàn)為菌株進(jìn)行對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的時(shí)間延長(zhǎng)池 他，但僅pH值為10時(shí)，后期的總生物量有所降低；pH為4時(shí)，整個(gè)培養(yǎng)時(shí)期，生物量較低，但是一直在增加。由以上可知，菌株可耐受30mg/L三唑磷。可見(jiàn)本發(fā)明的產(chǎn)酸克雷伯菌菌株CCTCC M 2011350不僅可耐受高濃度的三唑磷， 用于實(shí)驗(yàn)室條件下培養(yǎng)基中高濃度三唑磷農(nóng)藥的降解，還在耐受較寬的PH范圍0 10) 和溫度范圍(25°C 35°C)降解三唑磷。菌株在降解培養(yǎng)基中高濃度三唑磷的應(yīng)用用丙酮溶解三唑磷，添加到實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基中至三唑磷的終濃度為30mg/L，所用的實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基為(NH4)2S04 lg/L, K2HPO4 7g/L，KH2PO4 3g/L，檸檬酸鈉 0. 5g/L， MgSO4 ·7Η200· lg/L，葡萄糖5g/L，該實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基的pH值為7. 0 7. 2，溫度為30°C 35°C ； 將實(shí)施例1中制備的菌劑按(ν/ν)接種到該實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。定時(shí)取樣，用石油醚萃取培養(yǎng)后實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基中的三唑磷，分光光度計(jì)(Tu-1901) 測(cè)定三唑磷殘留，測(cè)定前用已知三唑磷濃度梯度做測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)表1和圖4)。以不加菌劑的實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基為對(duì)照(相當(dāng)于三唑磷未處理，濃度不變)。所有處理重復(fù)三次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)下表2、表3所示。三唑磷降解產(chǎn)物對(duì)硝基苯酚在0D405有特異吸收峰，根據(jù)對(duì)硝基苯酚產(chǎn)生量可以換算三唑磷的降解量。圖4是根據(jù)配置的已知等差濃度梯度的三唑磷與光吸收值(0040 (表1)的相關(guān)性，R2 = 0. 9901表明三唑磷降解產(chǎn)生的對(duì)硝基苯酚在0D405的光吸收值與對(duì)硝基苯酚在一定范圍內(nèi)相關(guān)性高，可以利用0D405光吸收值測(cè)定對(duì)硝基苯酚的濃度，從而換算出三唑磷降解的濃度。由表3可見(jiàn)，利用實(shí)施例1的菌株降解三唑磷，前IOmin降解速率為0. 72mg/L min ；20min降解速率為0. 37mg/L min ；30min降解速率為0. 25mg/L min ；40min降解速率為 0.19mg/L min。表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作三唑磷濃度梯度
權(quán)利要求
1.一種產(chǎn)酸克雷伯菌菌株，其特征在于所述產(chǎn)酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)菌株為保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心、且保藏號(hào)為CCTCC NO :M2011350的菌株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯菌菌株，其特征在于，所述菌株為具有以下主要特征的菌株球狀，具有莢膜，G，V-P反應(yīng)陽(yáng)性，甲基紅反應(yīng)陽(yáng)性，明膠液化陰性，吲哚反應(yīng)陽(yáng)性，最適生長(zhǎng)溫度為25°C :35°C，最適生長(zhǎng)pH值為5 9，16S rDNA序列長(zhǎng)度為1505bp，在Genbank 中的登錄號(hào)為JQ068819。
3.—種如權(quán)利要求1或2所述的產(chǎn)酸克雷伯菌菌株在降解三唑磷農(nóng)藥殘留中的應(yīng)用。
4.一種三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑，其特征在于所述菌劑主要是由權(quán)利要求1或2所述的產(chǎn)酸克雷伯菌菌株與基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基配制而成的菌懸液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑，其特征在于所述菌劑中產(chǎn)酸克雷伯菌菌株的濃度為彡2X109cfu/mL。
6.一種如權(quán)利要求4或5所述的三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑的制備方法，包括以下步驟(1)活化將所述產(chǎn)酸克雷伯菌菌株的保存種按平板培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)至單菌落出現(xiàn)；(2)種子培養(yǎng)將所述單菌落接入至種子培養(yǎng)瓶中，用產(chǎn)酸克雷伯菌菌株種子培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；(3)生產(chǎn)培養(yǎng)將步驟( 培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液接入至生產(chǎn)瓶中，用產(chǎn)酸克雷伯菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，所述培養(yǎng)液的接入量不少于所述產(chǎn)酸克雷伯菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基總體積的；(4)出瓶分裝將步驟( 培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液出瓶分裝得到三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中，平板培養(yǎng)法是指用基礎(chǔ)固體培養(yǎng)基對(duì)產(chǎn)酸克雷伯菌菌株的保存種進(jìn)行培養(yǎng)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述步驟O)的產(chǎn)酸克雷伯菌菌株種子培養(yǎng)基和所述步驟(3)中的產(chǎn)酸克雷伯菌菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基均為基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基。
9.根據(jù)權(quán)利要求6、7或8所述的制備方法，其特征在于所述步驟(1)、步驟( 和步驟(3)的每一次培養(yǎng)過(guò)程中，pH值均控制為7. 0 7. 2，培養(yǎng)溫度均控制為30°C 35°C;所述步驟O)、步驟(3)的每一次培養(yǎng)均為振蕩培養(yǎng)，振蕩速度為150 200rpm。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種產(chǎn)酸克雷伯菌菌株，其保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，且保藏號(hào)為CCTCC M2011350。該菌株可應(yīng)用于降解三唑磷農(nóng)藥殘留，例如做成一種三唑磷農(nóng)藥殘留降解菌劑，該菌劑主要是由本發(fā)明的菌株與基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基配制而成的菌懸液，其制備方法包括先將菌株的保存種按平板培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)至單菌落出現(xiàn)；再將單菌落接入至種子培養(yǎng)瓶中，用種子培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；再接入至生產(chǎn)瓶中用生產(chǎn)培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，培養(yǎng)液的接入量不少于菌株生產(chǎn)培養(yǎng)基總體積的1％；最后出瓶分裝即可。本發(fā)明具有生產(chǎn)成本低、農(nóng)藥去除效果高、無(wú)毒、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01N63/02GK102559558SQ20121003672
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2012年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月17日
發(fā)明者任磊, 劉勇, 張德詠, 張松柏, 彭靜, 成飛雪, 朱春暉, 楊春曉, 程菊娥, 羅香文, 譚新球 申請(qǐng)人:湖南省植物保護(hù)研究所