專利名稱：一種發(fā)酵床霉菌抑制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)合型的霉菌抑制劑，具體地說是一種針對(duì)禽類糞便發(fā)酵床的霉菌抑制劑及其制備方法，屬于霉菌抑制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
生態(tài)養(yǎng)殖的發(fā)展，促使了禽類發(fā)酵床的發(fā)展，但禽類糞便中水分很大，發(fā)酵床床體很低，所以很容易出現(xiàn)霉菌污染的現(xiàn)象。霉菌和霉菌毒素對(duì)畜禽的危害巨大，所以發(fā)酵床的霉囷抑制劑和霉囷毒素清除制劑的研究開發(fā)迫在眉睦。國內(nèi)發(fā)酵床禽養(yǎng)殖技術(shù)最近幾年剛剛開始，在發(fā)酵床中防霉劑的研究方面還沒有看到具體的報(bào)道。但對(duì)于飼料的防霉工作國內(nèi)外都做了很大的工作，為預(yù)防飼料貯存期間營養(yǎng)成分損失，防止飼料霉變并延長(zhǎng)貯存時(shí)間，當(dāng)飼料水分含量高于13%時(shí)，一般在貯存時(shí)都會(huì)添加防霉劑，用以降低飼料中霉菌的數(shù)量，抑制霉菌毒素產(chǎn)生。防霉劑除了有機(jī)化學(xué)藥物外，還從中草藥中提取有效成分作為天然霉菌抑制劑來對(duì)原材料保鮮。目前，對(duì)于發(fā)酵床的霉菌抑制劑產(chǎn)品，市場(chǎng)上多為有機(jī)物或無機(jī)物，成分單一，抗沖擊能力不強(qiáng)，處理效果不佳。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明設(shè)計(jì)了一種發(fā)酵床霉菌抑制劑及其制備方法，該抑制劑是由有機(jī)物、無機(jī)物和微生物菌體混合搭配而成的針對(duì)發(fā)酵床霉菌抑制的復(fù)合物，對(duì)發(fā)酵床中產(chǎn)生的霉菌進(jìn)行抑制，對(duì)霉菌產(chǎn)生的霉菌毒素進(jìn)行吸附，減少霉菌和霉菌毒素對(duì)畜禽的危害，具有高強(qiáng)度抑制力和清除能力，發(fā)酵床霉菌中霉菌的清除率達(dá)90%以上，霉菌毒素吸附率為70%，且不影響發(fā)酵床中有益菌群的生長(zhǎng)。本發(fā)明的技術(shù)方案為
一種發(fā)酵床霉菌抑制劑，由復(fù)合化學(xué)制劑和復(fù)合微生物菌劑組成；
所述復(fù)合化學(xué)制劑和復(fù)合微生物菌劑的質(zhì)量g數(shù)與體積ml數(shù)比為I 3 I ；
所述復(fù)合化學(xué)制劑和復(fù)合微生物菌劑的復(fù)配質(zhì)量體積比最佳為1:1;
所述復(fù)合化學(xué)制劑，由硅藻土、雙醋酸鈉、碘化鉀組成；所述硅藻土、雙醋酸鈉、碘化鉀的質(zhì)量比為3 6 : I 2 : I 2;其中，優(yōu)選為3 :1:1;
所述復(fù)合微生物菌劑由啤酒酵母菌iSac-charomyces cerevisiae)菌液、枯草芽孢桿舊{Bacillus菌液、德氏乳酸菌(Z.菌液組成；所述啤酒酵母菌
菌液、枯草芽孢桿菌菌液、德氏乳酸菌菌液的體積比為I 2 : 2 4 : 3 6，其中，優(yōu)選為 I : 2 : 3。所述復(fù)合微生物菌劑為單菌種純發(fā)酵，發(fā)酵后進(jìn)行復(fù)配得到的。上述發(fā)酵床霉菌抑制劑的制備方法，包括以下步驟
(O按照上述配比混合硅藻土、雙醋酸鈉、碘化鉀，得到復(fù)合化學(xué)制劑；
(2)分別制備啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液、德氏乳酸菌菌液；所述啤酒酵母菌菌液的制備方法為所需培養(yǎng)基為酵母膏l(xiāng)O.Og、蛋白胨20.0g、葡萄糖20. 0g、蒸餾水IOOOml ;培養(yǎng)溫度為28 38°C ;好氧發(fā)酵24 48h，得到啤酒酵母菌菌液；
所述枯草芽孢桿菌菌液的制備方法為所需培養(yǎng)基為蛋白胨15.0g、牛肉膏O. 50g、葡萄糖20. 0g、氯化鈉5. 0g、蒸餾水1000ml ;培養(yǎng)溫度為30 36°C ;好氧發(fā)酵48 72h，得到枯草芽孢桿菌菌液；
所述德氏乳酸菌菌液的制備方法為所需培養(yǎng)基為麥芽汁70mL、牛肉膏9. 99g、酵母膏5. 07 g、大豆蛋白粉5. 14 g、加水至1000ml、初始pH值為6. 27 ;培養(yǎng)溫度為38 42°C;好氧發(fā)酵48 72h，得到德氏乳酸菌菌液；
(3)按照上述體積比混合啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液、德氏乳酸菌菌液，得到復(fù)合微生物菌劑；
(4)將上述步驟(I)得到的復(fù)合化學(xué)制劑和上述步驟(3)得到的復(fù)合微生物菌劑按照上述質(zhì)量g與體積ml比的比例要求混合即可。上述發(fā)酵床霉菌抑制劑的使用方法為使用時(shí)，按照復(fù)合化學(xué)制劑和復(fù)合微生物菌劑的質(zhì)量g與體積ml比為I 3 1，按照污染發(fā)酵原料質(zhì)量的0. 2%，混勻拌到霉變的發(fā)酵床原料里，達(dá)到抑制霉菌生長(zhǎng)和吸附霉菌毒素的效果。硅藻土是由無定形的SiO2構(gòu)成的多孔材料，結(jié)構(gòu)中無同質(zhì)取代現(xiàn)象，因硅藻土的納米微孔數(shù)多，其孔隙中含有一定量的有機(jī)物，增強(qiáng)了對(duì)霉菌毒素的親和力。雙醋酸鈉即雙乙酸鈉，分子內(nèi)的單分子乙酸可以降低物質(zhì)的pH值，并且與酯化合物相溶性較好，因而可以透過細(xì)胞壁，有效地滲透進(jìn)入菌類組織的細(xì)胞中，干擾細(xì)胞間酶的相互作用，促使菌體蛋白質(zhì)的變性，且改變細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，達(dá)到菌體脫水死亡目的，起到抗菌防腐的作用。 碘化鉀能夠增強(qiáng)組織的溶解和消化作用，抗真菌活性。酵母菌主要和霉菌在營養(yǎng)與空間的競(jìng)爭(zhēng)、對(duì)病原菌的直接寄生作用及誘導(dǎo)寄主產(chǎn)生抗病性，酵母細(xì)胞壁能吸附黃霉菌毒素，從而去除已存在的霉菌毒素?？莶菅挎邨U菌為拮抗病原微生物，能夠維持和調(diào)整腸道微生態(tài)平衡；枯草芽孢桿菌可以產(chǎn)生有益代謝產(chǎn)物，使空腸內(nèi)PH值下降，乳酸、丙酸、乙酸的含量上升，并且枯草芽孢桿菌具有較強(qiáng)的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性。乳酸菌在培養(yǎng)過程中產(chǎn)生能夠乳酸，從而抑制霉菌的生長(zhǎng)及毒素的產(chǎn)生；乳酸菌的細(xì)胞壁能吸附黃霉菌毒素，從而去除已存在的霉菌毒素。未來的防霉劑研究和開發(fā)應(yīng)朝著優(yōu)質(zhì)高效、低成本的方向發(fā)展，從單一型向復(fù)合型發(fā)展，從化學(xué)合成防霉劑向天然防霉劑方向發(fā)展，防霉劑的載體由接觸型向氣霧型方向發(fā)展。因此，開發(fā)復(fù)合型天然防霉劑、菌體防霉劑和選擇有利于防霉劑擴(kuò)散的載體。提高防霉劑的使用效果，研制無毒副作用，無殘留的綠色環(huán)保型飼料防霉劑將成為今后研究和開發(fā)的熱點(diǎn)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于發(fā)酵床中霉菌的清除率達(dá)90%以上，霉菌毒素吸附率為70%，減少了霉菌和霉菌毒素對(duì)禽類的危害，解決了畜禽飼養(yǎng)過程中，由于環(huán)境因素或飼料因素而造成的畜禽霉菌或霉菌毒素中毒問題，達(dá)到藥物治療之功效，從而改變畜禽腸道菌群平衡問題，解決了現(xiàn)在畜禽養(yǎng)殖中，抗生素濫用問題，用普通的化學(xué)藥品和微生態(tài)制劑共同作用，解決了只有抗生素才能解決的問題，從而減少或不用抗生素，達(dá)到養(yǎng)殖的無抗標(biāo)準(zhǔn)；由于近年來飼料向生物無抗飼料發(fā)展，可作為生物飼料的核心料。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I 一種發(fā)酵床霉菌抑制劑，由復(fù)合化學(xué)制劑和復(fù)合微生物菌劑組成；
所述復(fù)合化學(xué)制劑和復(fù)合微生物菌劑的質(zhì)量g數(shù)與體積ml數(shù)比為3 I ；
所述復(fù)合化學(xué)制劑，由硅藻土、雙醋酸鈉、碘化鉀組成；所述硅藻土、雙醋酸鈉、碘化鉀的質(zhì)量比為6:2:1;
所述復(fù)合微生物菌劑由啤酒酵母菌iSac-charomyces cerevisiae")菌液、枯草芽孢桿舊{Bacillus菌液、德氏乳酸菌(Z.菌液組成；所述啤酒酵母菌
菌液、枯草芽孢桿菌菌液、德氏乳酸菌菌液的體積比為I 2 2 4 3 6。所述復(fù)合微生物菌劑為單菌種純發(fā)酵，發(fā)酵后進(jìn)行復(fù)配得到的。實(shí)施例2
一種上述實(shí)施例I所述發(fā)酵床霉菌抑制劑的制備方法，包括以下步驟
(1)按照硅藻土、雙醋酸鈉、碘化鉀的質(zhì)量比6 2 I混合，得到復(fù)合化學(xué)制劑；
(2)分別制備啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液、德氏乳酸菌菌液；
所述啤酒酵母菌菌液的制備方法為所需培養(yǎng)基為酵母膏10. Og、蛋白胨20. 0g、葡萄糖20. 0g、蒸餾水1000ml ;培養(yǎng)溫度為28 38°C ;好氧發(fā)酵24 48h，得到啤酒酵母菌菌液；
所述枯草芽孢桿菌菌液的制備方法為所需培養(yǎng)基為蛋白胨15.0g、牛肉膏O. 50g、葡萄糖20. 0g、氯化鈉5. 0g、蒸餾水IOOOml ;培養(yǎng)溫度為30 36°C ;好氧發(fā)酵48 72h，得到枯草芽孢桿菌菌液；
所述德氏乳酸菌菌液的制備方法為所需培養(yǎng)基為麥芽汁70mL、牛肉膏9. 99g、酵母膏5. 07 g、大豆蛋白粉5. 14 g、加水至1000ml、初始pH值為6. 27 ;培養(yǎng)溫度為38 42°C ；好氧發(fā)酵48 72h，得到德氏乳酸菌菌液；
(3)按照啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液、德氏乳酸菌菌液的體積比I: 2 6混合，得到復(fù)合微生物菌劑；
(4)將上述步驟(I)得到的復(fù)合化學(xué)制劑和上述步驟(3)得到的復(fù)合微生物菌劑按照質(zhì)量g與體積ml比為3 : I混合即可。實(shí)施例3
發(fā)酵床霉菌抑制劑的霉菌的清除率實(shí)驗(yàn) 一、儀器與設(shè)備
空氣浴振蕩器、蒸汽消毒器、電熱恒溫培養(yǎng)箱、表面皿、脫脂棉團(tuán)、錐形瓶、接種環(huán)、電子天平。二、實(shí)驗(yàn)材料
實(shí)驗(yàn)菌種啤酒酵母菌cerevisiae)(山東大學(xué)微生物研究所提供)、枯草芽孢桿菌iBacillus subtil is、(山東大學(xué)微生物研究所提供)、德氏乳酸菌(Z.Delbrueckii )(中國科學(xué)院微生物研究所提供)；實(shí)驗(yàn)化學(xué)制劑硅藻土、雙醋酸鈉、碘化鉀；
培養(yǎng)基飼料中霉菌總數(shù)的測(cè)定(GB\T13092-2006)中的高鹽察氏培養(yǎng)基；
實(shí)驗(yàn)霉菌材料霉變的發(fā)酵床原料。三、實(shí)驗(yàn)方法
取霉變的發(fā)酵床原料2kg充分混勻，然后平均分成兩份，其中一組為陽性對(duì)照組，另一組為空白對(duì)照組。在陽性對(duì)照組按照O. 2%的比例將實(shí)施例2得到的復(fù)合化學(xué)制劑和復(fù)合微生物菌劑充分?jǐn)嚢杌靹颍瞻讓?duì)照組中不加任何物質(zhì)。將處理過得陽性對(duì)照組和空白對(duì)照組裝三角瓶，在室溫條件下，處理48h。若不添加任何防霉劑，霉變發(fā)酵床原料的霉菌繼續(xù)生長(zhǎng)，若在霉變發(fā)酵床原料中添加防霉劑就會(huì)抑制其生長(zhǎng)，防霉效果越好對(duì)霉菌的生長(zhǎng)抑制作用也越大。等待霉菌總數(shù)的試驗(yàn)測(cè)定，根據(jù)結(jié)果差值計(jì)算出該抑制劑對(duì)霉菌生長(zhǎng)的霉菌抑制率。四、實(shí)驗(yàn)步驟
1、取霉變的發(fā)酵床原料2kg充分混勻，然后平均分成兩份，其中一組為陽性對(duì)照組，另一組為空白對(duì)照組。在陽性對(duì)照組按照O. 2%的比例將實(shí)施例2得到的復(fù)合化學(xué)制劑和復(fù)合微生物菌劑充分?jǐn)嚢杌靹?，空白?duì)照組中不加任何物質(zhì)。將處理過得陽性對(duì)照組和空白對(duì)照組裝三角瓶，在室溫條件下，處理48h ；
2、48h后，以無菌操作稱取實(shí)驗(yàn)霉菌材料檢樣各25g，分別放入兩個(gè)含有225ml滅菌稀釋液的玻璃三角瓶中，置振蕩器上，搖蕩30min，分別制出空白對(duì)照組和陽性對(duì)照組的I :10的稀釋液；
3、用滅菌吸管吸取I:10的稀釋液10ml，注入帶玻璃珠的試管中，置微型混合器上混合3min,使霉菌孢子分散開；
4、用ImL無菌吸管吸取I: 10樣品均液lmL，緩慢加入盛有9mL無菌蒸餾水的無菌試管中，用振蕩器振蕩，混合均勻，制成I :100的樣品稀釋均液；
5、按照4操作程序，制備10倍系列樣品稀釋液，每遞增稀釋一次，換用一次ImL無菌吸管。根據(jù)對(duì)樣品活菌數(shù)量的估計(jì)，選擇適宜稀釋度的樣品均液，進(jìn)行接種計(jì)數(shù)；
6、取100、I000、10 000倍的稀釋液各I ml入無菌平皿，每個(gè)稀釋度做三個(gè)重復(fù)，再在培養(yǎng)皿中分別倒入10 15mL已融化并冷卻至45 50°C的培養(yǎng)基，蓋好平皿蓋子，趁熱輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液與培養(yǎng)基充分混合均勻，冷凝后在25 28°C恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)3d后開始觀察。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
I、計(jì)數(shù)結(jié)果見下表
權(quán)利要求
1.一種發(fā)酵床霉菌抑制劑，其特征在于由復(fù)合化學(xué)制劑和復(fù)合微生物菌劑組成； 所述復(fù)合化學(xué)制劑和復(fù)合微生物菌劑的質(zhì)量g與體積ml比為I 3 I ； 所述復(fù)合化學(xué)制劑，由硅藻土、雙醋酸鈉、碘化鉀組成；所述硅藻土、雙醋酸鈉、碘化鉀的質(zhì)量比為3 6 I 2 I 2 ; 所述復(fù)合微生物菌劑由啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液、德氏乳酸菌菌液組成；所述啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液、德氏乳酸菌菌液的體積比為I 2 2 4 3 6。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的發(fā)酵床霉菌抑制劑，其特征在于所述復(fù)合化學(xué)制劑和復(fù)合微生物菌劑的復(fù)配質(zhì)量體積比為1:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的發(fā)酵床霉菌抑制劑，其特征在于所述硅藻土、雙醋酸鈉、碘化鉀的質(zhì)量比為3 : I : I。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的發(fā)酵床霉菌抑制劑，其特征在于所述啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液、德氏乳酸菌菌液的體積比為1:2:3。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的發(fā)酵床霉菌抑制劑，其特征在于所述復(fù)合微生物菌劑為單菌種純發(fā)酵，菌種發(fā)酵后進(jìn)行復(fù)配得到的。
6.一種如權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的發(fā)酵床霉菌抑制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 (O按照質(zhì)量比稱量硅藻土、雙醋酸鈉、碘化鉀，并混合，得到復(fù)合化學(xué)制劑； (2)分別制備啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液、德氏乳酸菌菌液； 所述啤酒酵母菌菌液的制備方法為所需培養(yǎng)基為酵母膏10. Og、蛋白胨20. 0g、葡萄糖20. 0g、蒸餾水1000ml ;培養(yǎng)溫度為28 38°C ;好氧發(fā)酵24 48h，得到啤酒酵母菌菌液； 所述枯草芽孢桿菌菌液的制備方法為所需培養(yǎng)基為蛋白胨15.0g、牛肉膏O. 50g、葡萄糖20. 0g、氯化鈉5. 0g、蒸餾水IOOOml ;培養(yǎng)溫度為30 36°C ;好氧發(fā)酵48 72h，得到枯草芽孢桿菌菌液； 所述德氏乳酸菌菌液的制備方法為所需培養(yǎng)基為麥芽汁70mL、牛肉膏9. 99g、酵母膏.5.07 g、大豆蛋白粉5. 14 g、加水至1000ml、初始pH值為6. 27 ;培養(yǎng)溫度為38 42°C;好氧發(fā)酵48 72h，得到德氏乳酸菌菌液； (3)按照啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液、德氏乳酸菌菌液的體積比混合，得到復(fù)合微生物菌劑； (4)將上述步驟(I)得到的復(fù)合化學(xué)制劑和上述步驟(3)得到的復(fù)合微生物菌劑按照質(zhì)量g與體積ml比混合即可。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種發(fā)酵床霉菌抑制劑及其制備方法，所述制劑由復(fù)合化學(xué)制劑和復(fù)合微生物菌劑組成，通過將有機(jī)物和無機(jī)物混合得到復(fù)合化學(xué)制劑，通過對(duì)微生物進(jìn)行單菌種純發(fā)酵后混合得到復(fù)合微生物菌劑；本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于所述抑制劑在發(fā)酵床中霉菌的清除率達(dá)90%以上，霉菌毒素吸附率為70%，減少了霉菌和霉菌毒素對(duì)禽類的危害，解決了畜禽飼養(yǎng)過程中，由于環(huán)境因素或飼料因素而造成的畜禽霉菌或霉菌毒素中毒問題，達(dá)到藥物治療之功效，從而改變畜禽腸道菌群平衡問題，解決了現(xiàn)在畜禽養(yǎng)殖中，抗生素濫用問題。
文檔編號(hào)A01N37/02GK102613251SQ201210059010
公開日2012年8月1日 申請(qǐng)日期2012年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月8日
發(fā)明者燕淑海 申請(qǐng)人:燕淑海